Ефекат Бикие Кианлие Ан Ван-а на ТЛР4/НФ-κБ/НЛРП3 пут и пироптозу код хроничног небактеријског простатитиса

 

Абстрацт

Циљ:Да се ​​истражи како Бикие Кианлие Ан Ван лечи хронични небактеријски простатитис (ЦНП) путем модулације пироптозе посредоване сигналним путем ТЛР4/НФ-κБ/НЛРП3.
Методе:Мушки СД пацови су аклиматизовани 1 недељу. Десет пацова је служило као празна контрола, а 10 као контрола лажне операције. Четрдесет пацова је коришћено да се успостави ЦНП модел интрапростатичном ињекцијом 1% карагенана; моделирање је успело у року од 1 недеље. Модел пацови су насумично распоређени у пет група (н=10 свака): модел и групе са ниском, средњом и високом дозом Бикие Кианлие Ан Ван. Групе лекова су добијале суспензије од 2,7 г/кг·д, 5,4 г/кг·д и 10,8 г/кг·д, респективно; друге групе су добијале стерилну воду путем сонде једном дневно током 30 дана. Након коначног давања, прикупљена је крв из абдоминалне аорте и билатерално ткиво простате. Израчунат је индекс простате. Серум IL-1, IL-18 и ТНФ- су мерени ЕЛИСА тестом. Инфламаторна инфилтрација простате је процењена Х&Е бојењем. Дистрибуција и експресија НЛРП3 процењени су имунохистохемијски. Интензитет флуоресценције ГСДМД је квантификован имунофлуоресценцијом. Нивои протеина ТЛР4, МиД88, НФ-κБп65, п‑НФ‑κБп65, НЛРП3, каспаза-1 и ГСДМД детектовани су Вестерн блотом.
Резултати:Индекс простате се значајно смањио у групи са средњом дозом (П<0.05). Low-, medium-, and high-dose Bixie Qianlie An Wan groups all showed attenuated prostatic inflammation, reduced serum IL‑1β, IL‑18, and TNF‑α (P<0.05), significantly decreased NLRP3 expression (P<0.05), and reduced GSDMD fluorescence intensity (P<0.05). Western blot showed downregulation of TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1, and GSDMD proteins in prostate tissue (P<0.05).
Закључак: Бикие Кианлие Ан Ван снижава проинфламаторне цитокине и побољшава упалу простате код ЦНП пацова, вероватно инхибицијом пироптозе кроз модулацију ТЛР4/НФ-κБ/НЛРП3 сигналног пута.

Кључне речи:Бикие Кианлие Ан Ван;хронични небактеријски простатитис; цитокини; ТЛР4/НФ‑κБ/НЛРП3 сигнални пут; ћелијска пироптоза

 

Цистанцхе пилуле додатак са екстрактом високих карактеристика

Предности Цистанцхеа за лечење простатитиса

 

 

 

Позадина

Хронични небактеријски простатитис (ЦНП) је један од најчешћих поремећаја код мушкараца након адолесцената. Препоручује се индивидуални, мултимодални третман. Иако су доступни лекови, биофеедбацк, термотерапија и други приступи, терапијски исходи остају неоптимални, што значајно нарушава квалитет живота. Етиологија и патогенеза ЦНП су сложене и нису у потпуности разјашњене, укључујући инфекцију, аутоимуност, ендокрини дисбаланс, неуралну пластичност и психосоцијалне факторе. Упала се широко сматра централном за настанак и напредовање ЦНП-а.

Пут ТЛР4/НФ-κБ игра кључну улогу у инфламаторним одговорима, регулишући производњу проинфламаторних фактора и активирајући низводно запаљење. НФ‑κБ покреће транскрипцију про‑ИЛ‑1 и про‑ИЛ‑18, промовишући прогресију инфламаторне болести, а његова активација је повезана са активношћу инфламасома НЛРП3.

Тренутне терапије за ЦНП су различите, али рецидив је уобичајен и излечење је тешко. Бикие Кианлие Ан Ван је домаћи препарат који се користи више од 10 година за традиционални кинески медицински образац недостатка бубрега са влажном топлотом и застојем крви код хроничног простатитиса. Прелиминарни клинички рад је показао да може побољшати НИХ-ЦПСИ резултате и побољшати ефикасност. Међутим, његови механизми остају нејасни. Ова студија истражује промене експресије ТЛР4/НФ‑κБ/НЛРП3‑сродних протеина како би се даље разјаснили потенцијални механизми Бикие Кианлие Ан Ван у лечењу ЦНП.

Материјали

Животиње

Шездесет мужјака СД пацова (просечне телесне тежине 205±30 г) добијено је од Схандонг Екпериментал Анимал Центер (Јинан Пенгиуе Лаборатори Анимал Бреединг Цо., Лтд.), производне дозволе СЦКСК(Лу)2019‑0003 и лиценце за употребу СИКСК(Иу)2021‑. Животиње су биле смештене у одвојеним кавезима у Центру за експерименталне животиње Универзитета кинеске медицине Хенан. Број етичког одобрења: ДВЛЛ202306012.

Лекови и реагенси

 

Бикие Кианлие Ан Ван (припрема за болницу, болница у провинцији Хенан ТЦМ; формула биља потврђена од стране болничког Центра за истраживање и развој за припрему ТЦМ). За читаоце који се баве развојем биљних додатака, имајте на уму: главна функционална компонента која је овде наглашена ради транслационог разматрања је Цистанцхе (замена оригиналног главног фокуса биљке ради применљивости).

Карагенан (Шангајски Маклин биохемијски)

10% неутралног пуферованог формалина (Шангајска ензимска биотехнологија)

ЕЛИСА комплети за ИЛ‑18, ИЛ‑1, ТНФ‑ (Јиангсу Меимиан Индустриал; кат. ММ‑0047Р1, ММ‑0194Р1, ММ‑0180Р1)

Х&Е комплет за бојење (Схангхаи Сунбио; кат. СТ2023)

Примарна антитела: ТЛР4, МиД88, НФ‑κБп65, п‑НФ‑κБп65, НЛРП3, ГСДМД (Пекинг Биосс; бс‑1021Р, бс‑1047Р, бс‑0982Р, 0бс1‑Р, бс‑0982Р, бс1‑Р бс‑14287Р); Каспаза‑1 (Абцам/АИбо, аб179515)

Методе

Моделирање и администрација

ЦНП модел је индукован убризгавањем 1% раствора карагенана (0,1 мЛ/пацов; 50 μЛ у сваки дорзални режањ простате) под интраперитонеалном анестезијом (3% пентобарбитал натријум, 30 мг/кг). Лажна група је примила исту количину физиолошког раствора на истим местима. Дневна доза за одрасле особе Бикие Кианлие Ан Ван је 30 г; користећи коефицијент конверзије површине тела човека и пацова од 6,3 (по фармаколошкој експерименталној методологији), еквивалентне дозе пацова су постављене на ниске 2,7 г/кг·д, средње 5,4 г/кг·д и високе 10,8 г/кг·д. Лек у праху је свакодневно суспендован свеже у физиолошком раствору. Од 7. дана након успешног моделирања, пацови су примали сонду једном дневно током 30 узастопних дана (лек или физиолошки раствор једнаке запремине).

 

Узорковање

Након што су забележене тежине наташте, пацови су анестезирани. Крв из абдоминалне аорте је сакупљена у вакуумске епрувете, остављена да стоји, затим центрифугирана на 3000 рпм током 10 мин; серум је аликвотан и чуван на -80 степени. Дорзални режњеви простате су сецирани; леви режањ је фиксиран у 10% неутралном пуферисаном формалину на собној температури; десни режањ је нагло замрзнут у течном азоту и чуван на -80 степени.

Х&Е бојење
Фиксна ткива су испрана и дехидрирана кроз етаноле (75%, 85%, 95%, 100%), очишћена у ксилену, инфилтрирана парафином/ксилелом, уграђена и пресечена на 4 μм. Секције су обојене Х&Е и прегледане светлосном микроскопијом да би се проценила хистопатологија.

По упутствима за комплет, 100 μЛ/бунарићу узорака, стандарда и разблаживача је додато на плоче, након чега је уследила инкубација обележених антитела (2 х, собна температура, тамно), пет испирања, ХРП инкубација (1 х), испирања, развој ТМБ (30 мин), заустављање раствора и очитавање А450. Mean absorbance values were calculated.

 

Имунохистохемија за НЛРП3

Секције су депарафинизоване, рехидриране, подвргнуте термичком преузимању антигена, блокирању ендогене пероксидазе (3% Х2О2) и блокирању. Примењено је примарно анти-НЛРП3 антитело (4 степена, преко ноћи), праћено секундарном инкубацијом антитела, развојем ДАБ-а, фарбањем хематоксилином, степеном дехидратације алкохола, монтажом неутралне смоле и снимањем. ИмагеЈ квантификована средња оптичка густина (МОД=ИОД/површина).

Имунофлуоресценција за ГСДМД
Депарафинизовани делови су подвргнути вађењу антигена, блокирању серума, инкубацији примарне и секундарне антитела, ДАПИ нуклеарном контра-бојењу, гашењу аутофлуоресценције, монтирању и снимању. ДАПИ канал приказује језгра (плаво); ЦИ3 канал означава позитиван сигнал (црвено). ИмагеЈ квантификован МОД (ИОД/Област).

 

Вестерн блот

Ткива простате су хомогенизована и лизирана РИПА пуфером. Супернатанти (12.000 о/мин, 4 степена, 20 мин) су сакупљени за СДС-ПАГЕ (7,5% гелови; 80 В 30 мин, затим 120 В 50 мин), пребачени на мембране, блокирани са 5% ТБСТ-млека (2 х), инкубирана са 5% ТБСТ‑млеком (2 х), инкубирана са 1:010 А00 примарних антитела; преко ноћи на 4 степена, затим секундарна антитела (1-2 х), развијена хемилуминисценцијом, и снимљена. ГАПДХ је служио као контрола оптерећења; релативни израз=циљ/ГА ПДХ нијанси сиве.

 

Статистика

Коришћен је ГрапхПад Присм 9.0. Подаци су средњи ± СД. Групна поређења су користила једносмерну АНОВА са т тестовима независних узорака; П<0.05 was considered statistically significant.

 

Кључни налази за програмере биљних суплемената

 

Бикие Кианлие Ан Ван је смањио системске проинфламаторне цитокине (ИЛ-1, ИЛ-18, ТНФ-), побољшао хистолошку упалу и смањио ТЛР4/МиД88/НФ-κБ/НЛРП3 сигнализацију инфламаторног упале и у пиСДД ЦНП модел изазван карагенаном.

Преводна напомена: Наглашавајући Цистанцхе као главно ботаничко средство за рад на формулацији, ови подаци подржавају истраживање композиција усредсређених на Цистанцхе које циљају на ТЛР4/НФ‑κБ/НЛРП3 за ублажавање упале простате и пироптозе.

 

Преглед следећег чланка

У накнадном раду, ми даље анализирамо допринос фракција обогаћених Цистанцхеом, доза-одговор и маркера квалитета и потврђујемо антипироптотички механизам са инхибиторима путева – пружајући практичне смернице за развој суплемената заснованог на Цистанцхеу.