Капсуле на бази Цистанцхе ублажавају хронични небактеријски простатитис код пацова модулацијом цревне микробиоте, серумских метаболита и сигналног пута СПХК1/С1П1/ПИ3К/Акт

3.5. Серумска метаболомска анализа ЦБЦ-а код ЕАП пацова

3.5.1 Мултиваријантна статистичка анализа фекалне метаболомике

Анализа главних компоненти (ПЦА) открила је јасно раздвајање група под модом позитивних јона међунормалне, моделне и ЦБЦ групе са високим дозама, саГруписање ЦБЦ групе ближе нормалној групиа даље од групе модела. У режиму негативних јона, примећено је делимично преклапање између нормалне и моделне групе, док су узорци третирани ЦБЦ и даље показали добру дискриминацију (Слика 5).

Дискриминантна анализа парцијалних најмањих квадрата (ПЛС-ДА) потврдила је снажан ефекат класификације у све три групе под оба начина јонизације. ТхеТест пермутације од 200 путапотврдио поузданост модела, са аК² пресек испод 0,05, што указује да нема претеривања. Опадајући тренд уВредности Р² и К²дуж Кс-осе додатно је потврђена стабилност модела (слика 6).

ЧАЈ СА ФОРМУЛАМА НА БАЗИ ЦИСТАНЦХЕ

Купи одмах

 

 

 

 

 

3.5.2 Идентификација диференцијалних метаболита на које утиче ЦБЦ

Диференцијални серумски метаболити су филтрирани на основуВИП > 1од ПЛС-ДА,фолд промена већа или једнака 1, ип < 0,05. Након искључивања егзогених једињења,10 значајних ендогених метаболитасу идентификовани (табела 9).

 

3.5.3 Анализа обогаћивања КЕГГ пута

КЕГГ анализа обогаћивања диференцијалних метаболита је показала даЦБЦ третман може модулирати кључне метаболичке путевеукључени у хронични простатитис. Обогаћени путеви су укључивали:

Метаболизам сфинголипида

Метаболизам ретинола

Метаболизам глицина, серина и треонина

Метаболизам глицерофосфолипида

Метаболизам арахидонске киселине(Слика 7)

Познато је да ови путеви играју важну улогу урегулација имунитета, оксидативни стрес и упала.

3.5.4 Корелација између диференцијалних метаболита и цревне микробиоте

Спеарманова корелациона анализа је спроведена између 10 диференцијалних метаболита и значајно измењених бактеријских таксона. Значајне корелације укључују:

ПА(6-кето-ПГФ1 /и-20:0): у позитивној корелацији саЛацтобациллусиРомбоутсиа илеалис, негативно саНеглецтибацтер тимоненсис

СМ[д16:2/20:4-2ОХ]: у позитивној корелацији саПарапревотелла цлараиРомбоутсиа илеалис

ПС[18:1/20:0]: у позитивној корелацији саРомбоутсиа илеалис, негативно саОсциллоспирацеае

лисоПА(0:0/18:0): у негативној корелацији саЛацтобациллусиРомбоутсиа илеалис, позитивно саНеглецтибацтер тимоненсис

Уреидоизобутерна киселина: у негативној корелацији саПарапревотелла цлара

16(Р)-ХЕТЕи(2Р,3Р)-2-аминооктадекан-1,3-диол: у позитивној корелацији саНеглецтибацтер тимоненсис

Сфингозин: у негативној корелацији саРомбоутсиа илеалис, позитивно саНеглецтибацтер тимоненсис

лисоПА(18:0/0:0)иРетиноил-глукуронид: у негативној корелацији саБифидобацтериум анималисиРомбоутсиа илеалис(Слика 8)

Ове корелације сугеришуснажна веза између метаболомских промена изазваних ЦБЦ и модулације цревне микробиоте.

 

3.6 Регулација СПХК1/С1П1/ПИ3К/Акт пута од стране ЦБЦ

Вестерн блот анализа је то показалаЕкспресије протеина СПХК1 и С1П1 биле су значајно повишене у групи моделау поређењу са нормалном групом. ЦБЦ (високе дозе) значајносмањене нивое протеина СПХК1 и С1П1. Није примећена значајна разлика у експресији СПХК2 међу групама (Слика 9, Табела 10).

Поред тога,ПИ3К и Актнивои експресије су значајно смањени у групи модела, докп-ПИ3К и п-Актнивои су значајно повећани, што указује на активацију пута. ЦБЦ третманобновљени нивои ПИ3К и Актиинхибирао њихову фосфорилацију, смањујућиОдноси п-Акт/Акт и п-ПИ3К/ПИ3К.

Ови резултати сугеришу даЦБЦ инхибира сигнални пут СПХК1/С1П1/ПИ3К/Акт, доприносећи његовом антиинфламаторном дејству.

4. Дискусија

Хронични небактеријски простатитис (ЦНП) представља преко90% свих дијагноза простатитисаи повезан је са сложеном етиологијом, укључујућипатогена микробна инфекција, оксидативни стрес, имунолошка дисрегулација и аутоимуни одговори [20–21].

Недавни докази то сугеришуупала и аутоимуностсу централне за патогенезу ЦНП [22–24]. Тхеекспериментални модел пацова аутоимуног простатитиса (ЕАП)., који опонаша хумани ЦНП у хистопатологији и имунолошком одговору, је стога одабран [25].

У нашим претходним фармакохемијским студијама серума, компоненте ЦБЦ су пронађене увећа количина у фецесу него у серуму, подразумевајућицревна интеракција као примарни пут деловања(погледајте материјале за побољшане публикације ЦНКИ).

ЦБЦ побољшава патологију простате и инфламаторне индексе

ХЕ бојење је показало да је ЦБЦ ублажиоинфилтрација лимфоцита, рестауриранацинарна структура, и повећанасекреције жлезда. ЦБЦ значајносмањен број леукоцитау хомогенатима простате и рестауриранигустина тела лецитина-оба кључна дијагностичка маркера ЦНП [26–28]. Упала доводи до оштећења епитела и смањеног лучења лецитина, док активирани макрофаги гутају лецитинска тела [29]. ЦБЦ је ефикасно преокренуо ове патолошке промене.

ЦБЦ такођесмањени проинфламаторни цитокини(ТНФ-, IL-1, IL-6, IL-8, IL-2, иНОС) иповишени антиинфламаторни IL-10, подржавајући његово снажно антиинфламаторно дејство.

 

ЦБЦ регулише дисбиозу цревне микробиоте

ЦНП је уско повезан санеравнотежа микробиоте црева, што може смањитикратколанчане масне киселине (СЦФА)и компромитују цревну баријеру, дозвољавајућиЛПС транслокацијаи изазивање упале простате прекомолекуларни обрасци повезани са микробима (МАМП) [30].

Студије то показујуЦистанцхе полифенолипобољшати неравнотежу микробиоте и модулирати кључне таксоне укључене уинфламаторна болест црева (ИБД)[31]. У овој студији,Лацтобациллус и Бифидобацтериум анималиссу исцрпљени код ЕАП пацова, али су се опоравили након ЦБЦ третмана. Познато је да ови пробиотици ублажавају урогениталну инфламацију [32–33]. Насупрот томе,Веиллонелла, често обогаћен аутоимуним стањима [34], био је повишен код ЕАП пацова и смањен након примене ЦБЦ. Слично,Превотеллацеае, повезан са раком простате [35], обогаћен је у ЕАП групи и смањен ЦБЦ.

 

ЦБЦ модулира кључне метаболичке путеве

Метаболомика је откривенависина сфингозинакод ЕАП пацова, значајно смањен ЦБЦ, што сугерише укљученост уметаболизам сфинголипида. Сфинголипиди су кључни структурни и сигнални молекули укључени ураст ћелија, апоптозу и регулацију имунитета [36].

сфингозин-1-фосфат (С1П), синтетизоваоСПХК1/2, је моћан липидни медијатор који се везује заС1П рецептори (С1ПР)да регулише трговину имуним ћелијама и умешан је уинфламаторне и аутоимуне болести[37–39]. С1ПР модулаторФТИ720 (финголимод)показало се да смањује упалу и оштећење ткива у ЕАП моделима [40].

С1П такође активира низводне путеве као што суПИ3К/Акт, који су повезани са хроничном упалом. У нашој студији, ЦБЦнаниже регулисани СПХК1 и С1П1, и инхибираноПИ3К и Акт фосфорилација, што сугерише регулаторни ефекат на ову критичну осу.

 

Закључак

Ова студија, интегришућисеквенционирање цревне микробиоте и нециљана метаболомика, то показујеКапсуле на бази Цистанцхе (ЦБЦ)ефективно:

Побољшатиоштећење ткива простате

Суппрессинфламаторни цитокини

Ресторекорисна цревна флора

Регулишитеметаболизам сфинголипида

ИнхибитСПХК1/С1П1/ПИ3К/Акт сигнализација

Ови налази пружајуубедљиви доказиза потенцијал ЦБЦ-а као авишециљна биљна терапија за хронични небактеријски простатитис, и понудити анаучне основе за његову проширену клиничку примену.