Абстрацт

Циљ:Формула за регулацију хипогликемије липида (ХЛФ) заснована на Цистанцхеу показала је значајну ефикасност у побољшању поремећаја метаболизма глукозе и липида. Међутим, његови специфични механизми деловања остају нејасни. Ова студија је имала за циљ да истражи потенцијалне циљеве и механизме ХЛФ у побољшању метаболичких поремећаја глуколипида кроз мрежну фармакологију, молекуларно спајање, симулације молекуларне динамике (МД) и експерименталну валидацију.

Методе:
Циљеви повезани са метаболичким поремећајима глуколипида преузети су из базе података ГенеЦардс. Акциони циљеви главних активних компоненти ХЛФ-а су добијени из база података ЦТД и СвиссТаргетПредицтион. База података СТРИНГ и софтвер Цитосцапе су коришћени за конструисање мрежа протеин-протеин интеракције (ППИ). Након идентификације потенцијалних кључних циљева, извршене су анализе обогаћивања генске онтологије (ГО) и Кјото енциклопедије гена и генома (КЕГГ) путем базе података Метасцапе и конструисана је мрежа „компаунд-таргет-патхваи”. Молекуларно спајање је спроведено коришћењем АутоДоцк-а и ПиМОЛ-а да би се верификовале интеракције између главних компоненти и кључних циљева. МД симулације су затим изведене на најбољим комплексима протеин-лиганд идентификованим из пристајања. Установљен је мишји модел метаболичког поремећаја глуколипида заин вивовалидација налаза мрежне фармакологије.

Резултати:
Тополошка анализа ППИ мреже идентификовала је 10 кључних циљева: ТНФ, ЦТННБ1, АКТ1, НФ-κБ1, ЕСР1, ФН1, ТП53, IL-1, IL-6 и ЕГФР. ГО обогаћивање је показало да су ови циљеви углавном укључени у трансдукцију сигнала и регулацију транскрипције. Анализа КЕГГ пута је открила значајну повезаност са путевима липида и атеросклерозе. Молекуларно спајање је потврдило повољне афинитете везивања између основних компоненти ХЛФ-а (нпр. ловастатин, коптизин, салвијанолна киселина Б) и циљева као што су АКТ1, ФН1 и IL-6. МД симулације су даље показале стабилне интеракције, посебно између АКТ1 и једињења као што су ловастатин, коптизин и салвијанолна киселина Б. Експерименти на животињама су показали да ХЛФ може имати терапеутске ефекте тако што смањује експресију АКТ1, ТП53, ФН1 и ЕГФР, потискујући као {IL-6 факторе за регулацију и регулацију {IL-6} ЦТННБ1 и ЕСР1. Ове промене су довеле до побољшања нивоа глукозе у крви и липида код модела мишева.

Закључак:
ХЛФ може регулисати метаболизам глукозе и липида и побољшати атеросклеротичне лезије циљањем на липиде и путеве повезане са атеросклерозом. Нуди свеобухватну терапијску стратегију за превенцију и лечење метаболичких поремећаја и сродних компликација.

Кључне речи:
Формула заснована на Цистанцхе; Метаболички поремећај глуколипида; Мрежна фармакологија; Молецулар доцкинг; Симулација молекуларне динамике;Пут липида и атеросклерозе

 

 

 

екстракт цистанцхе актеозид састојак за лечење метаболичких поремећаја глуколипида

сазнајте више о предностима цистанцхе, контактирајте нас

Контактирајте сада

 

 

 

1. Увод

Метаболички поремећаји глуколипида постали су истакнути проблем јавног здравља широм света. У 2021. години, глобална преваленција дијабетеса достигла је приближно 529 милиона, са пројекцијама које указују на преко 1,31 милијарду случајева до 2050. У Кини, недавне студије показују преваленцију дијабетеса од 12,4% у 2018, у односу на 10,9% у 2013. догађаји, смртност и инвалидитет.

Епидемиолошка истраживања из 20 терцијарних болница у Кини показују да 67,1% пацијената са дијабетесом типа 2 (Т2ДМ) има дислипидемију. Студија CCMR-3B је објавила да је 72% пацијената са Т2ДМ такође имало дислипидемију и/или хипертензију, што је удвостручило њихов ризик од макроваскуларних и микроваскуларних компликација у поређењу са пацијентима само са дијабетесом.

Због сложене патогенезе метаболичких поремећаја глуколипида и ниске стопе постизања свеобухватне метаболичке контроле, ефикасни третмани су ограничени. Формула за регулацију хипогликемије-липида (ХЛФ) заснована на Цистанцхеу, развијена према теорији „замућености слузи“, има за циљ да очисти топлоту, уклони замућеност и успостави равнотежу. Састоји се од осам биљака укључујућиЦистанцхе, Момордица цхарантиа, Алое вера, Сцутеллариа баицаленсис, Сцхисандра цхиненсис, Зингибер оффицинале, Салвиа милтиоррхиза, иАтрацтилодес мацроцепхала, ХЛФ циља на основне механизме метаболичких поремећаја.

Анализа отиска прста помоћу ХПЛЦ идентификовала је кључна једињења:мангиферин, коптизин, јатроризин, салвијанолна киселина Б, алоин, берберин, палматин,иловастатин. Претходне студије су потврдиле ефикасност ХЛФ-а у снижавању нивоа глукозе и липида, смањењу кардиоваскуларног ризика и побољшању инсулинске резистенције. Мултицентрично, рандомизовано, отворено клиничко испитивање које је укључивало 450 пацијената са Т2ДМ и дислипидемијом повезаном са гојазношћу, показало је да ХЛФ ефикасно смањује глукозу у крви, регулише липиде, смањује телесну тежину и побољшава осетљивост на инсулин.

Даља истраживања су показала да ХЛФ може модулирати цревну микробиоту (нпр.Фаецалибацтериум, Блаутиа) и утичу на метаболичке путеве као што су разградња масних киселина и гликолиза/глуконеогенеза. Упркос доказаној клиничкој ефикасности, прецизни механизми остају нејасни, ограничавајући ширу примену.

Мрежна фармакологија нуди приступ на нивоу система за разјашњавање механизама болести и деловања лекова интеграцијом биоинформатике и скрининга високе пропусности. Ова студија користи мрежну фармакологију, молекуларно спајање, молекуларну динамику и експерименте на животињама да би открила вишециљне механизме ХЛФ-а у лечењу метаболичких поремећаја глуколипида.

2. Материјали и методе

2.1 Инструменти

Д3024Р Брза расхладна центрифуга (СЦИЛОГЕКС)

Апарат за електрофорезу И300Ц и резервоар за електрофорезу ЈИ300Ц (Јунии Ориентал, Пекинг)

ЦхампГел 5000 систем за снимање (Саизхи Инноватион, Пекинг)

SMA-1000 спектрофотометар (Меилин Хенгтонг, Пекинг)

СтепОне Плус кРТ-ПЦР систем (АБИ)

ПоверПац универзална јединица за електрофорезу (Био-Рад)

PB-10 пХ метар (Сарториус)

Танон 5200 хемилуминисцентни анализатор (Танон, Шангај)

2.2 Биљни лекови

ХЛФ формула укључује:

Цистанцхе (Цистанцхес Херба)

Момордица цхарантиа

Сцутеллариа баицаленсис

Алое вера

Сцхисандра цхиненсис

Зингибер оффицинале

Салвиа милтиоррхиза

Атрацтилодес мацроцепхала
Све биљке су биле гранулиране формуле (Тиањианг Пхармацеутицал, Јиангиин).

Контролни лек:Метформин хидрохлоридтаблете (0,5 г по таблети, Бристол-Миерс Скуибб, Шангај).

2.3 Реагенси и антитела

ТРИзол реагенс (Инвитроген)

ХиФиСцрипт комплет за синтезу цДНК (ЦВ2569)

УлтраСИБР мешавина (Хигх РОКС, ЦВ2602)

БЦА Протеин Ассаи Кит

Примарна антитела која циљају на п-АКТ, п-НФ-κБ п65, АКТ, НФ-κБ п65, ФН1, п53, IL-1, IL-6, ЕГФР, ТНФ-, -катенин, ЕСР1, -актин

Секундарна антитела (ХРП-коњуговани козји анти-зечји/мишји ИгГ)

2.4 Животињски модели

Мужјаци Ц57БЛ/6Ј мишева (стари 7 недеља) су купљени и смештени под стандардним СПФ условима. Све поступке на животињама одобрио је Етички комитет болнице Гуанг'анмен (одобрење бр. ИАЦУЦ-GAMH-2019-002).

2.5 Предвиђање циља

Активна једињења из ХЛФ-а су испитиванаЦТДиСвиссТаргетПредицтион(вероватноћа > 0,1). Циљеви везани за болест за Т2ДМ и дислипидемију су узети изГенеЦардс(оцена релевантности > 1). Веновим дијаграмима су идентификовани циљеви који се преклапају за даљу анализу ППИ.

2.6 Изградња ППИ мреже

Унесени су циљеви који се преклапајуСТРИНГ(хттпс://ввв.стринг-дб.орг), са средњом поузданошћу (оцена већа или једнака 0,4). Мрежа је визуелизована и анализирана уЦитосцапе, и основни циљеви идентификовани по степену централности.

2.7 Обогаћивање ГО и КЕГГ

Кључни циљеви су достављениМетасцапеза ГО (БП, МФ, ЦЦ) и анализу КЕГГ пута (П <0,01). Визуелизација је урађена коришћењем мехурића.

2.8 Мрежа сложене-циљне путање

Цитосцапе је коришћен за изградњу мреже која повезује биљке, једињења, мете и путеве, илуструјући интеракције са више циљева и путева.

2.9 Молекуларно спајање

2Д структуре једињења су добијене изПубЦхем, претворен у ПДБ користећиОтвори Бабел. Протеинске структуре су преузете саРЦСБ ПДБ, припремљен уАутоДоцкТоолс, и усидрен помоћуСаилВина. Афинитет везивања Мањи или једнак -4,25 кцал/мол се сматра значајним. Резултати пристајања су визуелизовани саПиМОЛ.

2.10 Симулација молекуларне динамике

МД симулације су изведене коришћењемAmber18за одабране врхунске комплексе. Протеини: амбер14СБ; лиганд: гафф; вода: ОПЦ модел. РМСД и РМСФ су израчунати из 20 нс НПТ симулација.

2.11 Груписање животиња и интервенција

Мишеви су рандомизирани у 4 групе: нормални (Н), модел (М), метформин (МЕТ) и ХЛФ. Осим групе Н, сви мишеви су храњени исхраном са високим садржајем масти (ХФД) током 6 недеља. ХЛФ је примењен у дози од 14 г/кг (еквивалент сирове биљке), МЕТ у дози од 250 мг/кг. После 8 недеља интервенције, крв и ткива јетре су прикупљени за анализу.

2.12 кРТ-ПЦР

Укупна РНК је екстрахована коришћењем ТРИзола. цДНК је синтетизована коришћењем ХиФиСцрипт-а. кПЦР је изведен коришћењем УлтраСИБР и СтепОне Плус. Релативна експресија је израчуната преко 2^−ΔΔЦт.

2.13 Вестерн блот

Протеини су екстраховани из ткива јетре, квантификовани, раздвојени помоћу СДС-ПАГЕ и пребачени на ПВДФ мембране. Након блокирања и инкубације са примарним и секундарним антителима, сигнали су визуелизовани помоћу ЕЦЛ-а и квантификовани коришћењем ИмагеЈ. -актина који је коришћен за нормализацију.

2.14 Статистичка анализа

Подаци су анализирани коришћењемСПСС 23.0иГрапхПад Присм 10.1.2. Коришћени су једносмерни АНОВА и т-тестови, при чему се П < 0,05 сматра статистички значајним.