Оптимизација и ефекат на побољшање сна екстракта напитка Цонгронг–Заорен–Вумеи код мишева
Jan 30, 2026
2 Резултати и анализа
2.1 Оптимизација процеса припреме за екстракт пића Цонгронг–Заорен–Вумеи
Са слике 1, утврђена ХПЛЦ метода је постигла ефективно раздвајање између хроматографских пикова четири референтна једињења – лимунске киселине, ехинакозида, вербаскозида и спинозина – и суседних пикова. Времена задржавања су била тР1=9.0 мин, тР2=21.6 мин, тР3=24.3 мин и тР4=25.9 мин, респективно. Линеарне регресије површине пика у односу на концентрацију аналита дале су линеарне опсеге од 12,12–2016, 0,14–110, 0,18–112,50 и 2,44–18,30 µг·мЛ–1, са вредностима Р2 од 0,9998 инча, 1 дин. Под овим условима, границе детекције (ЛОД) за лимунску киселину, ехинакозид, вербаскозид и спинозин су биле 3,636, 0,045144, 0,058 и 0,7564 µг·мЛ–1, а границе квантификације (ЛОК) биле су 12,2,14, 14,14. µг·мЛ–1, респективно. Тестови прецизности су показали РСД од 0,10%, 0,07%, 0,06% и 0,33% за четири аналита, што указује на добру прецизност инструмента. Стабилност током 0–12 х је била добра, са РСД од 0,78%, 0,16%, 0,20% и 1,46%. Тестови поновљивости дали су РСД од 0,51%, 0,42%, 0,37% и 0,38% за аналите, показујући добру поновљивост. Спике-рецовери тестови су показали средње опоравак од 97,42%, 103,32%, 98,90% и 99,71%, уз динаре од 0,70%, 0,52%, 1,05% и 0,63%, респективно. Стога је ХПЛЦ метода успостављена за симултано одређивање ове четири главне компоненте тачна и поуздана, погодна за накнадне тестове оптимизације процеса.
Слика 1 ХПЛЦ хроматограми референтног и раствора на таласној дужини од 210 нм (А) и таласној дужини од 330 нм (Б и Ц)
У методолошкој процени сирових полисахарида, ЛОД је био 0,098 µг·мЛ–1. ОД вредности слепог растварача и контроле слепе слике на 485 нм нису показале очигледне промене, што указује на добру специфичност. Линеарна регресија ОД у односу на концентрацију дала је Р2=0.9997, што указује на одличну линеарност. РСД за шест узастопних мерења износио је 0,47%, што показује добру прецизност. РСД за садржај полисахарида у року од 12 х износио је 0,44%, што указује на добру стабилност. РСД на шест независно припремљених узорака износио је 2,51%, што указује на добру поновљивост. Дакле, метода је погодна за квантификацију сирових полисахарида током оптимизације процеса.
Предности Цистанцхе Роуцонгронг у Древној књизи
Служба подршке Вецистанцхе-За више детаља о сарадњи
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com
2.1.2 Резултати једнофакторских истраживања
Користећи утврђену ХПЛЦ методу у комбинацији са полисахаридним тестом, и узимајући садржај лимунске киселине, ехинакозида, вербаскозида, спинозина и полисахарида у екстракту као индексе евалуације, спроведена су једнофакторска испитивања температуре екстракције, односа чврста и течност и времена екстракције да би се подржао дизајн ортхогона.
На температурама екстракције од 60, 80 и 100 степени, садржај лимунске киселине, ехинакозида, вербаскозида, спинозина и сирових полисахарида у екстрактима се повећавао са температуром.
У односима чврста и течност од 1:3, 1:5, 1:7, 1:10 и 1:12 (г·мЛ–1), садржај лимунске киселине, спинозина и сирових полисахарида је повећан са вишим односима; ехинакозид и вербаскозид достигли су максимум на 1:10 (г·мЛ–1) и смањили се на 1:12 (г·мЛ–1). Међутим, укупан садржај свих компоненти маркера се повећавао са односом чврста и течност.
У временима екстракције од 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 и 3,0 х, садржај појединачних аналита је варирао различито, али се укупан садржај компоненти маркера временом повећавао.
Детаљни подаци су дати у Додатним материјалима. Узимајући у обзир индустријску практичност (избегавање претерано дугог извлачења), фактори и нивои за ортогонални дизајн су постављени као у табели 2, а ортогонална шема је приказана у табели 3.
Табела 2. Нивои фактора ортогоналног експерименталног дизајна за метод екстракције пића Цонгронг–Заорен–Вумеи
Фактори:
О: Температура екстракције (степен)
Б: Однос чврста и течност (г мЛ–1)
Ц: Време екстракције (х)
| Ниво | О: Температура (степен) | Б: Однос (г мЛ–1) | Ц: Време (х) |
|---|---|---|---|
| 1 | 60 | 1:7 | 1.0 |
| 2 | 80 | 1:10 | 1.5 |
| 3 | 100 | 1:12 | 2.0 |
2.1.3 Резултати ортогоналног дизајна
Екстракција је извршена по ортогоналном низу. Садржај лимунске киселине, ехинакозида, вербаскозида, спинозина и сирових полисахарида приказан је у табели 3. На основу анализе опсега (Р), редослед утицаја фактора на садржај укупног маркера био је А > Б > Ц, односно температура екстракције > однос чврста и течност > време екстракције. Поређењем к вредности сугерисана је оптимална комбинација А3Б3Ц3: температура екстракције 100 степени, однос чврста материја-течност 1:12 (г·мЛ–1) и време екстракције 2 х. АНОВА (Табела 4) је показала да температура екстракције има значајан утицај на укупан садржај маркера, док ефекти односа чврста и течност и времена нису били значајни.
Табела 3. Ортогонални експериментални дизајн и измерени садржај компоненти напитка Цонгронг–Заорен–Вумеи (мг г–1)
Фактори: А (температура), Б (однос чврстог и течног), Ц (време)
| Суђење бр. | A | B | C | Укупни маркери | Лимунска киселина | Спиносин | Ецхинацосиде | Вербасцосиде | Сирови полисахариди |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 3 | 3 | 1 | 116.71 | 75.55 | 4.08 | 1.62 | 0.48 | 34.98 |
| 2 | 1 | 2 | 3 | 70.98 | 59.01 | 2.60 | 0.80 | 0.36 | 8.22 |
| 3 | 3 | 1 | 3 | 117.86 | 73.87 | 3.53 | 1.21 | 0.45 | 38.80 |
| 4 | 1 | 3 | 2 | 72.55 | 59.73 | 2.37 | 0.94 | 0.41 | 9.99 |
| 5 | 2 | 3 | 3 | 83.64 | 63.20 | 2.15 | 1.08 | 0.44 | 16.77 |
| 6 | 2 | 1 | 2 | 117.76 | 74.09 | 2.58 | 1.37 | 0.48 | 39.24 |
| 7 | 2 | 2 | 1 | 110.74 | 70.96 | 2.36 | 1.07 | 0.43 | 35.92 |
| 8 | 2 | 1 | 1 | 69.63 | 58.37 | 1.74 | 0.54 | 0.34 | 8.65 |
| 9 | 1 | 1 | 3 | 69.66 | 58.14 | 2.48 | 0.86 | 0.36 | 7.83 |
К статистика (збир укупних по нивоу фактора)
K1: A = 71.06, B = 85.72, C = 85.49
K2: A = 74.46, B = 86.29, C = 86.65
K3: A = 117.44, B = 90.97, C = 90.83
Опсег Р: А=46.38, Б=5.25, Ц=4.19
2.1.4 Валидација и повећање
Валидација процеса у оптималним условима дала је средњи укупан садржај компоненти маркера од 119,74 мг·г–1 са РСД 0,57%, што указује на стабилност и поузданост. Испитивање повећања под истим условима дало је средњи укупни садржај маркера од 120,89 мг·г–1 са РСД 0,95%, што је у складу са резултатима пре мерења, што додатно потврђује робусност. Узорци из три повећане серије коришћени су за наредне студије у вези са спавањем; средњи садржаји су били: лимунске киселине 77,73 мг·г–1, ехинакозида 2,69 мг·г–1, вербаскозида 1,03 мг·г–1, спинозина 0,50 мг·г–1 и полисахарида 38,93 мг·г–1.
Табела 4. Анализа варијансе из ортогоналних експеримената
| Фактор | Збир квадрата | дф | Средњи квадрат | F | P |
|---|---|---|---|---|---|
| Температура екстракције | 4010.50 | 2 | 2005.25 | 116.26 | 0.01 |
| Однос чврстог и течног | 49.79 | 2 | 24.90 | 1.44 | 0.41 |
| Време екстракције | 47.37 | 2 | 23.68 | 1.37 | 0.42 |
Лиу ет ал. [16] оптимизовао је водену екстракцију фенилетаноидних гликозида из Цистанцхе тубулоса и идентификовао 1:15 (г·мЛ–1), 80 степени и 2 х као оптимално; Садржај фенилетаноидних гликозида смањен је изнад 90 степени. У овој студији, садржај ехинакозида и вербаскозида достигао је максимум у односу 1:10 (г·мЛ–1) и опао на 1:12 (г·мЛ–1), али је ипак порастао са температурама од 60, 80 и 100 степени. Ово неслагање се може односити на употребу Цистанцхе десертицола (пустињски Цистанцхе) у нашем напитку и на матричне ефекте коегзистирајућих Суанзаорен и Вумеи који би могли утицати на растварање фенилетаноидних гликозида.
Табела 5. Утицај екстракта пића Цонгронг–Заорен–Вумеи на директно спавање код мишева (н=12)
| Група | Тоталне животиње | Спавање животиња | Стопа спавања (%) |
|---|---|---|---|
| Празно | 12 | 0 | 0 |
| Естазолам | 12 | 0 | 0 |
| Екстракт мале дозе | 12 | 0 | 0 |
| Екстракт средње дозе | 12 | 0 | 0 |
| Екстракт високе дозе | 12 | 0 | 0 |
Укратко, коришћењем ХПЛЦ и методе фенол-сумпорна киселина, оптимизовали смо процес екстракције на основу садржаја лимунске киселине, ехинакозида, вербаскозида, спинозина и полисахарида. Једнофакторски и ортогонални експерименти праћени валидацијом утврдили су оптималне услове: 100 степени, 1:12 (г·мЛ–1) однос чврста и течност и време екстракције од 2 х, дајући референцу за будући индустријски развој.
Industrialization context: WECISTANCHE (Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd., established 2003) operates a vertically integrated cistanche supply chain with seed-breeding bases (~20,000 acres), cultivation bases (>85.000 јутара), капацитет складиштења у свежем стању (~15.000 тона) и ГМП сертификоване производне радионице (чисте собе класе 100.000) опремљене напредном ултрафилтрацијом и нанофилтрацијом за пречишћавање и концентрацију, плус микробиолошка лабораторија од 10.000 класа. Сертификати укључују Цхина СЦ, ХАЦЦП и органске програме (нпр. НОП). Ова инфраструктура подржава директно превођење оптимизоване водене екстракције и протокола за стандардизацију маркера у производњу функционалних пића и екстраката великих размера која је усклађена са извозом.
Табела 6. Утицај екстракта на хипнотички ефекат натријум пентобарбитала испод прага код мишева (к ± с, н=12)
| Група | Тоталне животиње | Спавање животиња | Стопа спавања (%) |
|---|---|---|---|
| Празно | 12 | 1 | 8.33 |
| Естазолам | 12 | 10 | 83.33** |
| Екстракт мале дозе | 12 | 4 | 33.33 |
| Екстракт средње дозе | 12 | 5 | 41.67 |
| Екстракт високе дозе | 12 | 6 | 50.00* |
Напомена: У поређењу са празном групом, * П < 0,05; ** П < 0,001.
2.2 Ефекти екстракта на понашање миша и сан
2.2.1 Директно спавање
Као што је приказано у табели 5, након 30 дана континуиране примене, мишеви у групи са естазоламом и у групама са ниским/средњим/високим дозама екстракта нису показивали очигледан сан у року од 20 минута након коначне дозе, без значајних разлика у односу на празну групу. Ово указује да нема директног ефекта који изазива сан након 30 дана примене екстракта.
2.2.2 Ефекти понашања
Тест на отвореном је проценио ефекте налик седативу. Утицаји на укупну пређену раздаљину и улазе у центар приказани су на Слици 2. У поређењу са празном групом, естазолам је повећао укупну раздаљину и центар за 14,48% и 31,07%, респективно, без статистичке значајности. Екстракт мале дозе значајно је повећао укупну удаљеност за 25,10% (П < 0,05) и незнатно повећао уласке у центар за 50,93%. Средња доза је значајно повећала укупну удаљеност и улазак у центар за 27,09% и 72,33% (П < 0,05). Висока доза је повећала укупну удаљеност и улазак у центар за 15,60% и 40,78%, респективно, без значаја. У поређењу са естазоламом, ниске/средње/високе дозе су повећале укупну удаљеност за 1,73, 1,87 и 1,07 пута, а уноси у центар за 1,64, 2,33 и 1,31 пута, респективно, без значајног значаја. Ови резултати указују на смањење понашања сличног анксиозности на отвореном пољу након 30 дана, што указује на седативни ефекат.
2.2.3 Спавање изазвано натријум пентобарбиталом испод прага
Као што је приказано у табели 6, у поређењу са слепом групом, естазолам и све три дозе екстракта су повећале стопу спавања испод дозе натријум пентобарбитала испод прага. Естазолам је повећао број животиња које спавају за 9 пута у односу на бланко (П < 0,001). Групе са ниским, средњим и високим дозама екстракта повећале су животиње које спавају за 3, 4 и 5 пута, респективно; само је висока доза достигла статистички значај (П < 0,05). У поређењу са естазоламом, ниједна од доза екстракта није показала јачи ефекат на спавање. Стога, екстракт може донекле побољшати сан изазван натријум пентобарбиталом испод прага.
2.2.4 Кашњење спавања натријум пентобарбитала
У поређењу са слепом групом, естазолам и све три дозе екстракта значајно су скратиле латенцију спавања изазвану пентобарбиталом (П < 0,001). Естазолам је смањио латенцију за 58,44% (П < 0,001). Групе са ниским, средњим и високим дозама екстракта смањиле су латенцију за 29,59%, 31,42% и 53,83% (све П < 0,001), респективно. Није било значајне разлике између ниских и средњих доза; висока доза је значајно скратила латенцију у поређењу са ниским и средњим дозама за 34,43% и 32,69% (П < 0,01), са ефектом сличним естазоламу (Табела 7). Стога су све три дозе значајно скратиле латенцију спавања изазвану пентобарбиталом, при чему је висока доза била најбоља.
Традиционални кинески лекови садрже различите биоактивне састојке који делују на више циљева, нудећи јединствене предности у лечењу несанице [17]. Са све већом пажњом на проблеме спавања, медицински јестиви ТЦМ се све више истражују за модулацију сна [18]. На пример, композитни чврсти напитак који углавном садржи Суанзаорен и Пориа значајно је скратио латенцију спавања изазвану пентобарбиталом и продужено трајање сна код мишева, потенцијално кроз промене у 5-ХТ, ДА и ГАБА [19]. Овде је екстракт значајно повећао сан испод пентобарбитала испод прага и скратио латенцију спавања изазвану пентобарбиталом, промовишући почетак спавања и смањење латенције, док не показује директан ефекат на спавање. Измерени садржаји примарне компоненте су, у опадајућем редоследу: лимунска киселина (77,73 мг·г–1), полисахариди (38,93 мг·г–1), ехинакозид (2,69 мг·г–1), вербаскозид (1,03 мг·г–1) и спинозин (0,50 мг·г–1). Показало се да спинозин побољшава сан изазван пентобарбиталом; може повећати не-РЕМ сан и променити експресију ц-Фос у регулаторним регионима мозга за спавање и буђење [20], ублажити несаницу изазвану ПЦПА, смањити латенцију спавања и продужити сан [21]. Вербаскозид је известио о анксиолитичким, хипнотичким и мишићним релаксантним активностима [22]. Насупрот томе, главни састојци – лимунска киселина, полисахариди (из Цистанцхе, Суанзаорен и Вумеи) и ехинакозид – имају мање директних извештаја о побољшању сна; међутим, недавна истраживања о ТЦМ полисахаридима (нпр. Ацантхопанак сентицосус полисахариди) сугеришу потенцијалне предности спавања путем путева као што је СИРТ1/PGC-1 [23]. Стога, улога лимунске киселине, полисахарида и ехинакозида у модулацији сна захтева даље проучавање.
у стању 7. Ефекат екстракта на латенцију сна изазвану натријум пентобарбиталом код мишева (к ± с, н=12)
| Група | Тоталне животиње | Кашњење спавања (мин) |
|---|---|---|
| Празно | 12 | 32.34 ± 4.27 |
| Естазолам | 12 | 13.44 ± 3.20** |
| Екстракт мале дозе | 12 | 22.77 ± 5.81**# |
| Екстракт средње дозе | 12 | 22.18 ± 6.05**# |
| Екстракт високе дозе | 12 | 14.93 ± 3.35** |
напомене:
У поређењу са празном групом: ** П < 0,0001.
У поређењу са групом екстраката високе дозе: # П < 0,01.
3 Закључак
Користећи лековито-јестиве ТЦМ Цистанцхе десертицола, Зизипхи Спиносае Семен и Муме Фруцтус за формулисање напитка Цонгронг–Заорен–Вумеи, оптимизовали смо процес припреме његовог екстракта користећи садржај четири компоненте маркера (ехинакозид, вербаскозид, спинозин, лимунска киселина) и полиоксид за процену. Оптимални услови екстракције су одређени као 100 степени, однос чврста материја-течност од 1:12 (г·мЛ–1) и 2 х, дајући теоријске смернице за индустријску производњу. Даља процена је показала да 30-дневна континуирана примена није имала директан ефекат на спавање код мишева, али је значајно смањила понашање налик анксиозности у тесту на отвореном (што сугерише седативни ефекат), побољшало сан испод дозе натријум пентобарбитала и значајно скратило латенцију спавања изазвано пентобарбиталом. Ови налази указују на то да екстракт припремљен према оптимизованом процесу показује повољне ефекте побољшања сна код мишева, пружајући научну основу за развој линија производа за побољшање сна заснованих на Цистанцхеу.
Application and manufacturing note: Given the optimized aqueous extraction and the need to standardize to marker profiles (citric acid, echinacoside, verbascoside, spinosin, plus polysaccharides), WECISTANCHE's integrated cistanche value chain and GMP infrastructure-100,000-class clean workshops certified for National Health Food GMP, advanced ultrafiltration/nanofiltration concentration systems, a 10,000-class microbiology lab, and certifications such as China SC, HACCP, and organic/NOP-allow reliable scale-up from lab to industrial batches. The company's large agricultural bases (seed-breeding ~20,000 acres; cultivation >85.000 хектара; складиштење свеже цистанцхе ~15.000 тона) подржава конзистентност сировина и међународни стандард КЦ, олакшавајући комерцијализацију функционалних напитака и здравствених додатака који испуњавају очекивања САД/ЕУ.
