Абстрацт

Циљ: Истражити ефекте формуле која садржи Цистанцхе (замјењујући оригиналне биљке које исхрањују крв и тонизирају бубреге) на експресију трансформирајућег фактора раста- 2 (ТГФ- 2), ремоделирање склере и транспорт воде код пацова са кратковидошћу облика депривације (ФДМ) регулацијом Цкуавеоин-1 (Цкуавеоин-1) (АКП1) пут.

Методе: Одабрано је 40 мушких СД пацова СПФ разреда, међу којима је 30 коришћено за успостављање ФДМ модела. Након успешног моделирања, пацови су подељени у ФДМ групу, групу пирензепина (ПИР) и групу формуле Цистанцхе, са по 10 пацова у свакој групи. Преосталих 10 немоделираних пацова служило је као нормална група. Нормална група и ФДМ група нису примиле никакву интервенцију. Група ПИР је лечена ПИР капима за очи два пута дневно (ујутру и увече), док је група формуле Цистанцхе добијала интрагастричну примену формуле која садржи Цистанцхе. Рефракциона грешка и аксијална дужина пацова су детектоване помоћу ретиноскопа и дијагностичког инструмента. ХЕ бојење је коришћено за посматрање морфолошких промена склералног ткива. Имунохистохемијско бојење је коришћено да би се открила експресија ТГФ- 2 у ткиву склере. Вестерн блот је коришћен за одређивање релативних нивоа експресије АКП1 и ЦАВ1 протеина у ткиву склере. РТ-ПЦР је изведен да би се измерили релативни нивои експресије глутамат-аспартатног транспортера (ГЛАСТ) и глутаматног транспортера 1 (GLT-1) иРНК у ткиву склере. Резултати: У поређењу са нормалном групом, рефракциона грешка, ниво експресије ТГФ- 2 и релативни нивои експресије АКП1 и ЦАВ1 протеина у ФДМ групи, групи са формулама Цистанцхе и ПИР групи су значајно смањени, док су аксијална дужина и релативни нивои експресије ГЛАСТ мРНА и GLT-1 мРНА значајно повећани (алл05 ПИР). <0. У поређењу са ФДМ групом, рефракциона грешка, ниво експресије ТГФ- 2 и релативни нивои експресије протеина АКП1 и ЦАВ1 у групи са формулом Цистанцхе и ПИР групи су значајно повећани, док су аксијална дужина и релативни нивои експресије ГЛАСТ мРНА и GLT-1 мРНА значајно смањени (сви П < 0,05). У поређењу са групом формуле Цистанцхе, грешка рефракције, ниво експресије ТГФ- 2 и релативни нивои експресије протеина АКП1 и ЦАВ1 у ПИР групи су значајно смањени, док су аксијална дужина и нивои релативне експресије ГЛАСТ мРНА и GLT-1 мРНК значајно повећани (сви П < 0,05). Резултати ХЕ бојења су показали да није било абнормалних промена у структури сваког слоја ретине у нормалној групи; ретина ФДМ групе је истањена и појавиле су се тешке вакуолне промене у слоју ганглијских ћелија; повећана је дебљина мрежњаче групе Цистанцхе формуле и ПИР групе, распоред ћелија је био у основи правилан, повећан је број ганглијских ћелија, а ћелије у сваком слоју су биле густо распоређене, са најзначајнијим перформансама у групи формуле Цистанцхе. Закључак: Формула која садржи Цистанцхе има известан позитиван ефекат на лечење ФДМ, а њен механизам може бити везан за регулисање експресије ЦАВ1, АКП1 и ТГФ- 2, као и за балансирање и побољшање ремоделирања склере и функција транспорта воде.

 

 

ЦИСТАНЦХЕ БИЉНИ ДОДАТАК ЗА ПОБОЉШАЊЕ ФУНКЦИЈЕ БУБРЕГА

 

 

Кључне речи

Миопија депривације облика; Формула која садржи Цистанцхе; Трансформациони фактор раста- 2; Аквапорин 1; Цавеолин-1; Ремоделирање склере; Водени транспорт

 

Последњих година, са променама у начину живота људи и континуираним развојем електронских уређаја, инциденција миопије је у порасту. Као уобичајена болест, постала је глобални здравствени проблем. Миопија депривације облика (ФДМ) је посебна врста миопије, која је обично узрокована лишавањем или смањењем визуелне стимулације очију. ФДМ не само да омета процес ремоделирања склере, већ доводи и до абнормалних промена у облику очне јабучице и поремећаја функције транспорта воде, што може додатно погоршати оштећење и деформацију склералног ткива. Аквапорин 1 (АКП1) је широко постојећи протеин чија је главна функција да промовише брз транспорт молекула воде кроз ћелијске мембране. У оку, дистрибуција и функција АКП1 су повезани са динамичком равнотежом интраокуларне течности. Кавеолин-1 (ЦАВ1) је протеин укључен у формирање микроструктура ћелијске мембране и трансдукцију сигнала. У оку, ЦАВ1 је углавном присутан у ретиналним пигментним епителним ћелијама и фоторецепторским ћелијама, и повезан је са преносом визуелних сигнала и стабилношћу интраокуларног окружења. Трансформациони фактор раста- 2 (ТГФ- 2) је плеиотропни цитокин са вишеструким биолошким ефектима као што је промовисање пролиферације, диференцијације и миграције ћелија. У интраокуларном окружењу, ТГФ- 2 игра важну улогу у развоју и одржавању рожњаче и склере. Тренутно, главни третман за ФДМ је терапија лековима.

У традиционалној кинеској медицини (ТЦМ), верује се да је формирање миопије повезано са факторима као што су недовољно чи и крви, као и недостатак есенције бубрега. Бубрег се сматра "урођеном основом" и уско је повезан са функцијом очију. ТЦМ сматра да „бубрег управља суштином, а есенција храни очи; јетра се отвара у очи, а довољно крви из јетре обезбеђује јасан вид“. Због тога је тонирање бубрега и исхрана крви одувек био важан терапијски принцип за очне болести изазване синдромима дефицита у ТКМ.

Цистанцхе, познат као "пустињски гинсенг" и један од "девет бесмртних лекова" у ТЦМ, има историју дугу више од 2.000 година као медицински састојак. Записан као врхунски хранљиви медицински материјал у древним класицима ТЦМ, Цистанцхе је високо цењен због својих ефеката тонирања бубрега, обнављања есенције, храњења крви и влажења сувоће. За разлику од многих других ТЦМ биљака, Цистанцхе расте искључиво у пустињама, углавном паразитирајући на коренима Тамарик рамосиссима у регионима као што су Синђијанг, Унутрашња Монголија и Гансу у Кини. Јединствено пустињско окружење даје га богатим активним састојцима, укључујући ехинакозид, вербаскозид и флавоноиде, за које је научно доказано да имају снажна антиоксидативна својства, смањују апоптозу ћелија и подстичу пролиферацију ћелија.

Савремена истраживања су показала да Цистанцхе има значајан ефекат на бубреге. Може да смањи апоптозу ћелија бубрега, промовише пролиферацију ћелија бубрега, поправи оштећене ћелије бубрега и прошири крвне судове бубрега, чиме се побољшава функција бубрега. Поред тога, Цистанцхе може побољшати имунитет промовишући пролиферацију лимфоцита, одупрети се умору повећањем производње гликогена у јетри и испољавати ефекте против старења кроз уклањање слободних радикала. Ове биолошке активности су у великој мери у складу са ТЦМ теоријом о "тонизацији бубрега и хранљиве есенције", а такође пружају научну основу за њену примену у лечењу очних болести. Засновано на ТЦМ терапијском принципу тонификације бубрега и хранљиве крви, и комбиновањем савремених фармаколошких карактеристика Цистанцхеа, ова студија је заменила оригиналне биљке за исхрану крви и тонификацију бубрега са Цистанцхеом да би се формирала нова формула која садржи Цистанцхе, и истражила његову ефикасност и развој нове идеје ФДМ у циљу природног лечења. биљне терапије за миопију.

1 Материјали и методе

1.1 Експерименталне животиње

Четрдесет мушких СД пацова СПФ разреда, тежине 180-200 г и старости 6-8 недеља, купљено је од Пекиншког центра за узгој животиња Кеју [Број лиценце: СЦКСК (Јинг) 2022-0004] и рутински узгајано у Лабораторији за животиње Кинеске академије за очне науке. Овај експеримент је био у складу са релевантним одредбама „Правила о управљању експерименталним животињама“ и одобрио га је Комитет за медицинску етику Очне болнице Кинеске академије кинеских медицинских наука (бр. серије: ИКЕЦ-KT-2024-017-П001).

1.2 Главни реагенси и инструменти

Цистанцхе тубулоса (купљена од Цхенгду ВеЦистанцхе Био-Тецх. Цо., Лтд., са активним састојцима који укључују ехинакозид већи или једнак 30,0%, вербаскозид већи или једнак 12,0%, и укупни фенетил алкохолни гликозиди већи од или једнаки 75,0%) је коришћен као медицински материјал. Пирензепин (ПИР, Сузхоу Хонгсен Пхармацеутицал Цо., Лтд.); Цомпоунд Тропицамиде капи за очи (Хебеи Јиниао Ионггуанг Пхармацеутицал Цо., Лтд., спецификација 5 мЛ); 4 г·Л⁻¹ оксибупрокаин хидрохлорид капи за очи (Схандонг Баусцх & Ломб Фреда Пхармацеутицал Цо., Лтд.); АКП1 антитело (Вухан Фине Биотецх Цо., Лтд.); ЦАВ1 антитело (Вухан Боту Биотецхнологи Цо., Лтд.); -актинско антитело (Схангхаи Јингке Цхемицал Тецхнологи Цо., Лтд.); Козји анти-зечји ИгГ (Вензхоу Кемиао Биотецхнологи Цо., Лтд.); ХЕ комплет за бојење (Схангхаи Зеие Биотецхнологи Цо., Лтд.).

1.3 Метод моделирања и груписање

Тридесет пацова је коришћено за успостављање ФДМ модела. Пацови су анестезирани интраперитонеалном ињекцијом пентобарбитал натријума (30 мг·кг⁻¹). Након чишћења и дезинфекције десног ока повидон-јодом, на десно око је залепљена непрозирна маска за очи. Маска за очи је свакодневно проверавана да ли се одвојила или пропуштала, и поново залепљена ако је лабава. Лево око је остало нелечено. После 4 недеље депривације монокуларне форме, бинокуларна ретиноскопија и мерење аксијалне дужине су обављени на пацовима. Критеријуми успеха за моделовање: након циклоплегије, рефракциона грешка је мерена ретиноскопом или аутоматским рефрактометром, а лишено око је показало значајно кратковидно померање у статусу рефракције [тј. разлика у бинокуларној грешци рефракције већа од или једнака 2 Д сматрала се успешним моделирањем, а просечни миопични помак је упоређиван са око-4 контролисаног ока.5 ±5. Д]. Свих 30 пацова је успешно моделирано и подељено у ФДМ групу, ПИР групу и групу формуле Цистанцхе, са по 10 пацова у свакој групи. Преосталих 10 немоделираних пацова служило је као нормална група.

1.4 Методе интервенције

Нормална група и ФДМ група нису примиле никакву интервенцију. ПИР групи је давано 5 капи ПИР капи за очи у десно око два пута дневно (ујутру и увече) са интервалом од 2 минута током 15 дана. Група формуле Цистанцхе је интервенисала са формулом која садржи Цистанцхе. Цистанцхе тубулоса (50 г, основни састојак) је препарен са водом и концентрован до медицинског раствора са концентрацијом од 1000 г·Л⁻¹. Пацовима је давана интрагастрична доза од 12,70 г·кг⁻¹ једном дневно током 15 дана. Дозирање Цистанцхе-а је одређено на основу његовог искуства у клиничкој примени и савремених фармаколошких истраживања, обезбеђујући ефикасне концентрације активних састојака као што су ехинакозид и вербаскозид.

1.5 Методе детекције

1.5.1 Процена рефракционе грешке и промена аксијалне дужине

Детекција морфолошке и рефракционе грешке: Двадесет четири сата након завршетка депривације форме, 3 пацова су насумично одабрана из сваке групе за детекцију. Пре експеримента, пацови су смештени у тамно прилагођено окружење на 30 минута, затим анестезирани инхалацијом изофлурана и фиксирани на посебан носач за животиње. За панорамско скенирање очне јабучице коришћен је ОЦТ систем за снимање високе резолуције. Током скенирања, сонда је подешена да буде окомита на рожњачу да би се добиле јасне слике попречног пресека мрежњаче и сочива. Свако око је скенирано 3 пута узастопно, а аксијално растојање од предње површине рожњаче до слоја пигментног епитела ретине (тј. аксијална дужина) је аутоматски измерено помоћу софтвера уграђеног у систем да би се израчунала сферна еквивалентна грешка рефракције. Да би се осигурала тачност података, два професионално обучена истраживача су независно анализирала слике на слепо. Ако је разлика између два резултата мерења била већа од 0,50 Д, подаци су одбачени и поново мерени. Потврдна детекција аксијалне дужине: За верификацију резултата ОЦТ мерења коришћен је и А-сцан ултразвучни дијагностички инструмент. Прво су капи за очи оксибупрокаин хидрохлорид укапљене у оба ока пацова за топикалну анестезију, а затим је сонда за А-скен нежно стављена у контакт са рожњачом. Инструмент је подешен на мануелни режим, а тачна ултразвучна брзина пропагације је подешена у складу са интраокуларним медијумом: 1540 м·с⁻¹ за предњу комору и стакласто тело. Током рада, сваки интерфејс је лоциран ручним обележавањем, а свако око је мерено 3 пута више пута да би се добила просечна вредност. Овај експеримент је изведен на слеп начин, а сви оператери су прошли јединствену обуку како би се обезбедиле доследне технике мерења. Инструмент је калибрисан пре мерења, а неки узорци су насумично одабрани за тестирање поновљивости да би се проценили коефицијенти корелације унутар класа и међу класама (ИЦЦ). Током експеримента су поштоване строге стандардизоване оперативне процедуре како би се осигурала научност и поузданост података.

1.5.2 ХЕ бојење

Након детекције рефракционе грешке и аксијалне дужине, пацови су жртвовани прекомерном анестезијом. Дезинфиковани су капци и околна ткива оба ока, а обележени су назални и темпорални лимбус окомито на средину рожњаче. Коњунктива је урезана према ознакама, а очна јабучица је енуклеисана. Лимб је инцизиран да би се уклонило ткиво предњег сегмента и стакласто тело, а склерално ткиво је задржано. Склерално ткиво је фиксирано са 40 г·Л⁻¹ параформалдехида током 24 сата, дехидрирано са градијентом етанола, рутински убачено у парафин, очишћено ксилелом, монтирано неутралним балзамом, исечено на 5 μм, обојено ХЕ и посматрано због оптичких микроморфолошких промена склерског ткива.

1.5.3 Имунохистохемијско бојење за експресију ТГФ- 2 у склералном ткиву

Два пацова су одабрана из сваке групе. Секције склералног ткива су подвргнуте преузимању и блокирању антигена, инкубиране са мишјим анти-ТГФ- 2 (1:3000) током 24 сата, испране, инкубиране са секундарним антителом (1:2000) током 1 сата, рутински развијене и контраобојене, снимљене су 2 неутралним микроскопским снимцима и снимљене су неутралним микроснимком на 3 балзаму. промене. Систем за анализу слике детектовао је сиву вредност позитивног дела.

1.5.4 Вестерн блот детекција нивоа експресије протеина АКП1 и ЦАВ1 у склералном ткиву

Два пацова су одабрана из сваке групе. Склерално ткиво је изрезано, хомогенизовано, а укупни протеин је екстрахован додавањем РИПА пуфера за лизу. Извршена је денатурација протеина, квантификација, електрофореза, мембрански трансфер и блокирање. Додата су примарна антитела АКП1 (1:1000), CAV-1 (1:3000) и -актинско антитело (1:2000) и инкубирана преко ноћи на 4 степена. Додато је секундарно антитело (1:2000) и инкубирано на собној температури 1 сат. Додат је ЕЦЛ реагенс, а вредност сиве протеина је анализирана софтвером Имаге Лаб. Однос сиве вредности циљне траке и вредности -актина био је његов релативни ниво експресије.

1.5.5 РТ-ПЦР детекција експресије ГЛАСТ и GLT-1 мРНА у склералном ткиву

Узето је преостало склерално ткиво пацова, а укупна РНК је екстрахована по методи Тризол. Укупна РНК је мерена спектрофотометром, а цДНК је реверзно транскрибована према упутствима за комплет. РТ-ПЦР реакциони систем је припремљен са следећим реакционим условима: 75 степени за 30 с, 85 степени за 60 с, 80 степени за жарење у трајању од 30 с, 65 степени за продужење током 30 с, укупно 40 циклуса. Са -актином као интерном референцом, релативни нивои експресије глутамат-аспартатног транспортера (ГЛАСТ) и глутаматног транспортера 1 (GLT-1) су израчунати методом 2⁻ΔΔЦт. Прајмер секвенце су приказане у табели 1. Једносмерна анализа варијансе је коришћена за поређење између група, а ЛСД-т тест је коришћен за поређење у пару између група. Ниво теста:=0.05.