2 Ресултс

2.1 Поређење општих перформанси и исхода понашања међу пацовима у свакој групи

Пацови у контролној групи су показали нормалну активност у понашању и храњење. Пацови у групи модела постепено су показивали спор одговор, брадикинезију, прљаво крзно и дрхтање удова и главе; ове манифестације су постајале све израженије са продуженим трајањем моделирања. У поређењу са моделном групом, пацови у свим групама за дозирање Бусхен Зхицхан Формуле (БСЗЦФ) и групи која је примала леводопа-бенсеразид показали су различите степене побољшања у понашању при храњењу, ублажавање типичних симптома тремора, смањену учесталост и амплитуду невољних тремора удова и појачану спонтану активност. У међувремену, крзно пацова је постало суво и чисто, а најзначајнија побољшања су примећена у групи са високим дозама БСЗЦФ и групи која је узимала леводопа-бензеразид. Као што је приказано у табели 1, у поређењу са контролном групом, латенција кретања у мрежном тесту и време у тесту на стубу су значајно повећани у свим осталим групама (П < 0,05); у поређењу са моделном групом, латенција покрета у грид тесту и тесту на стубу је повећана у групи инхибитора Нрф2, док су оба индикатора смањена у групи која је примала леводопа-бензеразид и свим групама дозе БСЗЦФ (П < 0,05); смањење латенције покрета и времена пењања по стубу у групи са високим дозама БСЗЦФ и групи која је узимала леводопа-бензеразид била је значајнија од оних у групама са ниским и средњим дозама БСЗЦФ (П < 0,05); није било статистички значајне разлике између групе са високим дозама БСЗЦФ и групе која је примала леводопа-бензеразид (П > 0,05).

Листа бенефиција Цистанцхе

Проверите листу

Служба подршке Вецистанцхе-За више детаља о сарадњи
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com
 

2.2 Поређење садржаја Фе²⁺, ГСХ, ГПКС4 и МДА у субстантиа нигра средњег мозга међу пацовима у свакој групи

Као што је приказано у табели 2, у поређењу са контролном групом, садржај ГСХ и ГПКС4 у супстанцији нигра средњег мозга је значајно смањен, док је садржај Фе²⁺ и МДА значајно повећан у свим осталим групама (П < 0,05); у поређењу са моделном групом, повећан је садржај Фе²⁺ и МДА, а смањен је садржај ГПКС4 и ГСХ у групи инхибитора Нрф2 (П < 0,05), док је садржај Фе²⁺ и МДА смањен, а садржај ГСХ и ГПКС4 повећан у групи која је примала леводопа-бензеразид (група <бенсеразид алл.БСЗ0Ф); у поређењу са групама са ниским и средњим дозама БСЗЦФ, садржај Фе²⁺ и МДА је додатно смањен, а садржај ГСХ и ГПКС4 је додатно повећан у групи која је примала леводопа-бензеразид и групу са високом дозом БСЗЦФ (П < 0,05); није било статистички значајне разлике у свим показатељима између групе која је примала леводопа-бензеразид и групе са високом дозом БСЗЦФ (П > 0,05).

2.3 Поређење нивоа протеина Нрф2, СЛЦ7А11 и ГПКС4 у субстантиа нигра средњег мозга међу пацовима у свакој групи

Као што је приказано у табели 3, у поређењу са контролном групом, нивои протеина Нрф2, СЛЦ7А11 и ГПКС4 у супстанцији нигра средњег мозга су значајно смањени у свим осталим групама (П < 0,05); у поређењу са моделном групом, нивои протеина Нрф2, СЛЦ7А11 и ГПКС4 су додатно смањени у групи инхибитора Нрф2, док су повећани у групи која је примала леводопа-бензеразид и свим групама са дозом БСЗЦФ (П < 0,05); нивои протеина Нрф2, СЛЦ7А11 и ГПКС4 у групи која је примала леводопа-бензеразид и групи са високом дозом БСЗЦФ били су значајно виши од оних у групама са ниским и средњим дозама БСЗЦФ (П < 0,05); није било статистички значајне разлике у овим нивоима протеина између групе која је примала леводопа-бензеразид и групе са високим дозама БСЗЦФ (П > 0,05). Слике електрофорезе Нрф2, СЛЦ7А11 и ГПКС4 протеина у супстанциа нигра средњег мозга пацова у свакој групи су приказане на слици 1.

2.4 Поређење нивоа РОС и експресије мРНА Нрф2 у субстантиа нигра средњег мозга међу пацовима у свакој групи

Као што је приказано у табели 4, у поређењу са контролном групом, ниво РОС је значајно повећан, а експресија мРНК Нрф2 је значајно смањена у супстанци нигра средњег мозга свих осталих група (П < 0,05); у поређењу са моделном групом, ниво РОС је повећан и експресија мРНК Нрф2 је смањена у групи инхибитора Нрф2, док је ниво РОС смањен и експресија Нрф2 мРНА повећана у групи која је примала леводопа-бензеразид и свим групама дозе БСЗЦФ (П < 0,05); у поређењу са групама са ниским и средњим дозама БСЗЦФ, ниво РОС је додатно смањен, а експресија мРНА Нрф2 је додатно повећана у групи која је примала леводопа-бензеразид и групу са високом дозом БСЗЦФ (П < 0,05); није било статистички значајне разлике између групе која је примала леводопа-бензеразид и групе са високим дозама БСЗЦФ (П > 0,05).

3 Дискусија

Као комплексна неуродегенеративна болест, патогенеза ПД је уско повезана са регулацијом фероптозе [15]. Клиничке студије су откриле да мозак пацијената са ПД показује значајну акумулацију гвожђа, углавном концентрисаног у супстанци нигра парс цомпацта [16]. У моделу ПД код мајмуна, интервенција са клиохинолом (ЦК), који има ефекте утишавања редокс-а на Фе²⁺, значајно је смањила акумулацију гвожђа и пероксидацију липида у супстанцији нигра [17]. Инхибирање фероптозе може ефикасно ублажити оштећење неурона у ПД. Механизам фероптозе укључује пероксидацију липида и акумулацију Фе²⁺; Преоптерећење Фе²⁺ може да генерише РОС кроз Фентонову реакцију, а РОС посредује у пероксидацији липида како би се произвела МДА, што на крају доводи до фероптозе нервних ћелија [18-19]. МДА је главни производ пероксидације липида, обележава интрацелуларни оксидативни стрес и служи као биомаркер фероптозе [20]. ГПКС4 је кључни антиоксидативни ензим који, уз учешће ГСХ, редукује токсичне липидне пероксиде на нетоксичне липидне алкохоле и елиминише интрацелуларне липидне РОС, чиме спречава производњу липидних пероксида индукованих РОС и инхибира фероптозу [21-22]. Поред тога, студије [23] су показале да у моделима ПД ћелија, повећање експресије Нрф2 и ГПКС4 може промовисати синтезу ГСХ, смањити производњу РОС и акумулацију Фе²⁺, чиме се инхибира фероптоза ПД неурона. СЛЦ7А11 је важан онкогени протеин који игра кључну улогу у одбрани од оксидативног стреса и фероптозе [24]. Као кључна подјединица цистин/глутаматног антипортер система (Систем Ксц⁻), СЛЦ7А11 је одговоран за транспорт глутамина у ћелије, где се претвара у цистеин за синтезу ГСХ [25]. Када једињења инхибирају цистин/глутаматни антипортер систем, синтеза ГСХ је блокирана, спречавајући ГПКС4 да користи ГСХ за смањење липидних пероксида и изазивање фероптозе [26]. И ГПКС4 и ГСХ су ендогени инхибитори фероптозе, а сигнални пут СЛЦ7А11/ГСХ/ГПКС4, као један од главних регулаторних путева фероптозе, испољава важне антиоксидативне ефекте [27-28].

Нрф2, као главни регулатор ћелијских антиоксидативних одговора, укључен је у ћелијске антиоксидативне и антиинфламаторне реакције. Инхибирање експресије Нрф2 може повећати нивое пероксидације липида и формирање РОС, промовишући ћелијску фероптозу [29], док активирање Нрф2 може значајно инхибирати пероксидацију липида зависну од ГПКС4 и смањити производњу МДА и липидних РОС [30]. Студије [31] су показале да активирање експресије Нрф2 може ублажити губитак неурона допамина изазван 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрахидропиридин (МПТП) и моторни дефицит код ПД пацова, инхибирајући неуронску фероптозу. Због тога је у овој студији формирана група инхибитора Нрф2 да би се упоредиле промене у понашању и индикаторима везаним за фероптозу код ПД пацова након циљане регулације експресије Нрф2.

У традиционалној кинеској медицини (ТЦМ), ПД спада у категорију „синдрома тремора“. Често настаје као последица продужене болести, неправилног одржавања здравља које доводи до постепеног конзумирања бубрежне есенције или недостатка бубрега и недовољне есенције услед старења. Штавише, пошто јетра и бубрези имају исто порекло (хомологија јетра-бубрег), то на крају резултира недостатком јетре и бубрега. Када вода не храни дрво (вода не храни дрво), ветар-јанг узнемирава горе и унутрашњи ветар настаје тајно, што доводи до губитка контроле над меридијанима и удовима, што узрокује болест. На основу сумирања досадашњих искустава и комбиновања савремених истраживања, истраживачки тим верује да основни узрок ове болести лежи у јетри и бубрезима, а јетрено-бубрежни недостатак је кључна патогенеза. Гуилу Еркиан децоцтион је класична формула за лечење недостатка јуана бубрега и недовољне есенције, крви, јина и јанга, са снажним антиоксидативним и анти-агинг ефектима [32]; Дадингфенг Зху такође може заштитити неуроне и обновити функцију нервних ћелија [33]. Бусхен Зхицхан формула је модификована од Гуилу Еркиан децоцтион-а у комбинацији са Дадингфенг Зху-ом. С једне стране, формула наслеђује ефекте Гуилу Еркиан децоцтион-а у тонизацији бубрега и јанга, хранљиве есенције и сржи; с друге стране, заснован на концепту формуле Дадингфенг Зхуа у снажном храњењу правог јина и затезању плутајућег јанга како би се смирио унутрашњи ветар, постиже се ефекат смиривања мањкавог ветра обнављањем јин течности и хранљивим меридијанима. У међувремену, формула је комбинована са Фруцтус Цорни, Рхизома Полигонати иЦистанцхе десертицолада негује суштину и крв јетре и бубрега, и упарен са Рхизома Гастродиае и Рамулус Унцариае Цум Унцис за смиривање унутрашњег ветра и ублажавање грчева и тремора. Комбиновано, ове биљке испољавају ефекте исхране јетре и бубрега, допуне есенције, смирују ветар, заустављају тремор и ископавају колатерале.

Посебно,Цистанцхе десертицола(30 г), основна компонента БСЗЦФ-а, је добро позната тоник биљка у ТКМ-у, поштована као „пустињски жен-шен“ и забележена као врхунски хранљиви медицински материјал више од 2000 година. Његова својства која исхрањују бубреге су добро документована: богата је активним састојцима као што су ехинакозид, вербаскозид и флавоноиди, за које се показало да инхибирају апоптозу ћелија бубрега, промовишу пролиферацију ћелија бубрега и испољавају моћна антиоксидативна својства – својства која директно подржавају формулу за обнављање кисне жлезде и обнављање ћелија. (хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/цистанцхе-ектрацт-продуцт/цистанцхе-фор-ноурисхинг-киднеи.хтмл). Савремене студије су то додатно потврдилеЦистанцхеврсте (посебноЦистанцхе тубулоса, који има највећи садржај кључних активних компоненти) може побољшати имунитет, одолети умору и заштитити од оксидативног стреса, а све то може допринети неуропротективним ефектима БСЗЦФ у ПД синергистичким регулисањем фероптозе и Нрф2/СЛЦ7А11/ГСХ/ГПКС4 пута.

Претходне студије [2, 34-35] су потврдиле да формула Бусхен Зхицхан може ефикасно ублажити церебралне инфламаторне одговоре и заштитити допаминергичке (ДА) неуроне код ПД пацова. Леводопа-бенсеразид таблете су обично коришћени лекови за лечење ПД са одређеном клиничком ефикасношћу, служе као стандардна терапија за ПД [36]; стога је овај лек постављен као позитивна контрола у овом експерименту.

Резултати ове студије су показали да су у поређењу са моделном групом побољшани општи услови (као што су понашање при храњењу, учесталост тремора и статус крзна) и перформансе понашања пацова у свим групама дозе БСЗЦФ и групи која је примала леводопа-бензеразид. Међу њима, група са високим дозама БСЗЦФ и група која је примала леводопа-бензеразид су показале боља побољшања од група са ниским и средњим дозама БСЗЦФ, без значајне разлике између групе са високим дозама БСЗЦФ и групе леводопа-бензеразида. У поређењу са нормалним пацовима, пацови са ПД модела су имали смањен садржај ГПКС4 и ГСХ и повећан садржај Фе²⁺, МДА и РОС у супстанцији нигра средњег мозга, што указује на присуство фероптозе и оксидативног оштећења липида код пацова модела ПД. У међувремену, циљана инхибиција експресије Нрф2 са инхибитором МЛ385 довела је до даљег смањења садржаја ГПКС4 и ГСХ, и нивоа протеина СЛЦ7А11 и ГПКС4, као и повећања садржаја Фе²⁺, МДА и РОС у супстанцији средњег мозга у поређењу са моделном групом нигра. Ово сугерише да Нрф2 може регулисати експресију СЛЦ7А11/ГСХ/ГПКС4 осе, а инхибирање експресије Нрф2 погоршава фероптозу и оксидативно оштећење липида. После интервенције са малим, средњим и високим дозама БСЗЦФ и леводопа-бензеразида, експресија Нрф2 мРНА и нивои протеина СЛЦ7А11 и ГПКС4 у супстанци нигра средњег мозга ПД пацова су повећани, садржај ГСХ је повећан, а садржај Фе²⁺, РОС и М је смањен. Међу њима, група са високим дозама БСЗЦФ показала је упоредива побољшања у односу на групу која је примала леводопа-бензеразид, која су била супериорнија у односу на групе са ниским и средњим дозама БСЗЦФ. Ови резултати сугеришу да формула Бусхен Зхицхан може ублажити реакције на оксидативни стрес и инхибирати неуронску фероптозу у одређеној мери. Може да промовише синтезу ГПКС4 повећањем стабилности СЛЦ7А11, побољшању експресије ГСХ и смањењу нивоа Фе²⁺, РОС и МДА, чиме инхибира процес фероптозе неуронских ћелија ПД, са најбољим ефектом при високој дози. Његов механизам може укључити повећање експресије Нрф2 да би се активирао низводни сигнални пут СЛЦ7А11/ГСХ/ГПКС4, чиме се инхибира процес фероптозе ПД неурона.

У закључку, формула Бусхен Зхицхан може побољшати моторичке симптоме и инхибирати фероптозу неурона супстанције нигра средњег мозга код ПД пацова. Механизам може бити активирањем експресије Нрф2, повећањем регулације пута СЛЦ7А11/ГСХ/ГПКС4 и ефикасним уклањањем акумулираних Фе²⁺ и липидних пероксида у ћелијама, чиме се инхибира неуронска фероптоза и штите ДА неурони. Ова студија пружа одређену научну основу и теоријску подршку за истраживање третмана ПД помоћу формуле Бусхен Зхицхан. Узимајући у обзир да је механизам којим Бусхен Зхицхан формула инхибира неуронску фероптозу код ПД пацова релативно сложен, будуће студије ће можда морати да комбинују секвенцирање једне ћелије, уређивање гена и друге технике како би даље систематски открили његов регулаторни механизам.

Референце

[15] Су И, Јиао И, Цаи С, ет ал. Молекуларни механизам фероптозе и његов однос са Паркинсоновом болешћу [Ј]. Браин Рес Булл, 2024, 213: 110991. дои: 10.1016/ј.браинресбулл.2024.110991.[16] Гриффитхс ПД, Добсон БР, Јонес ГР, ет ал. Гвожђе у базалним ганглијама код Паркинсонове болести. Ин витро студија која користи фину структуру проширене апсорпције рендгенских зрака и крио-електронску микроскопију [Ј]. Браин, 1999, 122 (Пт 4): 667–673.[17] Схи Л, Хуанг Ц, Луо К, ет ал. Клиохинол побољшава моторне и немоторне дефиците у моделу Паркинсонове болести код мајмуна изазваног МПТП-ом путем АКТ/мТОР пута [Ј]. Агинг (Албани НИ), 2020, 12(10): 9515–9533.[18] Ко ЦЈ, Гао СЛ, Лин ТК, ет ал. Фероптоза као главни фактор и терапеутска мета за неуроинфламацију код Паркинсонове болести [Ј]. Биомедицинес, 2021, 9(11): 1679.[19] Ванг И, Схен З, Зхао С, ет ал. Сипеимин ублажава повреду плућа изазвану ПМ 2,5 инхибирањем фероптозе путем ПИ3К/Акт/Нрф2 пута: приступ мрежној фармакологији [Ј]. Ецотокицол Енвирон Саф, 2022, 239: 113615. дои: 10.1016/ј.ецоенв.2022.113615.[20] Цхен Кс, Канг Р, Кроемер Г, ет ал. Проширивање хоризонта: улога фероптозе у раку [Ј]. Нат Рев Цлин Онцол, 2021, 18(5): 280–296.[21] Киу И, Цао И, Цао В, ет ал. Примена фероптозе код болести [Ј]. Пхармацол Рес, 2020, 159: 104919. дои: 10.1016/ј.пхрс.2020.104919.[22] Лиу МР, Зху ВТ, Пеи ДС. Систем Ксц(-): кључни регулаторни циљ фероптозе код рака [Ј]. Инвест Нев Другс, 2021, 39(4): 1123–1131.[23] Гу СЦ, Ксие ЗГ, Гу МЈ, ет ал. Мирицетин ублажава моторичке поремећаје и смањује неуронску фероптозу у пацовском моделу Паркинсонове болести [Ј]. Сци Реп, 2024, 14(1): 15107.[24] Имаи Х, Матсуока М, Кумагаи Т, ет ал. Ћелијска смрт зависна од пероксидације липида регулисана ГПк4 и фероптозом [Ј]. Цурр Топ Мицробиол Иммунол, 2017, 403: 143–170. дои: 10.1007/82_2016_508.[25] Ксие И, Хоу В, Сонг Кс, ет ал. Фероптоза: процес и функција [Ј]. Целл Деатх Диффер, 2016, 23(3): 369–379.[26] Киноваки И, Курата М, Исхибасхи С, ет ал. Прекомерна експресија глутатион пероксидазе 4 инхибира ћелијску смрт изазвану РОС-ом у дифузном великом Б-ћелијском лимфому [Ј]. Лаб Инвест, 2018, 98(5): 609–619.[27] Стоцквелл БР. Фероптоза пуни 10 година: нови механизми, физиолошке функције и терапеутске примене [Ј]. Целл, 2022, 185(14): 2401–2421.[28] Схе Кс, Танг ВЈ, Танг Б. Фероптоза и неурална повреда у можданом удару [Ј]. Цхин Ј Биоцхем Мол Биол, 2020, 36(7): 756–765. (на кинеском)[29] Денг И, Ву И, Зхао П, ет ал. Оса Нрф2/HO-1 може бити прогностички фактор код карцинома бубрежних ћелија бистрих ћелија [Ј]. Цанцер Манаг Рес, 2019, 11: 1221–1230. дои: 10,2147/CMAR.S188046.[30] Хе Р, Лиу Б, Ксионг Р, ет ал. Итаконат инхибира фероптозу макрофага путем Нрф2 путева против акутне повреде плућа изазване сепсом [Ј]. Целл Деатх Дисцов, 2022, 8(1): 43.[31] Ванг М, Зхенг ХС, Ие ВЛ, ет ал. Механизам побољшања Паркинсонове болести посредованог електроакупунктуром инхибицијом фероптозе кроз активирање Нрф2/ГПКС4 сигналног пута [Ј]. Фронт Агинг Неуросци, 2025, 17: 1551404. дои: 10.3389/фнаги.2025.1551404.[32] Лиу КСЛ, Ксу ЦЈ, Ианг ЛЛ. Посматрање ефикасности модификоване Гуилу Еркиан децоцтион у комбинацији са акупунктуром у лечењу Алцхајмерове болести [Ј]. Цлин Ј Цхин Мед, 2020, 12(21): 92–93. (на кинеском)[33] Цуи ТТ, Цао ЈЛ, Оуианг ЈФ, ет ал. Ефекти Дадингфенг Зхуа на микроглијалну активацију и сигнални пут ТЛР4/МиД88/НФ-κБ у супстанцији нигра код мишева модела Паркинсонове болести [Ј]. Ј Традит Цхин Мед, 2023, 64(9): 930–938. (на кинеском)[34] Ху ИИ, Ли ЛГ, Лиу ИХ, ет ал. Механизам формуле Бусхен Зхицхан у инхибицији неуронске пироптозе код пацова са Паркинсоновом болешћу регулацијом миР-296-5п/ГСДМД пута [Ј]. Цхин Арцх Традит Цхин Мед, 2023, 41(4): 114–119, 280. (на кинеском) [35] Ху ИИ, Луо ИКС, Киан К, ет ал. Ефекти Бусхен Зхицхан формуле у комбинацији са уградњом акупунктуре на понашање и уклањање слободних радикала у супстанцији нигра код пацова са Паркинсоновом болешћу [Ј]. Цхин Ј Интегр Мед Цардио-Церебровасц Дис, 2019, 17(2): 200–203. (на кинеском)[36] Група за Паркинсонову болест и поремећаје кретања Неуролошког огранка Кинеског медицинског удружења; Паркинсонова болест и поремећаји кретања Група неуролошких лекара огранка Кинеског удружења лекара. Кинеске смернице за лечење Паркинсонове болести (четврто издање) [Ј]. Цхин Ј Неурол, 2020, 53(12): 973–986. (на кинеском) [37] ВеЦистанцхе Био-Тецх. Цистанцхе за болест бубрега [ЕБ/ОЛ]. хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/цистанцхе-ектрацт-продуцт/цистанцхе-фор-ноурисхинг-киднеи.хтмл. Приступљено [Убаци датум приступа ако је потребно].