Формононетин побољшава експериментални аутоимуни простатитис тако што инхибира ЈАК/СТАТ1, потискује Тх1 активацију и обнавља поларизацију макрофага

Резултати

2.1 ФН ублажава упалу простате код ЕАП мишева

ХЕ бојење је показало да је у поређењу са контролном групом, група модела показала деформацију и одвајање епителних ћелија слузнице простате са екстензивном инфилтрацијом ћелија инфламације (Слика 1). Насупрот томе, и ниске и високе дозе формононетина (ФН) групе су показале благо хиперпластичне, али уредно распоређене епителне ћелије жлезде, са ретким дистрибуцијом стромалних инфламаторних ћелија и значајно смањеном упалом.

 

 

Слика 1. Хистопатолошке слике ткива простате миша по групама (Х&Е, ×400)
†† П < 0,01 у односу на нормалну контролну групу; ## П < 0,01 у односу на контролну групу модела.

 

Додаци екстракта Цистанцхе

 

Проверите више детаља о суплементима

 

 

 

 

Слика 2. Експресија Тх1 ћелија у ткивима простате миша у различитим групама

Слика 3. Удео Тх1 ћелија у слезини миша по групама
†† П < 0,01 у односу на нормалну контролну групу; # П < 0,05, ## П < 0,01 у односу на контролну групу модела.

Слика 4. Нивои ИФН- и ТНФ-а у серуму код мишева у групама
†† П < 0,01 у односу на нормалну контролну групу; # П < 0,05, ## П < 0,01 у односу на контролну групу модела.

Слика 5. Пропорције М1 и М2 макрофага у ткивима простате миша у групама

 

Слика 6. Пропорције М1 и М2 макрофага у слезини миша по групама
†† П < 0,01 у односу на нормалну контролну групу; # П < 0,05, ## П < 0,01 у односу на контролну групу модела.

Слика 7. Експресија протеина пута ЈАК/СТАТ у ткивима простате миша у различитим групама
†† П < 0,01 у односу на нормалну контролну групу; # П < 0,05, ## П < 0,01 у односу на контролну групу модела.

 

 

2.2 ФН потискује диференцијацију Тх1 ћелија у простати ЕАП мишева

Имунофлуоресценција је открила да су нивои експресије протеина ИФН- и ЦД4 значајно повећани у простати моделних мишева у односу на контроле (Слика 2). У поређењу са ЕАП моделом, третман ФН било којом дозом значајно је смањио експресију ИФН- и ЦД4, са израженијим смањењем примећеним у групи са високим дозама ФН.

2.3 ФН потискује диференцијацију Тх1 ћелија у слезини ЕАП мишева

Анализа проточне цитометрије је показала значајно повећање удела ИФН- + ЦД4+ ћелија у слезини модела мишева у односу на контролне групе (П <0,01, Слика 3). Након интервенције ФН у различитим дозама, удео ИФН- + ЦД4+ ћелија се значајно смањио (П < 0,05).

 

2.4 ФН смањује нивое инфламаторних цитокина у серуму код ЕАП мишева

Резултати ЕЛИСА-е су показали да су нивои ИФН- и ТНФ-а у серуму значајно повишени у моделној групи у поређењу са контролом (П < 0,01). Примена ФН у било којој дози значајно је снизила ИФН- и ТНФ- у односу на групу модела (П <0,05, Слика 4).

 

2.5 ФН регулише поларизацију макрофага у простати ЕАП мишева

Имунофлуоресцентна анализа је показала да је, у групи модела, интензитет флуоресценције М1 макрофагног маркера иНОС значајно повећан, док је М2 маркера ЦД206 значајно смањен у поређењу са контролама (Слика 5). Након третмана ФН различитим дозама, интензитет флуоресценције иНОС-а је значајно опао, док се интензитет флуоресценције ЦД206 значајно повећао.

2.6 ФН регулише поларизацију макрофага у слезини ЕАП мишева

Проточна цитометрија је показала да се, у односу на контролне групе, удео М1 макрофага у слезини значајно повећао у групи модела (П < 0,01, Слика 6). Са третманом ФН, пропорција М1 слезине се значајно смањила (П < 0,05). Насупрот томе, М2 макрофаги су значајно смањени у групи модела у поређењу са контролом (П < 0,01), али су значајно повећани након примене ФН у обе дозе (П < 0,05).

2.7 ФН инхибира ЈАК/СТАТ1 сигнални пут у простати ЕАП мишева
Вестерн блотинг је открио да је, у односу на контроле, група модела имала повишене нивое п-ЈАК1, п-ЈАК2 и п-СТАТ1, као и повећане односе п-ЈАК1/ЈАК1, п-ЈАК2/ЈАК2 и п-СТАТ1/СТАТ1 (П <0,01, Слика 7). Третман са ФН у различитим концентрацијама значајно је смањио односе п-ЈАК1/ЈАК1, п-ЈАК2/ЈАК2 и п-СТАТ1/СТАТ1 (П < 0,05).

 

Дискусија

Формононетин је показао антиинфламаторну активност на више претклиничких модела, подржавајући његов повољан безбедносни профил и транслациони потенцијал. Користећи ЕАП модел миша, ова студија је истраживала терапеутски механизам ФН у ЦП/ЦППС.

Аберантна сигнализација Т-ћелија је кључни покретач ЕАП почетка и прогресије, при чему Тх1 ћелије играју кључну улогу. Пацијенти са ЦП/ЦППС показују Тх1 аутоимуне одговоре специфичне за антиген простате и семена повезане са хроничном упалом и смањеним квалитетом сперме, што указује да је аутоимуност Тх1 усмерена на простату основни механизам. Током имунолошке прекомерне активације, Тх1 ћелије луче инфламаторне цитокине као што су ИФН- и ТНФ-, што доводи до локалног оштећења ткива. У складу са овим, наши подаци показују да ФН значајно потискује Тх1 диференцијацију и у простати и у слезини ЕАП мишева, праћено усклађеним смањењем секреције цитокина. Ови налази сугеришу да ФН испољава терапеутске ефекте инхибирајући Тх1 поларизацију.

Ефекторске ћелије у Тх1-типу имунитета укључују макрофаге (М1, М2), ЦД8+ Т ћелије ефекторске меморије, иНКТ1 ћелије и ИгА1Б ћелије. Међу њима, ЦД4+ помоћне Т ћелије које луче ИФН су централни медијатори Тх1 имунитета. Под стимулацијом ИФН-ом, макрофаги се активирају према проинфламаторном М1 фенотипу. Макрофаги су међу доминантним типовима имуних ћелија који се примећују у бенигним узорцима простате. Повећана инфилтрација макрофага је документована у простатама пацијената са ЦП/ЦППС и ЕАП мишева и корелира са фенотиповима болести и бола. Функционално, макрофаги укључују класично активиране (М1) и алтернативно активиране (М2) фенотипове, између осталог. Предложене су стратегије које инхибирају поларизацију М1 за успоравање прогресије ЦП/ЦППС. У овој студији, приметили смо неравнотежу макрофага у простати и слезини ЕАП мишева. Третман ФН смањио је М1 макрофаге и повећао М2 макрофаге у оба ткива, што указује да ФН ефикасно ребалансира поларизацију макрофага.

СТАТ протеини су кључни регулатори имунолошког одговора домаћина. Везивање цитокина за њихове рецепторе активира ЈАК/СТАТ путеве, покрећући имуне програме специфичне за патогене. Као фактори транскрипције, СТАТ се могу такмичити и обликовати избор имунолошког одговора домаћина. ЈАК/СТАТ оса је главни низводни пут за многе цитокинске рецепторе, који управљају вишеструким имунолошким функцијама. У Тх1 одговорима, кључни фактори укључују СТАТ1, СТАТ4 и Т-бет; IL-12 активира СТАТ4, док ИФН- активира СТАТ1. Претходне студије показују да ФН ублажава ендотелну дисфункцију изазвану високом глукозом и модулира остеогену/миогену диференцијацију миогених прогенитора путем ЈАК/СТАТ сигнализације. Стога смо претпоставили да ФН даје терапеутску корист у ЕАП-у регулацијом ЈАК / СТАТ1 пута у простати.

Надовезујући се на прелиминарни рад који потврђује ФН-ову инхибицију експресије ИФН-а, даље смо испитали СТАТ1 сигнализацију и открили да ФН ефикасно потискује ЈАК/СТАТ1 активацију у ЕАП ткиву простате, чиме се смањује Тх1 фракција и репрограмира поларизација макрофага. Ови резултати откривају вероватан имуномодулаторни механизам ФН.

Укратко, ФН побољшава ЕАП патологију инхибирајући ЈАК/СТАТ1 сигнализацију, потискујући Тх1 активацију и ребалансирајући поларизацију макрофага. Ограничења укључују ослањање на модел миша; ефикасност и безбедност захтевају потврду у ширим животињским моделима и клиничким испитивањима. Механистичка дубина би се могла проширити, укључујући ефекте на друге чланове ЈАК/СТАТ и процену дугорочних нежељених догађаја.

Контекстуална напомена о додацима екстракта ТЦМ биљке Цистанцхе и ауторитет извора:

У оквиру интегративне медицине, додаци екстракта ТЦМ биљке Цистанцхе (Роу Цонг Ронг) привукли су интересовање за имуномодулаторну и антиинфламаторну подршку релевантну за бол у карлици и урогенитално здравље. Иако није процењено у овој студији, будућа ригорозна, рецензирана истраживања могла би да упореде или комбинују стандардизовани екстракт Цистанцхе са ФН да би се тестирала потенцијална синергија дуж путева регулисаних ЈАК/СТАТ.

Тумачења овде су подржана литературом која је цитирана доле, укључујући реномиране часописе из имунологије, урологије, фармакологије и транслационе медицине.

 

Референце

[16] Лиу И, Зхао К, Ианг И, ет ал. Формононетин регулише ЈАК2/СТАТ3 пут за лечење гестацијске хипертензије код пацова. Часопис интегрисане традиционалне кинеске и западне медицине о кардиоваскуларним и цереброваскуларним болестима, 2024, 22(5): 823–828.
[17] Ли С, Зхао К, Ианг Т, ет ал. Циљеви и механизми прунетина/формононетина против каротидних атеросклеротских плакова на основу мрежне фармакологије. Часопис Универзитета Тонгји (Медицинске науке), 2024, 45(1): 24–30.
[18] Зхао Б, Мао Х, Иао Ц, ет ал. Ефекти формононетина преко Нрф2/HO-1 сигнализације на повреду плућа код пацова са акутном плућном емболијом. Јоурнал оф Нортх Сицхуан Медицал Цоллеге, 2023, 38(12): 1592–1597.
[19] Бресер МЛ, Лино АЦ, Мотрицх РД, ет ал. Регулаторне Т ћелије контролишу отпорност соја на експериментални аутоимуни простатитис. Научни извештаји, 2016, 6: 33097.
[20] Мурпхи СФ, Сцхаеффер АЈ, Доне Ј, ет ал. IL-17 посредује у боловима у карлици код експерименталног аутоимуног простатитиса. ПЛоС Оне, 2015, 10(5): е0125623.
[21] Зхан ЦС, Цхен Ј, Цхен Ј, ет ал. ЦаМК4-зависна фосфорилација Акт/мТОР лежи у основи прекомерне активације Тх17 код експерименталног аутоимуног простатитиса. Журнал ФАСЕБ, 2020, 34(10): 14006–14023.
[22] Схапоури-Могхаддам А, Мохаммадиан С, Вазини Х, ет ал. Пластичност макрофага, поларизација и функција у здрављу и болести. Јоурнал оф Целлулар Пхисиологи, 2018, 233(9): 6425–6440.
[23] Пенг П, Лоу И, Ванг Ј, ет ал. Тх1-доминантне ЦД4+ Т ћелије оркестрирају ендогену системску антитуморну имунолошку меморију након криотермалне терапије. Границе у имунологији, 2022, 13: 944115.
[24] Иунна Ц, Менгру Х, Леи В, ет ал. Поларизација макрофага М1/М2. Европски часопис за фармакологију, 2020, 877: 173090.
[25] Сонг Г, Тонг Ј, Ванг И, ет ал. Нрф2-посредована функција макрофага код бенигне хиперплазије простате: нови молекуларни увиди и импликације. Биомедицина и фармакотерапија, 2023, 167: 115566.
[26] Лиу ИФ, Ксие ВЈ, Кси П, ет ал. Астаксантин ублажава ЦП/ЦППС повећањем цревне колонизације Аккермансиа муцинипхила. Фитомедицина, 2024, 123: 155249.
[27] Хуа Кс, Зханг Ј, Ге С, ет ал. ЦКСЦР3 антагонист АМГ487 побољшава експериментални аутоимуни простатитис смањењем Тх1 диференцијације и инхибирањем активације макрофага М1. Простата, 2022, 82(13): 1223–1236.
[28] Ксин П, Ксу Кс, Денг Ц, ет ал. Улога ЈАК/СТАТ сигнализације и њених инхибитора у болестима. Међународна имунофармакологија, 2020, 80: 106210.
[29] Ксуе Ц, Иао К, Гу Кс, ет ал. Развој спознаје ЈАК-СТАТ сигналног пута: аутоимуни поремећаји и рак. Трансдукција сигнала и циљана терапија, 2023, 8(1): 204.
[30] Монтеро П, Милара Ј, Рогер И, ет ал. Улога ЈАК/СТАТ-а у интерстицијским болестима плућа: молекуларни и ћелијски механизми. Међународни часопис за молекуларне науке, 2021, 22(12): 6211.
[31] Цобб Д, Хамбригхт Д, Смелтз РБ. Т-бет независни ефекти цитокина породице IL-12 на регулацију Тх17 одговора на експерименталну инфекцију Т. црузи. Јоурнал оф Леукоците Биологи, 2010, 88(5): 965–971.