Ефекти декокције Јианпи Бусхен Иики на имунолошку функцију и неуромишићне спојеве код ЕАМГ мишева

2.3 Хистоморфолошко поређење тимуса и лимфних чворова у свакој групи мишева

Као што је приказано уСлика 1, кору тимуса и медулу упразна контролна групамишеви су били јасно разграничени, са уредно распоређеним ћелијама. Насупрот томе, тхеконтролна група моделапоказују нејасне кортикално-медуларне границе и ретку дистрибуцију ћелија. У поређењу са групом модела, мишеви угрупа преднизонаигрупе са ниским, средњим и високим дозама Јианпи Бусхен Иикипоказао релативно јасне кортикално-медуларне границе и густе, добро организоване ћелије.

Слика 2показује да су ћелије лимфних чворова у празној контролној групи показале комплетну структуру и уредан распоред. Примарни лимфоидни фоликули су били видљиви у кортексу, без секундарних фоликула или герминалних центара. У групи модела, ћелијска структура је била дезорганизована, са пролиферисаним примарним фоликулима и видљивим секундарним фоликулима и герминалним центрима. Групе за преднизон и Јианпи Бусхен Иики су показале смањену хиперплазију лимфоидног фоликула.

Табела 3показује да је, у поређењу са празном контролном групом, група модела имала смањен однос површине кортекса и медуле у тимусу и повећане герминативне центре у лимфним чворовима (П < 0,05 или П < 0,01). У поређењу са групом модела,преднизонивисоке дозе Јианпи

 

 

 

Слика 1 Поређење хистопатолошке морфологије ткива тимуса међу различитим групама мишева (ХЕ бојење)

 

Табела 3. Поређење односа тимусне кортикално-медуларне површине и броја заметних центара лимфних чворова у свакој групи мишева

Јединица: (к ± с)

Група	n	Однос површине кортекса тимуса/медуле	Број Герминалног центра (по ЛН)
Празна контрола	3	3.62 ± 0.18	0.00 ± 0.00
Контрола модела	3	1.74 ± 0.11 ᵃ	6.47 ± 1.51 ᵃ
Преднисоне	3	4.62 ± 1.41 ᵇ ᶜ	3.52 ± 0.35 ᵇ ᶜ
Децоцтион Лов Досе	3	2.91 ± 0.42 ᶜ	5.77 ± 0.66 ᶜ
Децоцтион Медиум Досе	3	3.41 ± 1.05 ᶜ	4.12 ± 0.25 ᶜ
Децоцтион Хигх Досе	3	4.60 ± 0.55 ᵇ ᶜ	3.00 ± 0.71 ᶜ

Напомене:

ᵃ: П < 0,01 у односу на празну контролу

ᵇ: П < 0,05 у односу на контролу модела

ᶜ: П < 0,01 у односу на контролу модела

Бусхен Иикигрупе су показале већи однос површине кортекса и медуле. Све интервентне групе, укључујући преднизон и све три дозе декокције, значајно су смањиле број герминативних центара (П < 0,01). У поређењу са групом преднизона, децокција јегрупе са ниским и средњим дозамаи даље је показивао нешто више заметних центара, док јегрупа са високим дозаманије имала значајну разлику.

Напомена: Црне стрелице показују на лимфне фоликуле, а црвене стрелице на герминативне центре.

Слика 2 Поређење хистопатолошке морфологије ткива лимфних чворова међу различитим групама мишева (ХЕ бојење)

 

 

 

 

2.4 Поређење процената Тх1, Тх2, Тх17, Трег и Тфх ћелија у суспензијама ћелија слезине

Као што је приказано уТабела 4, у поређењу са празном контролном групом, тхегрупа моделапоказао повећан проценат Тх1, Тх2, Тх17 и Тфх ћелија и смањен проценат Трег (П < 0,05 или П < 0,01). У поређењу са групом модела,групе децокција са средњим и високим дозамаимао смањене Тх1 проценте и повећане проценте Трег; све три децокционе групе су показале смањене проценте Тх17 и Тфх. Посебно, тхегрупа преднизонасмањени проценти Трег-а, што изазива забринутост због његовог потенцијала да поремети имунолошку хомеостазу.

У поређењу са групом која је примала преднизон, све групе са декоцијом су показале смањење Тх2, Тх17 и Тфх ћелија. Тхегрупе са средњим и високим дозамадодатно смањен Тх1 и повећане Трег ћелије (П < 0,05 или П < 0,01), што указује на уравнотеженију имунорегулацију.

 

 

 

Напомена: НМЈ, неуромускуларни спој; АЦхР, ацетилхолински рецептор.

Слика 3 Поређење морфологије АЦхР на неуромускуларним спојевима мишићних група међу различитим групама мишева
(имунофлуоресцентно бојење, ×100)

 

Табела 4. Поређење процената Тх1, Тх2, Тх17, Трег и Тфх ћелија у суспензијама ћелија слезине међу различитим групама мишева

Јединица: (% , к ± с)

Група	n	Тх1	Тх2	Th17	Трег	Тфх
Празна контрола	6	0.05 ± 0.04	0.03 ± 0.02	0.11 ± 0.06	16.42 ± 2.59	9.45 ± 3.29
Контрола модела	7	3.43 ± 1.11 ᵃ	0.82 ± 0.22 ᵃ	1.64 ± 0.65 ᵇ	7.99 ± 3.26 ᵃ	18.27 ± 4.21 ᵃ
Преднисоне	7	1.84 ± 0.26	0.84 ± 0.47	1.03 ± 0.71	5.02 ± 1.58 ᵃ	15.32 ± 3.84
Децоцтион Лов Досе	7	1.42 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.60 ± 0.16 ᶜ ᶠ	0.73 ± 0.24 ᶜ ᶠ	14.97 ± 2.11 ᶠ	10.35 ± 3.72 ᶜ ᶠ
Децоцтион Медиум Досе	7	1.08 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.47 ± 0.14 ᶜ ᶠ	0.45 ± 0.20 ᶜ ᶠ	13.82 ± 2.21 ᶠ	9.87 ± 3.65 ᶜ ᶠ
Децоцтион Хигх Досе	7	1.23 ± 0.62 ᶜ ᵉ	0.32 ± 0.14 ᶠ	0.34 ± 0.22 ᶜ ᶠ	13.50 ± 2.47 ᶠ	7.97 ± 3.60 ᶜ ᶠ

Напомене:

ᵃ: П < 0,01 у односу на празну контролу

ᵇ: П < 0,05 у односу на празну контролу

ᶜ: П < 0,01 у односу на контролу модела

ᵈ: П < 0,05 у односу на контролу модела

ᵉ: П < 0,05 у односу на преднизон

ᶠ: П < 0,01 у односу на преднизон

 

 

2.5 Поређење морфологије АЦхР у НМЈ у свакој мишићној групи

Слика 3показује да су НМЈ АЦхР у слепој контролној групи били структурно нетакнути и да су се појавили као компактне формације налик перецу. У групи модела, НМЈ у очним, стерноклеидомастоидним, делтоидним и тибијалним предњим мишићима изгледали су фрагментирани и деформисани, док су жвачни, интеркостални и дијафрагмални мишићи показали озбиљно поремећене структуре. Све интервентне групе су показале различите степене побољшања морфологије АЦхР.

Као што је приказано уТабела 5, у поређењу са празном контролном групом, моделна група је имала значајно смањен однос АЦхР површина у више мишића (П < 0,05 или П < 0,01). У поређењу са групом модела,преднизонисредња доза децокцијегрупе су показале повећану површину АЦхР у очним мишићима. Тхегрупа децокција са малим дозамапобољшане АЦхР области у делтоидном и предњем делу тибијалиса. Тхегрупа са високим дозамапобољшане АЦхР области у очним, стерноклеидомастоидним, делтоидним и тибијалним предњим мишићима.

У поређењу са преднизоном,група са малим дозамапобољшане АЦхР области у очним и жвачним мишићима; тхегрупа са средњом дозому жвачним мишићима; анд тхегрупа са високим дозамау стерноклеидомастоидном и предњем тибијалису (П < 0,05 или П < 0,01).

Табела 5. Поређење АЦхР области на неуромускуларном споју у свакој групи мишићних група мишева

Јединица: (% , к ± с)

Група	n	Очни мишић	Жвачки мишић	Стерноклеидомастоидни	Делтоид Мусцле	Интеркостални мишић	дијафрагма	Тибиалис Антериор
Празна контрола	3	3.83 ± 0.28	4.28 ± 0.29	4.48 ± 0.77	3.79 ± 0.12	3.78 ± 0.22	4.80 ± 0.26	3.60 ± 0.32
Контрола модела	3	2.58 ± 0.34 ᵃ	2.55 ± 0.45 ᵃ	2.15 ± 0.31 ᵇ	2.33 ± 0.15	2.55 ± 0.33	2.98 ± 0.34ᵇ	2.95 ± 0.49
Преднисоне	3	3.33 ± 0.49ᶜ	2.67 ± 0.55	3.83 ± 0.54	3.49 ± 0.38	3.60 ± 0.16	3.45 ± 0.67	3.02 ± 0.40
Децоцтион Лов Досе	3	2.76 ± 0.49ᵉ	3.05 ± 0.37ᵉ	3.77 ± 0.64	2.77 ± 0.44ᶜ	3.03 ± 0.25	3.33 ± 0.33	3.44 ± 0.71ᶜ
Децоцтион Медиум Досе	3	3.32 ± 0.40ᶜ	3.27 ± 0.75ᵉ	3.98 ± 0.43	3.27 ± 0.65	3.50 ± 0.28	3.85 ± 0.42	3.56 ± 0.52
Децоцтион Хигх Досе	3	3.46 ± 0.37ᶜ	3.34 ± 0.23ᵉ	4.54 ± 0.67ᶜ	3.69 ± 0.39	3.75 ± 0.36	3.75 ± 0.35	3.84 ± 0.52ᶜ

Напомене:

ᵃ: П < 0,05 у односу на празну контролу

ᵇ: П < 0,01 у односу на празну контролу

ᶜ: П < 0,05 у односу на контролу модела

ᵈ: П < 0,01 у односу на контролу модела

ᵉ: П < 0,05 у односу на преднизон

 

Табела 6. Поређење нивоа АЦхР-Аб, IL-6 и ТНФ-а у серуму међу различитим групама мишева

Јединица: (к ± с)

Група	n	АЦхР-Аб (П⁻¹)	IL-6 (пг·мл⁻¹)	ТНФ- (пг·мл⁻¹)
Празна контрола	12	1.00 ± 0.13	110.66 ± 30.75	25.84 ± 9.71
Контрола модела	12	3.13 ± 0.97 ᵃ	327.91 ± 38.71 ᵃ	124.15 ± 37.61 ᵃ
Преднисоне	11	2.05 ± 0.29 ᵇ ᶜ	487.21 ± 124.09 ᵇ	78.76 ± 22.35 ᵇ ᶜ
Децоцтион Лов Досе	13	2.50 ± 0.49ᵉ	306.42 ± 93.91ᶜ	89.14 ± 25.90 ᶜ
Децоцтион Медиум Досе	13	1.98 ± 0.34 ᶜ	278.60 ± 63.97ᶜ	80.36 ± 21.95ᶜ
Децоцтион Хигх Досе	13	1.42 ± 0.33 ᶜ	224.43 ± 49.03ᶜ	84.26 ± 36.60ᶜ

Напомене:

ᵃ: П < 0,01 у односу на празну контролу

ᵇ: П < 0,01 у односу на контролу модела

ᶜ: П < 0,01 у односу на контролу модела

ᵈ: П < 0,05 у односу на преднизон

ᵉ: П < 0,01 у односу на преднизон

2.6 Поређење нивоа АЦхР-Аб у серуму, IL-6 и ТНФ-а

Табела 6илуструје да, у поређењу са празном контролном групом,група моделаимао значајно повишене нивое АЦхР-Аб, IL-6 и ТНФ- (П < 0,01). У поређењу са групом модела,преднизонигрупе децокција са средњим и високим дозамазначајно смањен АЦхР-Аб. међутим,преднизон повећан IL-6, док јегрупа са високим дозама децокције смањена IL-6. И преднизон игрупе са средњим и високим дозамасмањен ТНФ- (П < 0,05 или П < 0,01).

У поређењу са преднизоном,група децокција са малим дозамаимао виши ниво АЦхР-Аб, алисве децокционе групеснизио IL-6, избегавајући проинфламаторне ефекте преднизона.

3. Дискусија

Клинички, МГ је категорисан у очну мијастенију гравис (оМГ) и генерализовану МГ (гМГ). оМГ се првенствено манифестује као птоза и диплопија, а може напредовати до гМГ, који се карактерише системском слабошћу скелетних мишића [1]. Теорија традиционалне кинеске медицине (ТЦМ) приписује патогенезу МГ дисфункцијама услезина и бубрег. Слезина управља мишићима и удовима, будући да је постнатални корен и извор Ки-ја и крви. Бубрег чува суштину и управља костима и сржи. Недостатак оба доводи до слабости мишића, као што се види у МГ [15–16].

На основу ТЦМ принципа „третирања корена“,тонизира слезину и бубрегепостаје централно. ТхеОдвар Јианпи Бусхен Иикиоличава овај приступ. Његов главни састојак,Астрагалус мембранацеус, појачава Ки слезине и подиже Јанг.Лепак од корњачевинеилепак за јелењи рогобогаћују бубрежну суштину и јанг, јачајући мишиће и кости.Цодонопсис, Ангелица синенсис, Буплеурум, Цимицифуга, иу меду пржени сладићраде синергијски да негују крв, подигну Јанг и хармонизују формулу.

Кључни додатак овој формулацији јеЦистанцхе десертицола, позната биљка затонизирајући јанг бубрега и обнавља виталну суштину. Показало се да Цистанцхе побољшава имунолошку модулацију и побољшава отпорност на умор, што га чини идеалним за стања као што је МГ. Према КСЈЦистанцхе, Цистанцхе екстракт подржававиталност живаца и мишића, промовишеравнотежа неуротрансмитера, и побољшаваимунолошка хомеостаза-механизми директно релевантни за МГ патофизиологију.

Ова студија је користила ЕАМГ модел миша за процену ефеката декокције на бихевиоралне, имунолошке и структурне димензије НМЈ. Резултати су то показалипреднизонпобољшала снагу хвата и Леннонове резултате, али је изазвала значајнегубитак тежине, у складу са познатим нежељеним ефектима глукокортикоида [19]. Насупрот томе, све дозе децокцијеповећана телесна тежина, што указује на бољу безбедност.

Терапеутска ефикасност је билазависно од дозе, сагрупа са високим дозамапостизање упоредивог побољшања у снази приањања и Ленноновом резултату са преднизон-понудом обојеефикасност и сигурност.

Индекси имунолошких органа су открили да преднизон смањује тимусни индекс и изазива кортикално-медуларну атрофију, нарушавајући централну толеранцију [20]. Уварак је, међутим, сачувао или побољшао структуру тимуса, посебно у великим дозама. Индекси слезине су пратили адвофазни образац регулације, са малим и средњим дозама које потискују абнормалну имунолошку пролиферацију, док је висока доза одржавала равнотежу.

Све групе са децокцијама смањиле су хиперплазију фоликула лимфних чворова, иако је само висока доза одговарала преднизону у супресији герминалног центра, што сугерише супериорну регулацију централног и периферног имунитета високим дозама.

Пошто је неравнотежа ЦД4⁺ Т-ћелија у основи ЕАМГ [4], способност декокције даребаланс Тх1/Тх2/Тх17/Тфх и Трегћелије је кључна. За разлику од преднизона, који је смањио Трег, децокција (нарочито средње и високе дозе)побољшани Треги потиснуте проинфламаторне подгрупе. Овоимунолошка модулација, уместо супресије имунитета, боље се усклађује са потребама аутоимуних болести као што је МГ.

За интегритет НМЈ, децокција је показалапоправка вишемишићног АЦхР-а, надмашујући преднизон у неколико мишићних група. Штавише, ефикасно је смањенАЦхР-Аб, IL-6 и ТНФ-, са високим дозама које показују најсвеобухватнији антиинфламаторни ефекат – без повишења преднизона IL-6.

 

Закључак

ТхеОдвар Јианпи Бусхен Иики, обогаћен саЦистанцхе десертицола, испољава вишециљне терапеутске ефекте код ЕАМГ мишева. То:

Поновно балансира Тх/Трег осу и потискује Тфх посредовану активацију Б ћелија

Смањује патогена антитела и инфламаторне цитокине

Поправља структуре НМЈ и враћа функцију мишића

У поређењу са преднизоном, нуди супериорносигурност, обнављање имунитета, ициљање на више мишића, истичући његов потенцијал као аклиничка алтернативаилипомоћна терапијаза МГ.

Будуће студије би требало да истраже његовубиоактивна једињења, метаболички путеви, имолекуларне мете, могуће крозмрежна фармакологијаипротеомика, како би се убрзао његов развој као новог терапеутика заснованог на ТКМ.