Прелиминарно истраживање промотивног ефекта и механизма полисахарида из Цистанцхе Десертицола на пролиферацију лимфоцита

Методе

МТТ тест је коришћен за откривање пролиферације лимфоцита слезине код мишева. Циклофосфамид (Ци) је коришћен за реплицирање животињских модела имунокомпромитованих животиња, а мерени су индекси слезине и тимуса нормалних и имунокомпромитованих животиња. Активност интерлеукина-2 (IL-2) мерена је тестом пролиферације тимоцита. Резултати: Полисахарид Цистанцхе десертицола значајно је подстакао пролиферацију лимфоцита активираних митогеном (ЦонА и ЛПС) и неактивираних нормалних ћелија и подстакао лучење IL-2 у лимфоцитима. Интраперитонеална примена је показала да полисахарид Цистанцхе десертицола значајно повећава индекс слезине нормалних и имунокомпромитованих мишева, а такође има значајан антагонистички ефекат на смањење индекса тимуса изазваног Ци. Закључак: Полисахарид Цистанцхе десертицола може значајно да подстакне пролиферацију лимфоцита слезине код мишева, што може бити повезано са његовом промоцијом лучења IL-2.

Пустињски живи цистанцхе

[Кључне речи]Цистанцхе десертицола полисахарид; Индекс слезине; Индекс тимуса; Пролиферација лимфоцита; Интерлеукин-2

Биљни полисахариди су привукли широку пажњу због својих широко распрострањених имуномодулаторних ефеката и релативно ниске токсичности [1]. Цистанцхе десертицола ма, позната као "пустињски гинсенг", је љускава, сува, месната стабљика Цистанцхе десертицола, биљке Оробацеае, која има опсежна фармаколошка дејства. Његова водена децокција може значајно повећати проценат фагоцита и фагоцитни индекс макрофага. Даља истраживања су показала да је његова материјална основа укупни полисахарид Цистанцхе десертицола [3]. Зенг Кунли и др. [4] су открили да појединачна компонента полисахарида Цистанцхе десертицола има значајан пролиферативни ефекат на тимусне лимфоците миша ин витро. Ефекат полисахарида Цистанцхе десертицола на пролиферацију лимфоцита примећен је ин виво и ин витро.

Молекуларна формула Цистанцхе десертицола

1Материјал и методе

1.1 Лекови и реагенси

Полисахарид из Цистанцхе десертицола обезбеђује Одељење за биљке и хемикалије Института за медицину и садњу Медицинског факултета. Екстрахује се из праха екстракта Цистанцхе, а садржај полисахарида је 87%.

Цистанцхе екстракт у праху

Пре употребе ин виво експеримената, растворити и разблажити физиолошким раствором до потребне концентрације и прокувати за стерилизацију. Пре употребе ин витро експеримената, медијум за културу RPMI-1640 је растворен и разблажен и извршена је стерилизација под високим притиском. Липополисахарид (ЛПС), конканавалин (ЦонА), дексаметазон (ДЕКС) и МТТ су сви производи Сигма Цорпоратион. Циклофосфамид, кинеско-америчко заједничко предузеће Сханки Таисхенг Пхармацеутицал Цо., Лтд., фетални говеђи серум, РПМИ1640 медијум за културу и трипсин су сви Гибцо производи. Остали реагенси су домаћи аналитички реагенси.

1.2 Животиње

БАЛБ ц младе мишеве (СПФ ниво) обезбеђује Витон Лихуа Екпериментал Анимал Тецхнологи Цо., Лтд. [СЦКСК (Пекинг) 2002-2003]. Животиње СПФ разреда се узгајају у просторији и слободно се хране и пију.

1.3 Апарат

Мултикан Асцент ензимски маркер, производ компаније Тхермо Елецтрон, САД. Леици PHS-3B Прецизни пХ метар, Схангхаи Прецисион Сциентифиц Инструмент Цо., Лтд., НАПЦОо 5410 инкубатор угљен-диоксида, НАПЦО, САД. BCN-1360 Ултра Цлеан Воркбенцх, Беијинг Донглианхар Инструмент Мануфацтуринг Цо., Лтд. XDS-1B Инвертирани микроскоп, Цхонгкинг Оптоелецтрониц Инструмент Цо., Лтд.

1.4 Метод

1.4.1 Утицај на пролиферацију лимфоцита [5]:

Рутинска припрема лимфоцита слезине од БАЛБ/ц мишева, коришћењем RPMI-1640 за подешавање концентрације ћелија на 1 × 107 мЛ, инокулисаних на плочу за културу са 96 јажица, са 100 суспензија ћелија додатих у сваки бунар μЛ-50. Узгојно је са различитим концентрацијама полисахарида Цистанцхе десертицола (коначна концентрација полисахарида Цистанцхе десертицола за пролиферацију неактивираних лимфоцита била је 6,25, 12,5, 25, 50 и 100 мг/Л по реду; коначна концентрација Цистанцхе десертицола полисахарида за пролиферацију неактивираних лимфоцита била је по реду; Т лимфоцити су били 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 и 62,5 мг/Л по реду, а коначна концентрација полисахарида Цистанцхе десертицола за пролиферацију ЛПС активираних Б лимфоцита била је 1,56, 3,13, 12,25 мг/Л и 6,25 мг; ЛПС, RPMI-1640 медијум је коришћен као контрола. Укупна запремина сваке рупе је 200 μЛ. Када се додају митоген ЦонА и ЛПС (контрола је RPMI-1640 која садржи одговарајуће концентрације ЦонА или ЛПС), коначне концентрације оба су 2,5 мг/Л и 10 мг/Л, респективно. Направљене су три паралелне рупе за различите третмане. Ставите плочу за културу у инкубатор са влажношћу од 37 степени, 5% ЦО2 на 68 сати, додајте МТТ и наставите са култивисањем 4 сата. Измерите вредност А540 нм помоћу маркера ензима користећи МТТ метод да бисте открили пролиферацију. Када упоредите сваку групу, претворите вредност А540нм у брзину пролиферације лимфоцита према следећој формули:стопа пролиферације лимфоцита=АА узорак А контрола × 100 %.

Ефекти Цистанцхе-побољшају имунитет

1.4.2 Утицај на тежину имуних органа код нормалних мишева [6,7]:

Млади БАЛБ ц мишеви (мужјаци, стари 4 недеље, телесне тежине 10-15 г) су насумично подељени у контролну групу (физиолошки раствор) и различите групе за дозирање (125 мг (кг · тм) и 250 мг (кг · т.м.)), са 11 пацова у свакој групи. Лек је даван интраперитонеално једном дневно током 7 узастопних дана. Мишеви су убијени након дислокације грлића материце. Узети су слезина и тимус, уклоњено је масно ткиво и ткиво фасције, а површинска течност је осушена филтер папиром. Након вагања, индекс слезине=100 × тежина слезине (мг) Телесна тежина (мг); Индекс хтимуса=100 × Тежина тимуса (мг) Телесна тежина (мг). Израчунајте индекс слезине и индекс тимуса за сваких 100 мг телесне тежине, респективно.

1.4.3 Утицај на тежину имунолошког органа код имунокомпромитованих мишева [7,8]:

Млади БАЛБ ц пацови (мужјаци, стари 6 недеља, телесне тежине 15-20 г) су насумично подељени у 12 група према телесној тежини. Осим нормалне контролне групе (интраперитонеална ињекција еквивалентне запремине физиолошког раствора), осталим групама је интраперитонеално даван Ци 50 мг (кг · т.м.) дневно, а раствор тестног лека је даван интраперитонеално [125 и 250 Мг (кг · т.м.)], нормална контролна група је давала исту физиолошку групу са 1. узастопних дана, једном дневно. Промене у тежини животиње примећене су током експеримента . 24 сати након последње примене, индекси слезине и тимуса су мерени и израчунати коришћењем исте методе као у 1.4.2.

1.4.4 Утицај на IL-2 активност:

① Индукција IL-2 [9]: Додајте 50 у сваки бунар на ћелијској плочи са 96 бунарчића μ Л Различите концентрације полисахарида Цистанцхе десертицола (коначне концентрације по редоследу: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5 мг/Л, 5 мг/Л контролне јажице додајте медијум културе) и 50 μЛ ЦонА (коначна концентрација 5 мг/Л), додајте још 1 по бунарчићу × 106 ћелија слезине. Инкубирајте у инкубатору за влажност од 37 степени, 5% ЦО2 засићеним 24 сата, центрифугирајте 20 минута на 2500 р мин, и узмите ћелијски супернатант и чувајте га на - 20 степену за приправност. ② IL-2 детекција активности [9,10]: Основна метода је заснована на литератури [9], а одговарајућа прилагођавања се врше према литератури [10]. Конвенционално припремање БАЛБ ц суспензије тимоцита миша, плоче са ћелијском културом са 96 јажица, 1 инокулација по бунарчићу × 106 тимоцита, уз додавање 50 ћелија по бунарчићу μЛ ЦонА (коначна концентрација 2,5 мг/Л), а затим додати припремљени IL-2 супернатант 50 μЛ контролног раствора 50 μЛ (додати заједно 50 μл контролног раствора Л културе). 54 сата, додајте МТТ, наставите са инкубацијом 4 сата, центрифугирајте 10 до 15 минута на 1000 р мин, одбаците супернатант и додајте ДМСО 100 по бунарчићу μЛ, протресите микро осцилатором 8 минута и измерите вредност А540 нм помоћу маркера ензима.

1.5 Статистичка анализа

Подаци су изражени као средња вредност и стандардна девијација (к ± с). За сређивање података коришћен је софтвер Мицрософт Екцел, а спроведен је и т-тест. П<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Резултати

2.1 Утицај на пролиферацију лимфоцита

Као што се може видети из табеле 1, додавање полисахарида Цистанцхе десертицола у медијум за културу лимфоцита слезине миша култивисаних ин витро у концентрацији изнад 25 мг/Л може значајно стимулисати пролиферацију лимфоцита, што указује да полисахарид Цистанцхе десертицола сам по себи има митотички ефекат. у исто време,може се видети из табеле 2 и табеле 3 да ЦДПС има значајан промотивни ефекат на пролиферацију ЦонА-индукованих Т лимфоцита или ЛПС-индукованих Б лимфоцита.

Таб.1 Утицај полисахарида Цистанцхе десертицола на пролиферацију неактивираних лимфоцита (к ±с, н =3)

Не: у поређењу са контролном групом, ＊П<0.05.

Таб.2 Утицај полисахарида Цистанцхе десертицола на пролиферацију Т лимфоцита изазвану ЦонА (к ±с, н =3)

 

Напомена: у поређењу са ЦонА групом, ＊П<0.05, ＊＊P <0.01.

Таб.3 Утицај полисахарида Цистанцхе десертицола на пролиферацију Б лимфоцита изазвану ЛПС (к ±с, н =3)

Напомена: у поређењу са ЛПС групом, ＊П<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Утицај на тежину имуних органа код нормалних мишева

Као што се може видети из табеле 4,Полисахарид Цистанцхе десертицола може значајно повећати индекс слезине нормалних БАЛБ/цц младих пацова, али не утиче на тимусну жлезду.

2.3 Утицај на тежину имунолошког органа код имунокомпромитованих мишева

Из табеле 5,види се да су индекси органа слезине и тимуса код мишева у Ци имуносупресивној групи нижи од оних у контролној групи, а полисахарид Цистанцхе десертицола (125, 250 мг/кг) може значајно побољшати индексе слезине и тимуса.

2.4 Утицај на активност IL-2

Као што се може видети из табеле 6,када доза полисахарида Цистанцхе десертицола достигне 7,82 мг/Л, може значајно повећати ослобађање IL-2 из ћелија слезине миша.

Таб.4 Ефекат полисахарида Цистанцхе десертицола на тежину имуних органа код нормалних мишева (к ±с, н =11)

Напомена: у поређењу са контролном групом, ＊＊П<0.01.

Таб.5 Ефекат полисахарида Цистанцхе десертицола на тежину имуних органа код имунодепресивних мишева (к ±с, н =12)

Напомена: у поређењу са контролном групом, ## П < 0,01; у поређењу са групом модела, ＊＊П<0.01.

Tab.6 The influence of Cistanche deserticola polysaccharide on the IL-2 production by splenic lymphocytes in mice( x ±s, n =3)

Напомена: у поређењу са контролном групом, ＊＊П<0.01.

3. Дискусија

ЦонА и ЛПС-индукована пролиферација лимфоцита слезине код мишева је ин витро експеримент за откривање функције Т и Б лимфоцита и важан је индикатор специфичне имунолошке способности. Студије су показале да када је коначна концентрација полисахарида Цистанцхе десертицола изнад 25 мг/Л, може значајно да подстакне пролиферацију лимфоцита, што указује да има одређени митотички ефекат. У присуству митогена (ЦонА или ЛПС), мања доза полисахарида Цистанцхе десертицола може побољшати ако тело показује значајну пролиферативну активност. Знамо да ЦонА и ЛПС углавном индукују пролиферацију Т лимфоцита или Б лимфоцита, респективно. Студије су показалездравствене предности цистанцхе праха: Полисахарид Цистанцхе десертицола може да подстакне и пролиферацију Т лимфоцита и пролиферацију Б лимфоцита, али је његов пролиферативни ефекат на Б лимфоците знатно јачи него на Т лимфоците.

Cistanche powder health benefits-Improvе имунитет

Кликните овде да видите производе Цистанцхе Импрове Иммунити

【Затражите више】 Е-пошта: xue122522@foxmail.com / ВхатсАпп 0086 18599088692 / ВеВеЦхат18599088692

Тимус и слезина су главни имуни органи код животиња. Имунске ћелије у слезини су углавном зрели Б лимфоцити, док су тимус углавном незрели Т лимфоцити. Индекси тимуса и слезине могу одражавати развој имунолошких органа и функционални статус имуних ћелија. Интраперитонеална ињекција полисахарида Цистанцхе десертицола може значајно повећати индекс слезине нормалних и имуносупресивних мишева и има значајан антагонистички ефекат на атрофију тимуса изазвану Ци код мишева.

Полисахарид Цистанцхе десертицола нема значајан утицај на тимусни индекс код нормалних животиња, што је у складу са резултатима ин витро експеримената у којима полисахарид Цистанцхе десертицола промовише пролиферацију Б лимфоцита пре него Т лимфоцита.

Cистанцхе додатак близу мене-Побољшајимунитет

IL-2 је цитокин који производе Т лимфоцити од Г1 фазе ћелијског циклуса до С фазе. То је главни фактор раста Т ћелија који делује као аутокрини фактор раста. Поред тога, IL-2 може да подстакне пролиферацију Б ћелија и синтезу антитела [11,12]. Полисахарид Цистанцхе десертицола промовише ослобађање IL-2 из лимфоцита, што је очигледно повезано са полисахаридом Цистанцхе десертицола који промовише пролиферацију лимфоцита слезине.

Медицинска истраживања показују да Цистанцхе садржи полисахариде, ехинакозиде и актеозиде, који могу да активирају лимфоците и побољшају стање организма; функционалне компоненте цистанцхе фенилетаноидних гликозида имају значајан утицај на опоравак ћелија након оштећења 60 Цо гама зракама, а такође могу побољшати имунолошку функцију против оштећења зрачења. Свакодневним узимањем Цистанцхе десертицола додатака може се постићи ефекат побољшања имунитета.