Абстрацт

Акутна повреда бубрега (АКИ)је критично стање које карактерише брз пад убубрежна функцијазбог више фактора као што су нефротоксичност, сепса и исхемија.Повреда бубрегаје дуготрајан, сложен процес, са почетном штетом која потенцијално напредујехронична болест бубрегаи чакзавршна фаза бубрежне инсуфицијенције. АКИ се манифестује оштећењем паренхима бубрега, тубуларном некрозом и смањеном брзином гломеруларне филтрације, што доводи до смањеног излучивања урина, неравнотеже електролита, акумулације метаболичког отпада и повишених нивоа азота уреје у крви (БУН), серумског креатинина (Сцр) и мокраћне киселине. АКИ се често појављује као део клиничких синдрома као што су срчана инсуфицијенција или отказивање јетре, погађајући 10–15% хоспитализованих пацијената и до 50% оних у јединицама интензивне неге (ИЦУ). Брз почетак и лоша прогноза АКИ-а су га учинили глобалним изазовом за јавно здравље. Тренутни западни медицински третмани се углавном ослањају на потпорне и замјенске терапије, које су скупе и често дају субоптималне резултате. Традиционална кинеска и монголска медицина, укорењена у хиљадама година холистичке праксе, нуди приступ са више циљева, вишеструких путева и више ефеката са високом ефикасношћу и безбедношћу. Последњих година, традиционална медицина је постала врућа тема истраживања за лечење АКИ. Стога, истраживање механизма монголске медицине која садржи Цистанцхе у лечењу АКИ има значајну вредност.

Монголски сложени лек заснован на Цистанцхе је класични рецепт који се састоји одЦистанцхе, нар, цимет, дуга паприка (Пипер лонгум), Алпиниа оффицинарум, Амомум виллосум, иБорнеол. Према традиционалној монголској медицинској теорији, бубрег се налази у положају "Бадаган" међу пет изнутрица, а болести бубрега су често типа Бадаган, изазване хладноћом. Верује се да формуле које садрже Цистанцхе, које су топле по природи, избацују бубрег на хладно и имају заштитне ефекте на бубрежну функцију, у складу са монголским принципом „лечења хладноће топлотом“. Претходне студије су показале да такве формуле, када се користе у комбинацији са другим монголским лековима, пружају заштиту бубрега код модела АКИ. На основу овога, ова студија има за циљ да користи мрежну фармакологију и експерименталну валидацију за истраживање биоактивних компоненти, терапеутских циљева и кључних путеваМонголски лек који садржи Цистанцхе у побољшању АКИ, постављајући теоријске основе за његову клиничку примену и даљи развој.

 

 

 

цистанцхе суплементи заПацијенти са акутном повредом бубрега (АКИ).

Кликните на слику да бисте добили више детаља о додатку херб цистанцхе

 

 

1. Материјали и методе

1.1 Мрежна фармаколошка анализа

1.1.1 Идентификација активних једињења и циљева

Користећи кључне речи „Цистанцхе, Пипер лонгум, Алпиниа оффицинарум, цимет, нар, Амомум виллосум, Борнеол“, претражили смоФармаколошка база података система традиционалне кинеске медицине (ТЦМСП)[хттп://тцмсп-е.цом] за проналажење биоактивних једињења и њихових циљева. Критеријуми скрининга су били:орална биорасположивост (ОБ) већа или једнака 30%исличност са дрогом (ДЛ) Већа или једнака 0,18. За Цистанцхе и цимет, којима недостају компоненте које задовољавају ове прагове, допунили смо податке о једињења/циља користећи преглед литературе иСвиссТаргетПредицтион[хттпс://ввв.свисстаргетпредицтион.цх/]. Пошто је главна компонента борнеола амонијум хлорид, он је искључен из даље анализе. Сви прикупљени протеински циљеви су стандардизовани наИмена гена Хомо сапиенсакористећи сеУниПротбаза података [хттпс://ввв.унипрот.орг].

1.1.2 Изградња сложене циљне мреже

Прикупљени подаци су организовани у НЕТВОРК и ТИПЕ фајлове и анализирани коришћењемЦитосцапе 3.9.1да се конструише мрежа интеракције једињења и циља за монголску медицину базирану на Цистанцхеу.

1.1.3 Скрининг циљева повезаних са АКИ

Циљеви повезани са АКИ су добијени коришћењем кључних речи „акутна повреда бубрега“ и „акутна бубрежна инсуфицијенција“ од:

ГенеЦардс[хттпс://ввв.генецардс.орг/]

ОМИМ[хттпс://омим.орг/]

База података о терапеутским циљевима (ТТД)[хттпс://дб.идрблаб.нет/ттд/]

ДругБанк[хттпс://ввв.другбанк.цом/]

ПхармГКБ[хттпс://ввв.пхармгкб.орг/]

Венови дијаграми су креирани помоћу онлајн алата [хттпс://ввв.биоинформатицс.цом.цн/статиц/отхерс/јвенн/] да би се идентификовали циљеви који се преклапају између база података.

1.1.4 Идентификација основних једињења и циљева, изградња ППИ мреже

КоришћењемНетворк Анализерфункције у Цитосцапе-у, анализирали смо мрежу једињења-циља. Чворови састепен централности, централност између централности, иблискост централностизнад медијане, ипросечна најкраћа дужина путаиспод медијане, одабрани су кроз четири круга да би се идентификовала језгра једињења. Заједнички циљеви између једињења и циљева повезаних са болешћу су унети уСТРИНГбаза података [хттпс://цн.стринг-дб.орг/], врста постављена на Хомо сапиенс, да се направиинтеракција протеин-протеин (ППИ)мреже. Мрежа је извезена у ТСВ формату за даљу анализу у Цитосцапе-у. Три рунде скрининга су дала резултатепотенцијалне мете, и шест рунди далоосновне мете. Тхејезгро циљно-потенцијална циљна мрежаје такође конструисан у Цитосцапе-у.

1.1.5 Анализа ГО и КЕГГ обогаћивања

Анализа обогаћивања је извршена уРСтудио 4.3.1користећиБиоцондуцтор и ЦлустерПрофилерпакети. Напомене о онтологији гена (ГО) укључивале су биолошки процес (БП), ћелијску компоненту (ЦЦ) и молекуларну функцију (МФ).Обогаћивање КЕГГ путатакође је спроведена. Визуелизација је завршена прекоБиоинформатицс.цом.цн[хттпс://ввв.биоинформатицс.цом.цн/].

1.1.6 Изградња мреже језгро језгро – циљ – болест – путеви

Идентификована кључна једињења, потенцијалне мете, повезане болести и сигнални путеви су интегрисани да се конструише амрежа језгро језгро – циљ – болест – путевикористећи Цитосцапе 3.9.1.

1.1.7 Молекуларно спајање

Структуре језгра су преузете саПубЦхем[хттпс://пубцхем.нцби.нлм.них.гов/] у СДФ формату и конвертован у МОЛ2 помоћуОтворите Бабел 2.4.1. Структуре језгра протеина су преузете изПДБ[хттпс://ввв.рцсб.орг/], одабрано на основу порекла Хомо сапиенса, високе резолуције и пожељно појединачних ланаца. Молекуларно спајање је изведено коришћењемАутоДоцкТоолс 1.5.7, са 50 покретања методом генетског алгоритма. Одабрана је најбоља конформација везивања са највећим афинитетом везивања и већином водоничних веза. Резултати су визуелизовани уПиМОЛ 2.5.7.

1.2 Експериментална валидација

1.2.1 Експерименталне животиње

СПФ-класа 4-недељни мужјаци КМ мишева (22 ± 2 г) купљени су од СПФ (Пекинг) Биотецхнологи Цо., Лтд. (лиценца бр. СЦКСК (Јинг) 2024-0001). Мишеви су смештени у лабораторији за животиње Медицинског колеџа Баотоу, Универзитета науке и технологије Унутрашње Монголије. Услови: 12 х циклус светлости/мрака, 24 ± 2 степена, 55 ± 5% влажности, храњење ад либитум. Експерименте на животињама одобрио је Институционални етички комитет (одобрење бр. BYDY-DL2023-36).

1.2.2 Припрема лека

Монголски лек на бази Цистанцхеа (серија бр.. 907031) је самлевен кроз сито од 100 месх и суспендован у 0,5% ЦМЦ-На.

1.2.3 Реагенси и инструменти

Кључни реагенси:

ЦМЦ-На (Соларбио, Пекинг)

Липополисахарид (Сигма-Алдрицх, Шангај)

Комплети за екстракцију РНК и реверзну транскрипцију (Севиер Биотецх, Вухан)

кПЦР мастер мешавина, РИПА пуфер за лизу, БЦА комплет, антитела: ПИ3К, Акт, п-Акт, -ацтин (Протеинтецх, Вухан)

Комплет за детекцију ЕЦЛ (Севиер Биотецх, Вухан)

Кључни инструменти:

Читач микроплоча (Тхермо Фисхер)

Центрифуга (JIDI-16R)

ПЦР систем у реалном времену (Тхермо Фисхер)

Систем за снимање гелом (Танон, Шангај)

1.2.4 Груписање, моделирање и администрација

32 миша су насумично подељена у 4 групе (н=8):

Контрола

Модел

Цистанцхе група са малим дозама (450 мг/кг)

Цистанцхе група високих доза (900 мг/кг)

Групе Цистанцхе су примале дневну оралну гаважу током 7 дана. Дана 7, 2 х након дозирања, све групе осим контролне су интраперитонеално убризгане саЛПС (10 мг/кг)да изазове АКИ. Контролна група је примила физиолошки раствор.

1.2.5 Морфологија бубрега, телесна тежина и индекс бубрега

24 х након моделирања, забележена је телесна тежина и тежина бубрега. Индекс бубрега=укупна тежина бубрега (г) / телесна тежина (кг).

1.2.6 Биохемијски тестови

Нивои БУН, Сцр и мокраћне киселине у серуму су мерени коришћењем комерцијалних комплета.

1.2.7 Хистопатолошка анализа

Бубрежно ткиво је фиксирано у 4% параформалдехида, дехидрирано, уграђено у парафин, исечено и обојено коришћењемХЕ бојење. Оштећење ткива је процењено под светлосним микроскопом.

1.2.8 кРТ-ПЦР за ТНФ-, IL-6, IL-1

Укупна РНК из ткива бубрега је екстрахована, реверзно транскрибована и амплификована коришћењем СИБР Греен кПЦР. ГАПДХ је коришћен као интерна контрола. Релативна експресија мРНА је израчуната коришћењем2^-ΔΔЦт метода.

1.2.9 Вестерн блоттинг за ПИ3К/Акт пут

Протеини су екстраховани из ткива бубрега коришћењем РИПА пуфера. Концентрација протеина је мерена БЦА тестом. Протеини су раздвојени преко СДС-ПАГЕ, пребачени на ПВДФ мембране, блокирани и испитани примарним и секундарним антителима. Сигнали су развијени коришћењем ЕЦЛ-а и квантификовани коришћењемИмагеЈсофтвера.

1.3 Статистичка анализа

Подаци су анализирани коришћењемГрапхПад Присм 9.5. Резултати су изражени каосредња вредност ± СД. За нормално распоређене податке са једнаком варијансом,једносмерна АНОВАпраћеноЛСД-т тестје коришћен. За ненормалне или неједнаке податке о варијанси,Крускал-Волис Х тестје примењено. АП-вредност < 0,05сматрало се статистички значајном.