Студија о терапеутским ефектима и механизмима мономера традиционалне кинеске медицине на моделу хипогонадизма касног почетка код пацова

 

Абстрацт

Циљ
За процену терапеутских ефеката и механизама три мономера традиционалне кинеске медицине (ТЦМ)ицариин, вербаскозид, игинсеносиде Рг1-онхипогонадизам са касним почетком (ЛОХ)у моделу пацова, и да истраже њихов потенцијал каоприродне интервенције за смањење тестостерона у вези са узрастомкод мушкараца средњих година.

Методе
Модел хипогонадизма са касним почетком (ЛОХ) установљен је код старијих мушкарацаСпрагуе-Давлеи пацовипутем интраперитонеалне ињекцијециклофосфамид, симулирајући недостатак андрогена. Три ТЦМ мономера-ицариин, вербаскозид, игинсеносиде Рг1- давани су орално током 60 дана.

На крају третмана мерена је телесна тежина и тежина репродуктивних органа (тестиси, епидидимис, семене везикуле итд.).Хистопатолошке променеу ткиву тестиса процењени су коришћењембојење хематоксилин-еозином (Х&Е).. Нивои у серумуФСХ, ЛХ, итестостеронтестирани су прекоЕЛИСА. Израз наандрогени рецептор (АР)протеина и мРНА су процењени коришћењемВестерн блотиквантитативни ПЦР у реалном времену (кРТ-ПЦР).

 

 

 

Резултати

Гинсеносиде Рг1показао најзначајније побољшање утелесна тежинаитежина репродуктивног органа(П < 0,01).

Ицариинзначајно повећао тежинутестиси, епидидимис, исеменске везикуле(П < 0,01).

Вербасцосидеумерено побољшана тежина семенских везикула (П < 0,05).

Сва три ТЦМ мономера ефикаснообрнута дегенерација тестисакод ЛОХ пацова, обнављајући структуру семиниферних тубула и повећавајући бројсперматогене ћелијеизрела сперма.

Све групе мономера показале су способност данижи нивои ФСХ и ЛХ у серумудокподизање серумског тестостерона. Тхеицариин гроуппоказала најзначајнија ендокрина побољшања (П < 0,01).

Нивои експресијеандрогени рецептор (АР)у протеинима и мРНК су значајно повећане у свим третираним групама. Ефекат одицариинбиоизраженији од тестостерон пропионата, што указује на аснажан регулаторни ефекат на АР сигнализацију.

 

Закључак

Ова студија сугерише дагинсеносиде Рг1је најефикаснији у побољшањутежина тела и органакод ЛОХ пацова, докицариинпоказује најјачи ефекат уповећање производње тестостеронаипобољшање АР експресије. Сва три мономера-ицариин, вербаскозид, игинсеносиде Рг1-демонстриранозаштитни ефекти против дегенерације тестисаиподржавају мушку репродуктивну ендокрину функцију, нудећи обећавајуће природне алтернативе за управљањехипогонадизам повезан са узрастом.

 

Кључне речи

Хипогонадизам са касним почетком (ЛОХ); Ицариин; Вербасцосиде; Гинсеносиде Рг1; традиционална кинеска медицина; Природни појачивач тестостерона; Мушки синдром старења; експресија андрогених рецептора; Биљна терапија за мушко здравље

Кликните на слику да бисте сазнали више о ТЦМ биљци за сексуално здравље

 

 

Позадина

Хипогонадизам са касним почетком (ЛОХ)код мушкараца средњих и старијих година уско је повезан сапад нивоа андрогена у вези са узрастом, посебно тестостерон. Епидемиолошка студија заснована на популацији из 2021. спроведена у шест репрезентативних провинција у Кини, укључујући6.296 мушкараца старости 40–79 година, открили су следеће стопе преваленције ЛОХ:

3.2%код мушкараца у 50-им годинама

11.2%у својим 60-им годинама

24.0%у 70-им [1]

ЛОХ карактеришесмањен тестостерон у серумузаједно са сазвежђем одсимптоми недостатка андрогенакао што су:

Низак либидо

Еректилна дисфункција

Депресија и раздражљивост

Когнитивни пад и губитак памћења

Ови симптоми могузначајно нарушавају физичко и психичко благостање, као иквалитет живота [2–3].

тренутно,терапија замене тестостероном (ТРТ)је главни третман за ЛОХ и може привремено да ублажи симптоме. Међутим, забринутост ококардиоваскуларни ризик, здравље простате, идугорочна сигурностостати [4]. Због тога расте интересовање за истраживањеприродне, сигурније алтернативе, посебно изТрадиционална кинеска медицина (ТЦМ).

Ова студија има за циљ да проценитерапијски ефекти и механизмиод три ТЦМ мономера-ицариин, вербаскозид, игинсеносиде Рг1-користећи апацовски модел ЛОХ.

 

1. Материјали и методе

1.1 Експерименталне животиње

Шездесет15-месечни мужјаци пацова Спрагуе-Давлеи (СД).(700–800 г) добијени су у јануару 2022. од Експерименталног центра за животиње Кинеског универзитета Тхрее Горгес. Бројеви лиценци:

Сертификат о животињама: Не. 42010200007997

Лиценца за производњу: СЦКСК (Е) 2022-0012

Пацови су смештени у контролисаном окружењу (температура: 19–23 степена, релативна влажност: 55%–65%), са природним циклусом светлости и мрака и слободним приступом храни и води. После1 недеља аклиматизације, почели су експерименти.

1.2 Реагенси и инструменти

Циклофосфамид(Нањинг Јианцхенг)

Ицариин(Нањинг Гуангрун Биотецх)

Гинсеносиде Рг1(Шангај Маклин)

Вербасцосиде(Схангхаи Зхензхун Биотецх)

АР антитело(Санта Круз, САД)

-актинско антитело(Сигма, САД)

Х&Е комплети за бојење(Схангхаи Иији Индустриал)

ЕЛИСА комплети за серумски ФСХ, ЛХ, тестостерон(Шангај Меилиан)

кРТ-ПЦР реагенси (СИБР Греен И)(Схангхаи Јулу Биотецх)

Инструменти: читач термо микроплоче, оптички микроскоп Олимпус, систем за снимање ЛИ-ЦОР Одиссеи, АБИ кРТ-ПЦР машина

 

1.3 Груписање животиња и индукција ЛОХ модела

Пацови су насумично распоређени6 група (н=10 по групи):

Контролна група:

Интраперитонеална (ип) ињекција 0,9% физиолошког раствора током 5 дана

Орални физиолошки раствор (1 мЛ/100 г) током 60 дана

Група модела:

ип циклофосфамид 20 мг/кг/дан током 5 дана

Након тога орални физиолошки раствор током 60 дана

Тестостерон пропионат (позитивна контрола):

ип циклофосфамид (исто као горе)

Субкутана ињекција тестостерон пропионата 5 мг / кг / дан током 7 дана

Ицариин гроуп:

ип циклофосфамид (исто)

Орални икариин 200 мг/кг/дан током 60 дана

Вербасцосиде гроуп:

ип циклофосфамид (исто)

Орални вербаскозид 200 мг/кг/дан током 60 дана

Гинсеносиде Рг1 група:

ип циклофосфамид (исто)

Орални гинсенозид Рг1 200 мг/кг/дан током 60 дана

Сви третмани су давани између8:00–11:30 часова. Извршене су процене24 сата након коначне дозе.

 

1.4 Телесна тежина и индекс репродуктивних органа

Након вагања, пацови су еутаназирани дислокацијом грлића материце. Тхетестиси, епидидимис и семенске везикулесу сецирали и измерили.

Једантестиса од сваког пацовабио фиксиран у4% параформалдехидатоком 72 сата, дехидрирано класификованим алкохолом, умотано у парафин, пресечено (5 μм) и обојено сахематоксилин-еозин (Х&Е). Морфолошке промене су уочене под светлосном микроскопијом.

 

1.5 Тестови хормона у серуму

Пацови су анестезирани са3% пентобарбитал натријум, а крв је прикупљена прекопункција срца. Серум је одвојен одцентрифугирање на 3000 рпм током 10 мин на 4 степена. За мерење су коришћени ЕЛИСА комплетиФСХ, ЛХ и тестостероннивоа према протоколима произвођача.

 

1.6 АР експресија протеина (Вестерн блот)

Ткиво тестиса је лизирано и измерена концентрација протеина. Једнаке количине протеина су раздвојене помоћу10% СДС-ПАГЕ, пренети на ПВДФ мембране и инкубирати са примарним антителима противАРи-актин (1:1000)преко ноћи. Секундарна инкубација антитела је праћена хемилуминисцентном детекцијом.ИмагеЈкоришћен је за анализу.

 

1.7 АР експресија мРНА (кРТ-ПЦР)

Укупна РНК је екстрахована из ткива тестиса. цДНК је синтетизована путем реверзне транскрипције. кРТ-ПЦР је изведен коришћењем СИБР Греен методе.

АР прајмери:

Нападач: 5′-ЦАГГГАЦЦА ЦГТТТТАЦЦЦА-3′

Реверс: 5′-ТТЦЦЦТТЦЦГЦАГЦТЦТТТТТ-3′

-актински прајмери ​​(интерна контрола):

Нападач: 5′-ЦЦАЦЦАТГТАЦЦЦАГГЦАТТ-3′

Реверс: 5′-ЦГГАЦТЦАТЦГТАЦТЦЦТГЦ-3′

Термички циклус: 95 степени током 15 минута (пре-денатурација), након чега следи 40 циклуса од 95 степени у трајању од 15 с и 60 степени током 1 мин. Подаци су анализирани коришћењем2^-ΔΔЦтметодом.

 

1.8 Статистичка анализа

Подаци су анализирани коришћењемСПСС 26.0.

Резултати су представљени каосредња вредност ± стандардна девијација (к ± с)

т-тестје коришћен за поређење две групе

Једносмерна АНОВАје коришћен за вишеструка поређења група

П < 0,05сматрало се статистички значајном