Студија о терапеутским ефектима и механизмима екстракта Цистанцхе Десертицола на саркопенију изазвану дексаметазоном код мишева

Апстракт:Ова студија је истраживалатерапеутски ефекат екстракта Цистанцхе десертицола (ЦдЕ)о саркопенији изазваној дексаметазоном (Дек) код мишева и могућем механизму деловања. Прво, фармакодинамичке компоненте и важни циљеви Цистанцхе-а су проучавани мрежном фармакологијом, а путеви су обогаћени да би се предвидео механизам деловања ЦдЕ. У експериментима на животињама, мишеви од 50 КМ су насумично подељени у 5 група (контролна група, група Дек модела, група са високом дозом ЦдЕ, група са средњом дозом ЦдЕ и група са ниском дозом ЦдЕ). Осим контролне групе, друге групе су убризгане субкутано да би се изазвала саркопенија након 42 дана, а три групе које су третирале су добиле различите дозе ЦдЕ орално у исто време. Током експеримента, редовно су тестирани тежина животиње, капацитет за вежбање и састав тела. Након што су животиње жртвоване, израчунат је мишићни коефицијент задњих удова и урађени су хистолошки и сродни тестови експресије гена. Резултати мрежне фармакологије показују да ЦдЕ може да лечи саркопенију регулацијом сигналних путева повезаних са IGF-1. Резултати експеримената на животињама показују да ЦдЕ значајно преокреће смањење садржаја немасног меса и мишићног коефицијента узроковано Дек-ом, побољшава капацитет вежбања, смањује садржај масти, побољшава хистолошки статус мишића, повећава IGF-1, МиоД и МиоГ и смањује експресију Атрогин-1 и МуРФ-1. ЦдЕ има терапеутски ефекат на атрофију мишића изазвану Дек-ом и може побољшати хистолошку морфологију мишића, а механизам његовог деловања може бити активација IGF-1 сигналног пута.

Кључне речи: Екстракт Цистанцхе десертицола; дексаметазон; саркопенија; мрежна фармакологија; IGF-1 путања

 

 

корист од ехинакозида

 

1. Материјали и методе

1.1 Реагенси

У овој студији коришћени су следећи реагенси:

Ињекција дексаметазон натријум фосфата(Серија бр.. 040191147) – Сханки Руицхенг Келонг Ветеринари Медицине Цо., Лтд.

Нормалан физиолошки раствор(Серија бр. Л220092407) – Сицхуан Келун Пхармацеутицал Цо., Лтд.

Анхидровани етанол, ксилен, параформалдехид, иглутаралдехид– Кинеска национална фармацеутска група

Хлороводонична киселина(ЦАС: 7647-01-0) – Цхенгду Келон Цхемицалс Цо., Лтд.

Раствор за бојење хематоксилином– Вухан Сервицебио Биологицал Тецхнологи Цо., Лтд.

Раствор боје еозина– Хефеи Бомеи Биологицал Тецхнологи Цо., Лтд.

812 комплет за уградњу епоксидне смоле, уранил ацетат– Компанија СПИ

Молпуре® комплет за екстракцију РНК, ПримеСцрипт РТ Кит, ТБ Греен™ Премик Ек Так™ ИИ– ИЕАСЕН Биотецхнологи анд Такара Биомедицал Тецхнологи Цо., Лтд.

3 активна састојка цистанцхе

 

1.2 Инструменти

Главна коришћена опрема:

NK-10 аналогни пусх-пулл мерач– Вензхоу Веиду Инструмент Цо., Лтд.

КМР06-060Х анализатор телесне композиције– Ниумаг Цорпоратион

БА 210 дигитални тринокуларни микроскоп– Мотиц Гроуп

JEM-1400 ФЛАСХ трансмисиони електронски микроскоп– ЈЕОЛ, Јапан

КуантСтудио™ 3 ПЦР систем у реалном времену– ТхермоФисхер Сциентифиц

 

1.3 Мрежна фармаколошка анализа

Да се ​​истраже активна једињења и потенцијални механизмиЦистанцхе тубулосау лечењу одсаркопенија, a мрежна фармакологијакоришћен је приступ:

Активна једињењаофЦистанцхе тубулосасу прегледани помоћуФармаколошка база података система традиционалне кинеске медицине (ТЦМСП), са праговима од:

Орална биорасположивост (ОБ) већа или једнака 30%

Сличност на лек (ДЛ) Већа или једнака 0,18

Додатно једињење ициљне информацијеје преузето са:

ПубЦхем(хттпс://пубцхем.нцби.нлм.них.гов)

СвиссТаргетПредицтион(хттп://ввв.свисстаргетпредицтион.цх)

Гени за саркопенију у вези са болешћусу добијени од:

ДисГеНЕТ(хттп://ввв.дисгенет.орг)

ГенеЦардс(хттпс://ввв.генецардс.орг)

Анализа протеин-протеин интеракције (ППИ).извршено је прекоСТРИНГ база података(хттпс://стринг-дб.орг).

A мрежа интеракције једињење–циљ–генје изграђен помоћуЦитосцапе 3.2.1.

Функционално обогаћивањеје спроведено коришћењем:

ДАВИД(хттпс://давид.нцифцрф.гов) заОнтологија гена (ГО)

КЕГГ(хттпс://ввв.кегг.јп/кегг/патхваи.хтмл) за анализу путање

Резултати су визуелизовани путемБиоинформатички онлајн алат(хттпс://ввв.биоинформатицс.цом.цн/)

цистанцхе тубулоса

1.4 ПрипремаЦистанцхе тубулосаЕкстракт (ЦдЕ)

ТхеЦистанцхе тубулосаекстракт је припремљен на следећи начин:

Кришке сировог биља (серија бр. И221217) су купљене одСицхуан ТЦМ Децоцтион Пиецес Цо., Лтд., а аутентичност је потврдио проф. Ианг Вениу са Универзитета Ксихуа.

1 кг сушеногЦистанцхе тубулосаје уситњен и пропуштен кроз а40-месх сито.

A Однос материјала и течности 1:20је коришћен са50% раствор етанола и воде.

Смеша је биланатопљена 30 мин, праћеноултразвучна екстракцијаат55 степени, 250 W, за40 min.

Екстракти су билицентрифугиран, филтриран и концентрован под сниженим притискомна 60 степени до густе пасте (густине 1,2) помоћу ротационог испаривача.

Концентровани екстракт је биосушено замрзавањем под вакуумом, доносећи финалеефикасност екстракције од 40%.

 

1.5 Дизајн експеримента на животињама

Укупно50 СПФ мушких КМ мишева, стар 6 недеља и тежак(22 ± 2) g, коришћени су у овој студији (лиценца за животиње бр.СЦКСК [Чуан] 2023-030). Све процедуре на животињама су праћенеПравилник о управљању лабораторијским животињамаиздало Министарство науке и технологије НР Кине и билиодобрио Комитет за етику животиња Универзитета Ксихуа(Бр. одобрења: XH-2023-02-01).

Услови становања:Температура (26 ± 1 степен), влажност (50 ± 10%), циклус светло/мрак 12 х, слободан приступ храни и води.

Након 7 дана аклиматизације, мишеви су билинасумично распоређени у 5 групана основу телесне тежине.

Телесна тежина је бележена свакодневно, а праћена су општа здравствена стања као што су понашање, стање крзна и унос хране.

Групе лечења и дозесу детаљно описани уТабела 1.

Ондана 40–42, тестови моторичке функције(снага хвата и пливање).

Ондан 43, након 12 х гладовања, забележена је телесна тежина и телесни састав. Мишеви су затим анестезирани етром и жртвовани. Билатерални скелетни мишићи задњих екстремитета брзо су сецирани и измерени.

Тхелеви гастрокнемиусје изрезан уздужно и фиксиран3% глутаралдехидаи4% параформалдехида, односно.

Тхедесни гастрокнемиусје замрзнут на -80 степени закПЦР анализа.

СЕО кључне речи:животињски модел саркопеније, КМ мишеви, експеримент атрофије мишића, процена мишићне функције, етичко истраживање на животињама

бенефиције актеозида

1.6. Композиција тела и мерење мишићног индекса

Телесна тежинаје сниман свакодневно током експеримента.

Пре жртвовања,састав теламерена је немасна маса и маса мастидва пута, анд тхепросечна вредностје снимљен.

После жртвовања,скелетни мишић задњег екстремитетабио измерен.

Тхеиндекс мишићне масеизрачунато је коришћењемЦуадрос формула [11]:

Индекс мишића (%)=Мишићна маса/телесна тежина × 100
(једначина 1)

СЕО кључне речи:немасна телесна маса код мишева, израчунавање мишићног индекса, анализатор телесне композиције, биомаркери саркопеније

 

1.7 Тестови функције мотора

Да проценифункција мишића, следећи тестови су обављени између 40. и 42. дана:

Тест пливања:

Сваки миш је биоизвагао, и аоптерећење (5% телесне тежине у оловној фолији)је фиксиран за дисталну трећину репа.

Мишеви су смештени у аконтејнер са водом од 25 степени, на дубини већој или једнакој 30 цм.

Време за купањеје забележен од уласка док миш више није могао да плута и није почео да тоне.

Сваки миш је тестиран једном дневно за3 узастопна дана, анд тхепросечноје узет као коначни резултат.

Тест чврстоће приањања:

Изведено помоћу аручни мерач потискивања.

Сваки миш је тестиранпет пута, са а150 секунди одмораизмеђу тестова.

Тхекоефицијент чврстоће хватаизрачунато је за нормализацију телесне тежине:

Коефицијент чврстоће приањања=Сила хватања/телесна тежина (Н/кг)
(једначина 2)

СЕО кључне речи:тест издржљивости пливања, снага хватања код глодара, метрика перформанси мишића, модел миша са саркопенијом

 

1.8 Хистолошка анализа

За проценуморфолошке промене у мишићном ткивунакон третмана саЦистанцхе тубулосаекстракт (ЦдЕ):

Бојење хематоксилином и еозином (Х&Е).је изведена на ткиву фиксираном у4% параформалдехида.

Секције су посматране под асветлосни микроскоп, иповршина попречног пресека мишићних влаканаје анализирано коришћењемИмагеЈсофтвера.

Заултраструктурна анализа, мишићи фиксирани у3% глутаралдехидасу накнадно фиксирани у1% осмијум тетроксид, дехидрирано у ацетону и уграђено уЕп812 смола.

Полутанке секцијебили су умрљани сатолуидин плавоза позиционирање.

Ултратанке секцијебили су умрљани сауранил ацетат и оловни цитрат, и посматрано са аЈЕМ-1400ФЛАСХ трансмисиони електронски микроскоп.

Ширина мишићног влакнаје мерено коришћењем ИмагеЈ.

СЕО кључне речи:хистологија скелетних мишића, ХЕ протокол бојења, електронска микроскопија у истраживању мишића, анализа морфологије мишићних влакана

листа бенефиција цистанцхе

1.9 Анализа генске експресије

Да истражитемолекуларни механизмиЦдЕ у саркопенији:

Замрзнуто мишићно ткивосу механички поремећени под течним азотом.

Укупна РНК је екстрахована коришћењемТРИпуре Реагентпрема упутствима произвођача.

цДНК је синтетизована са акомплет за реверзну транскрипцију, икПЦРизвршено је коришћењем аТхермо Сциентифиц ПикоРеалсистема.

ГАПДХје коришћен као интерни референтни ген.

Прајмер секвенце загени везани за мишићесу наведени уТабела 2.

СЕО кључне речи:кПЦР за гене атрофије мишића, ГАПДХ референтни ген, екстракција РНК из мишића, експресија гена у саркопенији

 

1.10 Статистичка анализа

Експериментални подаци су анализирани коришћењемједносмерна АНОВА, праћеноДуннеттов тест вишеструког поређења.

A П-вредност < 0,05сматрало се статистички значајном.

Све статистичке анализе су обављене коришћењемСПСС 23.0.

Хистоморфометријски подацианализирани су коришћењемИмагеЈсофтвера.

СЕО кључне речи:статистичка анализа у фармаколошким студијама, СПСС у биомедицинским истраживањима, АНОВА у студијама на животињама, ИмагеЈ анализа мишића