Шта стимулише нови раст костију? Цистанцхе (ЦПхГс) активира СИРТ2–Ц/ЕБП –АРЕГ пут за изградњу јачих костију

Резултати

 

2.1 ЦПхГ ублажавају остеопорозу изазвану овариектомијом код мишева

микро-ЦТ налази (Слика 1А) су показали да је, у поређењу са Схам групом, група ОВКС показала озбиљно деструкцију микроархитектуре трабекуларне кости у дисталном фемуру, коју карактеришу ретке и сломљене трабекуле. У групи ОВКС+ЦПхГс, трабекуларни број и повезаност су значајно обновљени, приближавајући се Схам нивоу. Ови резултати показују да ЦПхГ могу ублажити губитак костију изазван овариектомијом. ХЕ бојење (Слика 1Б) је даље потврдило да је број трабекула смањен у ОВКС групи у односу на Схам групу, са резидуалним трабекулама које су постале тање и сломљене; насупрот томе, група ОВКС+ЦПхГс показала је повећан трабекуларни број у поређењу са ОВКС и значајно побољшан структурни интегритет. Двоструко обележавање калцеина (Слика 1Ц) показало је замућене и уско распоређене флуоресцентне траке у ОВКС групи, што указује на инхибирано формирање костију; у групи ОВКС+ЦПхГс, флуоресцентне траке су биле јасне са значајно повећаним размаком, што указује да ЦПхГ подстичу брзину минерализације коштаног матрикса и значајно повећавају капацитет формирања нове кости.

 

 

Репрезентативни микро-компјутерски томографски снимак трабекуларне кости у метафизи фемура мишева; Б бојење феморалних делова мишева хематоксилином и еозином; Слике мишева са двоструким обележавањем Ц калцеином у групама ОВКС и ОВКС+ЦПхГс.

Слика 1 ЦПхГ ублажавају остеопорозу изазвану овариектомијом код мишева

 

Цистанцхе Остале погодности

 

 

 

 

Оглас за Цистанцхе на продају

 

 

2.2 Ефекти ЦПхГ на остеогену диференцијацију ћелија МЦ3Т3-Е1

Ин витро, ЦПхГс група је показала значајно више нивое експресије протеина и мРНК ОЦН, ОПН и РУНКС2 од НЦ групе (П <0,05). Активност алкалне фосфатазе (АЛП) 10. дана је такође била значајно већа у групи која је примала ЦПхГс него у НЦ (П < 0,05). Ови резултати показују да ЦПхГ значајно промовишу диференцијацију остеобласта. Види табелу 1.

 

2.3 Ефекти ЦПхГ на осу СИРТ2–Ц/ЕБП–АРЕГ

Експерименти са ћелијама (Табела 2) су показали да је, у поређењу са НЦ групом, ЦПхГс група имала значајно повећану експресију Ц/ЕБП протеина и мРНК и повишену АРЕГ мРНА (П <0,05), што указује на активацију низводних Ц/ЕБП циљних гена. У односу на НЦ, СИРТ2 мРНА је значајно повећана у ЦПхГс групи (П <0,05), уз истовремени пораст на нивоу протеина (П <0,05). Насупрот томе, нивои мРНА СИРТ1, СИРТ3, СИРТ4 и СИРТ5 нису показали значајне промене (П > 0,05), потврђујући специфичност пута за СИРТ2.

Табела 1. ЦПхГ повећавају маркере остеогене диференцијације у ћелијама МЦ3Т3-Е1

Ставка	НЦ Гроуп	ЦПхГс Гроуп
ОЦН протеин	0.48 ± 0.14	1.24 ± 0.18¹
ОЦНмРНА	1.00 ± 0.11	1.61 ± 0.23¹
ОПН протеин	0.51 ± 0.15	1.05 ± 0.44¹
ОПНмРНА	1.03 ± 0.12	2.11 ± 0.24¹
РУНКС2 протеин	0.77 ± 0.21	1.08 ± 0.25¹
РУНКС2мРНА	1.02 ± 0.14	1.58 ± 0.17¹
АЛП активност 10. дана	0.21 ± 0.02	0.44 ± 0.05¹

¹ P< 0,05 у односу на НЦ групу.

 

Табела 2. Ефекти ЦПхГ на експресију СИРТ2, Ц/ЕБП и АРЕГ

Ставка	НЦ Гроуп	ЦПхГс Гроуп
Ц/ЕБП протеин	0.51 ± 0.06	1.21 ± 0.11¹
Ц/ЕБПмРНА	1.00 ± 0.10	1.15 ± 0.14¹
АРЕГмРНА	1.01 ± 0.15	2.05 ± 0.24¹
СИРТ1мРНА	1.03 ± 0.12	1.01 ± 0.11
СИРТ2 протеин	0.26 ± 0.08	0.37 ± 0.07¹
СИРТ2мРНА	0.87 ± 0.08	1.88 ± 0.21¹
СИРТ3мРНА	1.01 ± 0.14	1.28 ± 0.17
СИРТ4мРНА	1.21 ± 0.12	1.04 ± 0.05
СИРТ5мРНА	1.06 ± 0.05	1.08 ± 0.03

¹ P< 0,05 у односу на НЦ групу.

 

2.4 Ефекти и механизам ЦПхГ на СИРТ2 и Ц/ЕБП

Имунофлуоресценција (слика 2А) открила је значајно појачану експресију и нуклеарну ко-локализацију СИРТ2 и Ц/ЕБП у групи ЦПхГс у односу на НЦ. Док су СИРТ2 и Ц/ЕБП сигнали били слаби у НЦ, њихови интензитети флуоресценције су значајно повећани од стране ЦПхГ, са јасним сигналима нуклеарне ко-локализације, што указује на појачану интеракцију. Ко-имунопреципитација је даље потврдила да је, у Ц/ЕБП пулл-довн комплексима, протеин СИРТ2 значајно повећан у групи ЦПхГс у односу на НЦ (слика 2Б). У имунопреципитатима Ц/ЕБП, сигнал ацетил-лизина (Ацетил) се смањио у групи ЦПхГс, док је укупни Ц/ЕБП протеин био непромењен (слика 2Ц), што указује да ЦПхГс значајно повећавају интеракцију СИРТ2-Ц/ЕБП и потискују ендогену Ц/ЕБП ацетилацију у ЕМ1МЦ3 ћелијама.

2.5 Ефекти СИРТ2 на експресију Ц/ЕБП протеина и мРНА

У поређењу са контролном групом, СИРТ2 кноцкдовн (СИРТ2 КД) значајно је смањио нивое Ц/ЕБП протеина и мРНА у ћелијама МЦ3Т3-Е1. У односу на Цонтрол+ЦПхГс, група СИРТ2 КД+ЦПхГс је такође показала смањење Ц/ЕБП протеина и мРНА, а ЦПхГс нису могли да преокрену смањење узроковано падом СИРТ2 (Слике 3А, 3Б). Ови налази указују на то да губитак СИРТ2 значајно смањује акумулацију Ц/ЕБП протеина и експресију Ц/ЕБП мРНА.

А, имунофлуоресцентна анализа СИРТ2 (црвено) и Ц/ЕБП (зелено) у ћелијама МЦ3Т3-Е1 ​​третираним са ЦПхГс (×200); Б, ко-имунопреципитационом (ко-ИП) анализом интеракције СИРТ2-Ц/ЕБП; Ц, нивоом ацетилације Ц/ЕБП антитела детектован ИП-телом пурисином.

Слика 2. Ефекат ЦПхГ на СИРТ2 и Ц/ЕБП и његов механизам

 

2.6 Ефекти Ц/ЕБП деацетилације на остеогену диференцијацију

Ц/ЕБП мутанти на месту ацетилације (К102Р и К211Р) су конструисани да опонашају трајну деацетилацију. Процењивали смо активност АЛП у раној фази диференцијације (7. дан) и минерализацију у терминалној фази (14. дан). У поређењу са ВТ, и К102Р и К211Р мутанти су показали повећану АЛП-позитивну површину, а бојење Ализарин Ред С (АРС) показало је побољшану минерализацију екстрацелуларног матрикса. Међутим, ЕКС група је показала веће повећање АЛП и АРС него било који појединачни мутант, што сугерише да ЦПхГ кооперативно модулирају и К102 и К211 места како би свеобухватно промовисали формирање кости (Слика 3Ц). Ови резултати показују да је проостеогени ефекат ЦПхГ повезан са раном диференцијацијом посредованом Ц/ЕБП деацетилацијом и терминалном минерализацијом, пружајући функционалне доказе да ЦПхГ утичу на остеогену диференцијацију преко СИРТ2/ЦЕБП/АРЕГ осе.

Дискусија

 

Остеопороза је постала глобални проблем јавног здравља који озбиљно утиче на квалитет живота пацијената. Традиционални кинески лекови као што су Цистанцхе (Роу Цонг Ронг), Лигуструм луцидум и Моринда оффициналис играју важну улогу у управљању остеопорозом и привлаче све већу пажњу због мање нежељених ефеката и стабилне ефикасности [8–9]. Цистанцхе и његови састојци могу да модулишу формирање и ресорпцију костију и имају снажан потенцијал за превенцију и лечење остеопорозе. Једна студија [10] открила је да екстракт Цистанцхеа промовише диференцијацију мезенхималних матичних ћелија према остеобластима, ефикасно повећавајући коштану масу уз смањење ресорпције кости. Друга студија [11] је показала да полисахариди Цистанцхе инхибирају остеокластогенезу и ресорпцију хидроксиапатита, делом супресијом гена маркера остеокласта (нпр. Цтск, ММП9 и АЦП5).

Ова студија је систематски истраживала ефекте и молекуларне механизме ЦПхГ у терапији остеопорозе. Кроз ин виво и ин витро експерименте, открили смо да ЦПхГ значајно промовишу остеогену диференцијацију модулацијом СИРТ2-Ц/ЕБП-АРЕГ осе, пружајући нову теоријску основу за регулисање метаболизма костију природним производима.

Показали смо да ЦПхГ побољшавају фенотип губитка кости код мишева са овариектомијом активирањем СИРТ2-Ц/ЕБП-АРЕГ осе, значајно повећавајући трабекуларни број и промовишући формирање костију. Наши резултати показују да ЦПхГ значајно појачавају остеогене маркере (ОЦН, ОПН, РУНКС2) и АЛП активност. Као главни регулатор остеогене диференцијације [12], РУНКС2 упрегулација може директно да покрене минерализацију коштаног матрикса, а појачана активност АЛП даље подржава сазревање функције остеобласта. По први пут откривамо да ЦПхГ појачавају експресију СИРТ2, јачају његову интеракцију са Ц/ЕБП и индукују деацетилацију Ц/ЕБП. Деацетиловани Ц/ЕБП вероватно пролази кроз конформационе промене које појачавају транскрипциону активност и значајно повећавају регулацију АРЕГ мРНК; као ЕГФР лиганд, АРЕГ може активирати ПИ3К-АКТ пут за промовисање остеогенезе у складу са ЗХАНГ ет ал. [13], који су известили да екстракт Цистанцхеа потискује диференцијацију остеокласта преко ПИ3К/АКТ. Користећи Ц/ЕБП мутанте на месту ацетилације (К102Р и К211Р), директно смо потврдили да Ц/ЕБП деацетилација промовише калцификацију екстрацелуларног матрикса, док је СИРТ2 нокдаун утврдио неопходност овог пута у деловању ЦПхГ, што указује на то да СИРТ2-посредовани ефекти Ц/ЕБП-посредоване процентуалне дезогене централне деградације. ЦПхГс. Ови налази проширују препознату разноликост функција породице Сиртуин у хомеостази костију и предлажу нове стратегије за лечење остеопорозе циљањем на посттранслационе модификације.

Остеобласти играју кључну улогу у сложеном процесу ремоделирања костију. Неравнотежа између формирања костију и ресорпције – коју у великој мери регулишу остеобласти – је главни покретач остеопорозе. Стога је повећање формирања костију основна терапијска стратегија. Ефикасно ремоделирање зависи од координисаних интеракција између остеобласта и остеокласта. АРЕГ, члан породице ЕГФ, кључан је у регулисању раста ћелија, апоптозе и миграције кроз различите типове ћелија [14]. СИРТ2 је НАД+-зависна деацетилаза изражена углавном у цитоплазми, али се такође налази у митохондријима и језгру, што га чини јединственим чланом породице Сиртуин [15]. Као фактор транскрипције, Ц/ЕБП се подвргава деацетилацији под регулацијом СИРТ2, повећавајући транскрипциону активност различитих гена. Током диференцијације остеобласта, Ц/ЕБП везује више гена да би модулирао транскрипцију. Наши резултати показују да ЦПхГ повећавају експресију Ц/ЕБП протеина и његову интеракцију са СИРТ2, значајно потискују Ц/ЕБП ацетилацију и заузврат регулишу АРЕГ мРНА, чиме се промовише остеогена диференцијација. Иако експресија Ц/ЕБП позитивно корелира са АРЕГ транскрипцијом, да ли Ц/ЕБП директно служи као АРЕГ транскрипциони фактор захтева даљу валидацију.

Укратко, ЦПхГ промовишу Ц/ЕБП деацетилацију преко СИРТ2, чиме се повећава експресија АРЕГ-а, побољшава диференцијација остеобласта и побољшава остеопороза. ЦПхГ имају потенцијал као терапеутски агенси за остеопорозу.

 

Поуздани извори Цистанцхеа за здравље костију са остеопорозом

Ако сте нутриционистички бренд, произвођач функционалне хране или купац истраживања и развоја који тражи поуздане, висококвалитетне Цистанцхе фенилетаноидне гликозиде (ЦПхГ) или стандардизоване екстракте Цистанцхеа за здравље костију, од суштинског је значаја да будете партнер са добављачем који контролише цео индустријски ланац биљака и који је у складу са међународним системима квалитета. Цхенгду Вецистанцхе Био-Тецх Цо., Лтд (ВЕЦИСТАНЦХЕ) је продајна компанија Хотан Дицхенг-а (Хетиан Дицхенг), а наше седиште се налази у Хотану, главном региону Цистанцхеа у Синђијанг-у у Кини. ВЕЦИСТАНЦХЕ је водећи произвођач Цистанцхеа у Кини са:

Хотан Дицхенг (Хетиан Дицхенг)

Највећи светски капацитет за прераду Цистанцхеа повезан је са базом од 200.000 јутара, укључујући 85,000+ хектара узгоја и фабрику ГМП од 20.000 тона за свеже Цистанцхе и друге биљке.

ГМП производна радионица са 100.000 класа; напредно пречишћавање и концентрација ултрафилтрацијом/нанофилтрацијом; и микробиолошка лабораторија са 10.000 класа.

 

Хотан Дицхенг (Хетиан Дицхенг)
 

Сертификати:Цхина СЦ, ХАЦЦП, органски сертификати (ИОИА/Интернатионал Органиц Цроп Импровемент Ассоциатион) и НОП (УС Органиц Програм).

14 патената за проналазак у вези са Цистанцхеом, укључујући технологију екстракције мембранске сепарације.

Академска сарадња са врхунским институцијама (нпр. Универзитет у Пекингу, Универзитет Јиао Тонг у Шангају, Медицински универзитет Ксињианг, Фармацеутски универзитет у Кјоту).

 

Обим пословања обухвата екстракте Цистанцхеа, здравствене додатке, сировине и апликације у ТЦМ децокцијама, функционалној храни, производима за здравствену негу, дијететским суплементима, фармацеутским производима и неги коже. Током ЦОВИД-19, ВЕЦИСТАНЦХЕ је донирао Цистанцхе производе у вредности од преко 1 милијарде РМБ, што одражава снажну друштвену одговорност.

 

За купце који желе да велепродају или набаве екстракт Цистанцхеа за механизме циљања формула фокусираних на остеопорозу као што су СИРТ2–Ц/ЕБП –АРЕГ модулација, диференцијација остеобласта (РУНКС2/АЛП/ОЦН/ОПН) и комплементарна антиресорптивна подршка-ВЕЦИСТАНЦХЕ нуди скалабилне, усаглашене стандарде испоруке у САД/ЕУ. Сазнајте више: О нама - ВЕЦИСТАНЦХЕ (хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/абоут-ус).

Емаил:wallence.suen@wecistanche.com
Адреса:бр.1, спрат 26, јединица 1, зграда 6, улица Схенг'ан бр. 133, високотехнолошки округ, Ченгду, Сечуан, Кина (Пилот зона слободне трговине).

 

Референце

[10] Ли И, Пеи Т, Зху Х, ет ал. Мелатонин ублажава повећану фреквенцију пулса лутеинизирајућег хормона и дисфункцију јајника изазвану поремећајем циркадијалног ритма.Ј Пинеал Рес.2025;77(1):е70026. дои:10.1111/јпи.70026

[11] Лиу Ј, Ианг И, Хе И, ет ал. Еркиан децокција ублажава прерано отказивање јајника изазвано цисплатином код пацова смањењем нивоа оксидације у ћелијама гранулозе јајника.Ј Етхнопхармацол.2023;304:116046. дои:10.1016/ј.јеп.2022.116046

[12] Ианг ЗН, Ду Кс, Ванг А, ет ал. Мелатонин побољшава митохондријалну хомеостазу изазвану Пб и оштећење јајника кроз регулисање сигналног пута п38.Ецотокицол Енвирон Саф.2025;292:117937. дои:10.1016/ј.ецоенв.2025.117937

[13] Окоие ЦН, Корен СА, Војтовицх АП. Производња РОС митохондријалног комплекса И и редокс сигнализација у хипоксији.Редок Биол.2023;67:102926. дои:10.1016/ј.редок.2023.102926

[14] Кескин-Актан А, Акбулут КГ, Иазици-Мутлу Ц, ет ал. Ефекти мелатонина и куркумина на експресију СИРТ2, Бцл-2 и Бак у хипокампусу одраслих пацова.Браин Рес Булл.2018;137:306-310. дои:10.1016/ј.браинресбулл.2018.01.006

[15] Зху Т, Иан Л, Денг С, ет ал. Митохондрије свињских ооцита синтетишу мелатонин, што побољшава њихово ин витро сазревање и развој ембриона.Антиоксиданси.2024;13(7):814. дои:10.3390/антиок13070814