Наночестице усмерене на бубреге за повећање бубрежне лимфне густине снижавају крвни притисак код хипертензивних мишева

1. Представљање

Идентификовање састојака хране са имуномодулаторним својствима заједно са њиховим одговарајућим молекуларним циљевима привукло је повећано интересовање последњих година. Због њиховог високог лигандног диверзитета, суперфамилија потенцијалних пролазних рецептора јонских канала (ТРПцханнелс) представља веома интересантну класу потенцијалних циљних структура.

Суперфамилија ТРП канала сисара укључује шест сродних породица протеина, наиме анкирин (ТРПА), канонски (ТРПЦ), меластатин (ТРПМ), муколипин (ТРПМЛ), полицистин (ТРПП) и фамилију ванилоида (ТРПВ), све који типично деле шест трансмембранских сегмената који се састављају као тетрамере да би формирали поре пропусне за катјоне са променљивом селективношћу катјона.[1]ТРПВ1 канал може бити далеко најинтензивније истражен члан ТРП суперфамилије. ТРПВ1 је првобитно идентификован као рецептор за капсаицин, оштра компонента чили паприке.[2] Касније је такође показано да оштри састојци из ђумбира, гингероли, активирају ТРПВ1.[3]

КЛИКНИТЕ ОВДЕ ДА ДОБИЈЕТЕ БИЉНИ ЦИСТАНЧ ЗА БУБРЕГЕ

Биолошка улога ТРПВ1 у не-неуронским типовима ћелија је још увек под опсежним истраживањем, али доступни резултати имплицирају функције које су далеко изван сензорне и термалне перцепције. На пример, 12-недељна интервенција са дневном дозом од 0 .15 мг нонивамида агониста ТРПВ1, структурног аналога капсаицина, спречило је повећање телесне масти изазвано исхраном и повећало нивое серотонина у плазми код здравих субјеката са прекомерном тежином.[4]

У 3Т3-Л1 адипоцитима активација ТРПВ1 нонивамидом смањила је акумулацију липида током диференцијације и сазревања супресијом експресије ППАР. У макрофагима, капсаицин и нонивамид су ослабили ослобађање проинфламаторних цитокина као што су ИЛ6, ЦКСЦЛ8 и ТНФ-алфа изазвано ЛПС-ом, на начин који зависи од ТРПВ1-.[6] Ипак, одређене функције ТРПВ1 у леукоцитима људске крви остају нејасне. У хуманим НК ћелијама, 10 и 50 μМ капсаицина индуковао је пораст интрацелуларних концентрација Ца2+, што указује на функционалан ТРПВ1 канал.[7]

Међутим, пригушене ефекторске функције НК ћелија као што су цитотоксична дегранулација и секреција цитокина, изазване пре-третманом ћелија капсаицином током 1 х у опсегу концентрација од 10–100 μМ, биле су углавном независне од ТРПВ1.[7] У Т ћелијама је документовано да је ТРПВ1 укључен у процесе сигнализације рецептора Т ћелија, пролиферацију и диференцијацију Т ћелија, као и производњу цитокина.[8] Претходни рад наше групе је такође показао функционалну експресију ТРПВ1 у људским примарним Т ћелијама.[9] Штавише, анализа одговора на дозу у концентрацијама у распону од 0,03 до 300 μмол Л−1 открила је да [6]-гингерол инхибира лучење цитокина примарним хуманим леукоцитима са ИЦ50 вредношћу од 82,2 μмол Л−1.

Међутим, квантификација [6]-гингерола у узорцима плазме здравих субјеката показала је средњу максималну концентрацију у плазми од само 42.0 ±16,3 нмол Л-1 након узимања 1 Л чаја од ђумбира. Пошто ове концентрације [6]-гингерола нису имале значајан утицај на лучење цитокина у претходним студијама, [9] није јасно да ли се у крвној плазми након конзумирања 1 Л чаја од ђумбира достиже релевантна концентрација од 50 нмол Л-1 у исхрани. , довољан је за модулацију ћелијских имуних одговора у другим људским примарним леукоцитима.

За људске неутрофиле, знање о функционалној улози ТРПВ1 је ограничено. Док су Косе и Назıроглу˘ [10] показали да се проток Ца2+-у неутрофилима као одговор на 10 μМ капсаицина смањио од стране антагониста ТРПВ1 капсазепина, други резултати нису показали да капсаицин индукује прилив Ца{5}} у концентрацију када се тестира опсегу од 1–100 μМ, упркос детектабилној експресији ТРПВ1РНА.[11]

Неутрофили су најзаступљенији леукоцити у људској крви, који чине 60-70% свих циркулишућих белих крвних зрнаца. Оне су прве имуне ћелије које се регрутују на места инфекције; стога се често помињу као прва линија одбране.[12] Регрутовање неутрофила покрећу, између осталог, бактеријски или митохондријски пептид Н-формилметионин-леуцил-фенилаланин (фМЛФ) орхемокини као што је ЦКСЦЛ8 (ИЛ-8).[13]

Одбрамбени механизми неутрофила укључују фагоцитозу,[14] ослобађање антимикробних ензима дегранулацијом,[15] стварање реактивних врста кисеоника (РОС),[16] и формирање неутрофилних екстрацелуларних замки.[17]Поред ових директних одбрамбених механизама, неутрофили су и неутрофили. даље доприносе каснијим имуним одговорима путем ослобађања различитих цитокина и хемокина.[18] Такође, неутрофили могу да прођу процес пражњења који им омогућава да снажније реагују на каснију пуну активацију.[16б]

Последњих година су нарасли докази да састојци из хране и лековитих биљака могу да модификују један или више поменутих одбрамбених одговора људских неутрофила. Ове модификације укључују повећану фагоцитотску активност[19] и РОСгенерацију,[20] појачану хемотаксију према фМЛФ,[21] и формирање неутрофилних екстрацелуларних замки.[20] Међутим, активна(а) једињења(а) нису идентификована. Састојци из Ферула акитсцхкенсис (𝛽-пинен, сабинен, 𝛾-терпинен, геранилацетон, андисоборнилацетат) су десензибилизирали неутрофиле на фМЛФ- и ЦКСЦЛ8-индуковали Ца2+ прилив и инхибирали инхибирали инхибирали инхибирали инхибирали инхибирали инхибирали инхибирали фМЛФ- и ЦКСЦЛ ефекти су посредовани путем ТРПВ1.[22]

На основу доступних података, претпоставили смо да лигандом индукована активација ТРПВ1 од стране [6]-гингерола може утицати на опште функције неутрофила, било директно или кроз појачавање њихових одговора на активирајуће стимулусе. У оквиру ове хипотезе, посебно смо имали за циљ да разјаснимо да ли је верификована нутритивно релевантна концентрација довољна да модулира ћелијске имуне одговоре код примарних неутрофила људи као дела популације леукоцита. '

Даље, настојали смо да упоредимо нивое експресије РНК свих чланова ТРП суперфамилије сисара у пет најистакнутијих типова ћелија у људској крви како бисмо добили квалитативно и квантитативно свеобухватан преглед експресије ТРП канала у људским леукоцитима.

2. Резултати

2.1. Обиље и релативни нивои транскрипта ТРП канала у људским леукоцитима

Да би се проценила експресија РНК ТРП канала у крвним леукоцитима, пет најистакнутијих типова ћелија леукоцита је изоловано из крви здравих давалаца, а експресија РНК канала ТРП је анализирана квантитативним РТ-ПЦР (Слика 1).

Специфични транскрипти ТРПВ као и ТРПМ породице су откривени са високим фреквенцијама од 75–100% у свим анализираним типовима ћелија. Просечна укупна учесталост узимајући у обзир све типове ћелија била је 96% за породицу ТРПВ и 98% за породицу ТРПМ. ТРПЦ-специфични транскрипти су били много мање заступљени, у распону од 0% у моноцитима, НК ћелијама, Т ћелијама и Б ћелијама до 100% у НК ћелијама и Т ћелијама са укупном средњом учесталошћу од само 53% (Слика 1А). ТРПЦ5-специфични транскрипт је откривен само у неутрофилима, са учесталошћу од 70%.

Такође, ТРПА{0}}специфични транскрипт је генерално открио прилично ниску заступљеност у анализираним типовима ћелија са учесталошћу од 100% у неутрофилима, 25% у моноцитима, 80% у НК ћелијама, 100% у Т ћелијама и 60% у Бцеллс. Слично, ТРПМЛ3-специфични транскрипт је показао ниску учесталост неутрофила (50%), моноцита (25%), НК ћелија (40%) и Б ћелија (20%), али учесталост од 100% у Т ћелије. ТРПВ1-специфични транскрипт је откривен у свим типовима ћелија, показујући учесталост од 100% у моноцитима, НК ћелијама и Т ћелијама, и учесталост од 90% у неутрофилима и 80% у Б ћелијама.

Што се тиче релативне експресије РНК, у поређењу са одговарајућим фреквенцијама, ТРП канали су открили образац експресије који је више специфичан за ћелијски тип, што је очигледно поређењем одговарајућих вредности Δцт у различитим анализираним типовима ћелија (Слика 1Б). На пример, ТРПП3 је детектован са фреквенцијом од 100% у свим типовима ћелија, али је јасно открио највиши ниво експресије у моноцитима.

Насупрот томе, ТРПВ2 канал је откривен у свим испитиваним типовима ћелија, са упоредиво високим нивоом експресије РНК, као и високом фреквенцијом. Слично томе, нивои транскрипта ТРПВ1 били су слични у свим испитиваним типовима ћелија (Слика 1Б).

2.2. ТРПВ1 површинска експресија на неутрофилима

Тренутно знање о функцији ТРПВ1 у људским неутрофилима је још увек нејасно. Да бисмо даље истражили улоге ТРПВ1 у људским неутрофилима, затим смо истражили да ли је ТРПВ1 канал експримиран на површини примарних људских неутрофила користећи проточну цитометрију живих ћелија (Слика 2).

Изоловани неутрофили су обојени за ЦД15 као површински маркер за неутрофиле (Слика 2А, Б) и истовремено обојени антителом подигнутим против епитопа у првој екстрацелуларној петљи протеина ТРПВ1 (Слика 2Б) или одговарајућом контролом изотипа, при чему је последња служила као сурогат за мерење неспецифичног везивања (слика 2А). Унутар ЦД15+ популације, анализиран је интензитет флуоресценције за ФИТЦ. Бојење неутрофила антителом ТРПВ1 довело је до јасно препознатљивог флуоресцентног сигнала у поређењу са контролом изотипа, чиме је потврђена површинска експресија ТРПВ1 у примарним људским неутрофилима (Слика 2Ц). Анализа неутрофила од четири појединачна донора открила је упоредиву површинску експресију ТРПВ1 (слика 2Д).

2.3. [6]-Гингерол индуковано повећање интрацелуларног Ца2+

Пошто ће активација ТРПВ1 изазвана лигандом довести до прилива Ца2+,[23] интрацелуларне концентрације Ца2+ неутрофила су одређене преко Ца2+-осетљиве боје Фура-2. На основу наших претходних налаза, [9] изабрана је концентрација од 50 нМ добро познатог ТРПВ1 лиганда [6]-гингерола и време инкубације од 2 х. Анализе су показале да је инкубација неутрофила са 50 нМ [6]-гингерола резултирала повећањем интрацелуларних концентрација Ца2+ које су у просеку износиле 18,4% ± 1,0% од максималне вредности, утврђене применом 1 μМ јонофорејономицина. Повећање изазвано ДМСО је било 4,7% ± 1,2% (Слика 3).

2.4. Утицај [6]-Гингерола на експресију ТРПВ1

Затим смо имали за циљ да анализирамо утицај стимулације ТРПВ1 помоћу [6]-гингерола на експресију ТРПВ1 на нивоу транскрипта преко к-РТПЦР, као и на нивоу површинског протеина путем бојења живих ћелија. У ту сврху, хумани неутрофили су инкубирани са 50 нМ [6]-гингерола током 2 х и одговарајући нивои експресије су квантификовани.

Ова двочасовна инкубација није утицала ни на нивое транскрипта ТРПВ1 нити на ниво протеина (слика 4), а такође се није променила, осим за ИЛ6, ИЛ17А, ИЛ24, Ц5 и ГДФ5, истражена РНА експресија заједничких гена цитокина и хемокина (слика С1, табела С2 ,Подршка информације).

2.5. Утицај [6]-Гингерола на експресију површинских маркера неутрофила

Услуга подршке Вецистанцхе-а - највећи извозник цистанцхеа у Кини:

Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com

Вхатсапп/тел:+86 15292862950

Купите за више детаља о спецификацијама:

хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/цистанцхе-схоп

НАБАВИТЕ ПРИРОДНИ ОРГАНСКИ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНЦХЕ СА 25% ЕХИНАКОЗИДА И 9% АКТЕОЗИДА