Анти-инфламаторни принципи из иглица Пинус Таиваненсис Хаиата и Ин Силицо студије о њиховим потенцијалним ефектима против старења Ⅱ

Борове иглице су екстраховане метанолом и подељене са хексаном, етилацетата и воде да би се добила три растворљива слоја, респективно. Тхеантиинфламаторнофракција, тхеслој етил ацетата, је подвргнут континуираном конвенционалном хроматукомбинација графичке технике, а окарактерисано је пет неописаних једињењаукључујући два нова лигнана, 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -дихидрокси-70 -(4-хидроксифенил)пропан-80 -илокси]бензојева киселина (1), 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -дихидрокси-70 -(4-хидрокси-3-метоксифенил)-пропан-80 -илокси]-2-хидроксибензојева киселина (2), један нови дитерпеноид, (13E,12R)-12 -хидроксиагатичнакиселина (3), један монотерпеноид, 5-изопропил-3-оксоциклохекс-1-ен-1-карбоксилна киселина (4), и једанфенилпропан, стиракинолна киселина (5). Хемијске структуре ових нових једињењасу конструисани уз помоћ НМР спектралног разјашњавања и МС спектраметричка анализа. Штавише, седамдесет и два позната једињења, која садрже један стероид, -ситостерол (6); један сесквитерпеноид, (-)-оплопан-4-један-10- -O- -Д-глукозид (7); једанкумарин, умбеллиферон (8); једаналкалоид, индол{0}}алдехид (9); четири дитерпеноида,

Кликните овде да бисте добили Цистанцхе крему против старења

3-метоксифенил)-1-пропанон (64), 3-хидрокси-1-(4-хидроксифенил)-1-пропанон (65),2-(4-хидроксифенил)сирћетна киселина (66), фенилсирћетна киселина (67), је ванилинска киселина (68), бензојевакиселина (69), ванилин (70), p-хидроксиацетофенон (71), натријум салицилат (72), ванилинска киселина4-O- -Л-рамнозид (73), транс-ферулна киселина (74), натријумp-кумарат (75), p-кумарскикиселина (76), транс-метилp-кумарат (77), односно идентификовани су испитивањемњихове физичке и спектроскопске податке са онима који су претходно објављени (референце познатихједињења су дата у Додатку Б.

3.1. Разјашњавање структуре једињења 1–5

Цомпоунд1 је изолован као оптички активан безбојни сируп, а молекулформула је додељена као Ц16H16O6 ХР-ЕСИ-МС анализом ([М− H]−, m/z 303,0855, израч.за Ц16H15O6, 303.0869, Слика С1). ИР спектар указује на присуство хидроксила(3412 цм−1 ) и коњуговану карбонилну групу (1598 цм−1 ). Тхе1Х-НМР подаци (слика С2)показао сигнале за двојепар-супституисани ароматични делови [δH 6.72 (2H, d, J = 8.4 Хз,H-30 , -50 ), 6.86 (2H, d, J = 8.8 Хз, Х-2, -6), 7,24 (2Х, д,J = 8.4 Хз, Х-20 , -60 ), и 7.83(2H, d, J = 8.8 Хз, Х-3, -5)], два метина са кисеоником [δH 4.48 (1H, m, H-80 ), и 4.85(1H, d, J = 5.6 Хз, Х-70 )], и два метина [δH 3,81 (1Х, дд,J {{0}}.0, 4,0 Хз, Х-90 a), и 3.86 (1Х, дд,J {{0}}.0, 5,6 Хз, Х-90 б)]. Тхе13Ц и ДЕПТ НМР спектри (слика С3)оф1 приказано је шеснаест угљеника, што одговара једној метиленској групи, два оксигенованаугљеника, дванаест ароматичних угљеника и један коњуговани карбонил (таб1). Тхе2 J- и3 J- ХМБЦ корелације од Х-2, -6 до Ц-1 и 4; од Х-3, 5 до Ц-1 и 7; од Х-20, 60 доC-40 и 70 ; од Х-70 до Ц-80 и 90 ; и од Х-80 до Ц-1, респективно, примећени су уХМБЦ спектар1 (Слика С4). Штавише, велика константа спајања између Х-70 и Х-80 (J = 5.6 Хз) подржава релативну конфигурацију1 на Ц-70 /C-80 каотхрео[44]. Апсолутне конфигурације на Ц-70 и Ц-80 оф1 одређивани су електронским циркулароманализа дихроизма (ЕЦД). Позитиван ефекат памука на 230 нм (∆ε плус 0.17) је открио 8S конфигурација за1, према објављеној литератури [37,38] и стога 70 R је такође биоодлучан. Други 2Д спектри (Слика С5-С7) дали су пуну доделу протона иугљенични сигнали. Сходно томе, структура од1 је додељено као 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -дихидрокси-7 0 -(4-хидроксифенил)пропан-80 -илокси]бензојева киселина као што је приказано на слици1. 

Молекуларна формула за2 додељен је као Ц17H18O8 на основу ХР-ЕСИ-МСаналитички подаци (m/z 349.0936 [M − H]−, Слика С8). Апсорпција у ИР спектру(3425 и 1541 цм−1 ) означава хидроксилну и коњуговану карбонилну функционалност,редом. У поређењу са НМР спектрима1 и2, могло се приметити да онипоседовао различите ароматичне делове. Два сета АБКС-спареног ароматичног прстена и једанметокси група може бити откривена у1Х- (Слика С9) и13Ц-НМР (слика С10) подациоф2 (Сто1), и предложио је то једињење2 поседовао два трисупституисана негопар-дисупституисани ароматични делови. Значајне ХМБЦ корелације (Слика С11) изХ-3 до Ц-1, Ц-5 и Ц-7; од Х-6 до Ц-4; из ОЦХ3-30 до Ц-30 ; од Х-60 до Ц-40 иC-70; од Х-70 до Ц-10 , C-20 , C-80 и 90 ; од Х-80 до Ц-1, респективно, утврдио даструктура од2 био и неолигнански скелет. Кроз комбинацију велике спојницеконстанта (J7,8 = 5.2 Хз) и позитиван Цотон ефекат на 230 нм (∆ε плус 1,14), апсолутноконфигурација2 је додељен каотри- и (70 R,80 S)-форма, исто што и1 [44,45]. Остало2Д спектри (Слика С12–С14) дали су пуну доделу протонских и угљеничних сигнала.Овим налазима закључена је структура2 као 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -дихидрокси-70 -(4-хидрокси-3-метоксифенил)пропан-80 -илокси]-2-хидроксибензојева киселина (Сл1). 

Цомпоунд3 добија се као безбојни прах и његова молекулска формула је биладодељен као Ц20H30O5 на основу ХР-ЕСИ-МС аналитичких података (m/z 349.2024 [M − H]−, Слика С15). Цомпоунд3 показала апсорпциону пикове на 3450 (ОХ) и 1648 (карбоксилнакиселина) цм−1 у свом ИЦ спектру. О томе су сведочили и13Ц-НМР спектар (Слика С16) укод којих су уочене две карбоксилне функционалностиδC 167.2 (Ц-15) и 181.5 (Ц-19). Инњегово1Х-НМР (Слика С17), резонанције наδH 4,03 (1Х, дд,J = 9.2, 2,8 Хз, Х-12) иδC 75,5 (Ц-12) указује на присуство секундарне групе алкохола. Терминални метиленгрупа могла бити успостављена због протонских резонанција наδH 4,53 (1Х, с, Х-17а) и4,91 (1Х, с, Х-17б), а сигнали угљеника наδC 106.9 (Ц-17) и 150.2 (Ц-8), респективно.Две метил групе наδH 0.63 (3Х, с, ЦХ3-20) и 1,21 (3Х, с, ЦХ3-18) су повезани саквартерни угљеници (Ц-10 и Ц-4) доказани ХМБЦ корелацијама (слика С18).Ефекат заштите карбоксилне групе на Ц-4 је резултирао померањем ЦХ у горњем пољу3-20 (δH 0.63), сугеришући своје-конфигурација [46]. Поред тога, хемијски помак Х-17а (δH 4.53) појавио се у горњем пољу, што сугерише 12R конфигурација [47]. У свом ХМБЦ-успектар, корелације од Х-12 до Ц-9, Ц-14 и Ц-16; од Х-17 до Ц-7 и Ц-9;из ЦХ3-16 до Ц-12 и Ц-14; из ЦХ3-18 до Ц-3, Ц-4 и Ц-19; из ЦХ3-20 до Ц-1, Ц-5,Ц-9 и Ц-10, респективно, конструисали су планарну структуру3 како је раније објављеноза 12-хидроксиагатну киселину [46]. Међутим, конфигурација Ц-13 за3 је одређиванакаоE према НОЕСИ аналитичким подацима (слика С19), који су приказали НОЕ ефекте међуХ-5/Х-9, Х-5/Х-18 и Х-12/Х-14. Штавише, НОЕ између Х-14 и ЦХ3-16, који треба да буде забележен у 12-хидроксиагатној киселини [46], није откривен у3. Остало2Д спектри (Слика С20–С21) је обезбедио пуну доделу протонских и угљеничних сигнала.Коначно, структура од3 основан је као (13E,12R)-12-хидроксиагатна киселина каоприказано (слика1).

ХР-ЕСИ-МС спектар4 изложио [М− H]− јонски врх наm/z 181.0855 (Слика С22), у складу са псеудомолекуларном формулом Ц10H13O3. Апсорпцијаврхови на 3456 и 1635 цм-1 у свом ИР спектру приказан хидроксил и коњуговани карбонилгрупе, респективно. Два протона метина наδH 2,09 (1Х, м, Х-5) и 6,32 (1Х, дд,J = 2.4, 1,2 Хз, Х-2), две метиленске групе наδH 1.84 (1H, m, H-4a), 2.02 (1H, m, H-4b), 2.50 (1Х, дддд,J = 19.2, 9.2, 4.8, 2.4 Хз, Х-6а) и 2.70 (1Х, дддд,J = 19.2, 5.2, 5.2, 1.2 Хз,Х-6б) и један скуп изопропилних протона наδH 0.88 (3H, d, J = 6.8 Хз, ЦХ3-9), 0.98 (3H, d, J = 6.8 Хз, ЦХ3-10) и 2,31 (1Х, хепт,J = 6.8 Хз, Х-8) појавио се у1Х-НМР спектароф4 (Слика С23). Поред тога, један коњуговани карбонил угљеник атδC 174.8 (Ц-7), и једанкарбоксилни угљеник атδC 205.7 (Ц-3) се може приметити у његовом13Ц- и ДЕПТ НМР спектри(Слика С24). Уочене ХМБЦ корелације (Слика С25) од Х-2 до Ц-7; од Х-4 доЦ-3; од Х-6 до Ц-1, Ц-2 и Ц-5; из ЦХ3-9 до Ц-5 и ЦХ3-10; из ЦХ3-10 до Ц-8,односно, конструисана структура од4 као 5-изопропил-3-оксоциклохекс-1-ен-1-карбоксилна киселинакиселина (слика1). Други 2Д спектри (Слика С26–С28) дали су пуну доделу протонаи угљенични сигнали. Међутим, стереохемија у Ц-5 је остала неодређена.

Цомпоунд5 поседовао је молекулску формулу Ц11H14O5 одређена из депротонисаногПик молекуларних јона у негативном моду ХР-ЕСИ-МС анализа (m/z 225.0767 [M − H]−, ФигураС29). У свом ИР спектру, хидроксил (3421 цм−1 ) и карбоксил (1572 цм−1 ) функционалности могу бити откривене. Тхе1Х-НМР спектар (Слика С30) је открио два далекосежнаспрега ароматичних протона приδH 6.86 (1H, d, J = 2.4 Хз, Х-4) и 7.31 (1Х, д,J = 2.4 Хз, Х-6), једна метокси група наδH 3.56 (2H, t, J = 6.8 Хз, Х-9), и један сет одпропанол протона наδH 1,82 (2Х, тт,J {{0}}.0, 6.8 Хз, Х-8), 2.61 (2Х, т,J {{0}}.0 Хз, Х-7) и 3.56(2H, t, J = 6.8 Хз, Х-9). Штавише, једна карбоксилна група се налазила наδC 176,2 (Ц-10) инњегово13Ц-НМР спектар (слика С31). Планарна структура од5 установљен је значајнимХМБЦ корелације (Слика С32) ОЦХ3-3 до Ц-3; Х-6 до Ц-2, Ц-4, Ц-7 и Ц-10; Х-7на Ц-4, Ц-5 и Ц-8; Х-9 до Ц-7, односно Ц-8. Други 2Д спектри (Слика С33–С35)обезбедио пуну доделу сигнала протона и угљеника. Горе наведени докази сугеришуструктура од5 као 2-хидрокси-5-(3-хидроксипропил)-3-метоксибензојева киселина (слика1), која је већ била пријављена као стиракинолна киселина у претходној синтетичкој литератури [48]. Ипак, ово истраживање је први извештај о5 из природних извора.

3.2. Анти-инфламаторна активност

Упала је један од главних механизама самоодбране стимулисан бактеријама,вируса, рана или разних других фактора околине. То је први одговор имуног системасистем против инфекција и иритација. Неутрофили припадају обилној врстимакрофага и играју главну улогу у запаљењу и обично су први лимфницити да стигну до зараженог региона [49]. Неутрофили луче низ цитотоксина као нпрсупероксид ањон и еластаза као одговор на активацију имуног система [50]. Инпоследњих година показало се да су различите људске болести повезане са неутрофилимапрекомерно изражавање [51–55]. Утврђен је однос између упале и рака, а аутори су истакли да је формирање ћелија рака директно повезанодо упале [49]. Стога су нова антиинфламаторна једињења вредна трудадаља студија о лечењу рака. Процењено је 43 изолована једињењаинхибиција стварања супероксид ањона и ослобађања еластазе од стране људских неутрофилакао одговор на фМЛФ/ЦБ [56] (погледајте додатне материјале, табела С2). Значајно уХибиторски резултати (табела2) показао је само то45, 47, 48, 49, и50 (Фигура2) приказатизначајна инхибиција стварања супероксид ањона, са ИЦ50 вредности у распону од3.3 ± 0.9 до7.7 ± 0.9 µM у поређењу са позитивном контролом ЛИ294002 (ИЦ50 1.1 ± 0.3 µM). Штавише,48, 50, и51 (Фигура2) открили су значајну инхибицију ослобађања еластазеса ИЦ50 вредности у распону од 5.3± 0.2 до 8.3± 0.8 µМ у поређењу са позитивнимконтрола ЛИ294002 (ИЦ50 3.2 ± 1.0 µМ) (Табела2). Једињења48 и50 приказано обојеинхибиције стварања супероксид ањона и ослобађања еластазе, што указује на њихово вишеструкоантиинфламаторне биоактивности. Игле одП. моррисоницолапријављено је да имајуантиинфламаторни ефекат у РАВ 264.7 макрофага [13]. Аутори су то предложилиепикатехин иp-кумаринска киселина идентификована уП. моррисоницоламогу бити активни састојци.У овом истраживању, сва активна једињења садрже сличну флавонску кичмуда епикатехин иp-кумароил део се такође може приметити у49, 50, и51. Ово указује да су фллавоноиди иp-кумароил функционалне групе могу допринетиантиинфламаторна биоактивност у овој студији. Ови резултати биолошке анализе то сугеришуфлавоноиди играју кључну улогу уПинусврсте за антиинфламаторну биоактивност.

Табела 2.Инхибицијски ефекти пречишћених једињења на стварање супероксид ањона и ослобађање еластазељудским неутрофилима као одговор на фМЛФ/ЦБ.

Слика 2.Структуре антиинфламаторних принципа45, 47, 48, 49, 50, и51. 

3.3. Молецулар Доцкинг Студи

Смањење нивоа ГХ у вези са узрастом сматра се симптомом неуроендокриног поремећајастарење [57]. Овај феномен постоји код неколико врста сисара као што су људи, домаћипси и лабораторијски глодари [57]. Код људи, нивои ГХ у плазми почињу да се смањујуса годинама након пуног физичког сазревања и наставља се током деценија живота [57]. Грелин је идентификован као ендогени лиганд за ГХСР и главни је регулаторлучење ГХ [18,19]. Грелин је укључен у различите физиолошке и патофизиолошкемеханизми код људи као што је старење [24,25]. Поред тога, може се сматрати да грелинбити повезан са антиинфламаторном активношћу. Активација имуних ћелија била је ограничена грелиномлечење кроз инхибицију НФ-κБ активација и накнадно лучење МЦП{0}} [26]. Пријављен је синтетички аналогни грелин пептид који ослобађа хормон раста-2 (ГХРП-2)да смањи факторе запаљења код пацова са артритисом и подржава да имуне ћелијепосредовани су активацијом грелинских рецептора [27]. Невес и др. такође предложиорегулација упале као интервенција против старења [58]. Дакле, премаекспериментални подаци антиинфламаторног биолошког теста,45, 47, 48, 49, 50, и51 (Фигура2) показаозначајних инхибиторних ефеката и одабрани су да би се утврдиле њихове способности везивања зарецептор грелина. Пре симулације спајања, природни лиганд (8ККС) укључен је у 6КО5ПДБ датотека је поново усидрена ради провере. Интеракције између 8ККС и 6КО5 инајбоља поза израчунатих резултата показала је високу сличност и поновљивост са изворним подацима(подаци нису приказани). Резултати указују на високу тачност постојећег симулационог системаи подржава даље рачунарство.

Најнижа енергија везивања сваког лиганда се сматра најбољом конформацијом. Тхеафинитети везивања су наведени у табели3. Пептид 6 који ослобађа хормон раста (ГХРП-6) је биокористи се као позитивна контрола за спајање са везним џепом рецептора грелина као код наспретходни извештај. Иако АутоДоцк Вина није конструисан за спајање између пептидаи протеини, неколико успешних резултата је објављено у претходним извештајима [59–61]. Због тога је у овој студији ГХРП-6 прво израчунат да би се утврдила тачностсадашњи модел пристајања и резултати су се добро поклопили (Слика3А). У поређењу са ГХРП-6,енергије везивања49, 50, и51 били су нижи од−10,3 кцал/мол (таб3). Овосугерише да49, 50, и51 могао пристати у џеп грелинског рецептора слично иличак и бољи од ГХРП-а-6. За49, водоничне везе се могу уочити измеђудве карбонилне групе (Ц-4 иp-кумароил) и Арг283, Ц-5 хидроксил и Глн120,C-7 хидроксил и Тир313 и Ц-40 хидроксил и Цис304, респективно. Арг199 формирао аконвенционална водонична веза са карбонил групомp-кумароил. Додатно,49 биоповезан са Арг283, Арг102, Асп99, Пхе279, Пхе312, Леу181 и Про200 остацимарецептор грелина путем различитих ефеката као што суπ-катација,π-анион,π–π Т-облика, иπ-алкил интеракције. Ово дозвољено једињење49 и протеина да формирају стабилан комплекс(Фигура3B). 50 био везан за Асп99, Арг102, Глн120, Арг283, Леу103, Асн305 иАрг199 кроз различите водоничне везе, док друге интеракције (π– катјон,π-анион,π–π Т-облика, иπ–алкил) су такође примећени са Асп99, Арг102, Арг283, Пхе279, Пхе312,Леу181 и Леу210 (Слика3C). 51 такође успостављене водоничне или угљеник-водоничке везеса Тир313, Сер123, Арг283, Арг102 и Асн305, заједно са другим интеракцијама (π-катација,π-анион,π-сигма,π–π Т-облика, иπ-алкил) да се повеже са Асп99, Арг283, Арг102, Леу181,Пхе312 и Про200 остаци рецептора грелина могу се открити (Слика3Д). У поређењу саједињења45, 47, и48 са49, 50, и51, бивша група је поседовала флфлавоноидсамо скелет док је друга група имала шећерне и кумароилне делове. Саопштено је дакумароил група везана за шећер била је кључна за афинитет везивања за грелинрецептор [34]. Структура јаза ГХСР-а у интеракцији са остатком ацилне киселине грелинарезултирало је трансформацијом рецептора грелина у активну конфигурацију [43]. Штавише, везни џеп ГХСР-а је раздвојен мостом соли између Глу124и Арг283, а овај регион је богат хидрофобним аминокиселинама [43]. Према нашимподаци, резултати пристајања49, 50, и51 били већи од оних на45, 47, и48, којапредложио бољу способност везивања. Главне структурне карактеристике су билекумароил групе, а не шећерне групе, а то би даље могло бити доказаноиспитивање више једињења која поседују кумароил функционалности. У овој студији,активни састојци49, 50, и51 поседовао не само антиинфламаторну биоактивност већ ипотенцијал везивања за рецептор грелина. Ово је указивало на то да су тврдили ефекти против старењаЧај од борових иглица такође може бити заснован на овим једињењима сличним грелину.

4. Закључци

Укупно седамдесет седам изолата који се састоје од петнаест неописаних једињења су пречишћени.потврђено из метанолних екстракатаП. таиваненсисигле. Њихове структуре су окарактерисанекроз спектроскопске и спектрометријске анализе. Четрдесет три пречишћена једињења су билаиспитан за својеантиинфламаторно активностодинхибиција стварања супероксид ањонаиослобађање еластазе на моделу неутрофила. Резултати сугеришу да45, 47, 48, 49, 50, и51 поседују значајанантиинфламаторни потенцијали. Даље молекуларно спајањеподржани резултати рачунарства49, 50, и51 показујући везујући афинитет према активномџеп рецептора грелина. Дакле, сирови екстракти и пречишћени састојци одП. таиваненсисимају потенцијал да се развију као нови антиинфламаторни оловни лекови илисастојци хране.

Додатни материјали:Следеће су доступне на мрежи на, Додатак А: Комплетне процедуре екстракције и изолације,Додатак Б: Референцепознатих једињења, Табела С1: Прелиминарни скрининг биоактивности иглица одП. таиваненсисна супероксидустварање ањона и ослобађање еластазе од стране људских неутрофила као одговор на фМЛФ/ЦБ,Табела С2: Инхибицијски ефекти пречишћених једињења на стварање супероксид ањона и еластазеослобађање од стране људских неутрофила као одговор на фМЛФ/ЦБ, слика С1–С35: ХРМС и НМР спектринова једињења

1–5. Доприноси аутора:Концептуализација, П.-ЦК и ЈТЦТ; Методологија, П.-ЦК и Т.-ЛХ;Истрага, И.-ЦЛ, АМК и М.-ЛИ; Ресурси, С.-ИВ; Курирање података, И.-ЦЛ и Г.-ХИ;Писање—припрема оригиналног нацрта, П.-ЦК и И.-ЦЛ; Писање—преглед и уређивање, П.-ЦК Свеаутори су прочитали и пристали на објављену верзију рукописа.

Финансирање:Ову студију је спонзорисало Министарство науке и технологије Тајвана (МОСТ). Тхеистраживање је делимично подржано од стране пројекта Хигхер Едуцатион Спроут, Министарства просветеСедиште универзитетског напредовања на Националном универзитету Цхенг Кунг (НЦКУ).

Изјава институционалног одбора за ревизију:Студија је спроведена уз одобрење ИнституцијеОдбор за преглед Меморијалне болнице Цханг Гунг (ИРБ бр. 201800369А3).Изјава о информисаној сагласности:Изјава се може дати на захтев.

Изјава о доступности података:Оригинални подаци се могу добити од одговарајућег аутора на захтев.

Признања:Аутори су такође захвални Меморијалној болници Цханг Гунг (ЦМРПД1Б0281~3,ЦМРПФ1Д0442~3, ЦМРПФ 1Ф0011~3, ЦМРПФ1Ф0061~3 и БМРП450 додељене Т.-ЛХ) заделимична финансијска подршка садашњем истраживању. Аутори са захвалношћу признају употребу НМРопрема која припада Центру за инструменте Националног Цхенг Кунг универзитета.

Сукоби интереса:Аутори изјављују да нема сукоба интереса.

Референце

1. Ксие, К.; Лиу, З.; Ли, З. Хемијски састав и антиоксидативна активност етеричног уља шестПинустаксона пореклом из Кине.Молецулес2015, 20, 9380–9392. [ЦроссРеф] 

2. Ким, КИ; Цхунг, ХЈ Једињења укуса чаја од борових клица и чаја од борових иглица.Ј. Агриц. Фоод Цхем.2000, 48, 1269–1272. [ЦроссРеф] 

3. Парк, Г.; Паудиал, ДП; Хванг, И.; Трипатхи, ГР; Ианг, И.; Цхеонг, Х. Производња ферментисаних екстраката иглица из црвеног бора ињихова функционална карактеризација.Биотецхнол. Биопроцесс Енг.2008, 13, 256. [ЦроссРеф]

4. Иџојтић, М.; Кајба, Д.; Фрањиц, Ј. Диференцијација Ф1 хибридаП. ниграЈФ Арнолд× П. силвестрисL., П. ниграЈФ Арнолд× П. денсифлораСиеболд ет Зуцц.,П. ниграЈФ Арнолд× П. тхунбергианаФранко и њихове родитељске врсте по игличастом испарљивом саставу.Биоцхем.Сист. Ецол.2005, 33, 427–439. [ЦроссРеф] 

5. Ким, ИС; Схин, ДХ Испарљиве компоненте и антибактеријски ефекти борове иглице (Пинус денсифлфлораС. и З.) изводи.Фоод Мицробиол.2005, 22, 37–45. [ЦроссРеф] 

6. Доб, Т.; Беррамдане, Т. Састав есенцијалног уљаПинус халепенсисМилл. из три различита региона Алжира.Ј. Ессент. Оил Рес.2007, 19, 40–43. [ЦроссРеф] 

7. Нам, АМ; Томи, Ф.; Гибернау, М.; Цасанова, Ј.; Бигхелли, А. Састав и хемијска варијабилност уља игле изПинус халепенсисрасте на Корзици.Цхем. Биодиверс.2016, 13, 380–386. [ЦроссРеф] 

8. Сезик, Е.; Устун, О.; Демирци, Б.; Ба¸сер, КХЦ Састав етеричних уљаПинус ниграАрнолд из Турске.Турк. Ј. Цхем.2010, 34, 313–325.