1. ДЕО Ефекти екстракта Цистанцхе Тубулоса налик антидепресивима на пацове од хроничног непредвидивог стреса кроз обнављање хомеостазе цревне микробиоте

Све већи број доказа показује да су неуропсихијатријски поремећаји, као што је депресија, повезани са микробиомом црева преко осовине црева и мозга.Цистанцхес Хербаје добро познат по лечењу недостатка „бубрега-јанга“ у традиционалној кинеској медицини (ТЦМ) и користи се за лечење неуродегенеративних болести последњих година. У овој студији, модел депресије изазван хроничним непредвидивим стресом (ЦУС) је успостављен да би се истражио утицајЦистанцхе тубулосаекстракт (ЦТЕ) на тестовима понашања, моноаминским неуротрансмитерима и неуротрофним факторима у хипокампусу и дебелом цреву, саставу цревне микробиоте и производњи кратколанчаних масних киселина (СЦФА). Штавише, корелациона анализа је коришћена за процену функционалног односа између измењене микробиоте црева, промењених неуротрансмитера и неуротрофина у хипокампусу и дебелом цреву и поремећене концентрације СЦФА. ЦТЕ је значајно побољшао понашање налик депресији код пацова под ЦУС-ом. Ниво 5-хидрокситриптамина (5-ХТ) у мозгу и експресија неуротрофног фактора (БДНФ) у мозгу код ЦУС пацова је обновљен помоћу ЦТЕ. Релативно обиље микробиоте црева и концентрације ацетата и хексаноичне киселине такође се могу модулисати ЦТЕ третманом. Даље смо показали да је примена ЦТЕ код ЦУС пацова довела до јаке корелације између поремећеног састава цревне микробиоте, нивоа неуротрансмитера хипокампуса и производње неуроактивних метаболита СЦФА. Све у свему, ови резултати идентификују ЦТЕ као потенцијални третман за симптоме депресије обнављањем хомеостазе микробиоте црева за поремећаје осовине микробиота-црева-мозак, отварајући нове путеве у области неуропсихофармакологије.

Кључне речи: Цистанцхе тубулоса, антидепресив, хронични непредвидиви стрес, микробиота црева, оса микробиота-црево-мозак

За више информација контактирајте:Joanna.jia@wecistanche.com

Цистанцхе десертицола има много ефеката, кликните овде да бисте сазнали више

УВОД

Цистанцхес Херба(Роу Цонг-Ронг на кинеском) је званично забележено као осушене сочне стабљикеЦистанцхе десертицола(ИЦ Ма) иЦистанцхе тубулоса(Сцхренк) у комисији Кинеске фармакопеје (2015). То је позната традиционална кинеска медицина (ТЦМ) за лечење недостатка бубрега, импотенције, женске неплодности, морбидне леукореје, обилне метрорагије,

Ецхинацосидеу цистанче може промовисатизарастање рана

и сенилна констипација (Кинеска фармакопејска комисија, 2015). Претходне студије су откриле неколико главних хемијских састојакаЦистанцхес Херба, укључујући фенилетаноидне гликозиде (ПхГ), иридоиде и иридоидне гликозиде, лигнане, алдитоле, олигосахариде и полисахариде. Фармаколошка анализа је показала да Цистанцхес Херба испољава широк спектар неуропротективних, имуномодулаторних, антиинфламаторних и хепатопротективних активности (Јианг и Ту, 2009; Фу ет ал., 2017). ПхГ се сматрају главним активним компонентама Цистанцхес Херба које поседују различите фармаколошке активности, као што су неуропротективне, имуномодулаторне, антиинфламаторне, хепатопротективне, антиоксидативне, итд. (Јианг и Ту, 2009; Фу ет ал., 2017). Цистанцхес Херба је првобитно забележена у Класици биљне медицине („Схеннонг Бенцао Јинг“ на кинеском), добро познатој књизи о лековитим биљкама написаној између 200. и 250. године нове ере, као „висока биљка“ која може да регулише „пет (утробе). ) напрезања и седам (преједање, љутња, влага, хладноћа, брига, ветар и киша и страх) оштећења“ (Хуанг, 1982). Данас је Цистанцхес Херба широко прихваћен као биљни тоник за општу слабост (Фу ет ал., 2017).Ц. тубулосагликозидне капсуле (Меморегаин®) се користе за лечење Алцхајмерове болести (Гуо ет ал., 2013). Дисфункционални допаминергички систем је једна од кључних патогенеза моноаминске хипотезе депресије (Думан ет ал., 1997; Крисхнан и Нестлер, 2008). Утврђено је да ехинакозид (један од ПхГ) и ПхГ из Цистанцхе салса штите допаминергичке неуроне од неуротоксичности допамина (ДА) изазване 1-метил-4-фенилом-1,2,3,{ {8}}тетрахидропиридин (МПТП) који може повећати нивое ДА у стриатуму Ц57 мишева (Тиан и Пу, 2005; Генг ет ал., 2007). Поред тога, каталпол и генипозид су два репрезентативна иридоида у Цистанцхес Херба, и за њих је утврђено да побољшавају понашање налик депресији изазвано хроничним непредвидивим стресом (ЦУС) кроз обнављање дисфункција хипоталамус-хипофизно-надбубрежне (ХПА) осовине, а каталпол може побољшати регулацију мозга. експресија изведеног неуротрофног фактора (БДНФ) (Цаи ет ал., 2015; Ванг ет ал., 2015). Штавише, најновија публикација даје део свежег доказа да је декокција Цистанцхес Херба значајно смањила период непокретности у тесту суспензије репа миша, што снажно сугерише да Цистанцхес Херба поседује потенцијалне особине сличне антидепресивима (ВангД. ет ал., 2017).

Традиционална кинеска медицина привлачи све већу пажњу као третман депресије због својих релативно умерених нежељених ефеката (Саррис ет ал., 2011; Фенг ет ал., 2016). Различити типови ТЦМ, као што су појединачна једињења из сирових лекова (гинсенозид Рб1, гинсенозид Рг3 и Иуанзхи-1) (Јин ет ал., 2015; Канг ет ал., 2017; Ванг ГЛ ет ал., 2017. ), појединачни кинески лековити материјал (корен Панак гинсенга, ризом Ацорус татариновии и Моринда Оффициналис) (Данг ет ал., 2009; Хан ет ал., 2013; Ксу ет ал., 2016) и ТЦМ децокције (Каи-Ксин- Сан, Цхаиху-Сху-Ган-Сан, Ксиаоиаосан и Ксиаоцхаихутанг) (Даи ет ал., 2010; Су ет ал., 2011; Су ет ал., 2014; Иан ет ал., 2016) су дубоко проучавани и приказани да преокрене или ублажи симптоме сличне депресији. На пример, откривено је да Каи-Ксин-Сан значајно ублажава симптоме депресивних пацова изазваних ЦУС повећањем броја неуротрансмитера, неуротрофних фактора и њихових одговарајућих рецептора, и промовишући експресију синаптотагмина и дендритске густине кичме (Иан ет ал. , 2016).

Ипак, претходне студије ТЦМ-а ослањају се на резултате тестова понашања сличних депресивима и фокусирају се на конвенционални фармаколошки механизам деловања. Веза између антидепресивне ефикасности орално примењеног ТЦМ-а и цревне микробиоте није добро схваћена. Све већи број доказа потврђује да микробиота црева игра кључну улогу у регулисању можданих функција, посебно депресије и других поремећаја повезаних са стресом (Фостер и Неуфелд, 2013; Схервин ет ал., 2017). На пример, хронични стрес доводи до дисрегулације микробне структуре црева пацова, са смањењем односа Фирмицутес/Бацтероидетес, и прецизније, смањењем релативне заступљености Лацтобациллуса и повећањем Осциллибацтер (Менг ет ал., 2017). Штавише, фекална трансплантација нерегулисане микробиоте од депресивних пацијената на мишеве без клица дала је фенотип сличан депресији код ових животиња, што указује да нерегулисана микробиота црева узрокује бихејвиоралне и физиолошке симптоме депресије и анксиозности (Келли ет ал., 2016; Зхенг ет ал. ., 2016). У експериментима на животињама, утврђено је да неки модулатори микробиоте, као што су пробиотици и пребиотици, побољшавају понашање слично депресији код мишева који су под хроничним стресом побољшавајући микробиоту црева (Браво ет ал., 2011; Бхарвани ет ал., 2017; Бурокас ет ал., 2017. ).

Имајући у виду повезаност између микробиоте црева и развоја болести, као и пластичности структуре микробиоте црева, одлучили смо да истражимо ефекте микробиоте црева за посредовање депресије привукли су нашу пажњу и били су истражени (Цханг ет ал., 2017; Ксу ет ал. ., 2017). Да би се ово постигло, извршена је комбинована анализа мета статистике секвенционирања 16С рРНА гена (Вхите ет ал., 2009) да би се анализирао састав цревне микробиоте. У овој студији,Ц. тубулосаје изабран за процену његових ефеката сличних антидепресивима јер има виши ниво ПхГ у поређењу саЦ. десертицола. Установљен је модел депресије изазване ЦУС пацова да би се истражио утицајЦ. тубулоса екстракт(ЦТЕ, који се састоји од 48,6 процената ПхГ, 6,9 процената иридоидних гликозида и 20,0 процената укупних сахарида) о тестовима понашања, моноаминским неуротрансмитерима и неуротрофним факторима у хипокампусу и дебелом цреву, саставу цревне микробиоте и кратком ланцу производња масних киселина (СЦФА). Штавише, функционални однос између измењене цревне микробиоте промењених неуротрансмитера и неуротрофина у хипокампусу и дебелом цреву, и проучавана је поремећена концентрација СЦФА. Корелациона анализа је коришћена да се поткрепе докази да ЦТЕ циља на микробиоту црева за лечење депресије модулацијом осе микробиота-црева-мозак.

МАТЕРИЈАЛИ И МЕТОДЕ

Материјали

Флуоксетин (ФЛКС) је купљен од Аладдин Индустриал Инц. (Шангај, Кина). 5-хидрокситриптамин (5-ХТ), норепинефрин (НЕ) и БДНФ ЕЛИСА комплети су купљени од Института за биоинжењеринг у Нањинг Јианцхенг (Нањинг, Кина). ХПЛЦ ацетонитрил је купљен од Мерцк-а (Дармстадт, Немачка). Дејонизована вода је припремљена од дестиловане воде коришћењем Милли-К система за пречишћавање воде (Миллипоре, Бедфорд, МА, Сједињене Државе). Сви остали коришћени реагенси и хемикалије су биле аналитичке чистоће.

Осушене стабљикеЦ. тубулосаприкупљени су из округа Хетиан (Сињианг, Кина). Узорке узорака ваучера је потврдио проф. Ксиаобо Ли и депоновао их је у хербаријум Фармацеутског факултета Универзитета Јиао Тонг у Шангају (Шангај, Кина). Хомогени прахЦ. тубулосастабљике су суспендоване десет пута у 70% етанолу и рефлуксоване три пута, сваки по 1 х на 100 степени. Екстракти су филтрирани коришћењем газе, упарени под вакуумом на 65 степени и лиофилизовани. Узорак је поново растворен, а затим одвојен макропорозном смолом Д101. Након адсорпције, фракција елуирана водом је одбачена. ЦТЕ је добијен након елуирања са 40 процената етанола, затим упарен под вакуумом на 65 степени и лиофилизован.

Анализа хемијског састава ЦТЕ

Релативни садржај ПхГс у ЦТЕ је одређен УВ спектрофотометријом на 330 нм коришћењем ехинакозида као стандарда. Релативни садржај иридоида и иридоидних гликозида је мерен УВ спектрофотометријом методом двоструке таласне дужине да би се избегла спектрална интерференција од ПхГс (237 нм је коришћено за спектроскопску квантификацију, изосбестична тачка 280 нм је коришћена за референтну таласну дужину), генипо као стандард. Укупан садржај угљених хидрата у ЦТЕ одређен је колориметријском методом фенол-сумпорне киселине са глукозом као стандардом (Цхов и Ландхауссер, 2004).

Главне хемијске састојке ЦТЕ карактерише УПЛЦ-К-ТОФ-МС. УПЛЦ-К-ТОФ-МС анализа је изведена на Ватерс АЦКУИТИ УПЛЦ систему (Ватерс Цорп., Милфорд, МА, Сједињене Државе) са АЦКУИТИ УПЛЦ БЕХ Ц18 колоном (100 мм к 2,1 мм ид, 1,7 段м, Ватерс Цорп., Сједињене Америчке Државе) градијентом елуирања коришћењем 0.1 процента мравље киселине ацетонитрила (А) и 0.1 процента мравље киселине у води (Б) на брзина протока од 0,4 мл/мин. Профил градијента је био: 0-5 мин (А: 5-20 процената), 5-7.5 мин (А: 20-30 процената), 7.5-10 мин ( А: 30-70 процената), 10-11 мин (А: 70-100 процената), и држано 1,5 мин. Градијент је враћен на 5 процената за 0,5 мин и држан 2,5 мин за следећу вожњу. Запремина ињекције је била 3 ​​[ил. Температура пећи на колони је подешена на 35 степени.

Масена спектрометрија је изведена коришћењем Ватерс Вион ИМС масеног спектрометра (Ватерс Цорп., Милфорд, МА, Сједињене Државе). Јонизација је изведена у режиму негативног електроспреја (ЕСИ). МС параметри су били следећи: капиларни напон, 2.0 кВ; напон конуса, 20 В; температура извора, 120 степени; температура десолватације, 500 степени; токови гаса конуса и десолватације, 50 и 1,000 Л/х, респективно. За прецизно мерење масе, леуцин-енкефалин је коришћен као блокада масе за генерисање [МХ]-јона (м/з 554,2615). Експеримент МСЕ (Масс СпецтрометриЕлеватедЕнерги) у две функције скенирања спроведен је на следећи начин: функција 1 (ниска енергија): м/з 50-1,000, време скенирања 0,25 с, кашњење између скенирања 0,02 с , 6 еВ енергија судара; функција 2 (висока енергија): м/з 50-1,000, време скенирања 0,25 с, кашњење између скенирања 0,02 с, рампа енергије судара од 20-45 еВ. Подаци су обрађени коришћењем софтвера УНИФИ 1.8.1 (Ватерс Цорп., Милфорд, МА, Сједињене Америчке Државе).

цистанцхемоћипобољшати функцију бубрега

Експерименти на животињама

Мужјаци Спрагуе-Давлеи пацова (200 土 20 г) набављени су од компаније Беијинг Витал Ривер Лаборатори Анимал Тецхнологи Цомпани (Пекинг, Кина) и смештени у Центру за лабораторијске животиње Шангајског универзитета Јиао Тонг (Шангај, Кина). Животиње су смештене у групама под контролисаном собном температуром (25°Ц 2 степена, 55°Ц 10% релативне влажности) са циклусом од 12:12 х светло-мрак. Пацовима је дозвољен слободан приступ редовној храни и води за лабораторијске пацове током 1 недеље. Објекти и протоколи за животиње одобрени су од стране Комитета за етику животиња Шангајског универзитета Јиао Тонг (Шангај, Кина).

Након 1 недеље аклиматизације, 40 наивних пацова је подвргнуто периоду од 72 сата тренинга са сахарозом и основног тестирања сахарозе. Пацови су подељени у пет група (н=8) на основу њихове преференције сахарозе у основном тесту сахарозе (додатна слика С1). Контролној групи и ЦУС групи дат је физиолошки раствор (10 мл/кг). За остале три групе, ЦТЕ у високој дози (ЦТЕХ) (400 мг/кг), ниској дози (ЦТЕЛ) (200 мг/кг) и ФЛКС (10 мг/кг) су давани интрагастрично 1 х пре ЦУС процедуре (8:00 до 9:00) током 4 недеље.

Хронични непредвидиви стрес је развијен како је претходно описано (Виллнер, 1997; Ксуе ет ал., 2013), осим за контролну групу без стреса, на пацове је примењен низ стресора: стробоскопско осветљење ниског интензитета преко ноћи (120 бљескова/ мин), бели шум (100 дБ) 1 х, ускраћивање воде 24 х, празне флаше воде 1 х (након лишења воде), ускраћивање хране 24 х, принудно пливање (5 мин), физичко обуздавање ({{11 }} х), запрљан кавез 24 х (200 мл воде у 100 г подлоге пиљевине), штипање репа (1 мин), нагиб кавеза од 45 степени 24 х, шок 30 мин и осветљење преко ноћи (12 х). Стресори су примењивани континуирано и насумично током 4 недеље, чији су детаљи описани у Додатној табели С1. Храна и вода били су слободно доступни контролним пацовима без стреса, који су остали неометани у другој просторији, изузев периода од 14 сати пре сваког теста сахарозе. Један пацов је угинуо током ЦУС процедуре. Тест присилног пливања (ФСТ) је урађен након

4 дана акутне администрације и након 28 дана стреса, урађени су тест преференције сахарозе (СПТ) (29. дан), тест на отвореном пољу (ОФТ) (31. дан) и тест храњења потиснутим новостима (НСФТ) (33. дан). Нацрт дизајна за ЦУС и тестове понашања приказан је на додатној слици С2.

Тест присилног пливања је изведен као што је претходно описано (Порсолт ет ал., 1978). Процедура се састојала од предтестирања и теста, коришћењем истих апарата и услова (пречник 20 цм, висина 45 цм, са 25 цм воде одржаване на 26 степени). Током претестирања, пацови су били присиљени да пливају 15 минута; 24 х касније, пацови су стављени у исти апарат на 5 мин тест пливања. Понашање пливања изнутра

Видео камером је посматрано 5 мин, мерено је и анализирано трајање непокретности.

За СПТ, пацови су прво обучени да конзумирају 1 проценат (в/в) раствора сахарозе током 72 сата пре СПТ. Основни тест сахарозе пре ЦУС процедуре и СПТ на крају ЦУС-а су изведени као што је претходно описано (Ксуе ет ал., 2013).

Тест на отвореном пољу је спроведен на крају ЦУС процедуре, апарат и метода су били исти као што је претходно описано (Ксуе ет ал., 2013). Систем за видео праћење (Схангхаи Мобиле Датум Информатион Тецхнологи Цо., Лтд.) је коришћен за снимање укупне пређене удаљености.

Нови тест храњења је процењен као што је претходно описано (Ксуе ет ал., 2013) и забележена је и анализирана латенција за почетак јела у року од 5 минута.

Мерење неуротрансмитера и неуротрофних фактора

Након тестова понашања, најмање четири фекалне пелете су добијене од сваког пацова, стављене у стерилне коничне епрувете и одмах замрзнуте на -80°Ц за анализу микробне заједнице и СЦФА. Након тога, пацови су жртвовани; хипокампус и дебело црево су изоловани и одмах измерени. Узорци ткива су испрани физиолошким раствором, брзо замрзнути у течном азоту и чувани на -80°Ц за складиштење. После узастопног одмрзавања на -20°Ц и 4°Ц, узорци ткива су хомогенизовани у физиолошком раствору и центрифугирани 25 минута на 2500 рпм/4°Ц. Добијени супернатант је сакупљен и чуван на 4°Ц до употребе. Нивои 5-ХТ у хипокампусу и дебелом цреву, НЕ у хипокампусу и БДНФ у хипокампусу одређени су комерцијалним ЕЛИСА комплетима у складу са протоколима произвођача (Хоу ет ал., 2017).

Анализа композиционог профила цревне микробиоте

Укупна ДНК микробиоте црева из фекалних узорака је екстрахована као што је претходно описано (Веи ет ал., 20{{20}}}4). Сваки фекални узорак (0.2 г) је помешан у 1 мл ПБС, и потпуно хомогенизован два пута, а затим центрифугиран на 200 г током 6 минута. Супернатанту је додат 20 ± 20 процената ПВП и центрифугиран на 300 г током 6 минута. Добијени супернатант је затим центрифугиран на 12,000 г током 6 минута и ћелијске пелете су сакупљене. Ћелијске пелете су испране са ПБС, а затим су ресуспендоване у 300 лизата И (150 мМ НаЦл, 100 мМ ЕДТА ・На2・2Х2., пХ 8,0). Суспензија је помешана са 100 ул раствора лизозима (100 мг/мл) и 20 к 1 процента РНКазе, 37°Ц у топлом купатилу током 30 мин, затим је додато 300 ул лизата ИИ (100 мМ НаЦл, 500 мМ базе), пХ8 Трис0. . Суспензија ћелија је нежно помешана са 50 ± 20 процената СДС, купана у леду 5 минута. ДНК је затим пречишћена секвенцијалном екстракцијом са 1 процентом ПВП, трис-еквилибрисаним фенолом и хлороформ-изоамил алкохолом (вол/вол/вол/вол, 3.125:25:24:1) и хлороформ-изоамил алкохолом (вол/вол, 24 :1) праћено таложењем на -20°Ц током 2 х са две запремине етанола и 50 [ил 3 М НаАц. ДНК је сакупљена центрифугирањем, осушена на ваздуху и растворена у 100 л стерилне дејонизоване воде. Чистоћа нуклеинске киселине је тестирана коришћењем НаноДроп 2000ц спектрофотометра (Тхермо Фисхер Сциентифиц, Валтхам, МА, Сједињене Државе). Укупна геномска ДНК је затим подвргнута ПЦР амплификацији коришћењем прајмера специфичних за В3-В4 регионе гена 16С рРНА: предњи прајмер 338Ф (5'-АЦТЦЦТАЦГГГАГГЦАГЦА-3') и реверзни прајмер 806Р (5 '-ГГАЦТАЦХВГГГТВТЦТААТ- 3'). ПЦР ампликони су пречишћени Агенцоурт АМПуре перлама (Бецкман Цоултер, Индианаполис, ИН, Сједињене Државе) и квантификовани помоћу ПицоГреен дсДНА Ассаи Кит (Инвитроген, Царлсбад, ЦА, Сједињене Државе). Након појединачног корака квантификације, ампликони су обједињени у једнаким количинама, а секвенцирање на крају пара 2 к 300 бп је изведено коришћењем Иллумина МиСек платформе са МиСек Реагент Кит в3 у Схангхаи Персонал Биотецхнологи Цо., Лтд (Шангај, Кина). Читања упарених крајева састављена су коришћењем ФЛАСХ софтвера (верзија 1.2.7), читања сирових секвенци су квалитетно исечена коришћењем КИИМЕ софтвера (верзија 1.8.0) да би се уклонили неусклађени бар кодови и секвенце испод прага дужине. Након тога, филтриране секвенце су груписане у оперативне таксономске јединице (ОТУ) са прагом од 97 процената сличности секвенце користећи КИИМЕ са УЦЛУСТ. Бета разноврсност је изведена на КИИМЕ за пондерисану УниФрац анализу главних координата (ПЦоА). Коначно, коришћен је софтвер Мета статс за упоређивање разлика у таксономском саставу цревних микроба међу различитим групама.

Анализа концентрације СЦФА

Концентрација СЦФА (укључујући ацетат, пропионат, бутират, изобутират, валеринску киселину, изовалеринску киселину и хексанску киселину) у узорцима фекалија пацова одређена је ГЦ{{0}} гасним хроматографом (Схимадзу, Јапан), уграђеним са ДБ-ФФАП колоном (30 мк 0.25 мм к {{10}}.25 цм, Агилент, Сједињене Државе). Стандардни раствори ацетата, пропионата, бутирата, изобутирата, валеринске киселине, изовалеринске киселине и хексанске киселине припремљени су на 1, 0.4, 0.2, 0.1, {{ 21}}.05, 0.01 и 0,005 мг/мл са етром (укључујући 2- метил валеринску киселину 0,1 мг/мл као интерни стандард), респективно. Сваки фекални узорак (0,2 г) је помешан у 0,8 мл дејонизоване воде мешањем и центрифугирањем на 5,000 рпм током 20 минута на 4°Ц, додато је 450 л супернатанта са 50 ил 50 процената Х2СО4 и 500 ил интерног стандарда раствора, мешање на вортексу 1 мин и центрифугирање на 12,000 рпм током 10 мин, затим је смеша стављена на 4°Ц током 30 мин. Супернатант је узет за ГЦ анализу. Анализа СЦФА је спроведена као што је претходно описано (Ванг ет ал., 2016).

Статистичка анализа

Сви подаци су представљени као средства 土 СЕМ. Статистичка анализа је обављена коришћењем софтвера СПСС 21.0 (СПСС Инц., Чикаго, ИЛ, Сједињене Државе) са једносмерном АНОВА праћеном Данетовим тестом или Студентовим т-тестом. Подаци су искључени из анализе ако су већи од две стандардне девијације од средње вредности. Вредности п < 0.05="" сматране="" су="" статистички="" значајним.="" пирсонова="" корелациона="" анализа="" је="" коришћена="" за="" процену="" повезаности="" између="" релативне="" количине="" цревне="" микробиоте,="" сцфа,="" нивоа="" 5-хт,="" не="" и="" бднф="" хипокампуса="" и="" 5-хт="" дебелог="">

РЕЗУЛТАТИ

Анализа хемијског састава ЦТЕ

Прво је свеобухватно анализиран хемијски састав ЦТЕ. Као што је приказано у табели 1, ПхГ су били главна компонента ЦТЕ, са релативним садржајем од 48,6 процената, иридоиди и иридоидни гликозиди су били 6,9 процената, а укупни сахариди су били 20,0 процената. Ове

компоненте ЦТЕ су затим карактерисане коришћењем УПЛЦ-К-ТОФ-МС. Укупно је откривено и идентификовано 27 састојака, укључујући 20 састојака ПхГ, пет иридоида и иридоидних гликозида и два олигосахарида. Детаљне информације, укључујући време задржавања, тачан МС и МС/МС јоне фрагмената, наведене су у пратећим информацијама (додатна табела С2). УПЛЦ-К-ТОФ-МС укупни јонски хроматограм (ТИЦ) ЦТЕ приказан је на додатној слици С3.

ЦТЕ је побољшао депресивно понашање код ЦУС пацова

Код ЦУС пацова, укупно време непокретности у ФСТ и латенција за јело у НСФТ су значајно смањени ЦТЕ третманом, а преференција сахарозе у СПТ и укупна пређена удаљеност у ОФТ су повећани.

Слика 1А илуструје акутне ефекте ЦТЕ на време непокретности у ФСТ код ЦУС пацова. У поређењу са групом модела ЦУС, акутна орална примена ЦТЕ од 3- дана значајно је смањила укупно време непокретности у ФСТ [једносмерна АНОВА, Ф(3,26)=4.983, п {{7} }.007]. Даља постхоц анализа открила је ту администрацију

ТАБЕЛА 1|хемијски састав одЦ. тубулосаекстракт ЦТЕ са групом високе дозе (Дуннеттов тест, п < {{0}}}.05) и групом са ниским дозама (Дуннеттов тест, п < 0,05) показао је значајно смањење укупног времена непокретности у ФСТ-у .

Ефекти ЦТЕ на преференцију сахарозе у СПТ код ЦУС пацова приказани су на слици 1Б. Процедура стреса од двадесет осам дана изазвала је значајно смањење преференције сахарозе у групи ЦУС модела у поређењу са контролним пацовима без стреса [једносмерна АНОВА, Ф(4,34)=3.993, п {{8 }}.{{10}09; Дуннеттов тест, п < 0,05],="" што="" указује="" да="" је="" цус="" модел="" успешно="" развијен.="" као="" позитивна="" контрола,="" флкс="" група="" је="" значајно="" повећала="" преференцију="" сахарозе="" код="" цус="" пацова="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,34)="3.993," п="0.009;" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,05],="" који="" показује="" предиктивну="" валидност="" цус="" модела.="" хронична="" орална="" примена="" цте="" у="" групи="" са="" високим="" дозама="" показала="" је="" кључне="" ефекте="" на="" преференцију="" сахарозе="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,34)="3.993,п=0.009;" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,01],="" који="" га="" је="" вратио="" на="" нормалне="" нивое="" код="" цус="" пацова.="" цте="" са="" групом="" са="" ниским="" дозама="" показао="" је="" тренд="" раста,="" али="" ефекат="" није="" био="" статистички="" значајан="" (дуннеттов="" тест,="" п="">

Као што је приказано на слици 1Ц, укупна удаљеност пређена у ОФТ-у је такође коришћена за процену ефеката ЦТЕ на ЦУС пацове. У поређењу са пацовима без стреса, група модела ЦУС је показала много краћу укупну удаљеност [једносмерна АНОВА, Ф(4,34)=7.845, п=0.0{{ 19}}01; Дуннеттов тест, п < 0.001]="" након="" 4-недељне="" изложености="" цус-у,="" и="" позитивна="" контрола="" флкс="" третмана="" повећала="" је="" укупну="" удаљеност="" код="" цус="" пацова="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,34)="7.845," п="0.0001;" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,05].="" дневна="" орална="" примена="" цте="" са="" високом="" дозом="" и="" ниском="" дозом="" показала="" је="" евидентан="" ефекат="" на="" укупну="" удаљеност="" код="" цус="" пацова="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,34)="7.845," п="0.0001" ;="" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,01="" за="" групу="" са="" високим="" дозама,="" п="">< 0,001="" за="" групу="" са="" ниским="" дозама,="" респективно].="" додатна="" слика="" с4="" приказује="" мапу="" трага="" активности="" у="">

Слика 1Д показује ефекте ЦТЕ на латенцију за јело у НСФТ код ЦУС пацова. Процедура стреса од двадесет осам дана изазвала је значајно повећање латенције за почетак јела у групи модела ЦУС у поређењу са контролним пацовима без стреса [једносмерна АНОВА, Ф(4,33)=3.434, п { {8}}.{{10}}19; Дуннеттов тест, п < 0,05],="" што="" указује="" да="" је="" цус="" модел="" успешно="" развијен.="" дуготрајна="" орална="" примена="" цте="" са="" високом="" дозом="" показала="" је="" евидентне="" ефекте="" на="" кашњење="" до="" почетка="" јела="" у="" поређењу="" са="" цус="" групом="" (студентов="" т-тест,="" т="2.759," п="">< 0,05),="" док="" је="" ниска="" доза="" цте="" показала="" без="">

ЦТЕ је вратио ниво неуротрансмитера и неуротрофних фактора код ЦУС пацова

Ефекти ЦТЕ на {{{{10}}}ХТ и НЕ нивое у хипокампусу ЦУС пацова приказани су на сликама 2А,Б. Процедура стреса од четири недеље изазвала је значајно смањење 5-ХТ [једносмерна АНОВА, Ф(4,34)=17.13, п=0.0{{39 }}01; Дуннеттов тест, п < 0.001]="" и="" не="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,34)="6.376,п=0.0006;" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,001]="" концентрација="" у="" хипокампусу="" цус="" пацова="" у="" поређењу="" са="" оном="" у="" контролној="" групи,="" а="" антидепресив="" флкс="" значајно="" је="" обновио="" 5-хт="" нивое="" у="" хипокампусу="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,34)="" {="" {25}}.13,="" п="0.0001;" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,001].="" након="" оралне="" примене="" цте="" у="" групи="" са="" високим="" дозама,="" примећено="" је="" значајно="" повећање="" 5-хт="" нивоа="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,34)="17.13," п="0.0001" ;="" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,001]="" док="" концентрације="" не="" нису="" промењене.="" слично,="" експресија="" бднф="" је="" значајно="" смањена="" у="" групи="" модела="" цус="" у="" поређењу="" са="" пацовима="" без="" стреса="" (студентов="" т-тест,="" т="4.171," п="">< 0,01)="" (слика="" 2ц).="" и="" дуготрајна="" орална="" примена="" цте="" са="" високом="" дозом="" (студентов="" т-тест,="" т="2.548," п="">< 0,05)="" и="" флкс="" (студентов="" т-тест,="" т="2.263," п="">< 0,05="" )="" повећана="" експресија="" бднф="" у="" поређењу="" са="" групом="" модела="" цус.="" цте="" са="" малом="" дозом="" није="" показао="" значајан="" утицај="" на="" експресију="">

{{0}}Ниво ХТ у дебелом цреву ЦУС пацова био је другачији од оног у хипокампусу, а 4-недељна процедура стреса није имала утицај на 5-ХТ дебелог црева (Слика 2Д ). Насупрот томе, орална примена ЦТЕ са високом дозом стимулисала је нивое 5-ХТ у дебелом цреву у поређењу са групом модела ЦУС (Студентов т-тест, т=2.173, п < 0,05).="" цте="" са="" малом="" дозом="" није="" показао="" никакав="" утицај="" на="" 5-хт="" ниво="" дебелог="">

ЦТЕ је регулисао микробни састав црева ЦУС пацова

Ефекат ЦТЕ на микробиолошки састав црева ЦУС пацова је процењен методом заснованом на секвенцирању гена 16С рРНА. Утврђено је да је 28 дана оралне примене ЦТЕ променило састав цревних микроба код ЦУС пацова и утицало на различите

таксономски нивои микроба међу групама пацова (ниво класе 1, ниво реда 1, ниво породице 1, ниво рода 8 и ниво врсте 2). Ово сугерише да би микробна заједница црева могла да игра улогу у антидепресивним ефектима ЦТЕ. Детаљне информације о значајно измењеним таксонима цревних микроба на различитим таксономским нивоима приказане су у табели 2.

МиСек секвенцирање је дало укупно 2.132.980 необрађених читања, након контроле квалитета, уклањања шума и процеса уклањања химере. Затим, очитавања су груписана у ОТУ, који су додељени таксонима од типа до нивоа врсте. Студија анализе бета разноврсности је спроведена да би се истражила сличност образаца бактеријске заједнице међу пет група пацова. ПЦоА заснована на пондерисаним УниФрац удаљеностима цревне микробиоте из пет студијских група пацова приказана је на слици 3А. Анализа бета диверзитета помоћу ПЦоА показала је јасно одвајање микробне заједнице од контролне групе и групе модела ЦУС, док је група ЦТЕ са високом дозом имала тенденцију да буде ближа контролној групи у поређењу са групом ЦУС.

Metastatic analysis was used to investigate the differences in gut microbial taxonomic composition among different groups. At the phylum level, the most dominant microbial taxa in the five rat groups were Firmicutes and Bacteroidetes (Figure 3B). Lactobacillus, Ruminococcus, Blautia, Bacteroides, and Prevotella were the most highly abundant microbial taxa at the genus level (Figure 3C). The two dominant phyla, Firmicutes and Bacteroidetes, accounted for a combined relative abundance of >90 процената. Као што је приказано на додатним сликама С5А, Б, 4-недељна стресна процедура изазвала је незнатан тренд ка повећаном нивоу Фирмицутес и незнатном смањењу Бацтероидетес у групи модела ЦУС у поређењу са контролном групом. Након дневне примене ЦТЕ са високом дозом и ниском дозом, релативна заступљеност Фирмицутес и Бацтероидетес се вратила на сличне нивое у контролној групи, али без статистичке значајности. И иако су сличне промене примећене за однос Фирмицутес/Бацтероидетес међу групама пацова, нису приказане статистичке разлике (додатна слика С5Ц). Незначајан тренд ка смањеном нивоу фила цијанобактерија је пронађен у групи ЦУС модела у поређењу са контролним пацовима без стреса; док је примена ЦТЕ са високом дозом резултирала значајним повећањем релативне заступљености цијанобактерија у поређењу са ЦУС групом (додатна слика С5Д).

На нивоу рода, Бацтероидес и Руминоцоццус су биле две од најзаступљенијих микробних таксона које су чиниле приближно 30 процената релативног обиља у свих пет група пацова. Процедура стреса од четири недеље изазвала је значајно смањење релативне заступљености Бацтероидес и значајно повећање Руминокока у групи модела ЦУС у поређењу са контролним пацовима без стреса (Слике 4А, Б). Дуготрајна примена ЦТЕ довела је до значајног повећања броја Бацтероидес, као и до значајног смањења Руминокока у поређењу са ЦУС пацовима. Поред тога, шест родова Парабацтероидес, Бутирицимонас, Деиноцоццус, Веисселла, Трицхоцоццус и Брацхибацтериум показало је статистички значајне разлике између групе ЦУС модела и контролне групе (Слике 4Ц-Х). После 28 дана лечења ЦТЕ, релативна бројност горе наведених шест родова је промењена на нивое сличне контролној групи.

Ниска заступљеност Деиноцоццус у различитим таксономским нивоима укључујући ниво класе (Деиноцоцци), ниво реда (Деиноцоццалес), ниво породице (Деиноцоццацеае) и ниво рода (Деиноцоццус) је откривена у ЦУС групи пацова, док није успела да буде откривена у контролној групи. група и групе администрације (Слике 5А-Д).

На нивоу врсте, Веисселла бениненсис је била много нижа у ЦУС групи него у контролној групи, а примећено је значајно повећање релативног обиља након примене ЦТЕ са високом дозом (Слика 5Е). Супротно томе, примена ЦТЕ је преокренула значајно повећање релативне заступљености конгломерата Брацхибацтериум уочено код ЦУС пацова (Слика 5Ф).

ЦТЕ модулисани СЦФА код ЦУС пацова

Концентрације СЦФА (укључујући ацетат, пропионат, бутират, изобутират, валеринску киселину, изовалеринску киселину и хексанску киселину) у узорцима фекалија пацова анализиране су помоћу ГЦ и приказане су на слици 6. Нивои ацетата [једносмерна АНОВА, Ф( 4,32)=2.721, п=0.0467; Дуннеттов тест, п < 0.05]="" и="" хексанска="" киселина="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,30)="3.028," п="" {{15="" }}.0328;="" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,05]="" су="" значајно="" повећани="" код="" пацова="" групе="" цус="" модела="" у="" поређењу="" са="" контролном="" групом.="" после="" дуготрајне="" примене="" цте="" са="" високом="" дозом,="" ацетатом="" (студентов="" т-тест,="" т="2.182," п="">< 0,05)="" и="" хексанске="" киселине="" [једносмерна="" анова,="" ф(4,30)="3" .028,="" п="0.0328;" дуннеттов="" тест,="" п="">< 0,05]="" концентрације="" су="" биле="" претежно="" смањене="" у="" поређењу="" са="" цус="" групом,="" што="" указује="" на="" то="" да="" би="" цте="" могао="" испољити="" своју="" антидепресивну="" активност="" кроз="" модулацију="" поремећеног="" неуроактивног="" метаболита="" сцфа.="" примена="" цте="" у="" групи="" са="" ниским="" дозама="" показала="" је="" опадајући="" тренд,="" али="" без="" значајног="" ефекта="" на="" концентрације="" ацетата="" и="" хексаноичне="">

Анализа корелације микробиоте црева, неуротрансмитера и неуротрофина у хипокампусу, 5-ХТ у дебелом цреву и СЦФА

Да би се истражио функционални однос измене цревне микробиоте на нивоу рода, промењених неуротрансмитера и неуротрофина у хипокампусу и дебелом цреву, и узнемирујуће концентрације СЦФА, развијени су Пирсонови коефицијенти корелације (Менг ет ал., 2017). Корелације између њих (р > 0.4 или р < -0.4,="" п="">< 0,05)="" су="" приказане="" на="" слици="" 7.="" коефицијенти="" су="" указивали="" на="" јаку="" корелацију="" између="" измењеног="" састава="" цревне="" микробиоте="" на="" нивоу="" рода,="" концентрације="" од="" седам="" типова="" сцфа="" и="" моноаминских="" неуротрансмитера="" повезаних="" са="" депресијом="" (5-хт="" и="" не).="" бројност="" руминокока="" је="" показала="" значајну="" негативну="" корелацију="" са="" 5-концентрацијом="" хт="" у="" хипокампусу,="" што="" значи="" да="" цус="" процедура="" доводи="" до="" повећања="" релативне="" заступљености="" руминокока="" и="" смањења="" 5-концентрација="" хт.="" након="" третмана="" са="" цте,="" релативна="" бројност="" руминокока="" је="" смањена="" на="" ниво="" контролне="" групе,="" а="" утврђено="" је="" да="" су="" се="" нивои="" 5-хт="" побољшали.="" надаље,="" релативна="" бројност="" бацтероидес="" је="" била="" у="" позитивној="" корелацији="" са="" 5-хт="" нивоом="">

хипокампус, и негативно повезан са концентрацијом бутирата, изобутирата, валеринске киселине, изовалеринске киселине и хексанске киселине; обиље Парабацтероидес је показало значајну позитивну корелацију са 5-ХТ нивоом у хипокампусу и концентрацијом пропионата, док је показало негативну корелацију са концентрацијама изобутирата и изовалеринске киселине; такође је примећена значајно позитивна повезаност између релативне заступљености Бутирицимонаса и нивоа НЕ у хипокампусу, а релативна заступљеност Деиноцоццус-а је у позитивној корелацији са концентрацијом ацетата. Ово је показало да ЦТЕ може да испољи своју антидепресивну активност променом састава цревне микробиоте, ремећењем нивоа неуротрансмитера хипокампуса и обнављањем неуроактивних метаболита СЦФА. Детаљни подаци корелационе анализе приказани су у Додатној табели С3.

цистанцхеможе лечитидијабетеса

ДИСКУСИЈА

Идентификација антидепресивне активности ЦТЕ и њених клиничких предности

Ова студија је проценила антидепресивну активност ЦТЕ код ЦУС пацова, потврдила ефикасност ин виво модела као што су ФСТ, СПТ, ОФТ и НСФТ, и потврдила антидепресивну активностЦ. тубулосакод ЦУС пацова који се често користи за лечење недостатка бубрега, импотенције и женске неплодности у ТКМ. Тренутно, најчешће прописани антидепресиви су инхибитор поновног преузимања серотонина и норепинефрина (СНРИ) венлафаксин, а затим следи селективни инхибитор поновног преузимања серотонина (ССРИ) ФЛКС (Тхасе ет ал., 2001; Мцинтире, 2017). Међутим, показало се да ови антидепресиви поседују озбиљне нежељене ефекте укључујући срчану токсичност, крвни притисак, сексуалну дисфункцију и поремећаје спавања (Фергусон, 2001; Јин ет ал., 2015). Међу свим класама антидепресива, ССРИ и СНРИ су у корелацији са највећом инциденцом сексуалне дисфункције (Монтејогонзалез ет ал., 1997; Цлаитон ет ал., 2014). Посебно треба истаћи укупну инциденцу сексуалне дисфункције, која износи 59,1 процената (604/1,022) када се сви антидепресиви посматрају као целина; а око 40 процената пацијената показује ниску толеранцију на сексуалну дисфункцију, тако да је усаглашеност са лековима озбиљно погођена (Цлаитон, 2001). Имајући у виду недостатке тренутног лечења депресије, Цистанцхес Херба показује велики потенцијал за клиничку примену, не само због свог снажног деловања попут антидепресива, већ и збогЦистанцхес Хербасе традиционално користи за лечење импотенције, што би требало да елиминише барем једну забринутост због најчешћих нежељених ефеката изазваних другим антидепресивима (Фу ет ал., 2017). Поред тога, Цистанцхес Херба не показује знаке токсичности и промене у вези са лечењем