Антиоксидативни и антикоагулантни ефекти фенилпропаноидних гликозида
Mar 30, 2022
Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com
Бартош Скалски а, Силвиа Павелец б, Дариусз Једрејек б, Агата Ролник а, Ростислав Пиетукхов а, Рената Пивоварцзик ц, Анна Стоцхмал б, Беата Олас а,
АПСТРАКТАН
Холопаразитске биљке Оробанцхацеае, укључујући Цистанцхе, Оробанцхе и Пхелипанцхе спп, познате су по свом богатству фенилпропаноидних гликозида (ППГ). Утврђено је да многа ППГ једињења поседују широк спектар активности, као што су антимикробна, антиинфламаторна, антиоксидативна и побољшавају памћење. Да бисмо боље истражили потенцијал биоактивности европских метлића (О Цариопхиллацеае – ОЦ, П Аренариа – ПА, П Рамос – ПР) и десет појединачних изолованих фенилпропаноидних састојака, истражили смо њихово антирадикално дејство, заштитни ефекат од оксидације у плазми ин витро систему и утицај на параметре коагулације. Тестирани екстракти су показали активност чишћења од 50–70 процената Тролок-ове моћи. Екстракт ОЦ, богат актеозидом, имао је преко 20 процената бољи антирадикални потенцијал од ПР екстракта који је једини садржао ППГ без Б-прстена катехолног дела у ацил јединици. Штавише, откривено је да је само осам тестираних ППГ-а показало антиоксидативни потенцијал у људској плазми третираној са Х2О2/Фе; међутим, три тестирана ППГ-а поседовала су и антикоагулантни потенцијал поред антиоксидативних својстава. Чини се да је структура ППГ, посебно присуство ацилних и катехолних делова, углавном повезана са њиховим антиоксидативним својствима. Антикоагулантни потенцијал ових једињења је такође повезан са њиховом хемијском структуром. Одабрани ППГ показују потенцијал за лечење кардиоваскуларних болести повезаних са оксидативним стресом.
Фенилпропаноидни гликозиди из Цистанцхеа: антиоксидативни стрес
1. Представљање
Оксидативни стрес је надалеко познат по свом негативном утицају на здравље живих организама, укључујући убрзано старење и неке врсте рака. Појава оксидативног стреса повезана је са поремећеном равнотежом између оксидативних и антиоксидативних механизама (укључујући ензимску (каталаза, глутатион пероксидаза) и неензимску (глутатион) одбрану) у ћелијама организма [1]. Прекомерна производња реактивних врста кисеоника (РОС), укључујући оксидирајуће радикале и врсте затворене љуске, један је од главних механизама иза формирања оксидативног стреса. Међутим, биолошки ефекат изазван РОС у великој мери зависи од концентрације, времена излагања и локације. У нормалним условима (ниска концентрација), радикали кисеоник/азот могу да играју улогу секундарних гласника, али на вишем нивоу могу да почну да реагују са биолошким структурама, као што су ћелијске мембране [2]. Међу свим врстама РОС, хидроксилни радикал (ХО.) узрокује једну од највећих оштећења био-макромолекула: протеина, липида и ДНК. Познато је да оксидативни стрес игра важну улогу у низу болести, укључујући кардиоваскуларне. Поремећаји крвног система су у корелацији и/или претходили променама различитих параметара хемостазе и биомаркера у плазми [1,3].
С друге стране, многе природне супстанце, као што су полифеноли и полинезасићене масне киселине, идентификоване су као моћни антиоксиданси способни да спрече стварање и/или смање реактивне врсте кисеоника. Једињења са таквим својствима налазе се у многим прехрамбеним производима и фармацеутским препаратима биљног порекла. Исхрана обогаћена свежим поврћем и воћем и антиоксидативне терапије засноване на природним антиоксидансима се стога широко препоручују јер могу смањити ниво оксидативног стреса и спречити различите патофизиолошке процесе [4,5]. Биљни полифеноли су разноврсна група секундарних метаболита, међу којима значајно место заузимају фенолне киселине, пошто су широко распрострањене и испољавају разноврсна биолошка дејства, као што су антимикробна, антиоксидативна и антиинфламаторна. Фенилпропаноидни гликозиди (ППГ) су естарски деривати хидроксициметне киселине и они су главна/једина класа секундарних метаболита присутних у холопаразитским биљкама Оробанцхацеае, укључујући Цистанцхе, Оробанцхе и Пхелипанцхе спп. Неколико врста ове породице су озбиљне штеточине усева којих фармери желе да се отарасе на њивама (пример Пхелипанцхе рамоса), неколико се користи у фармакологији, док је већина од малог значаја за људе. Херба Цистанцхе се у великој мери користи у азијској традиционалној медицини у лечењу недостатка бубрега и као средство за побољшање имунитета и памћења, против старења и против умора [6]. Фитокемијске анализе различитих истраживачких група су показале да су фенилпропаноидни гликозиди, као што су актеозид, ехинакозид и полиумозид, један од главних активних састојака Херба Цистанцхе [7]. Недавна студија о неколико врста метлића пронађених у Пољској од стране Једрејек ет ал. [8] је показао да овај биљни материјал има сличан квалитативни састав (доминација ППГ), штавише, једнак је или чак превазилази Цистанцхе спп. у погледу садржаја активних супстанци [8].
Ова студија је имала за циљ да процени антирадикални и антиоксидативни потенцијал, као и утицај на параметре хемостазе три екстракта метличке репице (Оробанцхе цариопхиллацеа – ОЦ, Пхелипанцхе аренариа – ПА и П. рамоса – ПР) богата различитим фенилпропаноидима, као нпр. као и њихови појединачни ППГ састојци. Антирадикални капацитет је мерен коришћењем 2,2′-азинобис-3-етилбензтиазолин-6-сулфонске киселине/Тролок еквивалента (АБТС/ТЕ) и 2,2-дифенил-1-пикрилхидразила (ДППХ ) тестови. Оксидативни стрес у плазма тест систему индукован је коришћењем хидроксилног радикала (Х2О2/Фе), затим липидне пероксидације (тест реактивних врста тиобарбитурне киселине (ТБАРС)) и мерен је ниво протеинских карбонилних и тиолних група. Међу утврђеним параметрима хемостазе били су: активирано парцијално тромбопластинско време (АПТТ), протромбинско време (ПТ) и тромбинско време (ТТ).
екстракт цистанцхе: анти-оксидација
2. Материјал и методе
2.1. хемикалије
2,2-дифенил-1-пикрилхидразил радикал (ДППХ), 2,2′-азинобис-3-етилбензтиазолин-6-сулфонска киселина (АБТС), калијум персулфат, 6- хидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоксилна киселина (Тролок), диметилсулфоксид (ДМСО), тиобарбитурна киселина (ТБА), мравља киселина (ЛЦМС квалитета) и Х2О2 су купљени из Сигма-Алдрича (Сент Луис, МО, САД). Метанол (ХПЛЦ градијент квалитета) и ацетонитрил (ЛЦ-МС граде) су набављени од Мерцк (Дармстадт, Немачка). Десет фенилпропаноидних једињења тестираних у овом раду, укључујући 2′-О-ацетилактеозид (97 процената), 2′-О-ацетилполиумозид (98 процената), 3-О-метилполиумозид (96 процената), актеозид (99 процената), аренариозид (97 процената), кренатозид (98 процената), фелипозид (99 процената), полиумозид (99 процената), тубулозид А (96 процената) и видеманиозид Д (96 процената) смо претходно изоловали из ниже наведеног биљног материјала [ 8]. Чистоћа једињења је процењена коришћењем УХПЛЦ-ПДА-МС анализе. Ултрачиста вода је припремљена у компанији користећи Милли-К систем за пречишћавање воде (Миллипоре Цо.). Остали реагенси су били аналитичког квалитета и обезбеђени су од домаћих комерцијалних добављача.
2.2. Садни материјал
Цвјетнице три врсте брусне репице, укључујући Оробанцхе цариопхиллацеа См., Пхелипанцхе аренариа Помел и П. рамоса (Л.) Помел идентификовао је проф. Рената Пивоварцзик (Универзитет Јан Коцхановски, Киелце, Пољска) и сакупљена из природног извора у Пољској. Ваучерски примерци (О. цариопхиллацеа – Цхоментовек ´ (50,3349◦Н, 20,4000◦Е), ксеротермни травњак, паразити Галиум бореале, мај 2014; П. аренариа – Звиерзиниец,◦22◦Н, 20,4000◦Е, 50,3349◦Н, 20,4000◦Е Артемисиа цампестрис, јун 2014; П. рамоса – Сзевце (50,3553◦Н, 22,3038◦Е), поље, паразити Соланум лицоперсицум, септембар 2014) депоновани су у Хербаријуму Универзитета Јан Коцхановски у Киелцеу (КТЦ). Биљни материјал је лиофилизован и фино млевен пре екстракције.
цистанцхе екстракт праха
2.3. Припрема екстракта метлића
Биљни материјал у праху (О. цариопхиллацеа (ОЦ) – 2 г, П. аренариа (ПА) – 3 г и П. рамоса (ПР) – 3 г) екстрахован је са 80 процената МеОХ на 40 ◦Ц и 1500 пси (притисак растварача ) коришћењем АСЕ 200 убрзаног екстрактора растварача (Дионек, Суннивале, ЦА, УСА). Екстракти су упарени и осушени замрзавањем (Гамма 2–16 ЛСЦ замрзивач за сушење, Цхрист, Немачка). Ефикасност екстракције за ОЦ, ПА и ПР била је 55 процената, 37 процената и 43 процента по тежини биљног материјала, респективно. Због високог садржаја угљених хидрата (подаци нису приказани), сирови екстракти су даље пречишћени екстракцијом чврсте фазе (СПЕ) на Оасис ХЛБ микро колони (500 мг; Ватерс, Милфорд, МА, САД). Шећери су уклоњени са 1% МеОХ, а затим су једињења од интереса елуирана са 80% МеОХ. Након уклањања растварача, екстракти ОЦ, ПА и ПР су лиофилизовани (Гамма 2–16 ЛСЦ сушач смрзавањем), а приноси пречишћавања СПЕ били су 53 процента (ОЦ), 67 процената (ПА) и 51 проценат (ПР) .
2.4. Фитокемијске карактеристике екстракта метличке репице
Квалитативне и квантитативне анализе екстракта метличке репице вршене су коришћењем АЦКУИТИ УПЛЦ система (Ватерс) повезаног са детектором фотодиодног низа (ПДА) и тандем квадруполним масеним спектрометром (ТКД-МС/МС). Лиофилизирани ОЦ, ПА и ПР екстракти растворени су у 50 процентном метанолу у концентрацији од 0.50 мг/мЛ и затим хроматографисани на БЕХ Ц18 колони (1{ {21}}0 × 2,1 мм, 1,7 µм, Ватерс). Услови хроматографије су били следећи: температура пећнице – 25 ◦Ц, линеарни градијент 10→25 процената мобилне фазе Б (0,1 проценат мравља киселина у ацетонитрилу) у мобилној фази А (0,1 проценат мравље киселине у Х2О) током 12 мин, брзина протока – 0,4 мЛ/мин, запремина убризгавања – 2 μЛ, УВ опсег – 190–490 нм (резолуција 3,6 нм). МС анализа је изведена у режиму негативних јона са електроспреј јонизацијом (ЕСИ), уз коришћење следећих подешавања: опсег скенирања 100–1200 м/з; капиларни напон 2,8 кВ; напон конуса 35 В; температура извора 150 ◦Ц; температура десолватације 450 ◦Ц; проток десолватационог гаса 900 Л/х, а проток конусног гаса 100 Л/х. Прикупљање и обрада података обављени су коришћењем софтвера Ватерс МассЛинк 4.1.
Пикови фенилпропаноидног гликозида (ППГ) идентификовани су поређењем добијених ЛЦ-МС података са претходно изолованим једињењима [8]. Квантификација ППГ-ова у екстрактима огрлице била је заснована на УПЛЦ-УВ методи са детекцијом на 330 нм, и екстерном стандардном калибрацијом коришћењем актеозида (Сигма-Алдрицх, веће од или једнако 99 процената, ХПЛЦ) као групног стандарда . Линеарна калибрациона крива је припремљена у шест концентрација у опсегу од 1–200 уг/мЛ и показала је добру линеарност (Р2 већи или једнак 0,999). Квантитативни резултати представљају средњу вредност ± СД за три ињекције и изражени су у милиграма актеозидних еквивалената (екв.) по граму екстракта (мг актеозид ек/г).
2.5. Антирадикална активност ин витро
2.5.1. АБТС тест уклањања радикала
АБТС антирадикални тест је спроведен коришћењем методе коју су описали Контек ет ал. [9], са малим модификацијама као што следи: 20% МеОХ је коришћено за припрему реагенса (7 мМ АБТС и 4,9 мМ калијум персулфата); раствори екстракта ОЦ, ПА и ПР, у четири нивоа концентрације у опсегу од 100−400 уг/мЛ, и раствори Тролок, на шест нивоа концентрација у опсегу од 10−250 уг/мЛ, припремљени су са 50 одсто. МеОХ. Пропорција узорка према АБТС плус радном раствору била је 1:25 (в/в). Апсорбанца на 734 нм је измерена након 30 мин инкубације у мраку помоћу УВ-вис спектрофотометра (Еволутион 260 Био, Тхермо Фисхер Сциентифиц Инц., Валтхам, МА, УСА).
Инхибиција апсорпције ( проценат ) је израчуната на следећи начин: [(Абсцонтрол–Абссампле)/Абсцонтрол] ×100.
Тролок еквиваленти (ТЕ) екстраката метличке репице су израчунати коришћењем формуле ТЕ {{0}} М узорак/Мстандард, где је м нагиб праволинијских кривих (инхибиција апсорпције у односу на концентрацију). ТЕ вредност узорка описује његову нормализовану активност против Тролок-а (ТЕстандард =1.0). ИЦ50 вредности за ОЦ, ПА, и ПР екстракте и Тролок су достигнуте експериментално, затим су израчунате из њихових праволинијских кривих (инхибиција апсорпције у односу на концентрацију) и изражене у уг/мЛ.
Тест је изведен у три примерка, а резултати су представљени као средње вредности ± стандардне девијације (СД).
Сл. 1. Хемијске структуре фенилпропаноидних гликозида пронађених у проучаваним врстама огрлице. Означени феноли (*) су коришћени за биолошка испитивања у систему плазме.
2.5.2. ДППХ тест уклањања радикала
ДППХ антирадикални тест је спроведен методом коју су описали Једрејек ет ал. [8] и Бранд-Виллиамс ет ал. [10], са малим модификацијама и то: раствори екстракта ОЦ, ПА и ПР, у четири нивоа концентрације у опсегу од 50−250 уг/мЛ, и Тролок раствори, на шест нивоа концентрација у опсегу од 10− 250 уг/мЛ, припремљени су са 50% МеОХ. Однос узорка према ДППХ био је 1:19 (в/в). Апсорбанција на 517 нм је измерена након 30 мин инкубације у мраку коришћењем УВ-вис спектрофотометра (Еволутион 260 Био).
Инхибиција апсорпције ( проценат ) је израчуната на следећи начин: [(Абсцонтрол–Абссампле)/Абсцонтрол] ×100.
Вредности Тролок еквивалента (ТЕ) и ИЦ50 тестних узорака су израчунате на исти начин као у АБТС тесту (одељак 2.5.1). Тест је изведен у три примерка, а резултати су представљени као средња вредност ± СД.
2.6. Основни раствори тестираних биљних једињења и екстраката за експерименте са људском плазмом
Основни раствори тестираних једињења и биљних екстраката припремљени су у 50 процената ДМСО. Коначна концентрација ДМСО у испитиваним узорцима била је нижа од 0,05 одсто и њени ефекти су утврђени у свим експериментима.
Слика 2. УПЛЦ-ПДА хроматограми екстракта брумрапа, Оробанцхе цариопхиллацеа, Пхелипанцхе аренариа и П. рамоса.
2.7. Изолација људске плазме
Људска крв, односно плазма, добијена је од шест редовних давалаца (мушкараца и жена непушача) у банци крви (Лођ, Пољска) и медицинском центру (Лођ, Пољска). Крв је сакупљена као ЦПД раствор (цитрат/фосфат/декстроза; 9:1; в/в крв/ЦПД) или раствор ЦПДА (цитрат/фосфат/декстроза/аденин; 8,5:1; в/в; крв/ЦПДА). Донатори нису узимали никакве лекове или супстанце које изазивају зависност (укључујући дуван, алкохол и додатке антиоксидансима) најмање две недеље пре донације. Наша анализа узорака крви обављена је у складу са смерницама Хелсиншке декларације за људска истраживања и одобрена од стране Комитета за етику истраживања у експериментисању на људима на Универзитету у Лођу. Плазма је припремљена центрифугирањем свеже људске крви на 4500к г током 25 минута на собној температури. Концентрација протеина је израчуната мерењем апсорбанције испитиваних узорака на 280 нм, према процедури Вхитакер и Гранум [11].
2.8. Маркери оксидативног стреса у људској плазми
2.8.1. Мерење липидне пероксидације
Пероксидација липида у плазми је квантификована мерењем концентрације реактивних супстанци тиобарбитурне киселине (ТБАРС). Концентрација ТБАРС је израчуната коришћењем коефицијента моларне екстинкције (ε =156, 000 М− 1цм− 1). Метода је детаљније описана на другом месту [12,13].
2.8.2. Мерење карбонилних група
Ниво карбонил група је израчунат коришћењем коефицијента моларне екстинкције (ε=22, 000 М− 1 цм− 1) и изражен је као нмол карбонил група/мг протеина плазме, према Бартошу [13]. ] и Левине ет ал. [14].
2.8.3. Одређивање тиолне групе
Садржај тиолне групе у протеинима плазме мерен је спектрофотометријски коришћењем СПЕЦТРОстар Нано Мицроплате Реадер-а (БМГ ЛАБТЕЦХ, Немачка) апсорбанцијом на 412 нм са 5,5′-дитио-бис-(2- нитробензојевом киселином). Метода је детаљније описана на другом месту [15–17].
2.9. Параметри хемостазе
2.9.1. Мерење протромбинског временае (ПТ)
ПТ је одређен коагулометријски коришћењем оптичког анализатора коагулације (модел К-3002, Кселмед, Грудзиадз, Пољска) према Малиновска ет ал. [18].
Табела 1. Садржај фенилпропаноидних гликозида у три проучавана екстракта брумрапе, Оробанцхе цариопхиллацеа (ОЦ), Пхелипанцхе аренариа (ПА) и П. рамоса (ПР).
2.9.2. Мерење тромбинског времена (ТТ)
ТТ је одређен коагулометријски коришћењем оптичког анализатора коагулације (модел К-3002, Кселмед, Грудзиадз, Пољска), према методи коју су описали Малиновска ет ал. [18].
2.9.3. Мерење активираног парцијалног тромбопластинског времена (АПТТ)
АПТТ је одређен коагулометријски коришћењем К-3002 оптичког анализатора коагулације (Кселмед, Грудзиадз, Пољска) према Малиновској ет ал. [18].
2.10. Анализа података
К-Дикон тест је спроведен да би се елиминисали несигурни подаци. Подаци су тестирани на нормалну дистрибуцију Шапиро-Вилковим тестом и једнакост варијансе Левеновим тестом. Статистички значајне разлике су идентификоване коришћењем АНОВА, праћене Тукеијевим тестом вишеструких поређења или Крускал-Валлисовим тестом. Поређења су сматрана значајним на п < 0.05.="" вредности="" су="" представљене="" као="" средње="" вредности="">
десертливинг цистанцхе: Анти-оксидација
3. Резултати и дискусија
Десет претходно изолованих од нас фенилпропаноидних гликозида [8], укључујући 2′-О-ацетилактеозид, 2′-О-ацетил-подијумску страну, 3-О-метил-подијумску страну, актеозид, унутрашњу арену, кренатозид, понос, на подијумској страни, тубулозид А и тенипозид Д, заједно са три екстракта огрлице (Оробанцхе Цариопхиллацеае (ОЦ), Пхелипанцхе Аренариа (ПА) и П. Рамос (ПР)) су тренутно проучавани за ублажавање оксидативног стреса и антикоагулансних својстава у људској плазми система. Хемијске структуре тестираних фенилпропаноида су представљене на слици 1, и, као што се може видети, сви су изграђени по сличном обрасцу, са истим/сличним подјединицама: хидрокситирозол, моносахариди (глукоза, рамноза и/или ксилоза) и хидроксициметна киселина. Већина испитиваних ППГ једињења је замењена кафеинском киселином, али она може бити замењена или кумаринском или феруличном киселином.
Поред појединачних ППГ једињења, у биолошку студију су укључена и три екстракта брумрапе – ОЦ, ПА и ПР, који су мешавине неколико ППГ-а и који су раније служили као полазни материјал за изолацију једињења. Други разлог за одабир три различите врсте била је велика разлика у фитокемијском профилу међу њима, као што се може видети на слици 2. Детаљније поређење ОЦ, ПА и ПР екстраката, укључујући квантитативне податке, представљено је у табели. 1. Актеозид је био главни састојак екстракта О. цариопхиллацеа (690 мг/г), фелипозид и аренариозид су доминирали у П. аренариа (заједно 550 мг/г), док су полиумозид и његов ацетиловани дериват били најважнији метаболити у П. Екстракт рамозе (заједно 640 мг/г). Испитани екстракти су се разликовали и по укупном садржају фенилпропаноида, највећа количина је нађена у ОЦ (810 мг/г), нешто нижа у ПР (795 мг/г), а мања у ПА (685 мг/г). Штавише, вреди напоменути да је присуство ППГ-ова са другим деловима осим кофеоила, као што су кумароил или ферулоил, откривено само у екстракту П. рамоса, где су ова једињења чинила око једне шестине укупних ППГ-ова (око 120 мг/ г) (Табела 1).
Претходне студије о антирадикалној активности фенилпропаноидних гликозида од стране Хеилманн ет ал. [19] и Једрејек и др. [8], укључујући око 30 различита ППГ као што су актеозид, изоактеозид и кренатозид, открили су његову снажну везу са структуром ацилних делова (фенолна киселина и тирозол). Генерално, модификација или супституција катехолног дела ацилне јединице је резултирала значајним смањењем активности уклањања реактивних врста кисеоника (РОС) и ДППХ радикала. У тренутној студији, антирадикални ин витро потенцијал три екстракта брумрапеа (ОЦ, ПА и ПР) испитан је помоћу АБТС и ДППХ тестова, а резултати су упоређени како једни са другима, тако и са активношћу појединачних фенилпропаноидних компоненти измерених у наша претходна студија [8]. Резултати су изражени као Тролок еквиваленти (ТЕ) и ИЦ50 вредности (Табела 2). Генерално, сва три екстракта су била добри чистачи и АБТС и ДППХ радикала, али су такође примећене разлике међу тестираним узорцима (процењени ТЕ је био у опсегу од 0.5–0.7; 1.0 је био еквивалент Тролок-у). Активност антирадикалног чишћења узорака била је у следећем редоследу: Тролок > ОЦ > ПА > ПР. Екстракт Оробанцхе цариопхиллацеа (ИЦ50=155–275 µг/мЛ) имао је преко 20 процената већу активност од екстракта Пхелипанцхе рамоса (ИЦ50=200–320 µг/мЛ).
Табела 2. Антирадикална активност ин витро три проучавана екстракта брумрапе (Оробанцхе цариопхиллацеа (ОЦ), Пхелипанцхе аренариа (ПА) и П. рамоса (ПР)) коришћењем АБТС и ДППХ радикалних тестова
Пријављена највећа активност уклањања радикала екстракта ОЦ може се објаснити највећим садржајем ППГ у овом узорку, као и уносом актеозида, његовог доминантног састојка, који је према претходним истраживањима [8,19] један од најјачи хватачи слободних радикала међу метаболитима из ове групе (ТЕДППХ=0.87; [4]). Међутим, с обзиром на међусобни однос антирадикалне активности и садржаја фенилпропаноида у екстрактима ОЦ, ПА и ПР, није пронађена једноставна корелација између ова два фактора (р < 0.5),="" што="" указује="" на="" значајан="" унос="" квалитативни="" профил.="" ово="" се="" углавном="" односи="" на="" екстракт="" п.="" рамоса,="" који="" се="" упркос="" високом="" нивоу="" ппг="" (0.8="" г/г)="" одликовао="" најнижом="" биолошком="" активношћу="" међу="" испитиваним="" узорцима="" (те="" ~="" 0.="" 5).="" екстракт="" пр,="" као="" што="" је="" горе="" поменуто,="" био="" је="" једини="" узорак="" који="" је="" поседовао="" фенилпропаноиде="" са="" кумаринском="" или="" ферулном="" киселином,="" супстанцама="" којима="" недостаје="" катехолна="" група="" б-прстена,="" за="" које="" је="" пријављено="" да="" имају="" смањен="" антиоксидативни="" потенцијал.="" четири="" ппг="" једињења="" која="" имају="" модификовану="" кафеинску="" киселину,="" укључујући="" 3-о-метилполиумозид,="" рамозид="" а="" и="" видеманиозид="" д,="" која="" смо="" претходно="" тестирали,="" имала="" су="" тедппх="" од="" око="" 0.3="" [8].="" дакле,="" досадашњи="" резултати="" су="" у="" складу="" и="" потврђују="" налазе="" претходних="" антирадикалних="" ин="" витро="" експеримената="" на="">
Како Цхен ет ал. [20] описано је повезано са већом способношћу донирања Х-а или стабилизацијом радикала различитим функционалним групама смеше једињења. Идентификовано је неколико структурних елемената који повећавају директну антиоксидативну активност полифенола, посебно оних који су повезани са бројем и положајем хидроксилних група. Верује се да се активност уклањања слободних радикала повећава са повећањем броја –ОХ група. Међутим, положај ових група, у молекулу, има још већи утицај на испољену активност. Релативно стабилна потентна једињења су она која поседују 3,4-дихидрокси део у својим структурама, као и она која поседују више од две хидроксилне групе [21]. Хемијска структура антиоксидативне супстанце омогућава разумевање механизма реакције антиоксиданса. Лопез-Мунгуиа ´ ет ал. [22] на основу прорачуна теорије функционалне густине (ДФТ) утврдило је да се антиоксидативни механизам ППГ одвија кроз секвенцијални пренос једног електрона са губитком протона (СПЛЕТ). Међутим, Ли и др. [23] покушавају да истраже механизме фенолних фенилпропаноидних антиоксиданата, закључили су да ППГ (актеозид, форзитозид Б и полиумозид) могу бити укључени у више путева за испољавање антиоксидативног дејства, што је појачало улогу остатака шећера.
Истраживања су показала да су антиоксиданси биљног порекла ефикасни модулатори хемостазе код кардиоваскуларних болести [24–26]. Различите биљке које се користе у традиционалној медицини садрже значајне нивое ППГ [27,28]. Поред тога, познато је да ППГ имају низ биолошких активности, укључујући антиинфламаторна, антинефритска и антихепатоксична својства [29–33].
У својој недавној студији, Једрејек ет ал. [8] описао је изолацију ППГ-а из три пољске метлице и проценио њихову антиоксидативну активност помоћу ДППХ теста. На основу тога, ова студија процењује да ли десет одабраних ППГ изолованих из ових биљака могу да смање оксидативни стрес у људској плазми третираној јаким биолошким оксидантом, односно донором хидроксилних радикала Х2О2/Фе, и да модулирају коагулациона својства плазме ин витро. Антиоксидативна својства десет изолованих ППГ су одређена према одабраним параметрима оксидативног стреса: ниво ТБАРС као маркер пероксидације липида, заједно са нивоом карбонил групе и тиол групе, као маркера оксидативног оштећења протеина.
И нивои пероксидације липида у плазми и нивои карбонилације протеина у плазми изазвани Х2О2/Фе су значајно смањени у присуству осам тестираних једињења, тј. актеозид, кренатозид, 2′-О-ацетилактеозид, фелипозид, аренариозид, тубулозид А, полиумозид и 3- О-метилполимуозид, у свим испитиваним концентрацијама (1, 5 и 50 µг/мЛ); међутим, ниједан ефекат није примећен за два од тестираних једињења, тј. 2′-О-ацетилполиумозид и видеманиозид Д, или било који од тестираних екстраката у било којој концентрацији (1, 5 и 50 µг/мЛ). Поред тога, није утврђено да ниједно од тестираних једињења или тестираних екстраката штити плазму од Х2О2/Фе – индуковане оксидације тиол групе у протеинима (слике 3–5). Међутим, тестирани екстракти могу бити извор једињења са различитим биолошким својствима.
цистанцхе стем
По први пут, резултати ове студије показују да осам тестираних ППГ-а показује антиоксидативни потенцијал у људској плазми у присуству егзогених реактивних врста кисеоника инхибирањем пероксидације липида и карбонилације протеина у плазми третираној са Х2О2/Фе. Поред тога, 2′-О-ацетилполиумозид и видеманиозид Д нису показали такав ефекат. Генерално, наши налази су у складу са претходним ин витро експериментима на ППГ. Хеилманн ет ал. [19] и Једрејек и др. [8] наводе корелацију између хемијске структуре ППГ и њихове активности. Чини се да су антиоксидативна својства ППГ-а првенствено повезана са структуром њихових ацилних делова, тј. јединице фенолне киселине и фенилпропаноида, укључујући присуство и/или модификацију катехолног дела. На пример, откривено је да видеманиозид Д губи свој антиоксидативни потенцијал према плазми третираној са Х2О2/Фе након замене његовог дела кафеоила са ферулоилном.
Промене у процесу коагулације често су резултат оксидативног стреса; ове промене могу да модулишу функције кардиоваскуларног система и могу довести до развоја кардиоваскуларних болести [1]. Од десет биљних једињења и три биљних екстракта тестираних у овој студији, тубулозид, полиумозид и 3-О-метилполиумозид и сви тестирани екстракти показали су да значајно продужавају тромбинско време при свим тестираним концентрацијама, тј. 1, 5 и 50 µг/мЛ (слика 6Б). Међутим, ниједан од ових екстраката, нити било које од тестираних једињења, није променио ПТ или АПТТ (Слике 6А и Ц).
Табела 3 упоређује ефекте ППГ (5 µг/мЛ) на биомаркере оксидативног стреса у плазми третираној са Х2О2/Фе и њихов утицај на коагулацију. Осам тестираних ППГ је показало антиоксидативни потенцијал само у третираној људској плазми; међутим, утврђено је да три тестирана ППГ-а поседују и антиоксидативна својства и антикоагулантни потенцијал. Занимљиво је да се резултати ДППХ теста нису поклапали са онима добијеним у биолошком моделу коришћењем људске плазме третиране са Х2О2/Фе: антиоксидативни потенцијал тестираних екстраката може бити блокиран одређеним једињењима присутним у плазми.
У закључку, наши садашњи налази бацају ново светло на антиоксидативни потенцијал и антикоагулантна својства ППГ-а. Чини се да је структура ППГ, посебно присуство ацилних и катехолних делова, углавном повезана са њиховим антиоксидативним и антикоагулансним својствима. Одабрани ППГ могу имати потенцијал за лечење кардиоваскуларних болести повезаних са оксидативним стресом. Међутим, потребни су даљи експерименти да би се одредиле концентрације ових једињења потребних за ин виво моделе.
