Антиоксидативни, анти-агинг и заштитни ефекти укупних сапонина из Цистанцхеа

Закључак: ТСАТ је висококвалитетан природни производ са антиоксидативним својствима и својствима против старења који могу ублажити оштећења изазвана старењем Д-гал код пацова.

Кључне речи:Цистанцхе тотал сапонинс, Д-галактоза, антиоксиданс,против старења

Кликните овде да бисте добили Цистанцхе додатке против старења

Увод

Од 21. века, са глобалним трендом старења и побољшањем животног стандарда широм света, здравствени проблеми изазвани старењем и болестима повезаним са старењем постају све израженији.1 Дакле, како одржати здравље старијих људи и одложити појава старења и болести повезаних са старењем постала је популарна тема истраживања. Старење је неповратан и сложен дегенеративни физиолошки процес који се јавља у свим деловима тела, доводи до структурног и функционалног пропадања ткива и органа и повећава ризик од разних хроничних болести, као што су хипертензија, дијабетес, неуродегенеративне болести и меланоза коже. .2 Неколико извештаја је показало да теорија слободних радикала о старењу, једна од најпопуларнијих теорија, може да објасни оштећење организма изазвано процесом старења.3 Током аеробног метаболизма, реактивне врсте кисеоника (РОС) се производе у ћелијама, укључујући синглетни кисеоник (1 О2), супероксид ањоне (•О2-), хидроксилне радикале (ХО•) и водоник пероксид (Х2О2).4,5 Једном када ови слободни радикали, који садрже неспарене и високо реактивне електроне, се производе у вишку, директно доводе до оксидативног стреса и проинфламаторних одговора, праћених редокс неравнотежом, што доводи до пероксидације протеина и липида, као и оштећења митохондрија и ДНК, што на крају доводи до измењене функције ћелија и ткива и патолошких стања за убрзање старења. .6,7 Занимљиво је да природни ендогени антиоксидативни системи постоје у систему људи/сисара, укључујући оне који укључују СОД, ЦАТ и ГСХ-Пк, као и неензимске антиоксиданте као што су аскорбинска киселина и каротеноиди, дизајнирани да одржавају одговарајућу равнотежу између слободних радикала и антиоксиданси.8,9 Ипак, антиоксидативни одбрамбени систем није довољан да у потпуности спречи оксидативна оштећења изазвана вишком слободних радикала, а суплементација антиоксидансима може барем смањити степен старења и повезаног оксидативног оштећења.10 У поређењу са природним антиоксидансима, синтетички Показало се да антиоксиданси (нпр. БХТ и БХА) изазивају ендокрине поремећаје, репродуктивне поремећаје, па чак и канцерогенезу у дуготрајној употреби.11,12 Стога је потрага за природним, безбедним и ефикасним хватачима слободних радикала од великог значаја за људско здравље. заштите.

Цистанцхе је биљна врста из истог рода као и Аралиа елата (Мик.) Сеем.13 Широко је распрострањена у планинама Кинба у западној Кини и представља лековиту и јестиву биљку. Екстракт коре корена цистанцхе се дуго користио у Кини као народни лек за лечење дијабетеса, а његов главни активни састојак је тритерпен сапонин.14 Показало се да има антиоксидативно, антихипергликемијско и антихиперлипидемичко дејство.14–16 Многе студије су показале да тритерпенски сапонини као што су азиатикозид Б, мадекасозид и парксајд А могу реаговати са слободним радикалима и спречити даљи развој ланчаних реакција слободних радикала, испољавајући на тај начин антиоксидативне ефекте.17,18 Претходни извештаји описали су да је ТСАТ показао супериорну активност уклањања ДППХ радикала од појединачних сапонини, као и добар антиоксидативни капацитет против пероксидације липида у микрозомима јетре пацова, и показало се да имају супериорне антиоксидативне ефекте у односу на гинсенг, шисандру и друге сапонине.14,15 Поред тога, ТСАТ је такође ублажио оштећење јетре изазвано Д-гал током старења. пацова кроз његов антиоксидативни ефекат.19 Даља студија односа структуре и ефекта сугерише да структурне разлике као што су категорија и секвенца олигосахаридног ланца на Ц-3 у таквим сапонинима играју важну улогу у смислу дијабетес мелитуса. антиоксидативне и антигликационе активности.20

Д-гал је често коришћени експериментални индуктор старења. Све већи број доказа сугерише да се фенотипови повезани са старењем, као што су прекомерно формирање слободних радикала, когнитивна дисфункција, смањен имуни одговор и повреде органа, могу приметити под дуготрајном Д-гал стимулацијом.21 Понашање, примена Д-гал доводи до дефицита у просторном и памћење препознавања код пацова, што је показано лошим перформансама у смислу потешкоћа у проналажењу циљних платформи и смањеним бројем укрштања циљних платформи у експерименту Моррисовог воденог лавиринта.22 Стога је хронична Д-гал стимулација коришћена за проучавање старења организма. и губитак памћења у вези са старењем, редокс неравнотежа и повреде органа.

На основу досадашњих студија о биолошкој активности ТСАТ-а, постоји разлог да се верује да ова лековита и дијететска биљка има значајан потенцијал за примену у области против старења. Међутим, постоји само једна студија о ин витро уклањању слободних радикала овим екстрактом тритерпеноидног сапонина, а недостају друге физиолошки релевантне карактеризације уклањања слободних радикала. Штавише, знање о заштитним ефектима ТСАТ-а против губитка памћења, редокс неравнотеже и повреде органа у моделу субакутног старења изазваног Д-галом је ограничено. Стога је ова студија консолидовала антиоксидативна својства ТСАТ ин витро уклањањем ДППХ, АБТС, ХО•, •О2- и инхибицијом активности тирозиназе. Штавише, експерименти у понашању, мерење параметара оксидативног стреса и хистопатолошка стања главних органа код пацова су процењени како би пружили додатне информације о способности ТСАТ-а да побољша субакутна оксидативна оштећења изазвана Д-галом и оштећење старењем, консолидујући његова очекивана фармаколошка својства.

Материјали и методе

Кора корена Цистанцхеа сакупљена је са планине Кинба, провинција Схаанки, Кина, а ботанички је идентификовао др Јитао Ванг (Шанкси универзитет кинеске медицине). Узорак ваучера (СУЦМ, бр. 20201003) депонован је у хербаријум Универзитета кинеске медицине у Шанксију. Тарасапонин ИВ

ДППХ (Сигма-Алдрицх, Ст. Лоуис, МО, САД), АБТС (Мацлин Биоцхемицал Цо., Лтд, Шангај, Кина), тирозиназа печурака (Иуан Ие Биотецхнологи Цо., Лтд, Шангај, Кина), Л{{1} },4-дихидроксифенилаланин (Л-ДОПА) и Д-гал (Иуан Ие Биотецхнологи Цо., Лтд, Шангај, Кина). Супероксид ањон (број артикла: А052-1-1), хидроксил слободни радикал (број артикла: А018-1-1), БЦА (број артикла: А045-4-2), СОД (број артикла: А{{ 8}}), ГСХ-Пк (Број ставке: А005-1-1), ЦАТ (Број ставке: А007-1-1), МДА (Број ставке: А003-1-2), Т-АОЦ ( Број артикла: А015-2-1), АСТ (број артикла: Ц010-2-1) и АЛТ (број артикла: Ц009-2-1) комплети за тест су добијени од Нањинг ЈианЦхенг Биоинжењеринг института (Нањинг, Кина) . Све коришћене хемикалије и други реагенси су аналитичке класе.

Кора корена цистанцхе испрана је двоструко дестилованом водом, осушена и уситњена на 60 степени. Пре експеримента, прах је стављен на хладно и суво место. Прашак (3 кг) је екстрахован са 70 процената етанола три пута под рефлуксом. Раствори су комбиновани и супернатант је добијен центрифугирањем великом брзином и филтрацијом. Супернатант је пречишћен стављањем у колону ХПД300 макропорозне смоле и затим елуирањем са 70% етанола. Раствор који је елуиран са 70% етанола је упарен да би се добио остатак (356 г) након уклањања растварача у вакууму. Принос ТСАТ-а био је 11,87 процената (в/в) и сачуван је у фрижидеру за даљу употребу.

графичка колона (4,6 ИД×250 мм). Мобилна фаза се састојала од ацетонитрила (растварач А) и 0.1 проценат воденог раствора фосфорне киселине (В/В) (растварач Б). Програм градијента је био следећи: 0–10 мин, 5–20 процената А; 10–25 мин 20–28 процената А; 25–35 мин, 28–33 процената А; 35–45 мин, 33–38 процената А; 45–55 мин, 38–46 процената А; 55–60 мин, 46–60 процената А; 60–70 мин. 60–75 процената А; 70–80 мин, 75–45 процената А; 80–90 мин, 45–5 процената А. Радни услови инструмента били су температура од 30 степени и брзина протока од 0,8 мЛ/мин. Запремина убризгавања стандарда и узорака била је 10 μЛ. Таласна дужина детекције је 203 нм. Пре убризгавања, сви узорци су пропуштени кроз филтер од 0,22 μм. Након усклађивања са стандардом, пик је одређен временом задржавања. За квантификацију је коришћена линеарна калибрациона крива стандарда.

Антиоксидативна активност ин витро

ДППХ тест ДППХ тест је мало измењен у односу на претходни извештај.23 Мешавина анхидрованог етанола (100 μЛ), раствора ДППХ (100 μЛ, 0,2 мМ) и узорка (100 μЛ, 0,01 – 1 мг/Л) снажно је протресен и држан (25 степени, 30 мин) у мраку. ВЦ је коришћен као позитивна контрола. Измерена је апсорбанца (517 нм). ДППХ ради

брзина чишћења кал је израчуната на следећи начин:

где А0 представља апсорпцију негативне контроле (ДППХ плус апсолутни етанол); А1 представља тест систем који садржи узорак (ДППХ плус ТСАТ); а А2 је апсорпција слепог система (ТСАТ плус апсолутни етанол). Израчуната је 50-постотна вредност концентрације инхибиције (ИЦ50) брзине уклањања слободних радикала ДППХ, што представља антиоксидативни капацитет ТСАТ-а. Све операције се изводе паралелно три пута.

АБТС плус тест АБТС је одређен методом Рафикуе ет ал са малим модификацијама.24 Прво је припремљена серија ТСАТ (0.01–1 мг/мЛ) раствора. Припремљен је раствор АБТС од 7 мМ и раствор К2С2О8 од 2,45 мМ. Након мешања у истој запремини, АБТС плус је добијен реакцијом (12–16 х) у мраку. Припремљени АБТС плус је разблажен двоструко дестилованом водом до апсорбанције од 0.7 ± 0.05 на 734 нм. Затим је смеша од 180 μЛ разблаженог АБТС плус раствора и 20 μЛ узорка реаговала (25 степени, 10 мин) у мраку. ВЦ је коришћен као позитивна контрола. Измерена је апсорбанца (734 нм). АБТС плус капацитет чишћења је израчунат по следећој формули:

где А0 представља апсорпцију негативне контроле (АБТС плус плус двоструко дестилована вода); А1 представља тест систем који садржи узорак (АБТС плус плус ТСАТ); а А2 је апсорпција слепог система (ТСАТ плус двоструко дестилована вода). Затим је израчуната ИЦ50 вредност АБТС плус брзина чишћења. Све операције су изведене паралелно три пута.

Одређивање активности инхибиције тирозиназе из гљива Инхибициона активност тирозиназе одређена је према мало побољшаној верзији методе коју су претходно објавили Мораис ет ал.25 Серија од 50 μЛ ТСАТ (0.01–1 мг/мЛ, у 50% ДМСО) раствори су додати у реакциони систем који садржи 100 μЛ ПБС пуфера (0,1 М, пХ 6,8) и 50 μЛ тирозиназе (100 У/мЛ), респективно, и реаговати на 25 степени 15 мин. . Затим је у реакциони систем додато 50 μЛ Л Л-ДОПА (3,5 мМ) раствора и инкубирано на 37 степени 10 мин. Одређена је апсорбанца (475 нм). ВЦ је коришћен као позитивна контрола. Израчуната је активност инхибиције ТСАТ-апо следећој формули:

указују на инхибиторну активност ТСАТ-а на тирозиназу. Све операције су изведене паралелно три пута.