Антиоксиданс, избељивање и антибактеријски ефекти флавоноида фенгдан божура
Mar 23, 2022
Контакт: ali.ma@wecistanche.com
Јие Лу†, Зхикианг Хуанг†, Иусхенг Лиу, Хуимин Ванг, Мин Киу, Јингхуи Ку и Венпенг Иуан *
Апстрактан: Флавоноидиимају важне биолошке активности, као што су антиинфламаторно, антибактеријско, антиоксидативно и избељивање, што је потенцијална функционална сировина за храну. Међутим, биолошка активност фенгданског божурафлавоноиданије посебно јасно. Стога, у овој студији, божурфлавоноидаекстрахован је из брашна семена фенгданског божура, и антиоксидативно, антибактеријско и избељујуће деловање божурафлавоноидабили истражени. Оптимални услови екстракције су били концентрација метанола од 90 процената, однос чврсте материје и течности од 1:35 г:мЛ, температура од 55 ◦Ц и време од 80 мин; под овим условима принос фенгданског божурафлавоноидаможе достићи 1,205 ± 0,019 процената (однос суве масе рутина према сувој маси брашна семена божура). Чишћење фенгданског божура укупнофлавоноидидо 1,1-дифенил-2-пикрилхидразил (ДППХ) слободни радикал, хидроксилни радикал и 2,2'-азино-бис (3-етилбензотиазолин-6-сулфонска киселина) (АБТС) слободни радикали могу достићи 75 процената, 70 процената и 97 процената, респективно. Фенгдан божурфлавоноидаможе инхибирати раст грам-позитивних бактерија. Минималне инхибиторне концентрације (МИЦ) фенгданског божурафлавоноидана С. ауреус, Б. антхрацис, Б. субтилис и Ц. перфрингенс били су {{0}}.0293 мг/мЛ, 0,1172 мг/мЛ, 0,2344 мг/мЛ и 7,500 мг/ мЛ, респективно. Стопа инхибиције флавоноида фенгданског божура на тирозиназу била је 8,53–81,08 процената. Ова студија је интензивно илустровала да је антиоксидативна, избељивачка и антибактеријска активност фенгданског божура укупнофлавоноидибили значајни. Фенгдан божур тоталфлавоноидиимају велику могућност да се користе као функционални прехрамбени материјали.
Кључне речи:Фенгдан божурфлавоноида; антиоксиданс; избељивање; антибактеријска активност; функционална храна
Флавоноиди, главни елемент Цистанцхеа, су против старења.
Цлицк то Цистанцхе екстракт користи за спречавање старења
1. Представљање
Peony is one of the economic and ornamental crops, which has been cultivated for more than 1600 years in China [1]. Oil peony refers to the variety of peony that can be used as a raw material for edible oil [2]. As one of the most commonly used oil peonies, Fengdan peony contains dark oval seeds, which has abundant unsaturated fatty acids (>90 процената ) [3]. Кинеска влада је потврдила аутентичност уља семена божура као нова изворна храна, због високог удела -линоленске киселине 2011. [4]. Штавише, семе божура је сертификовано као нови ресурс функционалне хране за побољшање здравља људи од стране Националне комисије за здравље и планирање породице Народне Републике Кине 2011. године [5]. Брашно семена фенгданског божура је један од најважнијих нуспроизвода у припреми уља семена божура, које чини око 60 до 70 процената семена фенгданског божура, а богато је флавоноидима, протеинима, полисахаридима, полифенолима, паеонифлорином и другим активним састојцима. састојци. Међутим, велика количина сачме фенгданског божура се тренутно користи само као храна за животиње или као отпад [6], што доводи до расипања природних ресурса и загађења животне средине [2].
Према литератури, флавоноиди имају важне биолошке активности, као што су антиинфламаторно, антибактеријско, антиоксидативно и избељујуће дејство [7–10], које се сматрапотенцијалне функционалне прехрамбене сировине. На пример, изофлавон из соје може заштитити ћелије од оштећења слободних радикала због својих антиоксидативних својстава [11–13]. Флавоноид у екстракту гинкго билобе има снажна антиоксидативна својства и може директно да инхибира слободне радикале [14]. Екстракт флавоноида беле гуаве је природни антибактеријски агенс, који може да промени микроскопску морфологију Е. цоли и С. ауреус [15].
Нажалост, као потенцијална функционална прехрамбена сировина, флавоноид фенгданског божура не само да је укључен у индустријску производњу, већ и његова биолошка активност није посебно јасна. Због тога, како би се што више побољшала применљива вредност флавоноида божура у области исхране и смањило расипање ресурса, флавоноид божура је екстрахован из брашна семена Фенгдан божура, а антиоксидативно, избељујуће и антибактеријско деловање флавоноида божура Фенгдан су проучавани. Очекује се постављање темеља за развој нових функционалних прехрамбених сировина од фенгданског божура.
2. Резултати и дискусија
2.1. Утицај четири фактора на укупан принос флавоноида
Утицај концентрације метанола на укупан принос флавоноида приказан је на слици 1а. Укупан принос флавоноида је у почетку био повећан, а затим опадао са повећањем концентрације метанола и достигао максимум (1,016 одсто, однос суве масе рутина према сувој маси брашна семена божура) када је концентрација метанола била 90. проценат .Разлог може бити везан за поларитет метанола и растворљивост укупних флавоноида у сачму семена божура [16]. Дакле, оптимална концентрација метанола била је 90 процената.
Као што је приказано на слици 1ц, укупни принос флавоноида је прво повећан, а затим опао са повећањем температуре. Укупан принос флавоноида достигао је максималну вредност (1,141 одсто, однос суве масе рутина према сувој маси брашна семена божура) на 55 ◦Ц. Брзина растварања укупних флавоноида у сачму семена је убрзана одговарајућим подизањем температуре. Међутим, делимични укупни флавоноид се разложио када је био изложен високој температури [18], што доводи до смањења приноса укупних флавоноида. Дакле, 55 ◦Ц је била најбоља температура.
Утицај времена екстракције на укупан принос флавоноида приказан је на слици 1д. Укупни принос флавоноида се брзо повећао за 0,5 х до 1,5 х. Када је време екстракције било дуже од 1,5 х, укупан принос флавоноида је остао непромењен. Разлог за ову појаву може бити тај што су се укупни флавоноиди у сачму семена континуирано растварали уз продужење времена екстракције за 0.5 х до 1,5 х. Штавише, када је време достигло 1,5 х, сви укупни флавоноиди су можда били растворени. Стога је повећање времена благо утицало на укупан принос флавоноида [4,19]. Дакле, најбоље време екстракције било је 1,5 х.
2.2. Оптимизација за укупан принос флавоноида
2.2.1. Прилагођавање модела и анализа података помоћу РСМ-а
Да би се даље истражио релативни значај различитих фактора за укупан принос флавоноида у сачму семена фенгданског божура, спроведен је РСМ експеримент. РСМ се користи у статистичком дизајну и анализи података мултифакторских експеримената за процену релативне важности неколико варијабли и проналажење најбољих услова за идеалне одговоре [20]. Бок-Бехнкен дизајн са РСМ може да се уклопи у једначину линеарне регресије, тако да се експеримент може прецизније анализирати како би се пронашао закон међу факторима који утичу [21].
Табела С1 је показала однос између укупног приноса флавоноида и тест варијабли. Експериментални подаци су анализирани вишеструком регресионом анализом. Квадратна полиномска регресиона једначина укупног приноса флавоноида (И) и односа чврстог и течног (А), температуре екстракције (Б) и времена екстракције (Ц) била је: и=1.19 плус 0 .01А − {{10}}.02Б − 0.003Ц плус 0,02АБ − 0,02АЦ плус 0,01БЦ − 0,03А2 − 0,04Б20,02Ц2.
Анова квадратног полиномног модела је приказана у табели 1. ТхеФ-вредност модела је била 18,57, п вредност модела је била 0.0004 (п < 0,01), степен уклапања модела је био 0,1202, а коефицијент детерминације (Р2) био је 0.9598, што је указивало да модел има изузетно значајан статистички значај. Примарни термин (Б) и секундарни термин (А2, Б2, Ц2) имали су изузетно значајне ефекте на укупан принос флавоноида (п < 0.01).="" а,="" аб="" и="" ац="" су="" имали="" значајан="" утицај="" на="" укупан="" принос="" флавоноида="" (п="">< 0.05).="" ц="" и="" бц="" нису="" имали="" значајан="" утицај="" на="" укупан="" принос="" флавоноида="" (п=""> 0,05). Према Ф-вредности три фактора, ефекат на укупан принос флавоноида је био температура екстракције > однос чврсте материје и течности > време екстракције.
Табела 1.Анова квадратног полиномног модела.
Тродимензионални (3Д) дијаграми површине одзива приказани су на слици 2а,ц,е. Највиша тачка 3Д графика била је најбољи услов за интерактивне факторе. Нагиби контуре интеракције између А и Б (Слика 2б), А и Ц (Слика 2д) су били стрми, док су нагиби А и Ц (Слика 2ф) били глатки. Ово је илустровало да је интеракција између А и Б, А и Ц имала велики утицај на укупан принос флавоноида, док интеракција између Б и Ц није имала значајан утицај на укупан принос флавоноида. Конзистентност између РСМ експеримента и регресионе анализе даље је показала да је успостављени модел тачнији.
Слика 2.Дијаграми 3Д површине за АБ (a), АЦ (c) и БЦ (e) до укупног приноса флавоноида.
2.2.2. Верификација оптималних услова
Теоријски оптимални параметри дати моделом су били однос чврсте материје и течности од 1:36,11, температура екстракције 53,52 ◦Ц, време екстракције 82,65 мин, а теоријска вредност укупног приноса флавоноида била је 1,195 одсто. Узимајући у обзир стварни рад, теоретски параметри су подешени на однос чврсте материје и течности од 1:35, температури екстракције од 55 ◦Ц и времену екстракције од 80 мин. Под овим условима, укупан принос флавоноида био је 1,205 ± 0,019 процената. У поређењу са теоријском прогнозираном вредношћу, релативна грешка је била 0,8 процената. Теоријска вредност је била у складу са стварним резултатом, што указује да су параметри оптимизације били доступни. Цхен ет ал. [10] екстраховали су флавоноиде из божура користећи 60% етанол-воденог раствора и принос је био 1,34%, што је у складу са овим радом. РСМ се широко користио за оптимизацију оптималног процеса екстракције флавоноида из биљака, као што су Аурантии Фруцтус [22], Пуерариа [23] и Цурцума Зедоариа листови [24]. У поређењу са ортогоналним тестом, РСМ је имао предности тачне предвидљивости, веће тачности и лакше анализе фактора утицаја [25].
2.3. Антиоксидативна активност флавоноида фенгдан божура
Флавоноиди су природни антиоксиданси који могу ефикасно очистити слободне радикале у телу. Антиоксидативни капацитет флавоноида је због чињенице да флавоноиди могу да обезбеде атоме водоника слободним радикалима и да се претворе у фенолне слободне радикале. Брзина преноса аутоматске ланчане реакције оксидације може бити успорена стабилношћу фенолних слободних радикала, чиме се инхибира даља оксидација липида [26].
Клиренс укупних флавоноида до слободних радикала ДППХ приказан је на слици 3а. У опсегу концентрација од 0.1 до 1.0 мг/мЛ, клиренс укупних флавоноида и слободних радикала ВЦ до ДППХ био је у позитивној корелацији са њиховом концентрацијом. У опсегу од 0.1 до 0.5 мг/мЛ, клиренс ВЦ је повећан са његовом концентрацијом. Када је концентрација била већа од 0.5 мг/мЛ, клиренс ВЦ је достигао 98 процената и имао је тенденцију да буде стабилан. У опсегу од 0.1 до 0.8 мг/мЛ, клиренс укупних флавоноида је повећан са повећањем концентрације. Када је концентрација била већа од 0.8 мг/мЛ, клиренс укупних флавоноида се стабилизовао на око 75 процената. Оанцеа ет ал. [27] је известио да је клиренс сировог екстракта божура од слободних радикала ДППХ био 81 проценат; клиренс је био сличан резултатима ове студије. Укупни флавоноиди фенгданског божура имали су одређени капацитет чишћења слободних радикала ДППХ, али је капацитет био нешто мањи од ВЦ. Реакција између антиоксиданса и слободног радикала ДППХ се остварује механизмом преноса атома водоника и електрона [28]. ДППХ слободни радикал је љубичаст у раствору етанола. Када антиоксидант доведе слободне радикале ДППХ у стабилно стање путем снабдевања водоником, његова боја постаје жута и има јаку апсорпцију на 517 нм [29]. У овом раду, ефекат уклањања флавоноида божура на ДППХ значајно је појачан повећањем концентрације флавоноида, што указује да су флавоноиди божура ефикасни антиоксиданси.
Клиренс укупних флавоноида до хидроксилног радикала је илустрован на слици 3б. У концентрацији од 0.1 до 1.0 мг/мЛ, клиренс укупних флавоноида до хидроксилног радикала био је мањи од ВЦ. При 0.4 мг/мЛ, клиренс ВЦ је у основи достигао максимум, око 97 процената. Брзина уклањања укупних флавоноида на хидроксил радикале се повећавала са порастом концентрације и достигла је максималну вредност (70 процената) када је концентрација била виша од 0.8 мг/мЛ. Хидроксилни радикал је прилично активан и може брзо да реагује са било којим биомолекулом, што наноси велику штету органима или ткивима [30]. Хидроксилни радикал је најтоксичнија реактивна врста кисеоника за ћелије [31], која убрзава ћелијску апоптозу тако што појачава оксидацију тела [32]. Ианг ет ал. [33] су открили да је ефекат чишћења уља семена божура на хидроксилни радикал зависио од концентрације, а клиренс хидроксилног радикала био је до 92 процента у опсегу концентрација од 0,1–0,5 мг/мЛ. У поређењу са овим радом, клиренс флавоноида из семена божура био је мањи него код уља из семена божура, али као нуспроизвод у производњи уља семена божура, флавоноиди екстраховани из брашна семена божура такође су имали очигледан ефекат уклањања хидроксилних радикала. при нижој концентрацији. Због тога се флавоноиди божура могу сматрати функционалном сировином за храну са способношћу уклањања хидроксилних радикала. С једне стране, имао је бољи заштитни ефекат на антиоксидативни одбрамбени систем човека, а са друге стране могао је да побољша и свеобухватну искоришћеност семена божура.
2.4. Активност избељивања флавоноида фенгдан божура
Као што је приказано на слици 4, флавоноид божура Фенгдан (0.03–1.00 мг/мЛ) произвео је 8,53–81,08 процената инхибиције тирозиназе, која је показала инхибицију тирозиназе у зависности од дозе . ИЦ50 је био 0,24 мг/мЛ. Лин ет ал. [36] су открили да је стопа инхибиције тирозиназе око 75 процената када је концентрација етанолног екстракта из божура била 1 мг/мЛ. Стопа инхибиције тирозиназе била је блиска резултатима овог рада. Меланин је кључна супстанца која инхибира избељивање [37]. Тирозиназа је кључни ензим у синтези меланина, који се користи као индекс за скрининг козметичке и функционалне хране за избељивање [38]. Инхибитори тирозиназе су есенцијални састојци већине козметичких производа или хране за избељивање [39]. У овој студији, флавоноид божура имао је очигледан инхибиторни ефекат на активност тирозиназе. Због тога је било изводљиво и ваљано додати флавоноиде божура у козметику или храну за избељивање као материјал за избељивање.
Табела 2.Пречник зоне инхибиције.
3. Материјали и методе
3.1. Материјал и реагенси
Обран оброк од фенгданског семена божура купљен је од Гуиу Пеони Биотецхнологи Цо., Лтд. (Хезе, Кина). Брашно од семена је млевено у прах, а затим пропуштено кроз 40-мрежасто сито [45]. Прашак семенског брашна је сакупљен и чуван на 4 ◦Ц за будућу употребу. Рутин стандард, витамин Ц (ВЦ), метанол, анхидровани етанол натријум нитрит (НаНО2), алуминијум нитрат (Ал(НО3)3) и натријум хидроксид (НаОХ) је испоручила КинаПхармацеутицал Гроуп Цо., Лтд. (Пекинг, Кина); Хидроксилни радикал, ДППХ слободни радикали АБТС комплет капацитета за уклањање слободних радикала купљени су од Схангхаи Тонгвеи Индустриал Цо., Лтд.
3.2. Екстракција укупних флавоноида
Штавише, 15.00 г обраног брашна од фенгданског божура додато је у чашу од 1000 мЛ. Затим је стављен у дигитално термостатско водено купатило (ХХ-С4, Јиангсу, Кина) са електричним блендером (ОЕС-60М, Вензхоу, Кина, 220 о/мин) и екстрахован под следећим условима: Концентрација метанола је била 90 процената, однос чврсте материје и течности је био 1:35 г:мЛ, температура екстракције је била 55 ◦Ц, а време екстракције је било 80 мин. Након екстракције, филтрат укупних фалвоноида је сакупљен вакуум филтером.
3.3. Експеримент са једним фактором
Укупан принос флавоноида у сачму семена фенгданског божура оптимизован је коришћењем експеримента са једним фактором. То би могло да одражава ефекат четири фактора на укупан принос флавоноида. Овај експеримент је истражен методом једне варијабле. Фактори и варијабле експеримента приказани су у табели 3.
Табела 3.Фактори и варијабле једнофакторског експеримента
3.4. РСМ експеримент
Експеримент са једним фактором обезбедио је три варијабле сваког фактора за РСМ експеримент. У овој студији, на основу експеримента са једним фактором, концентрација метанола је одабрана на 90 процената; као аргументи су коришћени однос чврсте материје и течности, температура екстракције и време екстракције. Као вредност одговора коришћен је укупан принос флавоноида божура. На основу принципа Бок–Бехнкен теста у софтверу Десигн-Екперт 12.0, РСМ са три фактора и три нивоа је дизајниран да оптимизује услове екстракције укупних флавоноида из брашна семена божура. Цео експериментални дизајн је састављен од 17 експерименталних тачака (Табела С1). Пет понављања (13–17) је изведено у дизајнерском центру да би се проценила чиста грешка. Фактори и нивои РСМ-а су приказани у табели 4.
Табела 4.Фактори и нивои РСМ.
3.5. Припрема праха укупних флавоноида фенгдан божура
Након што је РСМ одредио оптимални процес екстракције, филтрат укупних флавоноида божура Фенгдан екстрахован је најбољим процесом екстракције, затим је добијен прах укупних флавоноида божура након што је филтрат концентрисан на ротационом испаривачу (20 мЛ/мин, 25 В, Р -1001ВН, Џенгџоу, Кина) и сушено замрзивачем (−80 ◦Ц, 24 х, СЦИЕНТЗ-12Н, Нингбо, Кина). Прашак би се користио у антиоксидативним, избељивачким и антибактеријским експериментима.
3.6. Процена антиоксидативне активности
Раствор укупних флавоноида Фенгдан божура и ВЦ раствор са различитим масеним концентрацијама (0.1, 0.2, 0.3, 0.4, {{9 }}.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0 мг/мЛ) су припремљени са 80 одсто етанола, који ће се користити за одређивање клиренса укупних флавоноида до три слободна радикала.
3.6.1. ДППХ тест слободних радикала
Клиренс укупних флавоноида до слободних радикала ДППХ одређен је како је описао Пхам, ДЦ, уз мање модификације [48]. Укратко, 150 μЛ 0.2 мМ ДППХ у безводном етанолу додато је у 150 μЛ узорка у различитим концентрацијама (0,1–1,0 мг/мЛ). Смеша је протресена и инкубирана 30 мин на собној температури у мраку. Смеша од 200 μЛ је додата у 96- плочу са бунарима, а апсорбанца је измерена на 517 нм инструментом обележеним ензимима (СпецтраМак 190, Шангај, Кина). ВЦ је коришћен као контролна супстанца. Клиренс ДППХ је израчунат по следећој формули.
Клиренс ДППХ проценат={1− [(Аи − Ај) / Ао] ×100 } проценат (2)
где је Аи била апсорбанца узорка од 150 μЛ плус 150 μЛ ДППХ; Ај је била апсорпција узорка од 150 μЛ плус 150 μЛ анхидрованог етанола; А0 је била апсорбанца 150 μЛ ДППХ плус 150 μЛ анхидрованог етанола.
3.6.2. Тест хидроксилних радикала
Клиренс укупних флавоноида до хидроксилног радикала одређен је како је описао Зхоу, Ј., уз неке модификације [49]. Укратко, 50 μЛ раствора узорака различитих концентрација (0.1–1.0 мг/мЛ), 50 μЛ 9,0 мМ раствора салицилне киселине и етанола 50 μЛ 9,0 мМ раствора ФеСО4 и 200 μЛ дестиловане воде помешано је у епрувети. Затим је у горњу смешу додато 50 μЛ 8,8 мМ Х2О2, а апсорбанца је измерена на 510 нм. Клиренс хидроксилног радикала је израчунат по следећој формули.
Клиренс хидроксилног радикала проценат={1− [(Аи − Ај) / Ао] ×100 } проценат (3)
где је Аи била апсорбанца узорка; Ај је апсорпција дејонизоване воде уместо Х2О2; А0 је била апсорпција дејонизоване воде уместо узорка.
3.6.3. АБТС тест слободних радикала
Клиренс укупних флавоноида до слободних радикала АБТС одређен је како је описао Гонг, Ј. са неким модификацијама [5{{10}}]. Укратко, 1 мЛ 7 мМ раствора АБТС и 1 мЛ 2, 45 мМ раствора калијум персулфата мешани су у епрувети 12 х на собној температури у мраку. Смеша је разблажена 40 пута са анхидрованим етанолом. Затим је 190 μЛ смеше и 10 μЛ узорака различитих концентрација (0,1–1,0 мг/мЛ) мешано у епрувети 6 минута на собној температури у мраку; апсорбанца је мерена на 734 нм. Клиренс слободних радикала АБТС је израчунат по следећој формули.
Клиренс АБТС проценат={1− [(Аи − Ај) / Ао] ×100 } проценат (4)
где је Аи била апсорбанца узорка од 10 μЛ плус 190 μЛ смеше; Ај је била апсорпција узорка од 10 μЛ плус 190 μЛ анхидрованог етанола; А0 је била апсорпција 10 μЛ анхидрованог етанола плус 190 μЛ смеше.
Цистанцхе чисти слободне радикале.
3.7. Процена активности избељивања
Тест инхибиције тирозиназе је одређен као што је описао Цхен К са мањим модификацијама [38]. Укратко, 40 μЛ тирозина од 5 ммол/Л раствореног у 80 μЛ 1/15 фосфатних пуфера (пХ 6,8) помешано је са 40 μЛ раствора укупних флавоноида фенгдан божура на 37 ◦Ц током 15 минута. Затим је додато 40 μЛ тирозиназе (300 ИУ/мЛ) да би се покренула реакција. Смеша за испитивање је инкубирана на 37 ◦Ц 10 мин. Апсорбанција је мерена инструментом обележеним ензимима (СпецтраМак 190, Шангај, Кина) на 482 нм. Истовремено су формиране празна група и контролна група. У слепој групи, тирозиназа није додата и фосфатни пуфер је коришћен да се надокнади запремина. У контролној групи раствор флавоноида није додат, већ је за допуну запремине коришћен фосфатни пуфер. Инхибицијски проценат активности тирозиназе израчунат је по следећој формули:
Стопа инхибиције ( проценат )= [1−(Ас − Аб) / (Ац − Аб)]×100 процената (5)
где је АБ била апсорбанца слепе групе на 482 нм, АЦ је била апсорбанца контролне групе на 482 нм, а АС је била апсорбанца узорка на 482 нм.
3.8. Експеримент са антибактеријском активношћу
Затим је 400 μЛ стерилне воде додато у бактеријску епрувету за сушење смрзавањем. Након потпуног мешања, 200 μЛ бактеријске течности је равномерно распоређено на агар плочу. Инкубирана је у биохемијском инкубатору (ЛРХ-250, 650 В, Чангџоу, Кина) на 37 ◦Ц током 24 сата да би се активирале бактерије. Затим је појединачна колонија сакупљена у агар плочи са инокулационом петљом за једнократну употребу (65-0001, Шандонг, Кина) и инокулисана у течном медијуму. Медијум је стављен у интелигентни осцилатор културе константне температуре (ХНИЦ-202Т, 1800В, Тиањин, Кина) на 37 ◦Ц, 120 р/мин током 24 часа. Концентрација бактеријске суспензије је посматрана и бројана хемоцитометром (К401, Шангај, Кина), а затим подешена на 106 ЦФУ/мЛ [51].
Експеримент зоне инхибиције изведен је методом пробијања. Прво, припремљени су раствори укупних флавоноида Фенгдан божура различитих концентрација (30 мг/мЛ и 500 мг/мЛ) са 80% метанола. Затим је 80 μЛ суспензије бактерија равномерно распоређено на стерилни агар медијум. Затим, 4 рупе су избушене у медијуму перфоратором пречника 7 мм (А0358, Гуангџоу, Кина). Три рупе су додане у 100 μЛ укупног раствора флавоноида, а друга је додата у 100 μЛ 80% метанола као контрола. Коначно, култивисан је у биохемијском инкубатору на 37 ◦Ц током 24 х. Пречник чисте зоне инхибиције око сваке рупе је мерен коришћењем калипера (СВБ-227-150, Гуангџоу, Кина).
Експеримент МИЦ је изведен према следећим корацима. Систем за раст бактерија који садржи различите концентрације укупног раствора флавоноида (0.0037, 0.0073, 0.0146, 0.0293, 0,0586, 0,1172, 0,2344, 0,4688, 0,9375, 1,8750, 3,7500, 7,5000, 7,5000 Л, припремљено је 15 мг/м. методом разблаживања двоструког градијента [52]. Поред тога, додавање бактеријског раствора без раствора укупних флавоноида је коришћено као контролна група раста, а раствор укупних флавоноида без бактеријског раствора је коришћен као празна контролна група. Узгајани су у интелигентном осцилатору културе константне температуре (ХНИЦ- 202Т, 1800 В, Тиањин, Кина) на 37 ◦Ц, 120 рпм/мин током 24 сата. Максимална разређена концентрација укупних флавоноида без раста бактерија била је МИЦ укупних флавоноида на бактеријама [53].
3.9. Статистичка анализа
Десигн-Екперт В12.0.3.0 (Стат-Еасе Инц., Миннеаполис, МН, САД) је коришћен за израчунавање коефицијената квадратног полиномног модела и оптимизације. Ф-вредности и п-вредности су коришћене за проверу тачности једначине полиномског модела, а п-вредности мање од {{10}}.05 (п < 0.05)="" су="" сматране="" статистички="" значајним.="" сви="" експерименти="" су="" мерени="" три="" пута,="" а="" вредности="" података="" су="" изражене="" као="" средња="" вредност="" ±="" стандардна="" девијација="">
4. Закључци
У овој студији, оптимални услови екстракције укупних флавоноида фенгданског божура били су концентрација метанола од 90 процената, однос чврста и течност од 1:35, температура екстракције од 55 ◦Ц, време екстракције од 80 мин, и укупан принос флавоноида био је 1,204 одсто. Верујемо да је процес екстракције погодан за индустријску производњу. Флавоноиди фенгданског божура показали су одличне антиоксидативне ефекте, клиренс укупних флавоноида на ДППХ слободне радикале је био 75 процената, на хидроксилне радикале 70 процената, а на АБТС слободне радикале 97 процената. Поред тога, флавоноиди Фенгдан божура имали су одређени ефекат избељивања, стопа инхибиције флавоноида Фенгдан божура на тирозиназу показала се у зависности од дозе и ИЦ50 је могао да достигне 0,24 мг/мЛ. Штавише, укупни флавоноиди фенгданског божура могу инхибирати раст грам-позитивних бактерија. Сви резултати су пружили поуздану подршку података за примену укупних флавоноида фенгдан божура у здравственим производима и функционалним прехрамбеним сировинама и поставили темеље за индустријску производњу укупних флавоноида фенгданског божура.
цистанцхе таблете које садрже флавоноиде
кликните на слику и сазнајте више детаља