Атриплек Цанесценс је нови домаћин за Цистанцхе Десертицола

Контакт: emily.li@wecistanche.com

Фангминг Ванг, ет ал

Апстрактан

Цистанцхе десертицоласе историјски користио у традиционалној кинеској медицини за допуну функције бубрега (јанг), за побољшање крви и есенције, и за влажење црева ради излучивања столице. Његов домаћин, Халокилон аммодендрон, је важна пионирска биљка која се користи за ветроломе и фиксацију пешчаних дина, што су стратегије које се користе за контролу дезертификације. Дуго се сматрало да Ц. десертицола може паразитирати само на Х. аммодендрон. У овој студији, спроведени су морфолошка идентификација, идентификација генског баркодирања и експерименти инокулације, коначно смо открили да Ц. десертицола такође може паразитирати на Атриплек цанесценс. А. цанесценс је врста Цхеноподиацеае са широким спектром прилагодљивости. У поређењу са Х. аммодендроном, има више биомасе и шири опсег еколошке прилагодљивости, што га чини погоднијим за индустријску производњу Ц. десертицола. Поред тога, такође смо открили да је концентрација активних компоненти већа код Ц. десертицола паразитиране на А. цанесценс него код оних паразитираних на Х. аммодендрон; овај налаз даље сугерише да примена Ц. десертицола у већим размерама захтева даље истраживање.

Кључне речи:Цистанцхе десертицола, паразитизам, идентификација заснована на ДНК бар коду, традиционална кинеска медицина, цистанцхе салса

Кликните овде да бисте сазнали више о цистанцхе

1. Представљање

Употреба Цистанцхеа у традиционалној кинеској медицини први пут је забележена у Схеннонг биљном писму, због његових ефекататонирањебубрегаианг, боостингтхеДушаофкрв, ивлажењетхецревада би се олакшао пролаз столице. Такође је забележено у делима древне биљне медицине као 'пустињагинсенг'. Суве меснате стабљике и љускави листови Цистанцхе десертицола ИЦ Ма и Цистанцхе тубулоса (Сцхенк) Вигхт били су први зглоб описан 2005. у кинеској фармакопеји. Цистанцхе се углавном узгаја у Шингђангу, Унутрашњој Монголији и Гансуу у Кини, а глобално се налази у полусушним и сушним подручјима широм Европског Пиринејског полуострва, Северне Африке, Арабије, Ирана, Авганистана, Пакистана, Северне Индије, Монголије итд. ал. [1]. Отпоран је на оштре услове животне средине, као што су екстремно сушна клима, озбиљне варијације температура и депауперирана тла [2]. Према Таксономском индексу кинеских виших биљака, у Кини постоји шест врста Цистанцхе. Међутим, даља студија је потврдила постојање само четири врсте и једне варијанте Цистанцхеа, наиме, Ц. десертицола ИЦ Ма, Ц. тубулоса (Сцхенк) Р. Вигхт, Ц. салса (ЦА Меи.) Г. Бецк, Ц. синенсис Г. Бецк и Ц. салса вар. албифлфлора ПФ Ту ет ал., [3].

Ц. десертицола се сматра јединим традиционалним извором Цистанцхеа и има дугу историју употребе у медицини, још од династије Источни Хан (25. АД–220. не) [4]. У Цомпендиум оф Материа Медица (који је написао Ли Схизхен, династија Минг), документовано је да глатко тонизира јанг (за разлику од других биљака које имају снажније дејство). Низ ефикасних хемијских састојака, укључујући фенилетаноидне гликозиде, иридоиде, лигнане, алдитоле, олигосахариде, полисахариде и алкалоиде, изоловани су из Ц. десертицола савременим фитокемијским методама [5]. Фармаколошке студије су показале да је фенетил гликозид главна активна компонента, а пријављено је дапобољшатисексуалнифункција, екертнеуропротективниефекти, побољшатиучењеимеморија, изаштитититхејетра. Такође има терапеутски ефекат против деменције,Алцхајмерова болестболест, Паркинсонова болест, умор, итуморизаједно са експонатимаанти-инфламаторноиимуномодулаторносвојства [6, 7].

Ц. десертицола је обавезна паразитска биљка која живи искључиво на корену Халокилон аммодендрона [8]. Студија је објавила да Ц. десертицола није чак ни пронађена у Халокилон персицум [9]. Последњих година све је већа пажња посвећена Ц. десертицола, јер она не само да је извор компоненти лековите вредности већ и у великој мери доприноси контроли дезертификације [10]. Х. аммодендрон је једини домаћин који је коришћен у студијама које укључују Ц. десертицола. У априлу 2017, Ванг Схуаи, запосленик Зхејианг Кухенг Публиц Велфаре Фонда, инокулирао је семе Ц. десертицола на Атриплек цанесценс у пустињској ботаничкој башти у Минћину, провинција Гансу, а откривено је да Ц. десертицола цвета и наставила да цвета у мају 2018. да цвета до маја 2019. Међутим, семе је купљено на пијаци и сумња се да ли је заиста било семе Ц. десертицола. Поред тога, овај феномен разбија традиционално знање и потребно га је даље проучавати

А. цанесценс је Ц4 вишегодишњи жбун пореклом из пустиња Југозападне Америке и брзо се прилагођава условима салинитета, тешких метала, суше и високих температура [11]. Пошто је веома укусан и богат хранљивим материјама, користи се као сточна храна за већину стоке и крупних животиња [12]. Штавише, посебно је користан за контролу ерозије и рекултивацију маргиналних земљишта због своје одличне прилагодљивости и екстензивног кореновог система. Први пут је представљен у Кини из Сједињених Америчких Држава 1989. године и широко се користио за очување земљишта и воде, фиксирање песка и заслањеност земљишта [13]. Иако студија која извештава о расту Ц. десертицола на А. цанесценс поништава искључиво паразитско разумевање Ц. десертицола, ово би се могло показати као револуционарно откриће, пошто је А. цанесценс погоднији за раст Ц. десертицола јер има више биомасе и шири опсег еколошке прилагодљивости у поређењу са Х. аммодендроном.

Да би се осигурала тачност случајног открића, спроведени су експерименти идентификације биљака и вештачке инокулације. Традиционална идентификација биљака укључује органолептичку процену (као што су додир, мирис, вид и укус), анализу морфолошких карактеристика (као што су микроскопске и макроскопске) и хемијско профилисање (као што је течна хроматографија високих перформанси, танкослојна хроматографија и гасна хроматографија). хроматографија) [14]. Релативно је једноставно искључити Ц. тубулоса и Ц. Синенсис због разлике у величини, боји и распореду васкуларних снопова у стабљици. Прави изазов је направити разлику између Ц. десертицола и Ц. салса. Према Флори Кине, дужина листова Ц. салса је око 1/3 вјенчића, док је једнака код Ц. десертицола. Пресек меснатих стабљика сличан је између Ц. десертицола и Ц. салса и састоји се од епидерме, кортекса, васкуларних снопова и сржи. Главна разлика је у омотачу васкуларног снопа јер је за Ц. десертицола каудата, а за Ц. салса троугласта или полукружна.

Последњих година, технологија ДНК баркодирања се често користи за идентификацију врста. То је процес који користи кратку ДНК секвенцу из стандардног генома, која је генерално очувана и на коју не утичу спољни фактори, као што су старост и врста биљног ткива. Популарне секвенце кандидата за биљне ДНК баркодове су рбцЛ, матК, псбА-трнХ, ИТС и ИТС2 [15]. Неколико студија је показало да је ИТС/ИТС2 најефикаснији алат за идентификацију биљака. Такође је сугерисано да ИТС2 регион треба да буде укључен у основне баркодове због његове веће дискриминаторне моћи од пластидних бар кодова. Прихваћено је да се ИТС2 може користити као нови универзални бар код за идентификацију широког спектра биљних таксона [16, 17, 18, 19, 20, 21]. Иако су многе студије покушале да идентификују универзални биљни бар код, ниједан од доступних локуса не функционише на све врсте, тако да је неопходна метода са више локуса за разликовање биљних врста [22, 23, 24, 25, 26, 27, 28] . У овој студији, ИТС2, рбцЛ, псбА-трнЛ су коришћени као бар кодови.

Поред техника морфолошке и молекуларне идентификације, директни докази потичу из експеримената са инокулацијом. Потребно је спровести експерименте са инокулацијом како би се показало да Ц. десертицола може паразитирати на А. цанесценс. Поред идентификације, контрола квалитета постаје примарна ствар. Потребна су даља истраживања како би се утврдила разлика између квалитета Ц. десертицола паразитиране на корену Х. аммодендрон и оног паразитираног на А. цанесценс.

2. Материјал и методе

2.1. Биљни материјали

Цистанцхе расте на меким песковитим земљиштима са благим заслањивањем, углавном паразитирајући на 30–100 цм дубоким бочним коренима домаћина. Клима у погодном подручју за узгој је сушна, мање кишна, има велико испаравање, дуге сунчане сате и велику температурну разлику између дана и ноћи. Округ Минћин и град Баиинг су локације за прикупљање ових узорака, географски су близу и имају умерено континенталну сушну климу, са просечном годишњом количином падавина од 113,2 мм и просечном годишњом релативном влажношћу од 44 процента. Специфичне и детаљне информације о прикупљању узорака приказане су у табели 1. Сви узорци су замрзнути и сачувани на -20 Ц у Државној кључној лабораторији за природне и биомиметичке лекове, Пекинг, Кина.

2.2. Бојење и посматрање ткива

Свежи узорци су добијени и ускладиштени у раствору који се састоји од 70 процената етанола, глацијалне сирћетне киселине и формалдехида у односу 90:5:5 и дехидрирани су коришћењем градијента етанола (75 процената, 95 процената, 100 процената, 100 процената) за 1 х. Дехидрирани пресеци су подвргнути градијенту ксилена (25 процената, 50 процената, 75 процената, 100 процената, 100 процената) током 1 х да би се добили транспарентни пресеци. Транспарентни делови су подвргнути парафинској инфилтрацији, при чему је запремина парафина једнака запремини ксилена додата ксилену који је садржао узорак, половина добијеног раствора је затим аспирирана и поново је додата једнака запремина парафина. Овај процес је поновљен 10 пута и на крају су сви раствори извучени и замењени истом запремином парафина; овај последњи корак је поновљен два пута, а добијени раствор након сваког корака је инкубиран 1 х на 75 Ц. Након парафинске инфилтрације, секције су подвргнуте уградњи, при чему су узорци стављени у гвоздени резервоар који садржи течни парафин и додатни течни парафин. брзо се додаје да попуни цео резервоар и оставља да се стврдне. Добијени блок воска је исечен и исечен. Уграђени делови су стављени у топлу воду, завршени, стављени на стакалце и инкубирани на 45 Ц током 30 минута. Секције на стакалцу су депаратизоване серијским намакањем у 100 процената ксилола, 100 процената ксилена, 50 процената ксилена, 50 процената ксилена, 100 процената етанола, 100 процената етанола, 95 процената етанола и 75 процената етанол са 75 процената, а затим 4. мин. Након тога је уследила још једна рунда серијског, брзог намакања у 75 процената етанола и 95 процената етанола, а затим су слајдови потопљени у брзо зелено на 1 мин. Коначно, секције су подвргнуте последњем серијском намакању у 95 процената етанола, 95 процената етанола, 100 процената етанола, 100 процената етанола, 50 процената ксилена, 50 процената ксилена и 100 процената ксилена. Након што су пресеци обојени, кап лепка од смоле је стављена на тобоган, а преко њега је постављено покровно стакло. Стакалца су остављена неометана недељу дана, а делови ткива су посматрани помоћу оптичког микроскопа Олимпус и снимљени.

2.3. Екстракција ДНК и ПЦР амплификација

Укупна геномска ДНК је екстрахована из узорака цвећа коришћењем комплета за екстракцију биљне геномске ДНК (Соларбио Сциенце & Тецхнологи Цо., Лтд., Пекинг, Кина) у складу са протоколима произвођача. Прајмери ​​за амплификацију и секвенцирање гена и реакциони услови су приказани у табели 2. Свака генска амплификација је поновљена три пута за сваки узорак.

2.4. Анализа секвенцирања

Да би се добиле тачне секвенце, коначни ПЦР производи, након пречишћавања коришћењем комплета за екстракцију трансгеном брзим гелом, клонирани су одвојено у пЕАСИ®-Блунт векторе за клонирање, према упутствима произвођача. Након клонирања, трансформисане су у хемијски компетентне Транс5ɑ ћелије. Три колоније сваког узорка су насумично одабране и секвенциониране коришћењем М13 прајмера. Ове колоније су секвенциониране двосмерно помоћу Сенгеровог секвенцирања, користећи БигДие Терминатор В3.1 Цицле Секуенцинг Китс на АБИ Присм 3700 ДНК анализаторима. Добијене секвенце су поређане помоћу Цлустал Кс (в1.8.7) [29] и синхронизоване ручно у БиоЕдит (в7.1.3.0) [30]. Користећи податке о усклађеној секвенци, реконструисали смо филогенезу коришћењем софтвера МЕГА 7 коришћењем методе спајања суседа (Њ), коришћен је модел Кимура 2- параметра (К2П) и почетно покретање је било 1000 понављања [31].

2.5. Инокулација Ц. десертицола

Три грама семена Ц. десертицола додато је у саксије (пречник висине пречника дна ¼ 20 цм- 20 цм-12 цм) које садрже песковито земљиште и мешано да би се обезбедило равномерно ширење. Контролну групу чинило је 3 г семена Ц. салсе додатих у сличне саксије које садрже песковито земљиште. На крају, у сваку саксију је посађен А. цанесценс, а саксије су постављене напоље. Када је садржај влаге у земљишту мањи од 13 процената (г/г), саксије су заливене. Експеримент је спроведен у Зхонггуанцун Лифе Сциенце Парку, Пекинг, Кина (ширина 39-560 С, географска дужина 116 200 Е; 20 м надморске висине) од маја до јула. Дневна температура варирала је између 16 и 35 Ц, ноћна између 12 и 16 -Ц. Релативна влажност ваздуха је већа од 50 процената. Сунчева светлост је у изобиљу. Отприлике 80 дана касније, земља је уклоњена из саксија и одређена је стопа инокулације.

2.6. Одређивање концентрације лековитих компоненти

Одређивање концентрације лековитих компоненти обухвата два дела, један је поступак течне хроматографије, а други је припрема референтне супстанце и испитиване супстанце, детаљније је следеће:

и). Одређивање ехинакозида и вербаскозида-ехинакозида и вербаскозида је измерено и додато у 50 проценат метанола да би се добио раствор 0.2 мг/мл, који је коришћен као референтни раствор. Први је да се сува Ц. десертицола меље у прах, прах је помешан са 50 мл 50% метанола у смеђој волуметријској тиквици од 100 мл, а тестна течност се добија након подвргавања смеше мућкању, намакању. , соникација, стајање и филтрација. Хроматографска колона је била Агилент ЗОРБАКС СБ-Ц18 колона (4,6 мм 150 мм, 5 μм), са метанолом (А) - 0.1 проценат раствора мравље киселине (Б) као мобилном фазом, градијент елуирања (0–17 мин, 26,5 процената А; 17–20 мин, 26,5 процената → 29,5 процената А; 20–27 мин, 29,5 процената А), брзина протока је била 1,0 мЛ/мин, температура колоне је била 35 Ц, таласна дужина детекције је била 330 нм, запремина убризгавања је била 10ул.

ии). Одређивање бетаина, манитола, фруктозе, глукозе и сахарозе Бетаин, манитол, фруктоза, глукоза и сахароза су прецизно измерени и додати у воду да би се добио раствор {{0}}.25 мг/мл, што је користи се као референтно решење. Пет милилитара претходно поменутог раствора Цистанцхе теста помешано је са 50 процената метанола у волуметријској тиквици од 25 мл, добро промућкано и филтрирано са микропорозном мембраном од 0,2 μм. Хроматографска колона је била СХОДЕКСАСХАИПАК НХ2П-50 4Е полимеризована гел колона (250 мм 4,6 мм, 5 μм), мобилна фаза је била ацетонитрил-вода (77:23), брзина протока је била 0,7 мЛ/мин, температура колоне је била 25 Ц, Коришћењем евапоративног детектора расејања светлости (ЕЛСД), температура дрифт цеви је била 100 Ц, брзина протока гаса носача је била 3 ​​Л/мин, запремина убризгавања референтне супстанце и узорка је била 5 ул.

3. Резултати

3.1. Морфолошка идентификација цветова

Да би се потврдила врста Цистанцхе која паразитира на А. цанесценс, извршена је морфолошка анализа цветних примерака (Слика 1 и Слика С1). Укупна морфологија цветова паразитске биљке била је слична оној код Ц. десертицола. Даље, вјенчић је био дебљи од оног код Ц. салса на различитим домаћинима. Према Флори Кине, Ц. десертицола и Ц. салса имају очигледне разлике у листовима цвећа. Код Ц. десертицола листови су подједнаки вјенчићу, док је листови Ц. салса 1/3 дужине вјенчића. На основу наше статистичке анализе, листови Цистанцхе паразитирали су на А. цанесценс и Ц. десертицола су били подједнаки круни (Слика С2). Цистанцхе на А. цанесценс је испољио морфолошке карактеристике Ц. десертицола, што сугерише да би Ц. десертицола могао бити паразит на А. цанесценс.

Слика 1. Морфолошке карактеристике цветова Цистанцхе. (А) Цистанцхе десертицола (домаћин: Халокилон аммодендрон); (Б) Цистанцхе (домаћин: Атриплек цанесценс); (Ц) Цистанцхе салса (домаћин: Симпегма регелии); (Д) Цистанцхе салса (домаћин: Салсола пассерина).

3.2. Микроскопска идентификација обојених узорака ткива

Пресек меснате стабљике Ц. десертицола је веома сличан оном код Ц. салса, а оба се састоје од епидермиса, кортекса, васкуларног снопа и сржи. Васкуларни снопови обе биљке су распоређени у таласасте или дубоке таласасте прстенове, а сржи су очигледно видљиве. Главна разлика лежи у бочном облику омотача васкуларног снопа; репаста је код Ц. десертицола и троугласта или полукружна код Ц. салса. Након анализе микроструктуре на Цистанцхе паразитираној на А. цанесценс, открили смо да има каудатасти омотач васкуларног снопа, који подсећа на Ц. десертицола (Слика 2).

Слика 2. Микроскопске карактеристике меснатог стабла код различитих врста Цистанцхе. (А) Микроскопске карактеристике меснате стабљике Цистанцхе десертицола: 1. епидермис, 2. кортекс, 3. сноп трагова листова, 4. васкуларни сноп, 5. медуларни зрак, 6. омотач васкуларног снопа, 7. флоем, 8. ксилем , 9. срж. (Б) Увећани приказ васкуларног снопа код Цистанцхе десертицола: 1. омотач васкуларног снопа, 2. влакно, 3. ћелије пролина, 4. личко влакно, 5. флоем, 6. ксилем, 7. посуда, 8. најлон. (Ц) Микроскопске карактеристике меснатог стабљика Цистанцхе салса: 1. епидерма, 2. сноп трагова листа, 3. кортекс, 4. васкуларни сноп, 5. медуларни зрачак, 6. срж. (Д) Увећани приказ васкуларног снопа Цистанцхе салса: 1. омотач васкуларног снопа, 2. ћелије пролина, 3. Влакна, 4. флоем, 5. суд, 6. ксилем. (Е) Микроскопске карактеристике меснатог стабљика Цистанцхе паразитираног на Атриплек цанесценс 1. епидермису, 2. кортексу, 3. васкуларном снопу, 4. медуларном зраку, 5. сржи. (Ф) Увећани приказ васкуларног снопа Цистанцхе паразитираног на Атриплек цанесценс 1. суду, 2. ксилему, 3. камбијуму, 4. флоему, 5. омотачу васкуларног снопа.

3.3. Молекуларна идентификација

Поред морфолошке идентификације, извршили смо и молекуларну идентификацију и одабрали три фрагмента гена, и то ИТС2, рбцЛ и псбА-трнЛ. Еволуционо стабло је конструисано коришћењем информација о секвенци сваког фрагмента (Слика 3), а сва три филогенетска стабла су показала да је Цистанцхе паразитиран на А. цанесценс имао блиску филогенетску везу са Ц. десертицола. Ови резултати указују да би Ц. десертицола могао бити паразит на А. цанесценс. Детаљне дивергенције гена међу различитим врстама Цистанцхе су уочене након вишеструког поравнања секвенци (Слика 4). Пронашли смо три појединачна нуклеотидна полиморфизма (СНП) у телу гена ИТС2 између Ц. десертицола и Ц. салса, на базама 139, 295 и 472. У телу гена рбцЛ, постојале су четири генске дивергенције између Ц. десертицола и Ц. салса, који садржи два СНП-а и две инсерције и делеције (индел) мутације. У поређењу са ИТС2 и рбцЛ, разлике у телу гена псбА-трнЛ између Ц. десертицола и Ц. салса биле су очигледније, са седам одступања секвенци, од којих су четири биле СНП, а три ИнДел мутације. Конкретно, серија понављања тимина, почевши од базе 414 поравнате секвенце, може се користити за развој маркера понављања једноставне секвенце (ССР) за разликовање Ц. десертицола и Ц. салса.

3.4. Инокулација Ц. десертицола

Да бисмо тестирали да ли Ц. десертицола или Ц. салса могу паразитирати на А. цанесценс, спроведен је експеримент инокулације и пронашли смо доказе паразитизма у свим саксијама инокулисаним Ц. десертицола са стопом инокулације од скоро 100 процената (Слика 5). У контролним групама није примећен паразитизам. Овај резултат директно доказује да је Ц. десертицола лако паразитирала на А. цанесценс, док Ц. салса није могла.

3.5. Одређивање концентрације значајних лековитих компоненти

Процењивали смо концентрацију важних лековитих компоненти у Ц. десертицола паразитираној на А. цанесценс. Специфични хроматограм је приказан у додатном материјалу. Да би се добили тачни резултати, постављена су четири независна експеримента. На основу наших мерења (Табела 3), открили смо да је концентрација вербаскозида и ехинакозида била 20 пута већа од оне која је пријављена у кинеској фармакопеји (према кинеској фармакопеји, проценат збира концентрација ехинакозида а вербаскозид у Ц. десертицола треба да буде мањи од 0.30 процената). Концентрације су такође биле значајно веће од оне код Ц. десертицола паразитиране на Х. аммодендрону (углавном 0,2–1,5 процената) [32]. Концентрација манитола, бетаина, фруктозе и других компоненти угљених хидрата је такође била веома висока, а укупан квалитет је био бољи од оног код Ц. десертицола паразитиране на Х. аммодендрону. Дакле, ови резултати указују да се А. цанесценс може користити за узгој Ц. десертицола на индустријском нивоу и заштиту угрожених дивљих ресурса.

4. Дискусија

Раније се сматрало да Ц. десертицола искључиво паразитира на Х. аммодендрон. Међутим, у овој студији, користећи технике морфолошке и молекуларне идентификације, показали смо да Ц. десертицола такође може паразитирати на А. цанесценс. Иако Х. аммодендрон, А. цанесценс и Х. персицум припадају породици Цхеноподиацеае, занимљиво је и необично да Ц. десертицола има селективност врста, вероватно вођена сигналним молекулима које лучи домаћин. А. цанесценс, пореклом из Сједињених Америчких Држава, показује јаку отпорност на поремећаје животне средине и има релативно велику биомасу. А. цанесценс је одржив домаћин за Ц. десертицола из различитих разлога. Прво, може преживети у широком спектру услова животне средине. Друго, биомаса и стопа раста Ц. десертицола могу бити већа и бржа, респективно, на А. цанесценс него на Х. аммодендрон. Треће, због широког спектра прилагодљивости А. цанесценс, површина за садњу се може додатно проширити. Дакле, А. цанесценс има карактеристичне предности у односу на Х. аммодендрон као домаћина и помоћи ће индустријској производњи Ц. десертицола.

Ц. десертицола и Ц. салса је тешко разликовати, а морфолошка идентификација у прошлости је дала збуњујуће резултате. Са напретком у области молекуларне биологије, технике идентификације засноване на молекулима се широко користе у кинеској биљној медицини. Пошто већина кинеских биљних лекова нуди мало геномских информација, технологија ДНК бар кодирања се појавила као револуционарна техника идентификације. У овој студији, морфолошка и ДНК технологија баркодирања су свеобухватно примењене на идентификацију непознатих врста Цистанцхеспециес; ово раније није покушано, а наши резултати показују да је овај приступ изводљив.

Пошто Ц. десертицола паразитира на А. цанесценс, важно је утврдити разлике у квалитету Ц. десертицола на корену А. цанесцент и на корену Х. аммодендрона. Према нашим резултатима, концентрација активних компоненти била је већа код Ц. десертицола паразитиране на А. цанесценс него код оне паразитиране на Х. аммодендрон. Дакле, наши резултати постављају чврсту теоријску основу за масовну производњу Ц. десертицола паразитиране на А. цанесценс.

5. Закључци

Дуго времена се сматрало да Ц. десертицола паразитира искључиво на Х. аммодендрон. Раније је утврђено да семе Ц. десертицола купљено на пијаци може паразитирати на А. цанесценс, другу

Биљка Цхеноподиацеае. Користећи методе морфолошке и молекуларне идентификације, потврдили смо да је врста Цистанцхе која паразитира на А. цанесценс Ц. десертицола. Овај резултат је даље потврђен експериментом инокулације. Утврдили смо концентрацију значајних лековитих компоненти, а наши резултати сугеришу да су концентрација и квалитет компоненти већи код Ц. десертицола паразитиране на А. цанесценс него код оне паразитиране на Х. аммодендрон. Откриће нових домаћина може промовисати индустријску производњу Ц. десертицола, а такође може ефикасно заштитити дивље ресурсе и еколошку средину.

Референце
[1] ДИ Тан, КС Гуо, ЦЛ Ванг, Студија о статусу куо Цистанцхе десертицола и њеној експлоатацији и коришћењу у Кини, Фор. Ресоур. Манаг. 33 (2004) 29–32.
[2] КСИ Киао, ХЛ Ванг, ИХ Гуо, Студија о условима клијања семена Цистанцхе, Зхонггуо Зхонг Иао За Зхи 32 (2007) 1848–1850.
[3] ПФ Ту, ИП Хе, ЗЦ Лоу, Истраживање о пореклу и заштити ресурса Цистанцхе, Цхин. Традит. Херб. Дрога 25 (1994) 205–208.
[4] ЛД Караллиедде, ЦТ Каппагода, Изазов традиционалних кинеских лекова за алопатске практичаре, Ам. Ј. Пхисиол. Хеарт Цирц. Пхисиол. 297 (2009) 1967–1969.
[5] И. Јианг, ПФ Ту, Анализа хемијских састојака у врстама Цистанцхе, Ј. Цхроматогр. А 1216 (2009) 1970–1979.
[6] Т. Ванг, КСИ Зханг, ВИ Ксие, Цистанцхе десертицола ИЦ Ма, "пустињски гинсенг": преглед, Ам. Ј. Цхин. Мед. 40 (2012) 1123–1141.
[7] Фармакопеја НЦОЦ, Фармакопеја Народне Републике Кине, Тхе Цхемицал Индустри Пресс, Пекинг, 2020.
[8] ГКС Менг, КСС ​​Цуи, И. Ву, ИХ Гуо, Ефекти Левеиллула сакаоули на раст, хлорофил и угљене хидрате Халокилон аммодендрона, север. Хортиц. 14 (2012) 141–143.
[9] ИЦ Цхен, М. Ли, МЗ Ву, ИКС Сонг, Структура и састав корена у две врсте Халокилон Бунге, Плант Пхисиол. Ј. 49 (2013) 1273–1276.
[10] ПФ Ту, И. Јианг, ИХ Гуо, ИЗ Тиан, ет ал., Развој еколошке индустрије Цистанцхес херба за промовисање еколошке цивилизације западног пустињског региона, Мод. Брада. Мед. 4 (2015) 297–301.
[11] СЦ Сандерсон, ХЦ Стутз, Високи бројеви хромозома у пустињи Мојаве и Сонора Атриплек цанесценс (Цхеноподиацеае), Ам. Ј. Бот. 81 (1994) 1045–1053.
[12] ЈЛ Петерсон, ДН Уецкерт, РЛ Поттер, ЈЕ Хустон, Екотипске варијације у одабраним популацијама четворокрилних грмова соли у западном Тексасу, Ј. Ранге Манаг. 40 (1987) 361–366.
[13] ДС Конг, Морфолошке карактеристике и еко-физиолошка адаптабилност Атриплек цанесценс: преглед, Цхин. Ј. Ецол. 32 (2013) 210–216.
[14] МА Басхир, МС Фаезах, ССО Мохд, В. Алина, Преглед: ДНК баркодирање и хроматографски отисци прстију за аутентификацију биљних производа у биљним лековима. Евид. Базирани комплемент, алтернатива. Мед. 2017 (2017) 1–28.
[15] КСВ Ли, И. Ианг, ет ал., Биљни ДНК бар кодирање: од гена до генома, Биол. Рев. 90 (2015) 157–166.
[16] СЛ Цхен, Х. Иао, ЈП Хан, ет ал., Валидација ИТС2 региона као новог ДНК бар кода за идентификацију лековитих биљних врста, ПлоС Оне 5 (2010), е8613.
[17] К. Луо, СЛ Цхен, КЛ Цхен, ет ал., Процена кандидатских биљних ДНК бар кодова коришћењем породице Рутацеае, Сци. Цхина Лифе Сци. 53 (2010) 701–708.
[18] Т. Гао, Х. Иао, ЈИ Сонг, ет ал., Идентификација лековитих биљака у породици Фабацеае коришћењем потенцијалног ДНК баркода ИТС2, Ј. Етхнопхармацол. 130 (2010) 116–121.
[19] Т. Гао, Х. Иао, ЈИ Сонг, ет ал., Процена изводљивости коришћења ДНК бар кодова кандидата у дискриминаторним врстама велике породице Астерацеае, БМЦ Евол. Биол. 10 (2010) 324.
[20] КСХ Панг, ЈИ Сонг, ИЈ Зху, ет ал., Коришћење ДНК бар кодирања за идентификацију врста унутар Еупхорбиацеае, Планта Мед. 76 (2010) 1784–1786.
[21] КСХ Панг, ЈИ Сонг, ИЈ Зху, ет ал., Примена биљних ДНК бар кодова за идентификацију врста Росацеае, Цладистицс 27 (2011) 165–170.
[22] ПД Хеберт, ЕХ Пентон, ЈМ Бурнс, ДХ Јанзен, В. Халлвацхс, Десет врста у једном: ДНК баркодирање открива криптичне врсте у неотропском скипер лептиру Астраптес фулгуратион, Проц. Натл. Акад. Сци. САД 101 (2004) 14812–14817.
[23] МВ Цхасе, РС Цован, ет ал., Предлог стандардизованог протокола за баркодирање свих копнених биљака, Такон 56 (2007) 295–299.
[24] ВЈ Кресс, ДЛ Ерицксон, Глобални ДНК бар код са два локуса за копнене биљке: кодирајући рбцЛ ген допуњава некодирајући трнХ-псбА спацер регион, ПлоС Оне 2 (2007) е508.
[25] ДЛ Ерицксон, Ј. Споуге, А. Ресцх, ет ал., ДНК баркодирање у копненим биљкама: развој стандарда за квантификацију максималног успеха, Такон 57 (2008) 1304–1316.
[26] НЦ Кане, К. Цронк, Ботаника без граница: баркодирање у фокусу, Мол. Ецол. 17 (2008) 5175–5176.
[27] Р. Лахаие, М. ван дер Банк, Д. Богарин, ет ал., ДНК бар кодирање флоре жаришта биодиверзитета, Проц. Натл. Акад. Сци. САД 105 (2008) 2923–2928.
[28] Н. Кане, С. Свеинссон, Х. Демпеволф, ет ал., Ултра-баркодирање у какау (Тхеоброма спп.; Малвацеае) коришћењем целих генома хлоропласта и нуклеарне рибозомалне ДНК, Ам. Ј. Бот. 99 (2012) 320–329.
[29] ЈД Тхомпсон, ТЈ Гибсон, Ф. Плевниак, Ф. Јеанмоугин, ДГ Хиггинс, Интерфејс прозора ЦЛУСТАЛ_Кс: флексибилне стратегије за вишеструко поравнање секвенци уз помоћ алата за анализу квалитета, Нуцлеиц Ацидс Рес. 25 (1997) 4876–4882.
[30] ТА Халл, БиоЕдит: уређивач поравнања биолошких секвенци и програм за анализу прилагођен кориснику за Виндовс 95/98/НТ, Нуцл. Ацидс Симп. Сер. 41 (1999) 95–98.
[31] С. Кумар, М. Неи, Ј. Дудлеи, К. Тамура, МЕГА: софтвер усредсређен на биолога за еволуциону анализу ДНК и протеинских секвенци, Бриеф. Биоинформ. 9 (2008) 299–306.
[32] ПФ Ту, Б. Ванг, Т. Деиама, ЗГ Зханг, ЗЦ Лоу, Анализа фенилетаноидних гликозида Херба цистанцхис помоћу РП-ХПЛЦ, Ацта Пхарм. Синица. 32 (1997) 294–300.