Појачавање антиканцерогене активности таксола Аспергиллус Фавус "ендофит јојобе" преко коњугације са златним наночестицама посредованим зрачењем Ⅱ
May 30, 2023
Хемијски идентитет и антиканцерогена активност А. фавус Такол
Претпостављене ТЛЦ тачке одА. фавусТаксол је уклоњен и растворен у метанолу,а хемијска својства једињења су раздвојена из различитих ХПЛЦ,ХНМР и ФТ-ИР хроматографске и спектроскопске анализе. Протон нуклеарни магнетрезонантни сигнали (1 Х НМР) одА. фавусекстраховани таксол су распоређени између 1.0и 8.0 ппм, са три разрешена протонска сигнала на 1.0–3.0 ппм што одговара метилу,ацетатне и ацетиленске групе, док протонски сигнали на 6,5–9.0 ппм одговарајуароматични делови (сл.3). Образац и дистрибуција протонских сигналаА. фавусТаксол потврђује структурни идентитет и сличност узорка са стандардомТаксол (сл.3). Штавише, Такол офА. фавусима исти ФТИР спектар аутентичног таксола.Врх на 3393,3 цм−1је додељен за хидроксил (ОХ), док је пик на 2923,5 биоприписан алифатском ЦХ потезу, врхови су на 1661.0 цм−1одговарају Ц=Офреквенција истезања. Уочени врхови су на 1452.{1}} цм−1и 1404.0 се помињуфреквенција НХ истезања, док је врх на 1109,0 цм−1"Кабонил" се односи на карбонилну групуфреквенција истезања кисеоника. Врхови у опсегу између 1020,0 и 979,77 цм−1суупућују на присуство ароматичних Ц и Х кривина. Коначно, спектрални образац одФТИР у погледу функционалних групаА. фавусТаксол је био идентичан аутентичномТаксол (сл.3). Коначно, из хроматографске и спектралне анализе, претпостављеноузорак је разрешен и аутентификован као једињења таксола у поређењу са аутентичнимсложени.
Кликните овде да бисте сазнали кинеско биље ЦистанцхеАнтипролиферативна активност
Ефекат различитих типова медијума на производњу таксола од стране А. фавус
Утицај састава медија на производњу таксола поА. фавусје оцењеноузгојем на ПДБ, М1Д, Цзапек'с-Док-у и екстракту слада. После културне инкубеТаксол је екстрахован и квантификован као што је описано у Материјалима и методама. Одрезултати на Сл.4, највећи принос таксола заА. фавусдобија се узгојем на сладуекстракт (170 µг/л) и Цзапек'с-Док (166 µг/л), у поређењу са ПДБ медијумом за раст као контролом(89 µг/л). Дакле, принос таксола поА. фавусповећана за отприлике 2 путарастом на Цзапек'с-Док-у и медијуму екстракта слада, у поређењу са контролном подлогом.Дакле, даље студије оптимизације како би се максимизирао принос таксолаА. фавуспо одговорупримењен је статистички приступ површинске методологије.
Оптимизација варијабли биопроцеса коришћењем методологије површине одговораПлацкетт-Бурман дизајн скрининг за критичне факторе
Принос таксола поА. фавусје оптимизован статистичким експерименталним дизајномПлацкетт–Бурман [18, 28]. Минимални и максимални опсег изабраних параметараодабрани Плацкетт–Бурман дизајном сумирани су у табели2. Концентрација таксола је билаодређене ТЛЦ и ХПЛЦ. Сви експерименти су били
узета је у обзир просечна концентрација таксола. Статистичка анализа овог дизајна илуструјеthat the model F-value of 5.98 implies the model is significant and values of "Prob>Ф" мањеизведено у три примерка иод 0.0500 као што је наведено у табели3. Стварни и предвиђени принос таксола као одговор наекспериментални параметри како су откривени из Плацкетт-Бурмановог дизајна приказани су изматрица у табели4. „Пред Р-Скуаред“ од 0.3061 није тако близак „Адј Р-Скуаред“од 0.5760 као што се обично може очекивати. Максимална стварна (255,35 µг/л) и предвиђена(280,4 µг/л) принос таксола поА. фавусна основу факторског дизајна Плацкетт–Бурман дизајнаје добијено у вожњи бр. 8. Из добијених података (Сл.4), највећи принос таксола заА. фавус(225 µг/л) добија се коришћењем екстракта слада (20 г/л), пептона (2 г/л), сахарозе (20 г/л), сојитона(2 г/л), цистеин (0,5 г/л), глутамин (0,5 г/л), екстракт говедине (1 г/л), на температури инкубације30 степена, почетни пХ 6,0 и након 12 дана инкубације при брзини мућкања (150 о/мин). На овом културномрун (12), принос таксола поА. фавусзначајно повећан за око 1,4 пута,у поређењу са контролном подлогом (170 µг/л). Смањење модела, трансформација одговора,и Адек Прецисион мере однос сигнал-шум, а пожељан је однос већи од 4[46]. На основу процењеног параметра и применом анализе вишеструке регресије наекспериментални подаци, тест варијабле и варијабла одговора били су повезани следећимједначина модела: једначина првог реда у смислу кодираних фактора — Такол Цон.= плус 11,51 плус 1,91Е плус 2,92 Ј плус 0.81 К. Стварни и предвиђени нивои таксола премаА. фавусна Плацкетт–Бурбиопроцес оптимизације човека сумирани су у табели4и сл.4. Максимална стварна(255,35 µг/л) и предвиђени (280,4 µг/л) принос таксола премаА. фавуспо факторском дизајну одПлацкетт-Бурман дизајн је добијен у тесту # 8 на средњој компоненти. Ефекат индипојединачни параметри као што је откривено из Плацкетт-Бурмановог дизајна представљени су у ПаретуГрафикон који приказује редослед важности варијабли укључених у производњу таксола Сл.4. Дакле, најзначајније варијабле које утичу на продуктивност таксола суА. фавусбили цистеин,пХ и време инкубације како је откривено из Плацкетт-Бурман дизајна.
Суочени централни композитни дизајн је усвојен за даље студије оптимизације коришћењемзначајна варијабла која из Плацкетт–Бурмановог дизајна. Резултати 20 трка од триваријабле са позитивним ефектима су показале да је производња таксола значајно диверсификованаса стањем тестирани су у опсегу од 96,5–302,7 µг/л. Максимални принос одТакол биА. фавус(302,7 µг/л) примећено је коришћењем цистеина (0,50 г/л) на пХ 6,0 и инкубиранотоком 15 дана како је наведено у табели5. Минимална производња таксола забележена је нарад број 15, где је цистеин (1.0 г/Л) на пХ 7.0 и инкубиран 7 дана. Статистичкианализа дизајна линеарног модела показује да је Ф-вредност 87,08 што имплицираsignificance of the model, and the values of "Prob>Ф" мање од 0.050 означавају тај моделтермини су значајни (табела6). Због тога су цистеин, пХ и време инкубације значајнимодел појмова. Анализа је открила да је "Пред. Р-квадрат" од 0.8972 у разумнојспоразум са "Адј. Р-квадрат" од 0.9315. Однос "адекватне прецизности" од 30.800 мераоднос сигнал-шум, пошто је однос већи од четири пожељан, Адек.Резултати добијени из ЦЦД експеримента су анализирани АНОВА-ом која је даласледећа регресиона једначина на нивоу производње таксола: једначина модела првог редатермини кодираних фактора — Конц. таксола.{{0}} плус 11,47 плус 1,60А плус 2,43Б плус 0,67Ц. Тродимензионалникриве површине одговора које показују ефекат интеракција најзначпараметри нагиба, цистеин, пХ и време инкубације, приказани су на Сл.4.
Табела 2Минимум и максимумопсеге изабраних параметарау П-БД за оптимизацијуПроизводња таксола
Табела 4Плацкетт-Бурман дизајн за процену фактора који утичу на производњу таксолаА. фавус
варијабле са позитивним ефектима су показале да је производња таксола значајно диверсификованаса испитаним стањем у опсегу од 96,5–302,7 µг/л. Максимални принос одТакол биА. фавус(302,7 µг/л) примећено је коришћењем цистеина (0,50 г/л) на пХ 6,0 и инкубиранотоком 15 дана како је наведено у табели5. Минимална производња таксола забележена је нарад број 15, где је цистеин (1.0 г/Л) на пХ 7.0 и инкубиран 7 дана. Статистичкианализа дизајна линеарног модела показује да је Ф-вредност 87,08 што имплицираsignificance of the model, and the values of "Prob>Ф" мање од 0.050 означавају тај моделтермини су значајни (табела6). Због тога су цистеин, пХ и време инкубације значајнимодел појмова. Анализа је открила да је "Пред. Р-квадрат" од 0.8972 у разумнојспоразум са "Адј. Р-квадрат" од 0.9315. Однос "адекватне прецизности" од 30.800 мераоднос сигнал-шум, пошто је пожељан однос већи од четири, Адек.Резултати добијени из ЦЦД експеримента су анализирани АНОВА-ом која је даласледећа регресиона једначина на нивоу производње таксола: једначина модела првог редатермини кодираних фактора — Такол Цонц.{{0}} плус 11,47 плус 1,60А плус 2,43Б плус 0,67Ц. Тродимензионалникриве површине одзива које показују ефекат интеракција најзначајнијихпараметри, цистеин, пХ и време инкубације, приказани су на Сл.4.
модификовани медијум за екстракт слада добијен из РСМ према Плацкетт–Бурман дизајну. Послекултуралне инкубације у стандардним условима, таксол је екстрахован и квантификован помоћу ТЛЦи ХПЛЦ. Према добијеним резултатима (слика С1), нема значајнијег ефекта на Такол продуктивност при -зрачењу при различитим дозама.
Синтеза АуНП и коњугација са таксолом А. фавус посредована зрачењем
Поливинилпиролидон(Синтетизоване су златне наночестице (АуНП) са ПВП-оммешањем ПВП са златним (ИИИ) хлоридом, посредованим гама зрачењем у дозама од{{0}}.25–10.0 кГи, а развијени ПВП-АуНП су процењени из УВ–Вис, ФТ-ИР,и КСРД анализе. Приказана је скица формирања конзорцијума Такол-ПВП-АуНПсна сл.5. Праћена је величина развијених ПВП-АуНП-ова посредованих гама зрацима од 1.0 кГиод ДЛС-а, а био је око 50 нм (Сл.5). Са слике ХРТЕМ-а, очекиванооблик и величина синтетизованих АуНП-а је демонстрирана са сферним честицама унутаропсег наносмера од 20 до 30 нм са просечним главним пречником од 25 нм (Сл.5). Слични резултати су примећени са ПВП-АуНПс посредованим гама зрачењем [49, 50]. Спектрална својства развијених АуНП-ова као одговор на различите дозе гамазраци су процењени УВ-Вис анализом, са максималним забележеним спектром апсорпцијена λ540нм на 1,5–3.0 кГи. Поред тога, праћен је развој АуНП-аод визуелног прегледа, са вероватном жућкастом до браон бојом, откривајући формацијуоф АуНПс.
Хемијска коњугација таксола и ПВП-АуНП је проверена из ФТ-ИР спектраанализа, што је откривено благим померањем интензитета и преносног односафункционалне групе таксол-ПВП-АуНПс коњугата у поређењу са таксолом као контролом.Интензитет врха на 3393,3 цм−1додељен за хидроксил (ОХ) у таксол-ПВПАуНПс конзорцијум је повећан за око 3 пута у поређењу са природним таксолом, откривајућихемијско истезање на хидроксилним групама (Сл.5). Као и интензитет врхова1661.0 цм−1што се односи на Ц=О фреквенцију истезања је снажно повећана за око 10савија се након коњугације са ПВП-АуНПс, обезбеђујући истезање на Ц=О везама. Тхеинтензитет пика 2923,5 који одговара алифатском растезању ЦХ био је прилично стабилан. Аблаго померање интензитета посматраних пикова на 1452.0 цм−1и 1404,0 цм−1је биопримећено због фреквенције НХ истезања. Интензитет врха 1109,0 цм−1офФреквенција истезања карбонилне групе-кисеоник је благо смањена након коњугације саПВП-АуНПс.
Кристална/физичка структура таксола након коњугације са ПВП-АуНП је биларешено из КСРД анализе (Сл.5). Из КСРД-а, Такол-ПВП-АуНПс цонсортијум је имао исту структурну конфигурацију, кристалну оријентацију и величину као изворниТаксол, обезбеђујући недостатак негативног утицаја на кристалну структуру природног таксола. Одрезултати, аморфна и кристална структура таксол-ПВП-АуНП у поређењу саизворни таксол је потврђен. Из КСРД анализе, коњугација таксола иПВП-АуНПс је разрешен као што је откривено из дифракционих својстава која се тичу2ɵ=38.18 степен, 44,01 степен, 64,57 степен, 77,67 степени и 81,74 степен који описује Брагова запажањана (111), (200), (220), (311) и (222), респективно. Сви врхови су били везани за идеалкартица Заједничког комитета за стандарде дифракције праха (ЈЦПДС) АуНП-а (ЈЦПДСкартица бр. 04–0784) [51]. Дакле, приказана је снага кристала синтетизованих АуНП-а,обезбеђујући лице-центрирану кубичну (фцц) кристалну структуру. Поред тога, постоји једноставноаморфни врх на 19,25 степени за таксол који је укључен у организацију и постојаностАуНПс. КСРД узорак је потврдио успешну коњугацију таксола и ПВП-АуНП.Средња величина кристалита инкорпорираних АуНП-ова одређена је из Сцхерреровеједначина [52], а био је 20,2 нм за конзорцијум Такол-ПВП-АуНПс посредован гамазраци као што је поменуто у једначини:
где је Д просечна величина кристалита, пуна ширина на пола максимума, λ је рендгенски снимакталасна дужина, θ је Брагов угао,ик је константа.
Антиканцерогена активност коњугата таксол-ПВП-АуНПс
Тхеантипролиферативна активност таксол-ПВП-АуНПскоњугати су оцењени противХЕПГ-2 и МЦФ-7 ћелијске линије, које се нормализују на нативни таксол и АуНП, одвојено. Одрезултати (сл.6), биоактивност таксола је драматично повећана након коњугацијеса АуНП, у поређењу са природним таксолом као контролом. Како је откривено из ИК50вредности, таксол-Конзорцијум ПВП-АуНПс показао је значајну активност против ХЕПГ-2 (2,2 µг/мл) иМЦФ-7 (3,3 µг/мл) у поређењу са природним таксолом и АуНП одвојено. Дакле, након коњугацијеса АуНПс, активност таксола је повећана за два пута према испитиваним ћелијским линијама.Што се тиче биоактивности АуНП-а,антипролиферативна активностод таксол-ПВП-АуНПконзорцијум је повећан за око 4 пута у односу на АуНП као контролу. Занимљиво,активност конзорцијума Такол-АуНПс била је уверљиво конзистентна са аутентичним Таксолом.
Антимикробна активност таксола и синтетизованих АуНП против различитихМикроорганизми
Тхе аантимикробна активностод извученихА. фавусТакол и Такол-АуНПс конзорцијумје процењено на различите бактерије и гљивице отпорне на више лекова (табела7). По коњугацијиса АуНПс, антимикробна активност таксола је снажно повећана у поређењуна нативни таксол и АуНП одвојено, као што је откривено из пречника инхибицијезоне тестираних микроорганизама (сл.6). Као што је приказано на сл.6, Такол-АуНПС конзорцијум је показао највећу активност противЕ. агломерати(11 µг/мл),Ц. албицанс (12 µg/ мл), иЕ. цоли(14 µг/мл), у поређењу са природнимА. фавусТаксол и аутентични. Тхевећа активност таксола након коњугације са АуНПс потврђује биорасположивост,растворљивост и ефикасност таксола да се везује за циљни протеин тубулина ин виво.
ТРАЖИ ВИШЕ:
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com вхатсапп: плус 86 15292862950
