Кинеска медицина Цистанцхе Хемијски састав и анализа компоненти у телу Ⅲ

Поглавље 2 Квалитативна студија о хемијском саставу Цистанцхе десертицола

Цистанцхе је суво љускаво меснато стаблоЦистанцхе десертицола ИЦ.Маи Цистанцхе тубулоса (Сцхенк) Р.Вигхт. То је један од познатих традиционалних кинеских лекова који негују бубреге-јанг. Има функцијехранљиви бубрег-јанг, обнављање есенције и крви и влажење. Делује лаксативно и често се користи за лечење импотенције, неплодности, болова у струку и коленима, слабости мишића и костију, сувоће црева и затвора итд. Има фармаколошка дејства као што су анти- деменција, анти-Паркинсонова болест, заштита од церебралне исхемије и побољшање способности учења и памћења. Да би се разјаснила материјална основа заефикасност Цистанцхе десертицола, ово поглавље користи ХПЛЦ и ЛЦ-ИТ-ТОФ-МС за свеобухватну карактеризацијухемијске компоненте Цистанцхе. На основу систематског сажетка правила пуцања различитих врста хемијских компоненти, систематски се анализирају својства Цистанцхе десертицола. Хемијски састав, да обезбеди богате податке из поузданих извора задубинско расветљавањеод лековитих својставаЦистанцхе десертицолаин виво.

КОЛИКО ЈЕ ТРЕБА ДА ЦИСТАНЦХЕ проради?

Одељак 1 Експериментални материјали

1.Инструмент

Схимадзу ХПЛЦ-ИТ-ТОФ-МС спектрометар течне масе (опремљен са 2 ЛЦ-20АДКСР пумпе, СИЛ-20АЦ аутоматским узоркивачем, ЦТО-20АЦ колонском пећи, СПД-М20А УВ детектором, ДГУ-20А3Р машина за деконтаминацију гаса, ЦБМ-20А контролер, ЕСИ јонски извор, Схимадзу Цомпани, Јапан), Милли-К систем за пречишћавање ултра чисте воде (Милипоре Цомпани, САД): Меттлер МЕ204 електронска аналитичка вага ( Компанија Меттлер Толедо, Швајцарска).

2. Реагенси

Метанол, ацетонитрил и мравља киселина квалитета за хроматографију и масену спектрометрију су набављени од компаније Тхермо-Фисхер Цомпани (Питтсбургх, ПА, САД). Вода је била Милли-К ултрачиста вода направљена у лабораторији (Миллипоре, Бедфорд, МА, САД). Сви остали реагенси су аналитичког квалитета.

салидрозид, 6-деоксикаталпол, 8-епи-логанска киселина, ехинакозид, актеозид, изозид вербаскозид (изоактеозид) и пинорезинол- -Д-глукопиранозид (пинорезинол- -Д-глукопиранозид) оба је обезбедила истраживачка група професора Ту Пенгфеија у Кључној лабораторији природних и биомиметичких лекова на Универзитету у Пекингу. Саркозид Ф (цистанозидФ) је набављен од Цхенгду Мансите Биотецхнологи Цо., Лтд., цистанозид А (цистанозид А), 2'-ацетилактеозид (2'-ацетилактеозид), 2'-ацетилполиумозид (2'-ацетилполиумозид), цистанозид полиумозид (полиглукозид) ), цистанозид Е (цистанозидЕ), изоцистанозид Е (изоцистанозидЕ), цистанозид Ц (цистанозидЦ), изоцистанозид Ц (изоцистанозидЦ) и цистанозид Д (цистанозидД) су сви купљени од Схангхаи Схиданде Биотецхнологи Цо., Лтд., тубулозид А) (тубулозидА) тубулозид Б (тубулозидБ) купљени су од Цхенгду Веикеки Биотецхнологи Цо., Лтд.

Одељак 2 Експериментални садржај

1. Припрема узорка

1.1 Припрема референтне супстанце

Прецизно одмерити одговарајуће количине различитих референтних супстанци у горенаведеном "Одељак 1 Експериментални материјали" и припремити 10 мМ матичне растворе са ДМСО. Прецизно пипетирајте 2 мЛ сваког основног раствора и разблажите га са 25% ацетонитрила да бисте направили 2 μМ мешани контролни раствор. 1.2 Припрема раствора за испитивање

Водени екстракт Цистанцхе десертицола је направљен у нашој лабораторији, а узорак се чува у Модернизацијском истраживачком центру традиционалне кинеске медицине, Факултета традиционалне кинеске медицине, Пекиншког универзитета кинеске медицине. Узмите 20 мг праха Цистанцхе десертицола, додајте 40 мЛ воде да се раствори, промешајте и промешајте, центрифугирајте на 10000 обртаја у минути 10 минута и узмите супернатант. То јест, добијено је тестно решење.

3. Услови масене спектрометрије

Електроспреј јонски извор (ЕСИ), режим скенирања је скенирање позитивних и негативних јона истовремено и аутоматско покретање масене спектрометрије на више нивоа. Опсег скенирања масе МС'~МС' за позитивне јоне је м/з50~800, а за негативне јоне је м/з100~1000. Напони коморе за распршивање су 4,5кВ и -3.5кВ респективно: брзина протока гаса за распршивање (Нз) је 1,5Лмин; притисак гаса за сушење је 110МПа; напон детекције је 1,55 кВ; температуре закривљене цеви за десолвентизатор (ЦДЛ) и грејног модула су 200 степени. Притисак у колизионој комори је 1,5е-Па; притисак хватања јона је 2,8е-Па; број понављања позитивне и негативне прве фазе је 1, а време акумулације јона је 30 мс; број понављања позитивне и негативне друге фазе је 2, а време акумулације јона је 20мс. ; Енергија дисоцијације изазване сударом (ЦИД) је 50%.

Одељак 3 Резултати и дискусија

Избор колоне

Да бисмо постигли боље хроматографско раздвајање, детаљно смо прегледали хроматографске колоне различитих произвођача и спецификација, као што је АЦЕУлтраЦоре 2.5 СуперЦ8 хроматографска колона (3.0к150 мм, 2,5 ум, Адванце Цхроматограпхи Тецхнологиес Лтд., Абердеен), Сцот. Схисеидо Цапцелл Цоре Ци8 (2,1 мм к 150 мм, 2,7 μм), Ватерс Ацкуити УПЛЦ ХСС Т3 колона (2,1 к 100 мм, 1,8 μм, Милфорд, МА, САД) и Цапцелл Цоре АДМЕ колона (2,1 к 150 мм, 2,7 μм, Схисеи Цорпоратион Јапан). Систематским упоређивањем је установљено да када се користи Цапцелл Цоре АДМЕ хроматографска колона (2.1к150мм, 2.7μм, Схисеидо Цо., Лтд., Јапан), сваки хроматографски сигнал може бити боље раздвојен (слика 3-1).

2. Избор услова течне фазе

Пошто су главне хемијске компоненте одЦистанцхе десертицоласу фенилетанол гликозиди, лигнани, иридоиди и друга једињења, генерално боље реагује под условима негативних јона. Да би се идентификовале хемијске компоненте ниског нивоа у воденом екстракту Цистанцхе десертицола, спекулише се да ће можда бити потребно додати киселине у мобилну фазу да би се повећала снага. Стога је овај експеримент користио воду-метанол, вода-ацетонитрил, 0.1% мрављу киселину вода-метанол и 0.1% мрављу киселину вода-ацетонитрил као системе мобилне фазе за истраживање. Утврђено је да 0.1% мравља киселина вода-ацетонитрил има најбољи ефекат раздвајања, са добрим обликом врха и великим капацитетом врха, тако да су 0.1% вода мравље киселине и ацетонитрил изабрани као Мобилна фаза. 3. Квалитативна анализа хемијских компоненти. Користите 19 постојећих референтних супстанци да истражите правила фрагментације масене спектрометрије различитих типова једињења у Цистанцхе десертицола. Мешане референтне супстанце су ПДА хроматограми на 340 нм на АДМЕ колони и БПЦ графикони у модовима позитивних и негативних јона. Погледајте слику 3-1. Прегледали смо релевантну литературу кроз ПубМед, РСЦ, ЦНКл, Спрингер, СциенцеДирецт, ВИП и Ванфанг, итд., и конструисали самостално направљену базу података хемијских компоненти Цистанцхе десертицола. На основу поређења правила фрагментације масене спектрометрије и времена задржавања познатих једињења, прелиминарно смо идентификовали 45 једињења у Цистанцхе десертицола. једињења, укључујући 31 фенилетанол гликозид, 9 иридоида, 3 бензил гликозида и 2 лигнана, као што је приказано у табели 3-1.

Поређењем времена поверљивости, МС спектра и МС спектра референтне супстанце, једињења 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 су секвенцијално тачно идентификовани као генипин, цистанхеин Ф, цистанхеозид Е, ехинацеасиде, хризантозид, цистанхеин А, туберозин А, аришрезинол 4-0- -Д глукозид, гликозиди дивизма, изоканабиноид вербакозид, гликозид ехинацетил, цистетил метил пинозид гликозида Ц, изоцистанкозид Ц, туберозин Б и цистанцхе гликозид Д.

Овај експеримент користи ХПЛЦ-ИТ-ТОФ-МС технологију за брзу и прецизну систематску анализу сложених хемијских компоненти у воденом екстракту Цистанцхе десертицола, што пружа основу за свеобухватну анализу квалитета Цистанцхе десертицола и истраживања фармаколошких супстанци ин виво.

Слика 3-1 Хроматограм мешане референтне супстанце Горе: БПЦ графикон у режиму позитивних јона: Доле: БПЦ графикон у режиму негативних јона

Слика 3-1 Хроматограм мешане референтне супстанце Горе: БПЦ графикон у режиму позитивних јона: Доле: БПЦ графикон у режиму негативних јона