Активне флавоноидне компоненте и потенцијални механизми надземних делова Глициррхиза Ураленсис за хронични простатитис на основу мрежне фармакологије и експерименталне валидације
Nov 06, 2025
Апстракт:
Циљ: Утврдити активне састојке и могуће механизме деловања флавоноида из надземних делова Цистанцхе код хроничног простатитиса. Методе: Течна хроматографија ултра-перформансе–квадрупол–електростатичко поље Масена спектрометрија високе резолуције Орбитрап (УПЛЦ-К-Екацтиве Орбитрап-МС) коришћена је за идентификацију главних флавоноидних састојака у алкохолном екстракту надземних делова Цистанцхеа. Мрежна фармакологија и молекуларно спајање су коришћени за предвиђање кључних компоненти и кључних циљева повезаних са хроничним простатитисом. Модел хроничног простатитиса пацова индукован је карагенаном, а хистопатолошке промене у простатити пацова примећене су ХЕ бојењем. Нивои ДХТ, ИФН-, ИгГ, IL-6, ПСА и ТНФ-а у серуму су мерени ЕЛИСА тестом да би се проценила терапијска ефикасност екстракта. Резултати: У алкохолном екстракту идентификовано је укупно 44 флавоноида. Мрежна фармакологија је показала да кључне компоненте, укључујући глициризин, трихотецен изофлавоне, бодљикаву манзанита флориферу и глициризин (предвиђено као репрезентативни састојци), испољавају ефекте против хроничног простатитиса делујући на кључне мете као што су повезани АКТ1, ТНФ, ВЕГФА, ЕГФР, сигнални путеви који регулишу тамо. Молекуларно спајање показало је повољне афинитете везивања између кључних компоненти и кључних циљева. Експерименти на животињама су показали да алкохолни екстракт надземних делова Цистанцхеа даје јасан терапеутски ефекат на хронични простатитис код пацова. Закључак: Потврђена је ефикасност против хроничног простатитиса надземних делова Цистанцхеа. Активне компоненте, укључујући бодљикави аристолохицин, трихостатин изофлавоне и глициризин, могу деловати преко ПИ3К-АКТ сигналног пута да модулишу ЕГФР, АКТ1 и ММП9.
Кључне речи: надземни делови Цистанче; хронични простатитис; флавоноида; УПЛЦ-К-Екацтиве Орбитрап-МС; мрежна фармакологија
цистанцхе користи за здравље простате
Увод:
Традиционална кинеска лековита биљка Цистанцхе (Цистанцхе спп.) се састоји од сушеног лековитог материјала који се првенствено користи у ТКМ. То је важан масовни медицински ресурс у Кини, са функцијама као што су тонирање и подржавање телесних функција, чишћење топлоте и детоксикација, ублажавање болова и усклађивање формула, и обично се користи као помоћна компонента у многим рецептима са више биљака. Тржишна потражња је велика и на домаћем и на међународном нивоу. Надземни делови, укључујући стабљике и листове, су богати ресурси који чекају развој и коришћење.
Хронични простатитис је уобичајена уролошка болест код мушкараца младих и средњих година. Клинички симптоми укључују бол у доњем делу стомака или карлице, дисурију и учесталост мокрења. Без благовременог лечења, може довести до сексуалне дисфункције као што је превремена ејакулација и еректилна дисфункција, што озбиљно утиче на физичко и ментално здравље мушкараца.
Флавоноиди су у изобиљу у надземним деловима Цистанцхеа и показују значајне антиинфламаторне и антитуморске активности. Претходне студије су показале да су надземни делови богати флавоноидима са антитуморским и антиинфламаторним дејством. Обогаћивање флавоноида из надземних делова показало је добру антиоксидативну активност ин витро. Фармакодинамичка истраживања су такође показала да флавоноиди из надземних делова имају превентивно и терапијско дејство на хронични простатитис.
У овој студији, УПЛЦ-К-Екацтиве Орбитрап-МС је коришћен за профилисање флавоноида у алкохолном екстракту надземних делова Цистанцхеа. Мрежна фармакологија је примењена за предвиђање кључних циљева и путева за хронични простатитис, молекуларно спајање је коришћено да би се закључили механизми, а експерименти на животињама су спроведени да би се потврдила активност против хроничног простатитиса, пружајући референцу за каснији развој лекова и клиничку примену.
Материјали
Животиње
СПФ мушки СД пацови (н=24), стари 6–7 недеља, телесна тежина 230–250 г [Беијинг Спеифу Биотецхнологи Цо., Лтд.; лиценца за производњу: СЦКСК (Јинг) 2019-0010]. Животиње су биле смештене у СПФ објекту за животиње у Центру за експерименталне животиње Пекиншког универзитета кинеске медицине. Протокол је одобрио институционални етички комитет (бр. одобрења: BUCM-2023110204-4271).
Инструменти
Ултимате 3000 УПЛЦ систем (Дионек, САД)
Тхермо К Екацтиве Плус масени спектрометар високе резолуције (Тхермо Фисхер Сциентифиц, САД)
КХ500ДЕ дигитални ултразвучни чистач (Кунсхан Хецхуанг)
ФА2004Н електронска вага (Пекинг Сарториус)
Х1650 расхладна центрифуга мале брзине (Цхангсха Ксиангии)
RE-5023 ротациони испаривач (Схангхаи Иаронг)
Електронски грејни плашт са контролисаном температуром (Тиањин Тесте)
Мултискан МК3 читач микроплоча (Тхермо Сциентифиц, Шангај)
Б032 флуоресцентни инвертовани биолошки микроскоп (Никон Инструментс, Шангај)
Н5000 УВ спектрофотометар (Схангхаи Иоуке)
Реагенси
Ваздушни делови Цистанцхеа (стабљике, листови и мала количина махуна) убрани су у септембру 2019. из округа Гуазхоу, града Јиукуан, провинција Гансу, а аутентичност их је потврдио проф. Ванг Венкуан (Институт за развој лековитог биља, ЦАМС) као Цистанцхе спп.
Остали реагенси: Улатан (Схандонг Кеиуан Биоцхемицал Цо., серија Ц15887472); карагенан (Пекинг Соларбио, серија 20220601); Кианлиеканг Пуле'ан таблете (Зхејианг Цонба Пхармацеутицал); натријум карбоксиметил целулоза (ЦМЦ-На; Схангхаи ИуанИе, серија С14016); ЕЛИСА комплети за пацовске ДХТ, ИФН-, ИгГ, IL-6, ПСА и ТНФ- (Схангхаи Ензиме-линкед Биотецхнологи); Мултискан МК3 читач микроплоча (Тхермо Сциентифиц); средство за фиксирање ткива (Гуангзхоу Схуопу, серија 23257838); етанол (Пекинг Цхемицал Воркс, аналитичка квалитета); метанол, мравља киселина, ацетонитрил (Фисхер Сциентифиц, МС граде); вода (Вахаха група). Референтни стандарди (чистоћа > 98%, Схангхаи ИуанИе): ликвиритгенин, пуерарин, изооријентин ИИ, нарингенин, изокверцитрин, изоликвиритин, ононин, изокверцитрин, кверцетин, астрагалин, кемпферол, формононетин.
Методе и резултати
2.1 Хемијско профилисање алкохолног екстракта из надземних делова Цистанцхеа
2.1.1 Припрема узорка
Одговарајуће количине надземних делова екстраховане су са 70% етанолом. Екстракт је концентрован до сува. Остатак је ултразвучно растворен у води током 20 минута, центрифугиран на 3000 р·мин-1 током 15 минута, а супернатант је концентрован до сува. Одговарајућа количина осушеног узорка је стављена у волуметријски балон од 5 мЛ и доведена до запремине са метанолом да би се добио тест раствор.
2.1.2 Хроматографски и масени спектрометријски услови
УПЛЦ услови: АЦКУИТИ УПЛЦ БЕХ Ц18 колона (2,1 мм × 100 мм, 1,7 μм); мобилна фаза А, ацетонитрил; мобилна фаза Б, 0,5% мравље киселине у води; градијент елуирања (0–20 мин, 5%–20% А; 20–70 мин, 20%–30% А); проток 0,2 мЛ·мин-1; запремина ињекције 2 μЛ; температура колоне 30 степени.
МС услови: ХЕСИ извор; мод позитивних и негативних јона; потпуно скенирање; напон прскања +3.2 кВ (позитиван) и −3,0 кВ (негативан); температура капилара 320 степени; плашт гас 40 арб; помоћни гас 15 арб; помоћни грејач 350 степени ; МС резолуција 70.000; МС/МС резолуција 17,500; опсег скенирања м/з 100–1500.
Листа спецификација Цистанцхе
2.1.3 Идентификација компоненте
Узорак ваздушног дела је анализиран помоћу УПЛЦ-К-Екацтиве Орбитрап-МС да би се добили ТИЦ (Слика 1). Подаци су обрађени са Тхермо Ксцалибуром и упоређени са библиотекама компоненти и литературом, идентификујући укупно 44 флавоноида (Табела 1).
2.2 Мрежна фармакологија
Идентификовани састојци су увезени у ТЦМСП 2.3 базу података (хттп://тцмспв.цом/тцмсп.пхп). На основу оралне биорасположивости (ОБ) веће од или једнако 30,00% и сличности са леком (ДЛ) веће од или једнако 0,18, 19 активних компоненти је прегледано. Предвиђени циљеви активних компоненти и циљеви болести за хронични простатитис су укрштени, дајући 88 заједничких циљева. СТРИНГ 11.0 (хттп://стринг-дб.орг) је коришћен за изградњу ППИ мреже. Основни циљеви рангирани по степену укључивали су АКТ1, ТНФ, ВЕГФА, ЕГФР, СРЦ, ЕСР1, ПТГС2, ММП9, БЦЛ2Л1 и ММП2. ГО и КЕГГ обогаћивање (ДАВИД 6.8, хттп://давид.нцифцрф.гов) указује на биолошке процесе као што су позитивна регулација протеин киназе Б, негативна регулација апоптозе и позитивна регулација активности МАПК; ћелијске компоненте укључујући екстрацелуларни регион, макромолекуларне комплексе и рецепторске комплексе; молекуларне функције укључујући активности тирозин киназе, серин киназе и треонин киназе. КЕГГ путеви су обогаћени путевима код рака, ПИ3К-АКТ сигнализације, рака простате и отпорности на инхибиторе ЕГФР тирозин киназе. Цитосцапе 3.7.1 је коришћен за конструисање мреже „активна компонента–језгро циљ–пут“ (слика 2). Првих 10 компоненти по степену били су ликвиритигенин, спинацетин (репрезентативни флавон), изовитексин, кризоериол, сантин, кемпферол, шафтозид, лутеолин, ононин и формононетин.
Молекуларно спајање је обављено у пару између 10 компоненти језгра и кључних циљева из ППИ анализе. Молекуларне структуре основних компоненти су преузете из ТЦМСП 2.3 (мол2 формат), а 3Д структуре кључних циљева су добијене из ПДБ (хттп://ввв.рсцб.орг/) у пдб формату. Аутодоцк је коришћен за спајање сваког пара лиганд-протеин. Енергије везивања < −20,92 кЈ·мол−1 указују на повољно везивање; што је енергија нижа, то је бољи афинитет. Парови циљ-лиганд са најбољим резултатом наведени су у Табели 2. Репрезентативни комплекси пристајања са пет циљева су визуелизовани у ПиМол (слика 3).
2.3 Ин виво валидација
Модел хроничног простатитиса пацова је успостављен коришћењем карагенана. ХЕ бојење је открило хистопатолошке лезије карактеристичне за хронични простатитис код моделних животиња, док је третман алкохолним екстрактом надземних делова Цистанцхеа побољшао архитектуру жлезде и смањио инфламаторну инфилтрацију. ЕЛИСА је показала да, у поређењу са моделном групом, групе за лечење показују регулацију серумских ДХТ, ИФН-, ИгГ, IL-6, ПСА и ТНФ- према нормалним нивоима, што указује на терапијску ефикасност.
Дискусија
Свеобухватна анализа која интегрише профилисање засновано на МС високе резолуције, мрежну фармакологију, молекуларно спајање и валидацију животиња подржава да флавоноиди из надземних делова Цистанцхе-а испољавају ефекте против хроничног простатитиса. Претпостављени механизми укључују модулацију ПИ3К-АКТ и сродних путева повезаних са упалом и пролиферацијом и кључне мете као што су ЕГФР, АКТ1 и ММП9. Резултати дају научну основу за развој и клиничку примену флавоноидних препарата из ваздуха из Цистанцхеа у лечењу хроничног простатитиса.
Закључак
Флавоноиди из надземних делова Цистанцхеа показују терапеутски потенцијал против хроничног простатитиса, вероватно путем регулације ПИ3К-АКТ пута и интеракције са ЕГФР, АКТ1 и ММП9. Интеграција хемијског профилисања, мрежне фармакологије, молекуларног спајања и експеримената на животињама потврђује њихову ефикасност и разјашњава уверљиве механизме.
