Цистанцхе: Производња азотног оксида изазвана ехинакозидом у ендотелним ћелијама: улоге андрогених рецептора и ПИ3К-Акт пут

Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com

ЛИ ГУ, ДАНХОНГ ЛИАН, ИИМЕИ ЗХЕНГ, ВЕИ ЗХОУ, ЈИНЛЕИ ГУ и КСИН ЛИУ

Увод

ЦистанцхеХоффмг. Ет Линк је вишегодишња паразитска биљка из рода породице Оробанцхацеае. ХербаЦистанцхе, стабљикаЦистанцхе десертицолаИ. ц . МА иЦистанцхе тубулоса(Сцхенк) Р. Веигхт, коришћени су као тоник за лечење недостатка бубрега, импотенције, морбидне леукореје и сенилне констипације (1), што може бити последица његовог регулационог ефекта сличног андрогену или полним хормонима (2).Ецхинацосиде(ЕцХ; ц35Х46О20;

молекулска тежина, 786,73; Слика 1), један је од фенилетаноидних гликозида (ПхГ) изолованих из стабљика Хербе.Цистанцхе, и показује вишеструка биолошка својства, укључујући антиоксидативна, антиагинг, антиинфламаторна, хепатопротективна и неуропротективна дејства (3). Савремена фармаколошка истраживања су показала да различити састојци ХербеЦистанцхе, укључујући ЕцХ, актеозид, канканозу, канканозид Ф и цистанозид Ф, показују вазорелаксансу активност (4).

Ендотел је критични регулатор васкулатуре, а азот оксид (НО) је важан релаксирајући фактор који ослобађају ендотелне ћелије. Дифузијом у ћелије глатких мишића, НО активира гванилат циклазу, повећава нивое цикличног гванозин монофосфата (цГМП), а затим активира цГМП зависне протеин киназе (ПКГ) како би промовисао релаксацију глатких мишића (5). Раније је показано да ЕцХ на 350-400 µМ директно делује на глатке мишиће крвних судова и инхибира пролиферацију изазвану хипоксијом у ћелијама глатких мишића плућне артерије пацова (6), док је 30-300 µМ ЕцХ изазвао акутну вазорелаксацију у ендотелу- интактни прстенови на начин који зависи од концентрације, и повећана производња цГМП у глатким мишићима кавернозног тела аортних прстенова уговорених фенилефрин (7). Отварањем НО-цГМП-ПКГ-БКца канала у ћелијама глатких мишића, 100 или 300 µМ ЕцХ потиснуо је норадреналином индуковану контракцију у плућним артеријама пацова, посебно у прстеновима без ендотела (8). Ендотелне ћелије су кључни регулатори кардиоваскуларне функције и, у неколико случајева, откривено је да је ендотелијално зависна релаксација последица преносиве супстанце, као што је НО, која се ослобађа из ендотела (9). Међутим, узводни молекуларни механизам производње НО изазване ЕцХ у васкуларним ендотелним ћелијама захтева даље истраживање.

У васкуларном ендотелу, стварање НО примарно је посредовано ендотелном НО синтазом (еНОС). Неколико група је показало да пут фосфатидилинозитол 3-киназе (ПИ3К) активира серин треонин протеин киназу Б (Акт), што изазива директну фосфорилацију еНОС на серин 1177 (Сер1177) (10). Андрогени рецептор (АР) је члан подфамилије нуклеарних рецептора с3, који канонски модификује експресију гена. Укључена је АР локализација на кавеоле у ​​ћелијској мембрани

негеномска регулација функције ендотелних ћелија или експресије гена покретањем каскаде ц-Срц/ПИ3К/Акт, што на крају доводи до фосфорилације еНОС и производње НО (11). У ћелијама ендотела људске аорте, пријављено је да тестостерон активира ПИ3К/Акт сигнализацију и брзо индукује производњу НО услед директне интеракције АР и п85 подјединице ПИ3К на кардиоваскуларном систему (12). Пријављено је да ЕцХ погоршава симптоме повезане са недостатком хормона и испољава своје ефекте сличне андрогену због компетитивног везивања за АР уместо за тестостерон (2). Стога је ова студија претпоставила да пут ПИ3К/Акт може бити укључен у производњу НО кроз АР-зависну фосфорилацију еНОС индуковану ЕцХ. Циљ ове студије је био да се процене следећи ефекти ЕцХ: и) Индукција производње НО и фосфорилација еНОС; ии) учешће АР у фосфорилацији еНОС; и иии) активација ПИ3К/Акт пута у ендотелним ћелијама умбиликалне вене (ХУВЕцс), добро познати експериментални модел за проучавање регулације функција ендотелних ћелија и ангиогенезе (13).

Материјали и методе

хемикалије и реагенси.ЕцХ (чистоћа, 92,5 процената) је добијен од Националних референтних стандарда за лекове у Националном институту за контролу хране и лекова. Антитела против п-Акт (Сер473; кат. бр. аб8805), Акт (кат. бр. аб81283), п-еНОС (Сер1177; кат. бр. аб184154) и еНОС (кат. бр. аб76198) су купљена од Абцам-а. Инхибитори нилутамида и ИцИ 182780 су добијени од Сигма-Алдрицх; Мерцк КГаА. Л-НАМЕ је купљен од Адамас-Бета, Лтд., а вортманин је купљен од Приболаба.

Ћелија културе анддруг третман.ХУВЕц су добијени од Сциенцелл Ресеарцх Лабораториес Инц. и култивисани у медијуму ендотелних ћелија (ЕцМ; Сциенцелл Ресеарцх Лабораториес) са 5 процената (в/в) феталног говеђег серума (ФБС; Гибцо, Тхермо Фисхер Сциентифиц, Инц.) и 1 проценат ендотелних ћелија додатак за раст (ЕЦГС) на 37˚Ц (5 процената ЦО2 и 95 процената влажности) (14). По достизању конфлуенције, ћелије су дигестиране са трипсином и постављене у ЕцМ са 1 процентом ФБС и 1 процентом ЕцГС. За све експерименте, ХУВЕц су постављени у концентрацији од 1к104/мл и узгајани до конфлуенције. Пре третмана са ЕцХ или другим стимулаторима, ћелије су инкубиране у ЕцМ без фенол црвеног без ФБС и ЕцГС током 6 х да би се изазвало

заустављање раста. У инхибиторним експериментима, ХУВЕц су претходно инкубирани са различитим антагонистима или инхибиторима, укључујући 10 µМ нилутамид, 10 µМ ИцИ 182780, 0,5 мМ Л-НАМЕ или 5 µМ вортманина, током 30 мин. са или без ЕЦХ, на 37˚Ц. У свим групама, укључујући и контролу, дМСО је коришћен као растварач у једнаким концентрацијама од 0,001 процената.

Меасурементоф унутарћелијски НОпродуцтион.

Релативне промене у концентрацији НО у цитосолу у ХУВЕц су праћене коришћењем флуоресцентне НО сонде ДАФ-ФМ (Цаиман Цхемицал Цомпани), као што је раније објављено (12). Укратко, ћелије су напуњене са 5 µМ ДАФ-ФМ диацетата током 20 минута на 37°Ц у црној микротитарској плочи и испране неколико пута са ПБС (пХ 7,4). Флуоресценција је одређена при таласним дужинама ексцитације и емисије од 495 и 515 нм, респективно, коришћењем читача флуоресцентних микроплоча (Биотек Синерги Х4; БиоТек Инструментс, Инц.) и компактног инвертованог микроскопа (Никон ецлипсе Тс2Р; Никон корпорација).

Вестерн мрља анализа.Као што је раније објављено (15), конфлуентни монослојеви ћелија су два пута испрани у ледено хладном ПБС-у и лизирани РИПА пуфером (П0013д; Беиотиме Институте оф Биотецхнологи). Концентрација протеина у супернатанту мерена је методом анализе бицинхонинске киселине (16). Након тога, 30 µг протеина је напуњено по траци, одвојено коришћењем 10% полиакриламидних гелова и пребачено на поливинилиден дифлуоридне мембране. Мембране су блокиране са 5% обраног млека током 1 х на 25˚Ц. Након инкубације са моноклонским антителима против Акт (1:1,000 разблаживање), п-Акт (1:500 разблаживање), еНОС (1:2,000 разблаживање) или п-еНОС (1 :1,000 разблаживање) на 4˚Ц преко ноћи, мембране су испране ТБСТ-ом (који садржи 0,1 проценат Твеен-20) 4 пута по ~15 мин по прању на 25˚Ц. Након тога, мембране су инкубиране са секундарним антителима коњугованим с пероксидазом рена (1:5,000 разблажење; анти-мишје антитело, кат. бр. А0216, или антитело против зеца, кат. бр. А0208, Беиотиме Институте биотехнологије) током 1 х на 25˚Ц и детектован коришћењем комплета за побољшану хемилуминисценцију (кат. бр. 32209, Тхермо Фисхер Сциентифиц, Инц.). Интензитет трака је квантификован коришћењем софтвера за анализу гела Имаге Ј, верзија 1.8.0_112 (Национални институти за здравље).

Мала мешајући се (си) РНА припрема и трансфекција.Дуге дволанчане РНК су синтетизоване од стране циљне мРНК АР и рецептора естрогена (ЕР) са секвенцама приказаним у Табели И. Услови за уништавање сиРНА укључивали су трансфекцију ХУВЕЦ-а на 70 посто конфлуенце одржаване у не-антимикробном медијум за културу у посудама за културу прекривеним колагеном од 60 мм. Трансфекција 5 нМ АР-сиРНА или 10 нМ ЕР-сиРНА са Липофецтамине 3000 реагенсом (Инвитроген; Тхермо Фисхер Сциентифиц, Инц.) је извршена одвојено, према протоколима произвођача. Ефикасност трансфекције је процењена квантитативном ПцР анализом реверзне транскрипције (РТ-кПцР), као што је раније објављено (17). Услови термоциклирања били су следећи: 10 мин на 95˚Ц; 40 циклуса од 95˚Ц током 5 секунди и 60˚Ц током 1 мин, и крива топљења на 95˚Ц током 15 секунди, 60˚Ц током 1 мин и 95˚Ц током 15 секунди; изведене су три независне биолошке реплике за сваки узорак. Следећи експерименти су спроведени 48 х након трансфекције. Парови прајмера су дизајнирани коришћењем софтвера Пример Премиер в5.0 (ПРЕМИЕР Биософт) са следећим секвенцама: АР напред, 5'-ГГТТАцАццАААГГГцТАГАА-3' и обрнуто, 5'-ГАцТТГТАГАГАГАцАГГГТАГА-3'; ЕР напред, 5'-ццАГТАццА АТГАцА АГГ ГААГ -3' и назад, 5'-ТцАцАГГАццАГАцТццАТАА-3'; и ГАПдХ напред, 5'-цАГГГцТГцТТТТААцТцТГГТАА-3' и назад, 5'-ГГГТГГААТцАТАТТГГААцАТГТ-3'.

Статистички анализа.Сви подаци су представљени као средња вредност ± стандардна девијација. Статистичка поређења између група вршена су коришћењем Крускал-Волисовог теста или двосмерне АНОВА са Тукијевим пост хоц тестом за вишеструка поређења. П<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Резултати

ЕЦХ индукује НЕ производње и еНОСпхоспхорилатион.Као што је приказано на сликама 2А и Б, 1 µМ ЕЦХ је значајно повећао интрацелуларну производњу НО у ХУВЕц у поређењу са негативним контролним ћелијама, док је стимулативни ефекат ЕцХ ослабљен на ниво контроле претходном обрадом са Л-НАМЕ. Да би се добила оптимална концентрација, еНОС фосфорилација је тестирана 60 минута након третмана са ЕцХ у концентрацијама

од {{0}}, 0.01, 0.1, 1 и 10 µМ. Резултати су открили да ЕцХ у концентрацијама од 0,01-10 µМ може значајно индуковати фосфорилацију еНОС на Сер 1177 на начин зависан од концентрације, при чему је максимална фосфорилација еНОС примећена при индукцији ЕцХ од 10 µМ (сл. 2ц и д). Штавише, фосфорилација еНОС на Сер1177 је испитана Вестерн блот анализом на 0, 5, 15, 30, 60 и 120 минута након инкубације са 1 µМ ЕцХ. Примећено је да је фосфорилација еНОС брзо покренута од стране ЕцХ на 5 минута, и да је наставила да расте до 30 минута инкубације (Слике 2Е и Ф). Након тога, упркос третману ЕцХ, релативна величина еНОС фосфорилације остала је стабилна од 30 минута надаље; стога, ЕцХ није утицао на укупну експресију еНОС (сл. 2ц и Е).

АР посредује ЕЦХ-индуковано НЕ производње и еНОСинтерферирајући ефекти АР-сиРНА-1 и ЕР-сиРНА-2 били су најуспешнији у инхибицији експресије АР и ЕР у ХУВЕцс у овој студији (слика 3). Затим су примењени антагонист за анализу инхибиције функције АР и сиРНА за анализу губитка функције АР да би се проценило учешће АР у активацији еНОС изазваној ЕцХ и производњи НО. Као што је приказано на слици 4А, 1 µМ ЕЦХ значајно повећава производњу НО у ХУВЕц (П<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ЕЦХ активира тхе ПИ3К/Акт стаза.У овој студији, Акт фосфорилација на Сер473 је тестирана 60 мин након ЕцХ инкубације при концентрацијама 0, 0.01, 0.1 , 1 и 10 µМ. Резултати су показали да ЕцХ (0.01-10 µМ) може значајно да индукује Акт фосфорилацију. Релативни нивои експресије п-Акт достигли су максимум на 1 и 10 µМ третмана ЕцХ (Слике 5А и Б). Штавише, Акт фосфорилација је испитана Вестерн блот анализом на 0, 5, 15, 30, 60 и 120 минута након додавања 1 µМ ЕцХ у ХУВЕц културе. Као што је приказано на сликама 5ц и д, ЕцХ је брзо повећао Акт фосфорилацију након 5 минута инкубације, а максимални ниво протеина п-Акт је примећен на 60 минута. Насупрот томе, ЕцХ није утицао на укупну експресију Акт (слике 5А и ц). Штавише, да би се истражио потенцијални ефекат ПИ3К пута на фосфорилацију еНОС, ХУВЕц су претходно третирани ПИ3К инхибитором вортманином пре примене ЕцХ. Утврђено је да вортманин смањује производњу НО изазвану ЕцХ на основне нивое (слика 5Е). Сличан феномен је примећен коришћењем флуоресцентне микроскопије приликом испитивања флуоресценције ДАФ-ФМ изазване ЕцХ (слика 5Ф). Штавише, вортманин може имати способност да укине брзу фосфорилацију еНОС у ХУВЕцс (Слика 5Г и Х). Горе наведени резултати сугеришу да ЕцХ може активирати фосфорилацију еНОС и производњу НО путем ПИ3К/Акт пута.

Дискусија

ЕцХ је природно једињење изоловано из ХербеЦистанцхе, са различитим фармаколошким својствима. Претходно је показано да ЕцХ испољава ефекат васкуларне релаксације зависан од ендотела отварањем НО-цГМП-ПКГ-БКца канала у ћелијама глатких мишића крвних судова (7,8). Садашњи налази пружају доказе да је ЕЦХ извршио АР-зависну активацију еНОС-а да изазове производњу НО уз учешће ПИ3К/Акт сигналног пута у васкуларним ендотелним ћелијама.

Као унутрашњи слој зида крвних судова, ендотел може брзо да осети и реагује на промене у протоку крви, што заузврат доводи до преноса сигнала до глатких мишићних ћелија испод како би се регулисао васкуларни тонус (18). Широко је објављено да постоји више вазодилататорних једињења добијених из ендотела, са најпрототипијом супстанцомбудући да је НО, формиран из ендотелне изоформе еНОС-а, што резултира фосфорилацијом (19). У нормалним условима, еНОС остаје неактиван када је везан за кавеолин, и активира се следећим низом догађаја у ендотелућелије: и) еНОС се одваја од кавеолина-1 и повезује се са ца2 плус /цаМ; ии) протеин топлотног шока (ХСП)90 промовише еНОСдимеризацију и фаворизује стеричне формације за регрутовање Акт; и иии) калцинеурин дефосфорилише Тхр495 да би појачао стање активације (20). У овој студији, производња НО је значајно повећана у ХУВЕЦс третираним са 1 µМ ЕЦХ. Овај феномен је био сличан претходним резултатима, где је ЕцХ повећао ослобађање НО и стимулисао синтезу цГМП у прстеновима торакалне аорте пацова (7). Штавише, чини се да су два места фосфорилације, Сер1177 и Тхр495, посебно важна за регулисање активности еНОС (20), а ова студија је открила да је ЕцХ индуковао акутну фосфорилацију еНОС у Сер1177 на начин који зависи од концентрације. Поред тога, стимуланси повезани са ефектима на нивое протеина еНОС углавном одређују стабилност еНОС мРНК, а ако се стимулус одржава дужи временски период, до транскрипције еНОС мРНК долази преко протеин киназе активиране митогеном и нуклеарног фактора κБ (20). Узето заједно, ова запажања указују да је активација еНОС-а на Сер1177 одговорна за синтезу НО изазвану ЕцХ.

Штавише, све већи број студија је показао да се АР експримује у ендотелним ћелијама у великом броју људских ткива, што сугерише потенцијалну улогу андрогена и њихових аналога, који делују кроз АР-посредоване процесе, у модулацији људског ендотела. ћелијска хомеостаза (21). У некласичном ПИ3К/Акт путу, АР може активирати ПИ3К директном интеракцијом са ПИ3К регулаторном подјединицом п85 (22). Ова студија је показала да АР антагонист или АР сиРНА смањује производњу НО и фосфорилацију еНОС изазвану ЕцХ у ХУВЕцс. Раније је објављено да естрогени индукују фосфорилацију еНОС и стимулишу производњу НО путем класичне активације ЕР у ендотелним ћелијама (23), а примена ЕЦХ значајно појачава експресију ЕР у материци (24). Међутим, у овој студији, ефекат АР је био истакнутији у поређењу са ЕР на активацију еНОС изазвану ЕцХ и производњу НО. Поред тога, примећено је да је ЕцХ изазвао акутну производњу НО у року од неколико минута путем АР-укључене еНОС активације у ХУВЕцс, што је у складу са негеномском природом одговора у ендотелним ћелијама. АР је повезан са протеинима скеле, укључујући ХСП90, ХСП70 и киназу Срц, у цитоплазми, и може се транспортовати до мембране из АР комплекса у року од 5 минута од третмана тестостероном (23). На основу стратегије 'циљаног риболова', ХСП90 је идентификован као мета повезана са ПхГс, што указује да ЕцХ може олакшати дисоцијацију АР од протеина скеле (25). Друга студија је сугерисала да, у хипоталамусу, ЕцХ може да се комбинује са АР џепом на аминокиселинама Мет-894 и Вал-713 и инхибира транспорт цитоплазматског АР у језгро (26). Међутим, основни механизам кроз који ЕцХ посредује цитоплазматску АР транслокацију на мембрану захтева даље истраживање. Због тога су потребна даља истраживања да би се разјаснио механизам путем којег ЕцХ постиже АР-зависну активацију еНОС-а и како то може бити повезано са везивањем за ХСП90 у васкуларним ендотелним ћелијама.

ПИ3К/Акт пут је једна од најважнијих сигналних каскада, чија је активација индукована производњом фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфата да се веже Н-терминални хомолошки домен плекстрина Сер/ Тхр кинасе Акт. Ово олакшава регрутовање Акт-а на плазма мембрану (27). ПИ3К/Акт пут може играти важну улогу у контроли релаксације зависне од НО изазване ЕцХ.

Ова студија је открила да је производња НО изазвана ЕцХ значајно смањена када су ћелије инкубиране са ПИ3К инхибитором вортманином. Претходни извештај је показао да 15 мг/кг ЕцХ активира ПИ3К/Акт сигнални пут у ћелијама коштане сржи супримираним 5‑флуороурацилом (28). У овој студији, ПИ3К инхибитори су значајно смањили ЕцХ-индуковану фосфорилацију еНОС на Сер1177. Штавише, активност Акт је била претежно регулисана узводним регулаторним путевима, посебно фосфорилацијом зависном од ПИ3К на Сер473 (20). У овој студији, ЕцХ је индуковао Акт фосфорилацију на Сер473 на начин зависан од дозе; Слично томе, претходна студија је показала да 5, 10 или 20 µМ ЕцХ испољава кардиопротективни ефекат против третмана аноксије/реперфузије на начин зависан од дозе, потенцијално повећавајући п-Акт и СЛц8А3 (29). Регулација транскрипције Акт гена остаје углавном непозната (30); стога, ова студија се фокусирала на пост-транскрипционе регулаторне ефекте ЕцХ на Акт. Узимајући у обзир горе поменуте налазе, закључено је да примена ЕцХ на ХУВЕцс може довести до активације ПИ3К/Акт пута, који фосфорилише еНОС и, након тога, повећава производњу НО.

У закључку, ЕцХ је природни производ који је углавном изолован од ХербеЦистанцхе.Потенцијални механизам који лежи у основи ЕцХ-индуковане производње НО у ендотелним ћелијама може укључивати следеће (слика 6): и) ЕцХ делује као функционални лиганд АР који је локализован на кавеолама у ћелијској мембрани; ии) ПИ3К се везује за хидрофобни домен Акт на Сер473 и олакшава регрутовање Акт-а на ћелијску мембрану; иии) регрутовање ПИ3К/Акт каскада покреће АР-зависну еНОС фосфорилацију; и ив) стварање НО је посредовано еНОС у ендотелним ћелијама. Опажање да ЕцХ индукује производњу НО кроз АР-зависну фосфорилацију еНОС-а уз учешће ПИ3К/Акт пута може допринети даљем разумевању вазорелаксанса ЕцХ. Штавише, ЕцХ који циља на НО путеве изведене из ендотела може бити последица негеномских ефеката. Стога, ова студија може помоћи у разјашњавању механизама кроз које ЕцХ испољава своје фармаколошке ефекте у превенцији кардиоваскуларних болести.

Признања

Није применљиво.

Финансирање

Ова студија је подржана од стране Националне фондације за природне науке Кине (грант бр. 81503333).

Доступност оф података и материјала

Скупови података генерисани и анализирани током ове студије доступни су од одговарајућег аутора на разуман захтев.

аутори доприноси

ЛГ и КСЛ су осмислили и дизајнирали експерименте. дЛ и ИЗ су извели експерименте. ВЗ и ЈГ анализирали су податке. ЛГ је саставио рукопис. КСЛ је прегледао и уредио рукопис. Сви аутори су прочитали и одобрили коначни рукопис.

1202 ГУет ал: ЕЦХИНАЦОСИД ИНДУЦИРА ПРОИЗВОДЊУ АЗОТА ОКСИДА ПУТЕМ ПИ3К/АКТ-ЗАВИСНОГ АР

Етика одобрење и сагласност до учествовати

Није применљиво.

Пацијент сагласност за публикација

Није применљиво.

Надметати се интересовања

Аутори изјављују да немају супротстављене интересе.

Референце

1. Комисија за кинеску фармакопеју:ЦистанцхеХерба. У: Фармакопеја Народне Републике Кине 1. цхин. Мед. Сци. Пресс, Пекинг, стр. 135, 2015.

2. Јианг З, Ванг Ј, Ли Кс и Зханг Кс: Ецхинацосиде иЦистанцхе тубулоса(Сцхенк)Р. вигхт побољшава оштећење тестиса и сперматозоида изазвано бисфенолом А код пацова путем стероидогених ензима регулисаних осовином гонада. Ј Етхнопхармацол 193: 321-328, 2016.

3. Лиу Ј, Ианг Л, Донг И, Зханг Б и Ма Кс: Ехинакозид, непроцењив природни производ у лечењу неуролошких и других поремећаја. Молекули 23: пииЕ1213, 2018.

4. Иосхикава М, Матсуда Х, Морикава Т, Ксие Х, Накамура С и Мураока О: Фенилетаноид олигогликозиди и ациловани олигошећери са вазорелаксансном активношћу изЦистанцхе тубулоса. Биоорг Мед цхем 14: 7468-7475, 2006.

5. Арнолд ВП, Миттал цК, Катсуки С и Мурад Ф: Азот оксид активира гванилат циклазу и повећава нивое гуанозин 3':5'-цикличног монофосфата у различитим препаратима ткива. Проц Натл Ацад Сци УСА 74: 3203-3207, 1977.

6. Гаи КСИ, Танг Ф, Ма Ј, Зенг КВ, Ванг СЛ, Ванг ИП, Вурен ТН, Лу дКс, Зхоу И и Ге РЛ: Антипролиферативни ефекат ехинакосида на ћелије глатких мишића плућне артерије пацова под хипоксијом. Ј Пхармацол Сци 126: 155-163, 2014.

7. Хе ВЈ, Фанг ТХ, Ма Кс, Зханг К, Ма ЗЗ и Ту ПФ: Ехинакозид изазива релаксацију зависну од ендотела у прстеновима аорте пацова путем НО-цГМП пута. Планта Мед 75: 1400-1404, 2009.

8. Гаи КСИ, Веи ИХ, Зханг В, Вурен ТН, Ванг ИП, Ли ЗК, Лиу С, Ма Л, Лу дКс, Зхоу И и Ге РЛ: Ехинакозид изазива вазорелаксацију плућне артерије пацова отварањем НО-цГМП-ПКГ- БКца канали и смањење интрацелуларног ца2 плус нивоа. Ацта Пхармацол Син 36: 587-596, 2015.

9. Марухасхи Т, Кихара И и Хигасхи И: Процена вазодилатације независне од ендотела: Од методологије до клиничке перспективе. Ј Хипертенс 36: 1460-1467, 2018.

10. Ахмад КА, Зе Х, цхен Ј, Кхан ФУ, цхен Кс, Ксу Ј и дериват на ендотелним ћелијама људске пупчане вене против повреде изазване оксидативним стресом: Укључивање антиоксидације и ПИ3к/Акт/еНОС/НО сигналних путева. Биомед Пхармацотхер 106: 1734-1741, 2018.

11. Иу Ј, Акисхита М, Ето М, Коизуми Х, Хасхимото Р, Огава С, Танака К, Оуцхи И и Окабе Т: Срц киназа-посредује негеномску активацију сигналне каскаде зависну од андрогеног рецептора која доводи до ендотелне синтазе азот-оксида . Биоцхем Биопх Рес цоммун 424: 538-543, 2012.

12. Иу Ј, Акисхита М, Ето М, Огава С, Сон Б, Като С, Оуцхи И и Окабе Т: Андроген рецептор-зависна активација ендотелне синтазе азот-оксида у васкуларним ендотелним ћелијама: Улога фосфатидилинозитола {{3} }кинасе/Акт патхваи.Ендоцринологи 151: 1822-1828, 2010.

13. Питтарелла П, Скуарзанти дФ, Молинари ц, Инверниззи М, Уберти Ф и Рено Ф: НО-зависна пролиферација и миграција изазвана витамином д у ХУВЕц. Ј Стероид Биоцхем 149: 35-42, 2015.

14. Хе И, Луан З, Фу Кс и Ксу Кс: Прекомерна експресија одвајајућег протеина 2 инхибира апоптозу ендотелних ћелија хумане пупчане вене изазване високом глукозом. Инт Ј Мол Мед 37: 631-638, 2016.

15. Ксиао-Хонг д, цханг-Кин Кс, Јиан-Хуа Х, Вен-Јианг З и Бинг С: Ицариин одлаже ендотелно старење ћелија изазвано хомоцистеином, укључујући активацију ПИ3К/АКТ-еНОС сигналног пута. Пхарм Биол 51: 433-440, 2013.

16. Смитх ПК, Крохн РИ, Хермансон ГТ, Маллиа АК, Гартнер ФХ, Провензано Мд, Фујимото ЕК, Гоеке НМ, Олсон БЈ и Кленк дц: Меасуремент оф протеин усинг бицинцхониниц ацид. Анал Биоцхем 150: 76-85, 1985.

17. Гу Л, Зхонг Кс, Лиан д, Зхенг И, Ванг Х и Лиу Кс: Биосинтеза тритерпеноида и транскрипциони одговор изазван азотним оксидом у ферментацији под водомГанодерма луцидум. Процесс Биоцхем 60: 19-26, 2017.

18. Еллинсвортх дц, Сандов СЛ, Схукла Н, Лиу И, Јереми ЈИ и Гуттерман дд: Хиперполаризација и коронарна вазодилатација изведена из ендотела: разноврсне и интегрисане улоге епокси-икозатриенске киселине, водоник пероксида и празнина. Микроциркулација 23: 15-32, 2016.

19. Фреед ЈК и Гуттерман дд: комуникација је кључна: Механизми међућелијске сигнализације у вазодилатацији. Ј цардиовасц Пхарм 69: 264-272, 2017.

20. Куиллон А, Фроми Б и Дебрет Р: Сензирање микроокружења ендотела који доводи до вазодилатације посредоване азотним оксидом: Преглед нервних и биомеханичких сигнала. Азот оксид 45: 20-26, 2015.

21. Торрес-Естаи В, Царрено дВ, Францисцо ИФ, Сотомаиор П, Годои АС и Смитх ГЈ: Андрогени рецептор у људским ендотелним ћелијама. Ј Ендоцринол 224: 131-137, 2015.

22. денг К, Зханг З, Ву И, Иу ВИ, Зханг Ј, Јианг ЗМ, Зханг И, Лианг Х и Гуи ИТ: Негеномско дејство андрогена је посредовано брзом фосфорилацијом и регулацијом трговине андрогеним рецепторима. Целл Пхисиол Биоцхем 43: 223-236, 2017.

23. де Оливеира ТС, де Оливеира ЛМ, де Оливеира ЛП, цоста РМд, Тостес Рц, Георг Рц, цоста ЕА, Лобато НС, Филгуеира ФП и Гхедини Пц: Активација ПИ3К/Акт пута посредованог рецепторима естрогена објашњава естрон изазван васкуларна активација цГМП сигнализације. Васцул Пхармацол 110: 42-48, 2018.

24. Ли Ф, Ианг Кс, Ианг И, Гуо ц, Зханг ц, Ианг З и Ли П: Антиостеопоротска активност ехинакозида код пацова са овариектомијом. Фитомедицина 20: 549-557, 2013.

25. Зенг КВ, Лиао ЛКС, Ван ИЈ, Јианг И и Ту ПФ: Идентификација фармаколошких циљева и анализа ефикасности фенилетаноидних гликозида изЦистанцхесХерба заснована на стратегији 'циљаног риболова'. цхин Традит Хербал другс 49: 173-178, 2018.

26. Јианг З, Зхоу Б, Ли Кс, Кирби ГМ и Зханг Кс: Ехинакозид повећава количину сперматозоида код пацова циљајући хипоталамски андрогени рецептор. Научни представник 8: 3839-3850, 2018.

27. Цоффер ПЈ, Јин Ј и Воодгетт ЈР: Протеин киназа Б (ц-Акт): мултифункционални медијатор активације фосфатидилинозитол 3-киназе. Биоцхем Ј 335, 1-13, 1998.

28. Ванг С, Зхенг Г, Тиан С, Зханг И, Схен Л, Пак И, Схен И и Киан Ј: Ехинакозид побољшава хематопоетску функцију код мишева изазваних мијелосупресијом 5-ФУ. Лифе Сци 123: 86-92, 2015.

29. цхен М, Ванг Кс, Ху Б, Зхоу Ј, Ванг Кс, Веи В и Зхоу Х: Заштитни ефекти ехинакозида против повреде аноксије/реперфузије у ћелијама Х9ц2 путем појачане регулације п-АКТ и СЛц8А3. Биомед Пхармацотхер 104: 52-59, 2018.

30. Абеиратхна П и Су И: Критична улога Акт-а у кардиоваскуларној функцији. Васцул Пхармацол 74: 38-48, 2015.