Цистанцхе гликозиди ублажавају фиброзу простате код бенигне хиперплазије простате регулацијом МиРНА-483-3п

 

АПСТРАКТ

Циљ:Да се ​​испитају мелиоративни ефекти цистанцхе гликозида на фиброзу простате код бенигне хиперплазије простате (БПХ) и механизам који укључује регулацију микроРНА (миРНА)-483-3п.

Методе:Мужјаци мишева су насумично распоређени у пет група: нормална контрола, контрола модела БПХ, финастерид, цистанцхе гликозиди и цистанцхе гликозиди + антагонист миРНА-483-3п. БПХ модел је успостављен билатералном орхиектомијом праћеном свакодневном субкутаном ињекцијом тестостерон пропионата. После 30 дана, таложење колагена у простати је процењено Массоновим трихромом и Сириус Ред бојењем и мерен је садржај хидроксипролина (Хип). Нивои мРНА простате трансформишућег фактора раста-1 (ТГФ-1), митоген-активиране протеин киназе 2 (МК2) и митоген-активиране протеин киназе киназе 6 (МКК6), као и нивоа миРНА-483-3п, одређени су квантитативним нивоом ПЦРкП у реалном времену. Нивои протеина простате ТГФ‑1, МК2, фосфорилисаног МК2 (п‑МК2), МКК6 и фосфорилисаног МКК6 (п‑МКК6) процењени су Вестерн блотингом. Директно везивање миРНА‑483‑3п за МК2 је испитано коришћењем луциферазне репортерске анализе.

Резултати:У односу на нормалну контролну групу, контролна група модела БПХ показала је значајно повећано таложење колагена у простати; повишени нивои мРНА ТГФ-1, МК2 и МКК6; и виши нивои протеина ТГФ‑1, п‑МК2 и п‑МКК6 (сви П < 0,01), док су нивои миРНА‑483‑3п значајно смањени (П < 0,01). У поређењу са контролном групом модела БПХ, цистанцхе гликозиди су повећали регулацију миРНА-483-3п, смањили нивое мРНА ТГФ-1, МК2 и МКК6, снизили нивое протеина ТГФ-1, п-МК2 и п-МКК6, и све то је смањило простатичку позицију. Приметно је да је истовремена примена антагомира миРНА‑483‑3п са гликозидима цистанхе значајно смањила миРНА‑483‑3п, повећала таложење колагена и повишене нивое мРНА ТГФ‑1, МК2 и МКК6, као и нивое протеина ТГФ‑1, МК2 и МКК6, протеина и ТМГФ‑, п1КФ‑ п-МКК6 у поређењу са самим цистанцхе гликозидима (сви П < 0,01). Тест луциферазе је показао да миРНА-483-3п директно циља на МК2.

Закључак: Цистанцхе гликозиди ублажавају фиброзу простате у БХП тако што регулишу миРНА-483-3п и инхибирају МК2 сигнализацију.

Кључне речи: Цистанцхе гликозиди; миРНА‑483‑3п; простате;фиброза; бенигна хиперплазија простате

 

 

 

Цистанцхе Десертицола врхунског квалитета

Више знања о биљци за лечење БПХ

 

Услуга подршке Вецистанцхе-а - највећи извозник цистанцхеа у Кини:
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com
 

 

Увод

Бенигна хиперплазија простате (БПХ)је уобичајено стање код средовечних и старијих мушкараца, а преваленца расте са годинама. Извештаји показују да преваленција БПХ прелази 50% међу мушкарцима старијим од 50 година. БПХ и повезани симптоми доњег уринарног тракта (ЛУТС) намећу значајна оптерећења на квалитет живота и дугорочне трошкове здравствене заштите. Клинички, инхибитори 5 -редуктазе и блокатори адренергичких рецептора се препоручују као фармакотерапије. Међутим, ‑блокатори не смањују запремину простате, а 25–30% пацијената не показује побољшање ЛУТС са 5 -инхибиторима редуктазе; штавише, 5–7% се може чак и погоршати. Иако се хируршке иновације као што је тхулиум ласерска простатектомија све више користе у поређењу са трансуретралном ресекцијом простате, постоперативни ЛУТС се и даље јављају у стопама које прелазе 23%.

Тренутни докази указују на три главна патобиолошка процеса у БПХ: хиперплазију жлезде, контракцију глатких мишића и фиброзу простате. Ови процеси делују независно или синергистички како би покренули клиничку прогресију. БПХ обично (иако не увек) коегзистира са ЛУТС; фиброза, коју карактерише прекомерно таложење екстрацелуларног матрикса, угрожава флексибилност уретре унутар простате и доприноси опструкцији урина. Ипак, терапијске опције које су специфично усмерене на фиброзу органа остају ограничене.

Цистанцхе (Цистанцхе спп.) је традиционална лековита и хранљива биљка. Његови карактеристични фенилетаноидни гликозиди (који се овде заједнички називају цистанцхе гликозиди, као што су ехинакозид и актеозид) показују широку биоактивност, укључујући антимикробне, хиполипидемијске, антиалергијске, кардиотоничне, антидијабетичке, антитуморске, неуропротективне, имунопротективне и антиоксидативне ефекте. Нагомилани докази указују на антифибротично деловање ових гликозида у органима као што су бубрези, плућа, срце и јетра. Међутим, нису пријављени њихови ефекти на фиброзу простате. Ова студија је испитала утицај цистанх гликозида на фиброзу простате и истражила основне механизме, фокусирајући се на ос миРНА-483-3п/МК2 релевантну за ремоделирање екстрацелуларног матрикса.

Цистанцхе Десертицола врхунског квалитета

 

Материјали и методе

Материјали

 

миРНА‑483‑3п антагомир (хемијски модификован): купљен од Схангхаи ГенеПхарма Цо., Лтд. (бр. серије: 12953).

Ињекција тестостерон пропионата: Тиањин Јиниао Пхармацеутицал Цо., Лтд. (бр. серије: 150822).

Цистанцхе гликозиди: Схангхаи Аладдин Биоцхемицал Тецхнологи Цо., Лтд. (чистоћа већа или једнака 98%, серијски број: М14062). Напомена за нутрицеутичке програмере: материјал одговара стандардизованој фракцији фенилетаноид гликозида; обезбеди спецификацију помоћу ХПЛЦ садржаја (нпр. укупни ПЕГЛ, ехинакозид/актеозид).

Финастерид таблете: МСД (Хангзхоу) Пхармацеутицал Цо., Лтд. (бр. серије: У011856; 5 мг/таблета).

Комплет за анализу Луциферазе (серија бр.: Е2920) и вектор псиЦХЕЦК‑2 (бр. серије: Ц8021): Промега (САД).

кПЦР комплет за детекцију: КАПА Биосистемс (серија бр.: КМ4101).

Комплет за испитивање хидроксипролина (Хип): Институт за биоинжењеринг у Нањинг Јианцхенг (бр. серије: 20190626).

Прајмере за ТГФ-1, МК2 и МКК6 синтетизовао је Вухан Тиании Хуииуан Биотецхнологи Цо., Лтд.

Цистанцхе Десертицола врхунског квалитета

 

Животиње

Мушки мишеви Ц57БЛ/6 стари седам недеља без специфичних патогена (СПФ) (22–24 г) су добијени са Пољопривредног универзитета Хуазхонг (бр. лиценце за производњу: СЦКСК Хубеи 2015‑0019). Животиње су биле смештене на 23 ± 2 степена, 50 ± 5% влажности, под циклусом од 12 х светлости/12 х таме.

 

Опрема

 

СтепОнеПлус ПЦР систем у реалном времену (Апплиед Биосистемс, САД).

Луминоскан 5200110 микроплочасти луминометар (Тхермо Фисхер Сциентифиц, САД).

Експериментални дизајн и модел БПХ
После 1 недеље аклиматизације, мишеви су насумично распоређени (табела случајних бројева) у пет група (н=6 по групи): нормална контрола, контрола БПХ модела, финастерид, цистанцхе гликозиди и цистанцхе гликозиди + миРНА-483-3п антагомир. БПХ модел је индукован хируршком кастрацијом плус дневном поткожном ињекцијом тестостерон пропионата у дози од 7,5 мг·кг⁻¹ током 30 дана. Група финастерида примала је орални финастерид 1 мг·кг⁻¹ дневно (растворен у 0,5% ЦМЦ‑На). Група са цистанцхе гликозидима примала је оралне цистанцхе гликозиде 100 мг·кг⁻¹ дневно. Комбинована група је примала оралне гликозиде цистанхе 100 мг·кг⁻¹ дневно плус ињекцију миРНА‑483‑3п антагомира у вену репа у дози од 10 мг·кг⁻¹ сваких 5 дана према упутствима произвођача. Контролне групе са нормалним и БПХ моделом су орално добиле једнаку запремину од 0,5% ЦМЦ-На.

После 30 дана, мишеви су анестезирани интраперитонеалном ињекцијом натријум пентобарбитала (80 мг·кг⁻¹) и еутаназирани дислокацијом грлића материце. Простата је изрезана; делови су фиксирани и уграђени за Массон-ов трихром и Сириус Ред бојење, а свежа ткива су обрађена за кПЦР, Вестерн блот и биохемијске тестове. Поступци на животињама су у складу са прописима провинције Хубеи о управљању лабораторијским животињама (Квалификациони број оператера: ТИ20190784).

Цистанцхе Десертицола врхунског квалитета

 

Процена фиброзе простате

Таложење колагена је процењено Сириус Ред и Массоновим трихромним бојењем. Садржај хипа у ткиву простате је квантификован према упутствима за комплет. За сваки слајд, три насумична поља су анализирана коришћењем Имаге‑Про Плус 6.0 да би се израчунао проценат позитивно обојене површине.

Евалуација активности МК2 пута

кПЦР: Измерени су нивои мРНА простате МК2, ТГФ-1 и МКК6. Прајмер секвенце:

МК2 (264 бп) напред 5'-ГГААГТГЦЦТГЦТГАТ-3', обрнуто 5'-АГТТГТГАЦТГГТГГТТТ-3';

ТГФ‑ 1 (153 бп) напред 5'-АГГАГАЦГГААТАЦАГГГ-3', реверс 5'-АТГАГГАГЦАГГААГГГ-3';

МКК6 (146 бп) напред 5'-ЦЦТЦАГАЦЦАГТТЦЦАЦ-3', обрнуто 5'-ЦГЦАТЦТТЦТЦЦАЦЦА-3'.

Вестерн блот: Нивои протеина ТГФ‑1, МК2, п‑МК2, МКК6 и п‑МКК6 су одређени према претходно утврђеним протоколима.

Мерење миРНА‑483‑3п
миРНА‑483‑3п прајмери: напред 5'-ГГГТЦАЦТЦЦТЦЦЦЦЦТ-3', реверс 5'-ААЦТГГТГТЦГТГГАГТЦГГЦ-3'; РТ прајмер 5'-ЦТЦААЦТГГТГТЦГТГГАГТЦГГЦААТТЦАГТТГАГААГАЦГГГ-3'. кПЦР је изведен према упутствима за комплет.

 

Тест Луциферазе Репортер

МК2 3'УТР је клониран у вектор псиЦХЕЦК‑2 да би се конструисали репортерски плазмиди дивљег типа (ВТ) и мутантни (МУТ). ХЕК-293Т ћелије су ко-трансфектоване са миРНА-483-3п и репортерским плазмидима коришћењем Липофецтамине 3000; контролне ћелије су примиле празан вектор. После 24 х, активност луциферазе је мерена према протоколу комплета.

Статистичка анализа
Подаци су анализирани коришћењем СПСС 17.0. Једносмерна АНОВА је примењена након потврде нормалности и хомогености варијансе. Резултати су изражени као средња вредност ± СД. ЛСД пост хоц тестови су коришћени за вишеструка поређења. Разлике су сматране статистички значајним при П < 0,05.

 

Резултати

У поређењу са нормалном контролном групом, контролна група модела БПХ показала је значајно повећање таложења колагена у простати; повишене експресије мРНК ТГФ-1, МК2 и МКК6; и виши нивои протеина ТГФ‑1, п‑МК2 и п‑МКК6 (сви П < 0,01). Нивои миРНА‑483‑3п су значајно смањени (П <0,01).

У односу на контролу модела БПХ, цистанцхе гликозиди су значајно појачали миРНА-483-3п, смањили нивое мРНК ТГФ-1, МК2 и МКК6, снизили нивое протеина ТГФ-1, п-МК2 и п-МКГК6 депозиције простатичног колагена и п-МКГК6.

У поређењу са самим цистанцхе гликозидима, комбинација цистанцхе гликозида са антагомиром миРНА‑483‑3п значајно је смањила миРНА‑483‑3п и повећала таложење колагена, плус нивое мРНА ТГФ-1, МК2 и МКК6, као и нивое протеина ТГМФ-1, п‑2 п‑МКК6 (сви П < 0,01).

Тест репортера луциферазе је потврдио да миРНА-483-3п директно циља на МК2.

 

Дискусија (кратка, фокусирана на нутриционизам)

Ова студија показује да гликозиди цистанхе ублажавају фиброзу простате у моделу БПХ изазваног кастрацијом/тестостероном тако што регулишу миРНА-483-3п и потискују активност МК2 пута низводно од ТГФ-сигнализације. С обзиром на ограничења тренутне фармакотерапије за БХП у решавању фиброзног ремоделирања, цистанцхе гликозиди могу представљати комплементарну нутрацеутичку стратегију која има за циљ баланс екстрацелуларног матрикса.

За развој дијететских суплемената, разматрања укључују:

Стандардизација: дефинисати укупне фенилетаноидне гликозиде и једињења маркера (нпр. ехинакозид већи или једнак 20%, актеозид већи или једнак 10% помоћу ХПЛЦ).

Транслација дозе: 100 мг·кг⁻¹ код мишева је приближно 8–12 мг·кг⁻¹ хумане еквивалентне дозе (ХЕД) користећи скалирање површине тела, отприлике 500–800 мг/дан за одраслу особу од 60–70 кг; потребна је клиничка валидација.

Квалитет и безбедност: обезбедите идентитет (ботанички извор, загађивачи, тешки метали, пестициди) и процените потенцијалне интеракције са ‑блокаторима или инхибиторима 5‑редуктазе.

Тврдње: тврдње о структури/функцији треба да се фокусирају на „подршку протоку мокраће и равнотежи ткива простате“ и избегавају језик лечења болести без клиничких доказа.

 

Закључци

Цистанцхе глицосидесублажавају фиброзу простате код БПХ регулацијом миРНА-483-3п и инхибирањем МК2 сигнализације. Ови налази подржавају даља транслациона истраживања о стандардизованим екстрактима цистанцхе као помоћним нутрацеутицима за здравље простате.

 

Признања

Овај рад је подржала Национална фондација за природне науке Кине (Број гранта. 81703594).

Информације о аутору
Ианг Цхухао (1991–), жена, Вухан, Хубеи, клинички фармацеут, МС; главна област истраживања: клиничка фармација. ОРЦИД: 0000-0002-8921-5758; Тел: +86-27-82440854.