Механистичка студија напитка Ксиан Фанг Хуо Минг заснованог на Цистанцхеу у лечењу хроничног простатитиса: интегрисана мрежна фармакологија и експериментална валидација која циља на ПИ3К/Акт/НФ-κБ пут
Oct 27, 2025
2. Методе
2.1 Мрежна фармакологија и анализа молекуларног повезивања
2.1.1 Идентификација активних компоненти и циљева болести
Користећи ТЦМСП базу података, активна једињења у напитку Ксиан Фанг Хуо Минг на бази Цистанцхе (КСФХИ) су тестирана према АДМЕ критеријумима: орална биорасположивост (ОБ) већа или једнака 30% и сличност са леком (ДЛ) већа или једнака 0,18. Потенцијални циљеви ових једињења идентификовани су коришћењем СвиссТаргетПредицтион (вероватноћа већа или једнака 0,1). Мрежа „биљка–једињење–циљ“ је конструисана коришћењем Цитосцапе 3.9.1, а првих пет једињења идентификовано је на основу централности степена. Истовремено, са ГенеЦардс, ОМИМ и ДисГеНЕТ сакупљени су циљеви болести повезаних са ЦП/ЦППС користећи кључне речи као што су „хронични простатитис“ и „простатитис“.
Додаци екстракта Цистанцхе за здравље простате и бубрега ПхГс75% Ецх 30% Ацт 12%
2.1.2 Идентификација мета раскрсница
Пресек између мета КСФХИ једињења и циљева ЦП/ЦППС болести је одређен коришћењем софтвера Венни 2.1 за генерисање Веновог дијаграма, идентификујући кључне потенцијалне терапијске циљеве.
2.1.3 Изградња ППИ мреже
Циљеви укрштања су увезени у СТРИНГ базу података (врста: Хомо сапиенс; резултат интеракције > 0,9). Резултирајућа мрежа интеракције протеин-протеин (ППИ) је увезена у Цитосцапе, а кључне мете су идентификоване коришћењем ЦитоХуббе на основу параметара топологије мреже као што су степен, између и блискости.
2.1.4 Изградња мреже „Биље–Сједињење–Циља–пут“
Користећи Цитосцапе 3.9.1, направљен је мрежни модел за визуелизацију односа између КСФХИ, његових активних једињења, циљева и сигналних путева. Мрежни параметри су анализирани да би се одредили кључни чворови.
2.1.5 Анализа ГО и КЕГГ обогаћивања
Циљеви укрштања су учитани у ДАВИД базу података за онтологију гена (ГО) и анализу обогаћивања путева из Кјото енциклопедије гена и генома (КЕГГ) (П <0,05). Резултати су визуелизовани путем биоинформатичких алата.
2.1.6 Молекуларно спајање
Првих пет једињења (нпр. кверцетин, кемпферол) су коришћени као лиганди, а првих десет главних мета из ППИ мреже као рецептори. Протеинске структуре су добијене из Протеин Дата Банк (ПДБ), претходно обрађене коришћењем АутоДоцкТоолс 1.5.6 (укључујући дехидратацију, хидрогенацију и додавање пуњења) и конвертоване у ПДБКТ формат. Лигандске структуре у МОЛ2 формату су добијене из ТЦМСП-а и на сличан начин конвертоване. Молекуларно спајање је спроведено коришћењем АутоДоцк-а, а афинитети везивања су визуелизовани коришћењем ГрапхПад Присм 8.
2.2 Експеримент на животињама
2.2.1 Успостављање модела
За моделирање ЦП/ЦППС коришћена је метода хемијске индукције. Пацови су анестезирани са 3% пентобарбитал натријумом (50 мг/кг). Средњи рез је направљен у доњем делу стомака и 80 μЛ 3% λ-карагенана је убризгано у сваки бочни режањ простате (укупно 160 μЛ). Лажно оперисани пацови су примили ињекције физиолошког раствора. Постоперативна нега је укључивала локалну примену антибиотика. Седмог дана, успех моделирања је потврђен грубим и хистолошким прегледом простате (едем, конгестија, дегенерација епитела и инфламаторна инфилтрација).
2.2.2 Груписање и третман
Седамдесет мушких СД пацова је насумично подељено у седам група (н=10):
Нормална контрола
Лажна операција
Контрола модела
Групе са ниским, средњим и високим дозама КСФХИ
Тамсулозин гроуп
Дозе су израчунате на основу хумане еквивалентне дозе (7,29 г/кг/дан). КСФХИ је примењиван путем оралне сонде при 0,3645 г/мЛ (низак) и 1,458 г/мЛ (висок). Тамсулозин је даван у дози од 0,0018 мг/кг. Сви третмани су трајали 28 дана, почевши од 8 дана након моделирања.
2.2.3 Хистопатолошка евалуација
Леви режњеви простате су фиксирани у 4% параформалдехида, уграђени у парафин, исечени и обојени хематоксилин-еозином. Хистолошке промене су процењене под светлосном микроскопијом.
2.2.4 ЕЛИСА за маркере инфламације
Крв прикупљена преко абдоминалне аорте је центрифугирана, а нивои ТНФ-а, IL-1 и COX-2 у серуму су мерени коришћењем ЕЛИСА комплета у складу са упутствима произвођача.
2.2.5 кРТ-ПЦР за експресију гена
Укупна РНК је екстрахована из ткива простате и реверзно транскрибована у цДНК. ПЦР у реалном времену је спроведен коришћењем специфичних прајмера за ПИ3К, Акт и НФ-κБ п65. ГАПДХ је коришћен као интерна контрола. Релативна експресија је израчуната методом 2^-ΔΔЦт.
2.2.6 Вестерн блот за експресију протеина
Протеин је екстрахован из замрзнутог ткива простате коришћењем РИПА пуфера. Након квантификације, протеини су раздвојени помоћу СДС-ПАГЕ, пребачени на ПВДФ мембране и испитани примарним антителима против ПИ3К, п-ПИ3К, Акт, п-Акт (Сер473/Тхр308), НФ-κБ п65 и п-НФ-κБ п65. Коришћена су ХРП-коњугована секундарна антитела и ЕЦЛ детекција. Интензитет траке је квантификован коришћењем ИмагеЈ.
2.2.7 Статистичка анализа
Сви експерименти су изведени у три примерка. Подаци су анализирани коришћењем ГрапхПад Присм 8 и изражени као средња вредност ± стандардна девијација. Једносмерна АНОВА праћена ЛСД или Дуннеттовим тестом је коришћена за вишеструка поређења група. П < 0,05 се сматра статистички значајним.
3. Резултати
3.1 Мрежна фармакологија и молекуларно повезивање
Раскрсница споја и циља:912 сложених циљева и 2.197 мета болести дало је 374 преклапајућа циља.
Највећа идентификована једињења:Кверцетин, кемпферол, пеларгонидин, нарингенин и биакангеликол – сви са познатим антиинфламаторним и антиоксидативним ефектима.
ППИ анализа:Кључне мете су укључивале ТП53, АКТ1, ЕГФР, ТНФ, ИЛ6, СТАТ3, БЦЛ2, ЦАСП3, ЦЦНД1 и НФКБ1.
ГО и КЕГГ обогаћивање:Обогаћени путеви укључивали су ПИ3К/Акт, МАПК, РАС и биолошке процесе повезане са упалом.
Молекуларно спајање:Уочени су јаки афинитети везивања између главних циљева и главних једињења (енергија везивања мања или једнака -5,0 кцал/мол), што указује на високу биоактивност.
3.2 Експериментална валидација
3.2.1 ХЕ бојење
Пацови моделне групе су показали дегенерацију епитела жлезде, стромални едем и екстензивну инфламаторну инфилтрацију. Групе које су третиране КСФХИ показале су смањену упалу, посебно у групама са средњим и високим дозама.
3.2.2 Нивои инфламаторних маркера
У поређењу са моделном групом, КСФХИ је значајно смањио нивое ТНФ-, IL-1 и COX-2 у серуму (П < 0,01), што указује на антиинфламаторну ефикасност.
3.2.3 Експресија гена (кПЦР)
КСФХИ је значајно смањио нивое мРНА ПИ3К, Акт и НФ-κБ п65 на начин који зависи од дозе. Само ниске дозе смањене Акт и п65; групе са средњим и високим дозама показале су ширу супресију.
3.2.4 Експресија протеина (Вестерн Блот)
Нивои фосфорилације ПИ3К, Акт (Сер473, Тхр308) и НФ-κБ п65 били су значајно повишени у групи модела и смањени код пацова третираних КСФХИ, посебно при средњим и високим дозама.
4. Дискусија
Надовезујући се на клиничко искуство, ова студија то потврђујеКСФХИ базиран на Цистанцхеима приметан антиинфламаторни ефекат на ЦП/ЦППС. Мрежна фармакологија је идентификовала кључна активна једињења, посебнокверцетин, са доказаним антиинфламаторним и антиоксидативним својствима. ППИ анализа је истакла циљеве као нпрТНФ, ИЛ6, иАКТ1, који су централни за упалу код простатитиса.
КЕГГ анализа је сугерисала умешаностПИ3К/Акт/НФ-κБсигнални пут-широко препознат у инфламацији и регулацији имунитета. КСФХИ може испољити терапеутске ефекте инхибирањем овог пута, чиме се смањује експресија проинфламаторних цитокина.
Штавише, чини се да је двострука фосфорилација Акт (Сер473 и Тхр308) критична за активацију НФ-κБ. КСФХИ је инхибирао фосфорилацију на обе локације, што указује на инхибицију НФ-κБ сигнализације кроз супресију Акт узводно.
Закључак
КСФХИ може ублажити ЦП/ЦППС блокирањем пута ПИ3К/Акт/НФ-κБ, смањујући експресијуIL-1 , ТНФ-, иCOX-2и ублажавање инфламаторних одговора у ткиву простате. Учешће у путу, посебно фосфорилација Акт на Сер473 и Тхр308, пружа потенцијално механичко објашњење за ефикасност КСФХИ. Даља истраживања су оправдана да би се потврдило да ли је ПИ3К/Акт/НФ-κБ дефинитиван пут кроз који КСФХИ спроводи своје терапеутско дејство.
Сукоб интереса:
Аутори изјављују да нема сукоба интереса.
Јавите ми ако желите аграфички сажетак, збирна табела, илиПоверПоинт презентацијана основу ове студије!
