Полисахариди Цистанцхе инхибирају пролиферацију ћелија рака простате и индукују апоптозу путем РОС генерације и супресије антиоксидативних гена
Jun 10, 2025
Апстракт:
Циљ:Да би се истражили ефекти и основни механизмиЦистанцхе полисаццхаридесна пролиферацију и апоптозућелије рака простате.
Методе:
ДУ145 ћелије рака простате су третиране ниским, средњим и високим концентрацијамаЦистанцхе полисаццхаридес(20, 40 и 80 мг/мЛ, респективно). Пролиферација ћелија је процењена коришћењемМТТ тест, а апоптозу је процениопроточна цитометрија. Интрацелуларреактивне врсте кисеоника (РОС)нивои су мерени путем проточне цитометрије, докглутатион (ГСХ)нивои су одређени коришћењемЕЛИСА. Нивои експресије мРНА и протеинакаталитичка подјединица глутамат-цистеин лигазе (ГЦЛЦ), подјединица модификатора глутамат-цистеин лигазе (ГЦЛМ), итиоредоксин редуктаза 1 (ТКСНРД1)су анализирали одРТ-ПЦРиВестерн блот, односно.
Резултати:
Полумаксимална инхибиторна концентрација (ИЦ₅₀) одЦистанцхе полисаццхаридесна ћелијама ДУ145 била је 40,35 мг/мЛ, тако да је 40 мг/мЛ одабрано као средња доза за наредне експерименте. Ниске, средње и високе дозе су дефинисане као 50%, 100% и 200% ИЦ₅₀, респективно.
Све третиране групе су показале значајно повећане стопе апоптозе у поређењу са контролном групом. ТхеЦистанцхе група високих дозасу показале највећу инхибицију пролиферације ћелија и највећу стопу апоптозе, праћене групама са средњим и малим дозама (P< 0,01). Нивои РОС су били значајно повишени, а нивои ГСХ су значајно смањени код свихГрупе третиране Цистанцхенаспрам контроле. Посебно, тхегрупа са високим дозамаимале значајно веће РОС и ниже нивое ГСХ од група са средњим и ниским дозама (P< 0,05); група са средњом дозом показала је сличне разлике у поређењу са групом са ниским дозама (P< 0,05).
Нивои експресијеГЦЛЦ, ГЦЛМ, иТКСНРД1(и мРНА и протеин) су значајно смањене у свим групама које су третиране Цистанцхеом у поређењу са контролном (P< 0,05). Тхегрупа са високим дозамапоказао најзначајнију супресију ових гена и протеина повезаних са антиоксидансима, а затим групе са средњим и малим дозама (P< 0,05).
Закључак:
Цистанцхе полисаццхаридесинхибирају експресију антиоксидативних фактораГЦЛЦ, ГЦЛМ, иТКСНРД1, чиме се смањујеГСХ синтеза, промовисањеАкумулација РОС, и на крају изазивајућиапоптоза у ћелијама рака простате. Ови налази сугеришу даЦистанцхеможе послужити као априродно терапеутско средствоза рак простате прекомеханизми посредовани оксидативним стресом.
Екстракт Цистанцхе са високим садржајем полисахарида
Вецистанцхе услуга подршке – контактирајте нас да бисте добили велепродајну цену
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com
Вхатсапп/тел:+86 15292862950
Позадина и методе
Рак простатеизноси приближно7,1% свих малигних болести мушкараца, при чему се врхунац инциденције јавља након 60. године. Како становништво Кине наставља да стари, очекује се да ће инциденција ове болести даље расти [1]. Студије сугеришу да висока преваленција рака простате код старијих мушкараца може бити повезана садегенеративне промене у простати, генетска предиспозиција, навике у исхрани, ифактори начина живота [2].
Хируршка ресекцијаостаје главни ослонац у лечењу рака простате, са циљем да се уклони већи део туморске масе. Међутим, то је повезано са значајним компликацијама, као нпруринарна инконтиненција, сексуална дисфункцијаи што је најважније,рецидив тумора и метастазе, који су главни узроци лоше прогнозе [3].
Последњих година,Традиционална кинеска медицина (ТЦМ)добија све већу пажњу због своје улоге у терапији рака. ТЦМ може помоћипојачати имунитет, супротставити нежељене ефекте хемотерапије/радиотерапије, ипобољшати детоксикацију. Излажу се и неке лековите биљкедиректна антитуморска својства, укључујући инхибицију раста тумора ииндукција апоптозе у ћелијама рака [4].
Међу овима,Цистанцхе (Цистанцхе десертицола)је традиционална тоник биљка позната поимуномодулаторно, антиоксидативно, иантитуморски ефекти. Његове главне биоактивне компоненте суполисахаридиифенилетаноидни гликозиди. Ова студија истражује ефекте и основни механизамЦистанцхе полисаццхаридеснапролиферација и апоптоза ћелија рака простате ДУ145.
1. Материјали и методе
1.1 Главни материјали и реагенси
ДУ145 људске ћелије рака простатедобијени су од Тонгпаи Биотецх (Шангај, Кина).
Цистанцхе полисаццхаридес(Серија бр: 0287181) су купљени од Веикеки Био Цо., Лтд. (Сицхуан, Кина).
Фетални говеђи серум, пеницилин/стрептомицин, иДМЕМобезбедио Зета Лифе (САД).
МТТ тест, Анексин В/ПИ комплети за апоптозу, РИПА пуфер за лизу, Комплети за квантификацију БЦА протеинадобијени су од Елабсциенце (Шангај, Кина).
Комплет за детекцију реактивних врста кисеоника (РОС).иГСХ ЕЛИСА комплетикупљени су од БиоЛаб-а (Шангај, Кина).
Тризол реагенс, комплети за реверзну транскрипцију, иПЦР комплетису набављени из НеуроСим-а (Хангџоу, Кина).
Антитела противГЦЛЦ, ГЦЛМ, ТКСНРД1, -актин, а одговарајућа секундарна антитела су купљена од УнивБио (Шангај, Кина).
1.2. Испитивање културе ћелија и пролиферације
ДУ145 ћелије су култивисане уДМЕМ допуњен са 10% ФБС и 1% пеницилина/стрептомицинау ЦО₂ инкубатору. ЗаМТТ тестДУ145 ћелије логаритамске фазе су засејане у плоче са 96 бунарчића и третиране саРаствори полисахарида Цистанцхеу концентрацијама од10, 20, 40 и 80 мг/мЛ. Контролна група је примила само ДМЕМ медијум.
Након 24 сата третмана,20 µЛ 5 мг/мЛ МТТје додат у сваки бунар и инкубиран 4 сата. Супернатант је уклоњен, и150 µЛ ДМСОје додато. После мућкања од 10 минута, мерена је апсорпција на490 nmпомоћу читача микроплочица. ТхеИЦ₅₀је израчунато, и20, 40 и 80 мг/мЛсу изабрани каониске, средње и високе дозеза наредне експерименте. Тхестопа инхибиције пролиферације ћелијаизрачунато је као:
Стопа инхибиције (%)=(ОД_контрола - ОД_третирана) / ОД_контрола × 100
1.3 Тест апоптозе
ДУ145 ћелије лог-фазе су третиране различитим концентрацијамаЦистанцхе полисаццхаридеспрема групацијама. Након фиксације и бојења,Анексин В-ФИТЦиПИкоришћени су за обележавање апоптотичких ћелија.Проточна цитометријаизвршено је да се детектују флуоресцентни сигнали и забележен је проценат апоптотичких ћелија.
1.4 Детекција интрацелуларних нивоа РОС и ГСХ
Нивои РОС су мерени коришћењем аРОС флуоресцентна сондаи проточна цитометрија. Нивои ГСХ су квантификовани коришћењемЕЛИСА. Стандардна крива је припремљена коришћењем познатих концентрација ГСХ стандарда, а апсорбанца је мерена да би се израчунале концентрације ГСХ у узорцима.
1.5 РТ-ПЦР за експресију мРНА ГЦЛЦ, ГЦЛМ, ТКСНРД1
Укупна РНК је екстрахована коришћењемТризол, а цДНК је синтетизована. ПЦР је изведен коришћењем специфичних прајмера:
ГЦЛЦ:
Напред: 5'-ГТЦГГТГТЦААААТАЦГГАГТТЦЦА-3'
Реверс: 5'-ЦГТГАЦГАГГАЦТГЦГТГЦАТГГАТ-3'
ГЦЛМ:
Напред: 5'-ЦЦГАТГАЦГЦЦАТАААЦГТЦЦГТАГЦ-3'
Реверс: 5'-ГГЦТААГЦГТАЦГТАГТАЦГЦААЦГТА-3'
ТКСНРД1:
Напред: 5'-ТГАЦАГТЦЦТАЦЦГТАЦГТАГААТГЦЦ-3'
Реверс: 5'-АТААТГЦГТАГГГАТГЦГЦТАГЦААТГГ-3'
-актин (интерна контрола):
Напред: 5'-ТТАГГЦГЦГАТГЦАГТЦАГАТААГЦ-3'
Реверс: 5'-АТЦГАЦГТАЦГТАЦГГАЦГЦГАТАГ-3'
Услови појачања: 95 степени током 60 с, након чега следи 30 циклуса од 95 степени за 30 с, 60 степени за 30 с и 72 степена за 60 с. ПЦР производи су анализирани одгел електрофореза, а релативна експресија гена је нормализована на-актин.
1.6 Вестерн блоттинг за експресију протеина
Укупни протеин је екстрахован коришћењемРИПА пуфер, а концентрација протеина је одређена помоћуБЦА тест. Протеини су раздвојени помоћуСДС-ПАГЕ, пребачен уПВДФ мембране, блокиран и инкубиран преко ноћи на 4 степена са примарним антителима противГЦЛЦ, ГЦЛМ, ТКСНРД1, и-актин. Након инкубације саХРП-коњугована секундарна антитела, бендови су визуелизовани помоћухемилуминисценцијаи квантификовано поИмагеЈ софтвер.
1.7 Статистичка анализа
Сви подаци су анализирани коришћењемСПСС 25.0. Једносмерна АНОВА иЛСД-т тестовикоришћени су за одређивање статистичке значајности.
