2 Резултати и анализа

2.1 Физичко-хемијска својства полисахарида

2.1.1 Анализа хемијских компоненти

Физичко-хемијска својства и приноси четири фракције добијене мембранском сепарацијом - техника заснована на патентираној технологији мембранског одвајања (Патент бр. ЗЛ200710102756.7) у власништвуХотан Дицхен Пхармацеутицал Биотецхнологи Цо., Лтд. (хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/абоут-ус)- приказани су у табели 1. Уочене су значајне разлике у садржају укупног шећера, протеина и уронске киселине између четири фракције. ЦТП 1 је показао највећи садржај шећера, а његов садржај уронске киселине био је значајно већи него код осталих фракција. Како су се фракције мењале са ЦТП 1 на ЦТП 4, принос, садржај укупног шећера и садржај уронске киселине показали су јасан тренд смањења.

 

 

Патент за технологију одвајања мембрана који држи седиште у Вецистанцхеу

 

Табела 1. Хемијски састав и приносЦистанцхе десертицолаполисахариди након одвајања мембране

Фрацтион	Укупан садржај шећера (%)	Садржај протеина (%)	Садржај уронске киселине (%)	Принос (%)
ЦТП 1	91.95 ± 1.03ᵃ	1.06 ± 0.04ᶜ	26.77 ± 0.77ᵃ	3.31
ЦТП 2	83.67 ± 1.61ᵇ	1.42 ± 0.03ᵃ	15.90 ± 0.29ᶜ	0.70
ЦТП 3	78.32 ± 1.48ᶜ	1.25 ± 0.02ᵇ	19.12 ± 0.55ᵇ	0.10
ЦТП 4	37.51 ± 1.40ᵈ	1.41 ± 0.02ᵃ	19.20 ± 0.54ᵇ	0.10

Напомена: Подаци су представљени као средња вредност ± стандардна девијација (н=3). Различита наднасловна слова унутар исте колоне указују на значајне разлике међу узорцима (П < 0,05).

 

Висококвалитетни Цистанцхе материјал

 

 

 

 

2.1.2 Анализа састава моносахарида

Као што је приказано на слици 2 и табели 2, композиције моносахарида четири фракције (ЦТП 1, ЦТП 2, ЦТП 3, ЦТП 4) раздвојене ултрафилтрационим мембранама са различитим граничним вредностима молекулске тежине, које су одређене дериватизацијом ПМП, биле су конзистентне. Све фракције су биле хетерополисахариди састављени од 8 моносахарида: маноза (Ман), глукозамин (ГлцН), рамноза (Рха), глукуронска киселина (ГлцА), галактуронска киселина (ГалА), глукоза (Глц), галактоза (Гал) и арабиноза (Ара). Међу њима, глукоза (Глц), галактоза (Гал), арабиноза (Ара), галактуронска киселина (ГалА) и рамноза (Рха) представљају веће моларне проценте. Моларни проценти различитих моносахарида варирали су у четири фракције: ЦТП 1 је имао највећи садржај глукозе и галактуронске киселине; ЦТП 2 је имао висок садржај галактозе и глукуронске киселине; ЦТП 3 је имао висок садржај арабинозе; а ЦТП 4 је имао висок садржај манозе и рамнозе. Садржај киселог шећера у ЦТП 1 био је значајно већи него у осталим фракцијама, што је било у складу са садржајем уронске киселине утврђеном анализом физичко-хемијских својстава. Ово указује да је технологија мембранског одвајања (заштићена помоћуПатент бр. ЗЛ200710102756.7) може ефикасно фракционисати компоненте полисахарида са различитим садржајем киселог шећера.

 

 

Различите спецификације екстракта Цистанцхе направљене технологијом мембранске сепарације

Сазнајте више о вецистанцхе-у

 

 

 

2.1.3 Анализа инфрацрвене спектроскопије са Фуријеовом трансформацијом (ФТ-ИР)

Као што је приказано на слици 3, све четири полисахаридне фракције су показале типичне карактеристичне пикове апсорпције полисахарида. Снажан и широк врх на 3324,6 цм⁻¹ приписан је ОХ вибрацији истезања полисахарида [18]; пик на 2924,6 цм⁻¹ био је ЦХ истезање вибрација угљених хидрата, типичан карактеристичан врх полисахарида [19, 20]. Апсорпција близу 1738,8 цм⁻¹ указује на присуство структура уронске киселине, што сугерише да су полисахариди кисели [16, 21]. Пик апсорпције на 1607,5 цм⁻¹ приписан је адсорбованој води, што може бити последица хигроскопне природе полисахарида. Пик апсорпције близу 1234,3 цм⁻¹ узрокован је вибрацијама савијања ЦХ [22, 23], а апсорпциони врх на 1014,2 цм⁻¹ је потврдио карактеристичну апсорпцију пиранозних прстенова. Пикови апсорпције на 887,3 цм⁻¹ и 755,2 цм⁻¹ указују на присуство -конфигурисаних и -конфигурисаних гликозидних веза [24-27]. Процес раздвајања мембране није оштетио основне типове гликозидних веза или структуре функционалних група полисахарида, чиме је обезбеђен структурни интегритет фракција полисахарида.

Слика 1 Хромотограм састава моносахарида референтних супстанци

Напомена: 1. Маноза; 2. Глукозамин; 3. Рамноза; 4. Глукуронска киселина; 5. Галактуронска киселина; 6. Галактозамин; 7. Глукоза; 8. Галактоза; 9. Ксилосе; 10. Арабиноза; 11. Фукоза.

 

Слика 2. Хроматограми моносахаридног састава полисахаридних фракција.

Напомена: 1. Маноза; 3. Рамноза; 5. Галактуронска киселина; 7. Глукоза; 8. Галактоза; 10. Арабиноза.

 

 

 

 

2.1.4 Анализа скенирајуће електронске микроскопије (СЕМ).

Као што је приказано на слици 4, ЦТП 1 је показао благо таласасту површину при увећању од 2000к (А1). При увећању од 10.000× (А2), уочене су неправилне поре неуједначене величине, што представља „порозну и лабаву“ општу карактеристику. ЦТП 2 је имао релативно нетакнуту и ​​равну структуру при увећању од 2000к (Б1), са слабом агломерацијом упркос неким наборима ивица. При увећању од 10.000× (Б2), површина је била глатка и равна без скоро икаквих очигледних пора. ЦТП 3 је показао суптилне „мребање“ на површини при увећању од 2000× (Ц1), што може бити последица делимичне агрегације молекула полисахарида без потпуног унакрсног повезивања у компактну структуру. При увећању од 10.000к (Ц2), површина је показала умерену храпавост [28]. ЦТП 3 је показао суптилне „мребање“ на површини при увећању од 2000× (Ц1), што може бити последица делимичне агрегације молекула полисахарида без потпуног унакрсног повезивања у компактну структуру. При увећању од 10.000к (Ц2), површина је показала умерену храпавост [28]. ЦТП 4 је имао ретко распоређене честице наноразмера на површини агломерисаног подручја при увећању од 2000 × (Д1), без очигледних веза између честица и умерене дисперзибилности. При увећању од 10.000к (Д2), површина честица је била глатка без очигледних избочина, показујући благе наборе и умерену структурну униформност [29]. Укратко, микроскопске морфологије полисахарида третираних различитим ултрафилтрационим мембранама биле су значајно различите, посебно у стању агрегације, храпавости површине и дисперзибилности. Ова морфолошка разлика може бити повезана са интермолекуларним силама полисахарида и ефектом просијавања током ултрафилтрације.

 

Табела 2. Моларни односи моносахаридног састава полисахаридних фракција

Моносахарид	ЦТП 1 (%)	ЦТП 2 (%)	ЦТП 3 (%)	ЦТП 4 (%)
маноза (човек)	1.373	1.112	1.772	3.484
глукозамин (ГлцН)	0.201	0.265	0.347	0.454
рамноза (Рха)	8.695	9.860	11.060	12.590
глукоза (ГлцА)	1.239	1.313	1.166	1.228
Галактуронска киселина (ГалА)	13.755	12.653	13.777	7.461
глукоза (Глц)	35.101	19.329	33.898	33.998
галактоза (гал)	28.353	33.372	28.623	30.997
арабиноза (ара)	11.284	12.286	12.756	9.806

Слика 3: Фоуриерова трансформација инфрацрвених спектра полисахарида из сваке фракције

 

Слика 4 Слике фракција полисахарида помоћу скенирајуће електронске микроскопије.

Слика 5 Капацитет уклањања радикала ДППХ фракција полисахарида.

 

 

 

ВЕЦИСТНАЦХЕ МУНУФАЦТОРЕР

 

Служба подршке Вецистанцхе-За више детаља о сарадњи
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com

 

2.2 Одређивање антиоксидативне активности полисахарида

2.2.1 Одређивање ДППХ· капацитета чишћења радикала

Као што је приказано на слици 5, капацитет уклањања радикала ДППХ сваке фракције показао је јасан ефекат зависан од дозе [30, 31]. У поређењу са капацитетом уклањања радикала ВЦ, капацитети за чишћење ДППХ четири фракције били су релативно слаби. При концентрацији од 8 мг/мЛ, ИЦ5₀ вредности ВЦ и четири фракције биле су 0,961 мг/мЛ, 4,946 мг/мЛ, 7,534 мг/мЛ, 7,534 мг/мЛ и 8,472 мг/мЛ, респективно, са ЦТП радикалом 1 који показује највећи капацитет за одвајање.

 

Слика 6 Капацитет хватања супероксидних ањона фракција полисахарида.

Слика 7 Укупни антиоксидативни капацитет фракција полисахарида.

 

Слика 8 АБТС капацитет уклањања радикала фракције полисахарида

 

 

2.2.2 Одређивање капацитета чишћења супероксидних ањона

Као што је приказано на слици 6, капацитети за чишћење супероксидних ањона четири фракције нису показали значајну промену са повећањем концентрације [32]. У поређењу са капацитетом уклањања супероксидних ањона ВЦ, капацитети четири фракције су били релативно слаби. При концентрацији од 8 мг/мЛ, ИЦ₅₀ вредности ВЦ и четири фракције биле су 0,884 мг/мЛ, 11,46 мг/мЛ, 10,54 мг/мЛ, 14,03 мг/мЛ и 11,83 мг/мЛ, респективно, што указује да су есенцијалне фракције сца супероксида биле есенцијалне фракције сца. доследан. Ова разлика активности може бити повезана са више фактора као што су молекулска тежина, састав и однос моносахарида и садржај киселог шећера у полисахаридима.

2.2.3 Одређивање укупног антиоксидативног капацитета

Као што је приказано на слици 7, укупни антиоксидативни капацитет сваке фракције постепено се повећавао са повећањем концентрације [33], показујући ефекат зависан од дозе. У поређењу са укупним антиоксидативним капацитетом ВЦ, капацитети четири фракције су били релативно слаби. При концентрацији од 8 мг/мЛ, ИЦ₅₀ вредности ВЦ и четири фракције биле су 22,88 мг/мЛ, 40,00 мг/мЛ, 61,30 мг/мЛ, 79,41 мг/мЛ и 71,81 мг/мЛ, респективно, са ЦТП 1 као најјачим капацитетом антиоксида.

2.2.4 Одређивање АБТС⁺ капацитета за уклањање радикала

Као што је приказано на слици 8, ​​капацитет уклањања радикала АБТС⁺ сваке фракције постепено се повећавао са повећањем концентрације, показујући ефекат зависан од дозе. При концентрацији од 4 мг/мЛ, ИЦ5₀ вредности ВЦ и четири фракције биле су 0,450 мг/мЛ, 0,486 мг/мЛ, 0,405 мг/мЛ, 1,039 мг/мЛ, односно 0,531 мг/мЛ, респективно, што указује да је брзина фракције четири радикала АБТС′ есенцијална. у складу са ВЦ.

 

3 Закључак

У овој студији, остатак одЦистанцхенакон екстракције фенилетаноидног гликозида као сировина, а ултрафилтрациона мембрана комбинована са технологијом преципитације алкохола - заштићена патентом проналаска (Патент бр. ЗЛ200710102756.7) држиХотан Дицхен Пхармацеутицал Биотецхнологи Цо., Лтд. (хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/абоут-ус) - was employed to achieve efficient extraction and fractionation of polysaccharides. Four polysaccharide fractions with different molecular weight ranges were successfully prepared: CTP 1 (>300 кДа), ЦТП 2 (50–300 кДа), ЦТП 3 (10–50 кДа) и ЦТП 4 (<10 kDa). The structural characteristics and antioxidant activity differences of each fraction were systematically analyzed.

Ефекат фракционисања полисахарида и карактеристике дистрибуције: Како се величина пора ултрафилтрационе мембране смањивала, принос фракција полисахарида је показао опадајући тренд, одражавајући широку дистрибуцију молекулске тежине полисахарида уЦистанцхеостатак. Технологија мембранске сепарације (патентирана од стране Хотан Дицхен Пхармацеутицал Биотецхнологи Цо., Лтд.) може прецизно фракционисати компоненте полисахарида са различитим молекулским тежинама и садржајем киселог шећера без оштећења основних типова гликозидних веза и структура функционалних група полисахарида, обезбеђујући структурну структуру. Ово обезбеђује ефикасно и еколошки прихватљиво техничко решење за прецизно фракционисање полисахарида.

Карактеристике односа структура-активност: Све четири полисахаридне фракције су хетерополисахариди који садрже 8 моносахарида, али су уочене значајне разлике у моларним пропорцијама моносахарида. Садржај киселог шећера (уронске киселине) у ЦТП 1 био је значајно већи него у осталим фракцијама. Експерименти са антиоксидантима ин витро потврдили су да је ЦТП 1 показао најбоље активности уклањања радикала ДППХ и АБТС⁺, што указује на то да је антиоксидативна активност полисахарида уско повезана са молекулском тежином, садржајем киселог шећера и односом састава моносахарида, што је у складу са основним закључком постојећих студија које регулишу биполарну активност харида. Студија Аладана Меметалија и др. [34] је такође показао да се антиоксидативна активност значајно повећава са повећањем концентрације полисахарида, а ова карактеристика зависна од дозе је потврђена експериментима са градијентом концентрације у овој студији. За разлику од претходних студија које су обично припремале сирове полисахариде таложењем алкохола, ова студија је увела технологију мембранског одвајања за систематско фракционисањеЦистанцхеполисахарида, омогућавајући прелазак са анализе укупне активности мешаних компоненти на прецизно испитивање антиоксидативних активности фракција полисахарида у различитим распонима молекулске тежине.

Ова студија је само проценила антиоксидативну активност полисахарида користећи ин витро хемијске моделе, а резултати се могу разликовати од антиоксидативне ефикасности у ин виво физиолошком окружењу. Будућа истраживања би требало даље да спроводе ин витро ћелијске експерименте и ин виво студије на животињама како би се потврдила антиоксидативна активност и потенцијални путеви. У међувремену, технологије као што су хроматографија-масена спектрометрија и дифракција рендгенских зрака могу се користити за анализу фине структуре полисахарида и идентификацију кључних активних места, пружајући прецизнију теоријску подршку за развој функционалне хране, антиоксиданата и других производа на бази резидуа полисахарида. Путем даљег усавршавања анализе фине структуре и верификације активности ин виво, очекује се да ће се даље истражити потенцијал примене резидуалних полисахарида и промовисати унапређење развоја карактеристичних медицинских ресурса у Синђангу ка зеленим, ефикасним и индустријализованим правцима.

 

Референце

[18] Ву ХК, Зхоу СИ, Зхоу ИИ, ет ал. Екстракција полисахарида потпомогнута ултразвуком изБамбуса вулгарисЛ. Пуцње које користе нискоеутектички растварач и њихова ин витро анализа активности [Ј].Наука и технологија прехрамбене индустрије, 2025, (у штампи).

[19] Зхоу Р, Цуи М, Ванг И, ет ал. Изолација, идентификација структуре и антиинфламаторна активност полисахарида изФрагмитиризома [Ј].Међународни часопис за биолошке макромолекуле, 2020, 161: 810-817.

[20] Ванг СЛ, Иу Ј, Сонг ЈКС, ет ал. Изолација, пречишћавање, структурна анализа и ин витро активност полисахарида изАмеланцхиер алнифолиаНутт [Ј].Процес Биоцхемистри, 2024, 136: 229-236.

[21] Какар МУ, Ли Ј, Мехбооб МЗ, ет ал. Пречишћавање, карактеризација и одређивање биолошких активности полисахарида растворљивих у води изМахониа беалеи [J]. Научни извештаји, 2022, 12(1): 1-12.

[22] Лиу Т, Зхоу К, Иин С, ет ал. Пречишћавање и карактеризација егзополисахарида произведеног одЛацтобациллус плантарумХИ изолован из домаћег сечуанског краставца [Ј].Међународни часопис за биолошке макромолекуле, 2019, 134: 516-526.[23] Иин З, Зханг В, Зханг Ј, ет ал. Изолација, пречишћавање, структурна анализа и коагулациона активност полисахарида растворљивих у води изЛигуструм луцидумАит цвеће [Ј].Цхемистри Централ Јоурнал, 2017, 11(1): 1-11.

[24] Гао И, Абудуаини Г, Ианг Ц, ет ал. Изолација, пречишћавање и разјашњавање структуреСтропхариа ругосоаннулатаполисахариди са хиполипидемијским дејством [Ј].Границе у исхрани, 2022, 9: 1-12.

[25] Ма К, Ии Кс, Ианг СТ, ет ал. Изолација, пречишћавање и структурна карактеризација полисахарида изЦодонопсис пилосулаи њени терапеутски ефекти на неалкохолну масну болест јетре ин витро и ин виво [Ј].Међународни часопис за биолошке макромолекуле, 2024, 265: 130988.

[26] Ху ХБ, Лианг ХП, Ли ХМ, ет ал. Изолација, пречишћавање, карактеризација и антиоксидативна активност полисахарида из коре стабљикеАцантхопанак леуцоррхизус [J]. Полимери угљених хидрата, 2018, 196: 359-367.

[27] Луо И, Зхао З, Цхен Х, ет ал. Динамичка анализа физичкохемијских својстава и састава полисахарида током ферментације постферментисаног чаја [Ј].Храна, 2022, 11(21): 3376.

[28] Рен Л, Ианг И, Биан Кс, ет ал. Физичкохемијска, реолошка, структурна, антиоксидативна и антимикробна својства полисахарида екстрахованих из семена тамаринда [Ј].Часопис за квалитет хране, 2022, 2022: 1-14.

[29] Генг Кс, Гуо Д, Ву Б, ет ал. Ефекти различитих метода екстракције на физичко-хемијске карактеристике и биолошке активности полисахарида изЦлитоцибе скуамулоса [J]. Међународни часопис за биолошке макромолекуле, 2024, 259: 1-10.

[30] Лиу С, Зханг Т, Цхен З, ет ал. Структурна карактеризацијаЦоридалис ианхусуополисахариди и њихова биоактивност ин витро [Ј].Међународни часопис за биолошке макромолекуле, 2025, 306: 141575.

[31] Гу Ј, Зханг Х, Вен Ц, ет ал. Пречишћавање, карактеризација, антиоксидативна и имунолошка активност полисахарида изСагиттариа сагиттифолиа L [J]. Фоод Ресеарцх Интернатионал, 2020, 136: 1-10.

[32] Хуо С, Ванг Х, Цхен Ј, ет ал. Прелиминарна студија о екстракцији полисахарида, пречишћавању и антиоксидативним својствима филаментозних микроалги богатих шећеромТрибонема минус [J]. Јоурнал оф Апплиед Пхицологи, 2022, 34(6): 2755-2767.[33] Цапек П, Кошталова З. Изолација, хемијска карактеризација и антиоксидативна активностПрунус спиносаЛ. воћни фенолни полисахарид-протеини [Ј].Истраживање угљених хидрата, 2022, 515: 1-9.

[34] Аладан Меметали, Јанг Т, Јуан Ј, ет ал. Процес екстракције и ин витро антиоксидативна активност полисахарида изЦистанцхе тубулосаОстаци [Ј].Хемија и биоинжењеринг, 2020, 37(02): 36-41.