Поређење разлика у садржају осам хемијских компоненти у сировим производима и производима прерађеним у вину две врсте Цистанцхе Десертицола на основу УПЛЦ Ⅱ
Jun 16, 2025
2. Методе и резултати
2.1 Хроматографски услови
УПЛЦ анализа је изведена коришћењем аВатерс АЦКУИТИ УПЛЦ™ БЕХ Ц18 колона (100 мм × 2,1 мм, величина честица 1,7 μм). Мобилна фаза се састојала одметанол (А)и0,1% водени раствор мравље киселине (Б)са следећим градијентом елуције:
0–4 мин: 10% → 26% А
4–18 мин: 26% → 40% А
18–20 мин: 40% → 50% А
Брзина протока:0,3 мЛ/мин
Волумен убризгавања:3 μЛ
Температура колоне:Ночьу 35°Ц
Таласна дужина детекције:330 nm
2.2 Припрема раствора
2.2.1 Мешовито референтно решење
Прецизно измерите следећа стандардна једињења:цистанозид Ф, ехинакозид, цистанозид А, вербаскозид, тубулозид А, изовербаскозид, 2'-ацетилвербаскозид, итубулозид Б. Растворити у 50% метанолу да би се припремила референтна смеша са следећим концентрацијама (µг·мЛ⁻¹):
Цистанозид Ф: 32,7
Ехинакозид: 102.4
Цистанозид А: 50.2
Вербаскозид: 80.6
Тубулозид А: 25.6
изовербаскозид: 86.3
2'-ацетилвербаскозид: 77.3
Тубулозид Б: 60,8
2.2.2 Решење узорка
Сирове кришке Цистанцхеприпремани су омекшавањем биља, резањем и сушењем.
Цистанцхе куван на винуприпремљен је натапањем сирових кришки у 30% пиринчаног вина, мешањем на пари 12 сати, хлађењем и поновним сушењем.
Отприлике0.2 gосушеног праха (пропуштеног кроз сито од 65 месх) је измерено у 50 мЛ јантарну волуметријску боцу, екстраховано са 25 мЛ 50% метанола, соникирано 40 минута (250 В, 35 кХз) и поново доведено до тежине. Раствор је филтриран кроз а0,22 μм мембрана, а филтрат је коришћен за анализу.
Напомена: Х. Десерт Цистанцхе; Г. Тубулоса Цистанцхе; РХ. Цистанцхе десертицола сирове кришке; РГ. Цистанцхе тубулоса сирове кришке; ВХ. Цистанцхе десертицола динстана са вином; ВГ. Цистанцхе тубулоса динстана са вином; Слике од 4 до 7 су исте.
Слика 1 Слике лековитих материјала Цистанцхе десертицола и Цистанцхе тубулоса, сирових кришки и динстаних са вином
познато вино цистанцхе које се продаје у Кини
Вецистанцхе услуга подршке - Контактирајте нас да бисте добили узорак или детаље о велепродаји
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com
Вхатсапп/тел:+86 15292862950
2.3 Квантитативна анализа 8 главних једињења у сировом и вином прерађеном Цистанцхе
2.3.1 Погодност система
Под описаним хроматографским условима, теоретски број плоче заехинакозид exceeded 6000 with good resolution (>1.5). Хроматограми мешаних стандардних узорака, сировог пустињског Цистанцхеа и узорака прерађених у вину приказани су на слици 2.
Пеак Идентифицатион:
Цистанозид Ф
Ецхинацосиде
Цистанозид А
Вербасцосиде
Тубулозид А
Исовербасцосиде
2'-Ацетилвербаскозид
Тубулозид Б
цистанцхе десертицола
цистанцхе тубулоса
2.3.2 Линеарност и границе детекције
Стандардне калибрационе криве су успостављене коришћењем серијских разблажења референтне смеше у концентрацијама од 0,1 до 5,0 мЛ. Калибрационе криве су генерисане цртањемконцентрација (Кс)наспрамповршина врха (И). Утврђене су границе детекције (ЛОД, С/Н=3) и границе квантификације (ЛОК, С/Н=10) и потврђена је добра линеарност у тестираним опсезима.
2.3.3 Прецизност
Показало се шест поновљених ињекција мешаног референтног растворарелативне стандардне девијације (РСД)вршних подручја у распону од0,48% до 2,14%, што указује на одличну прецизност инструмента.
2.3.4 Стабилност
Пример решења засирови Цистанцхе прах (серија бр.. 160901)анализирани су у 0, 2, 4, 8, 12 и 24 сата. РСД површине пикова за свих 8 једињења кретале су се од0,71% до 1,93%, потврђујућистабилност раствора у року од 24 сата.
Табела 1. Информације о узорцима Цистанцхе материјала
| Изворне врсте | ИД узорка | Порекло | Број серије |
|---|---|---|---|
| Цистанцхе десертицола | H1 | Унутрашња Монголија | 160901 |
| H2 | Ксињианг | 1712301 | |
| H3 | Ксињианг | 1712305 | |
| H4 | Ксињианг | 1712306 | |
| H5 | Ксињианг | 1712307 | |
| H6 | Унутрашња Монголија | 1712308 | |
| H7 | Ксињианг | 180710 | |
| H8 | Ксињианг | 180710 | |
| H9 | Ксињианг | 180710 | |
| H10 | Ксињианг | 180711 | |
| Цистанцхе тубулоса | G1 | Ксињианг | 151201 |
| G2 | Ксињианг | 170301 | |
| G3 | Ксињианг | 1709001 | |
| G4 | Ксињианг | 170601 | |
| G5 | Ксињианг | 1712302 | |
| G6 | Ксињианг | 1712303 | |
| G7 | Ксињианг | 1712304 | |
| G8 | Ксињианг | 180710 | |
| G9 | Ксињианг | 180710 | |
| G10 | Ксињианг | 180712 |
| Ецхинацосиде |
| Цистанозид А |
| Вербасцосиде |
2.3.5 Поновљивост
Шест независно припремљених реплика исте Цистанцхе серије показало је добру поновљивост. Просечан садржај (мг·г⁻¹) и РСД били су следећи:
| Цомпоунд | Авг. Садржај (мг/г) | РСД (%) |
|---|---|---|
| Цистанозид Ф | 0.24 | 1.24% |
| Ецхинацосиде | 4.49 | 0.25% |
| Цистанозид А | 0.56 | 1.93% |
| Вербасцосиде | 2.52 | 1.40% |
| Тубулозид А | 0.59 | 1.15% |
| Исовербасцосиде | 1.49 | 0.71% |
| 2'-Ацетилвербаскозид | 1.23 | 1.94% |
| Тубулозид Б | 0.86 | 1.02% |
2.3.6 Тест опоравка
Опоравак је тестиран убацивањемшест реплика Цистанцхе праха (0,1 г)са познатим концентрацијама 8 референтних једињења. Просечан опоравак кретао се од95,56% до 102,71%, са динарима између1,44% и 2,97%, указујућиодлична поузданост екстракције и квантификације.
Напомена: А. Мешовита референца; Б. Сирова цистанцхе десертицола; Ц. Пирјана цистанцхе десертицола у вину; 1. Цистанцхесиде Ф; 2. Ецхинацосиде; 3. Цистанцхесиде А; 4. Вербасцосиде; 5. Тубулозид А; 6. Изовербаскозид; 7. 2΄-ацетилвербаскозид; 8. Тубулозид Б.
2.3.7 Квантификација активних једињења у сировом у односу на цистаншу прерађену у вину
Сваки узорак је тестиран у дупликату. 8 циљних једињења је квантификовано у10 серија Цистанцхе десертицола(сирови и обрађени вином) и10 серија Цистанцхе тубулоса. Резултати су сажети у табели 3, која нуди увид у:
Специфичне разлике у саставу
Промене фитокемијског садржаја након прераде вина
Аналитички отисак прста за контролу квалитета Цистанцхеа
Табела 2. Калибрационе криве, коефицијенти корелације (р), линеарни опсези, ЛОД и ЛОК за осам једињења
| Цомпоунд | Једначина за калибрацију | r | Линеарни опсег (µг·мЛ⁻¹) | ЛОД (µг·мЛ⁻¹) | ЛОК (µг·мЛ⁻¹) |
|---|---|---|---|---|---|
| Цистанозид Ф | И=4.89 × 10⁹Кс + 3.31 × 10³ | 0.9999 | 0,327–32,700 | 0.0521 | 0.1300 |
| Ецхинацосиде | И=3.88 × 10⁹Кс + 1.71 × 10⁴ | 0.9999 | 1.024–102.400 | 0.0422 | 0.1339 |
| Цистанозид А | И=5.08 × 10⁹Кс + 3.45 × 10³ | 0.9999 | 0,502–50,600 | 0.1006 | 0.4035 |
| Вербасцосиде | И=3.88 × 10⁹Кс + 3.43 × 10³ | 0.9999 | 0,806–80,600 | 0.0732 | 0.1871 |
| Тубулозид А | И=4.42 × 10⁹Кс + 1.07 × 10³ | 0.9999 | 0,256–25,600 | 0.0865 | 0.2876 |
| Исовербасцосиде | И=4.81 × 10⁹Кс + 5.29 × 10³ | 0.9999 | 0,863–86.300 | 0.0242 | 0.0734 |
| 2'-Ацетилвербаскозид | И=5.30 × 10⁹Кс + 2.99 × 10³ | 0.9999 | 0,773–77,300 | 0.0317 | 0.1024 |
| Тубулозид Б | И=5.17 × 10⁹Кс + 3.39 × 10³ | 0.9999 | 0,608–60,800 | 0.1794 | 0.3876 |
2.4 Компаративна анализа хемијског састава између врста Цистанцхе
Да истражитефитокемијске разликеизмеђуЦистанцхе десертицолаиЦистанцхе тубулоса, концентрације осам кључевафенилетаноидни гликозидииз10 серија сирових и прерађених узоракасваке врсте су визуелизоване помоћукутије (слика 3). Статистичка анализа је открила да осим за2'-ацетилвербаскозидитубулозид Б, показала је већина других једињењазначајне разлике (П < 0,05)између две врсте у сировом и прерађеном облику.
Конкретно:
Усирова Цистанцхе, садржајцистанозид Ф, ехинакозид, изовербаскозид, тубулозид А и вербаскозидбиознатно нижеинЦ. десертицолау поређењу саЦ. тубулоса(П < 0,05).
Тхеузорци обрађени виномодражавала сличне трендове.
Посебно,цистанозид Аје пронађен навиши нивои уЦ. десертицолаи бионеоткривениинЦ. тубулоса, што сугерише да може послужити као апотенцијално једињење маркераза диференцијацију врста.
ПЛС-ДА хемометријска анализа врста Цистанцхе
A Дискриминантна анализа парцијалних најмањих квадрата (ПЛС-ДА)је изведена коришћењем података о концентрацији осам једињења. Добијенибодовни прикази (слика 4А)показао да сирови и обрађени узорци обе врстене групишу се у јасно одвојене групе.
међутим,тестови случајне пермутације (слика 4Б)открио да је модел бионије преопремљен, као праве вредностиР²И и К²били већи од оних код пермутованих модела. Релативнониске вредности К²предложитиограничена предвидљивост, вероватно збогваријабилност унутар групеипреклапајући опсези једињењаизмеђу сирових и прерађених облика.
Даље ПЛС-ДА моделирање и ВИП анализа
Одвојени ПЛС-ДА модели су конструисани за сирове и обрађене узорке обе врсте за истраживањехемијске разлике специфичне за врсту. Уочено је следеће:
Бодови (слике 5А и 5Ц)показаојасно груписањеизмеђуЦ. десертицолаиЦ. тубулосакако у сировом тако иу прерађеном облику.
Валидација модела (слике 5Б и 5Д)потврђена добра предиктивна моћ без претеривања.
Променљиви значај у пројекцијама (ВИП) дијаграмима (слике 6А и 6Б)идентификовала кључна једињења која доприносе дискриминацији врста:
Засирови узорци: Цистанозид А, цистанозид Ф, ехинакозид, ивербаскозидбили најинформативнији.
Заузорци обрађени вином: Цистанозид Аитубулозид Биграо доминантне улоге.
2.5 Утицај прераде вина на фитохемију Цистанцхеа
Због значајних варијација у садржају једињења у серијама,парна поређењанаправљени су између сирових и обрађених узорака винаиста серија. Резултати, визуелизовани коришћењемвиолински заплети (слика 7), открио следеће:
УЦ. десертицола, нивои2'-ацетилвербаскозид, цистанозид А, цистанозид Ф, ехинакозид, тубулозид А и вербаскозид значајно смањенанакнадна обрада (П < 0,05), доктубулозид Б повећана.
УЦ. тубулоса, нивои2'-ацетилвербаскозид, ехинакозид и вербаскозидтакођесмањио, докизовербаскозид и тубулозид Б повећаназначајно (П < 0,05).
Ови налази указују на то да прерада вина може довести дохидролиза, изомеризација, илихемијска трансформацијаактивних састојака.
3. Дискусија
ПремаИздање Кинеске фармакопеје из 2020, Цистанцхе десертицоламора садржати не мање од0.3%комбинованог садржајаехинакозид и вербаскозид, докЦистанцхе тубулосамора садржати не мање од1.5%ова два једињења. У овој студији, сви сирови и обрађени узорци - осим једне серије (180710) - испуњавали су ове стандарде.
Упркос томеваријабилност од серије до серијеунутар сваке врсте (нека једињења су се разликовала и до 10 пута, као што су тубулозид А и изовербаскозид), статистички значајне разлике у садржају једињења су доследно примећене између две врсте. Ово потврђује топорекло врсте је главни факторутичући на фитокемијски састав.
Поред тога,цистанозид Абиооткривена само уЦ. десертицолаи одсутан уЦ. тубулоса, чинећи га авредан маркер за аутентификацију врсте, посебно у поставкама фармакогностике или контроле квалитета.
🔬 Утицај прераде вина на хемијски састав
Након прераде вина, обе врсте су показале доследан тренд:
Смањени нивоиод:
Цистанозид Ф, ехинакозид, цистанозид А, вербаскозид, тубулозид А и 2'-ацетилвербаскозид
Повећани нивоиод:
Тубулозид Б и изовербаскозид
Ови трендови могу бити резултатхемијска хидролиза, деградација, илиструктурно преуређењетоком процеса парења. Занимљиво је давеличина и правац промена су варирали у различитим серијама, вероватно због разлика у:
Почетне концентрације једињења
Морфологија биљке (величина, дебљина)
Осетљивост на услове обраде
Ово наглашава важностстандардизовање параметара обрадеи дириговањепроцене квалитета специфичне за серијутоком биљне припреме.
