Дихотомни одговори на хроничну феталну хипоксију доводе до унапред одређеног фенотипа старења Ⅰ
Nov 29, 2023
Укратко
Користећи протеомику одоздо према горе и бубрег као парадигму, ми извештавамо о интегративној перспективи ћелијских одговора на хроничну феталну хипоксију, откривајући фундаменталне механизме феталног програмирања теорије болести одраслих који су принципијелно применљиви на све друге органе у телу. Карактеристични биомаркер ткива и серума профиће промовисати развој нових терапијских приступа за сузбијање фенотипа прераног старења који изгледа да је повезан са феталним програмирањемхроничне болести.
НАБАВИТЕ ПРИРОДНИ ОРГАНСКИ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНЦХЕ СА 25% ЕХИНАКОЗИДА И 9% АКТЕОЗИДА ЗА ИНФЕКЦИЈУ БУБРЕГА
Хигхлигхтс
• Хронична фетална хипоксија изазива широко распрострањене промене у експресији протеина.
• Потиснута репликација и транслација ограничавају формирање нових нефрона.
• Вишеструки путевиунапред одређују фенотип старењавећ током развоја.
• Синергија инфлоштећење запаљења, неефикасна поправка и измењен метаболизам.
• Смањено обиље протеина против старењаклото и сиртуин 6 код мишева и људи.
Ограничење интраутериног раста изазвано хипоксијом повећава ризик закардиоваскуларни, бубрежни, и другихроничне болести код одраслих, што представља велики јавноздравствени проблем. Ипак, не зна се много о феталним механизмима који предиспонирају ове особе на болест. Користећи претходно валидирани мишји модел феталне хипоксије и протеомике одоздо према горе, карактеришемо одговор феталног бубрега на хронични хипоксични стрес. Фетални бубрези показују дихотомни одговор на хроничну хипоксију, са једне стране обухватајући ћелијске адаптације које промовишу преживљавање (гликолиза, аутофагија и смањена синтеза ДНК и протеина), али са друге стране процесе који индукују фенотип сличан старењу (инфилтрација инфламаторних ћелија , оштећење ДНК и смањена пролиферација). Важно је да хронична хипоксија такође смањује експресију протеина против старења клотхо и Сирт6, механизам који је еволутивно очуван између мишева и људи. Узети заједно, откривамо да је унапред одређено старење током развоја фетуса кључни догађај ухронична хипоксија, успостављајући чврсту основу за Баркерову хипотезу о феталном програмирању болести одраслих. Овај фенотип је повезан са карактеристичним профилом биомаркера у узорцима ткива и серума, који се може искористити за откривање и циљање убрзаног старења ухроничне хипоксичне болести људи.
Баркерова теорија феталног програмирања болести одраслих (1, 2) наводи да нежељени догађаји током развоја повећавају ризик од вишеструких хроничних болести у одраслом добу, укључујућихипертензија,шећерна болест,опструктивна болест плућа, илихронична болест бубрега(ЦКД). У нашем друштву које стално стари, ови поремећаји намећу огроман економски терет који прогресивно расте због све већег броја пацијената који пате од једног или више ових поремећаја. Међу њима,ЦКДипоследњи стадијум болести бубрега(ЕСРД) не само да представљају независне факторе ризика за кардиоваскуларни морбидитет и морталитет, већ такође стварају све веће трошкове терапије замене бубрега, што их чини великим проблемом јавног здравља. Међу стратегијама за суочавање са овим трендом, расветљавање механизама који повезују Баркерову теорију и развој ЦКД игра кључну улогу. Уверљиво објашњење за постепени губитак функције бубрега код потомака мале порођајне тежине претпоставља успостављање зачараног круга који се врти између смањене бубрежне филтрационе површине, повећаног оптерећења преосталих нефрона и даљег оштећења тог поновосмањује капацитет филтрације(Brenner's hypothesis) (3). A common finding in intrauterine growth restriction (IUGR) babies is the reduced number of nephrons formed at the end of kidney development (4). Thus, a low nephron number at birth increases the risk for accelerated functional decline and irreversible renal tissue damage (5, 6). Among all possible intrauterine stress factors, chronic hypoxia due to placental insufficiency or pregnancy at high altitude (>2500 м надморске висине – погађа више од 2% светске популације (7, 8)) спада у најкритичније и клинички релевантне факторе који нарушавају развојни програм ембриона (9). Међутим, молекуларни механизми помоћу којих хипоксија доводи до ИУГР и поремећеног развоја бубрега остају непотпуно схваћени и захтевају даље истраживање. У овој студији, проценили смо на нивоу протеома молекуларне промене у феталном бубрегу након излагања ембриона миша у развоју хроничном хипоксичном стресу и потврдили неке кључне налазе у узорцима хуманог хипоксичног серума. Пружамо значајне доказе о низу механизама интеракције који с једне стране омогућавају опстанак ћелија у неповољним условима, али с друге стране, промовишу смањен број нефрона и фенотип прераног старења. То даље показујемоген-специфична ДНКхиперметилација али и хипометилација ДНК доприносе овом дихотомном одговору на хроничну хипоксију. Дакле, наши налази успостављају чврсту основу за Баркерову хипотезу, откривајући низ путева који унапред одређујуфенотип старењавећ током развоја.
ЕКСПЕРИМЕНТАЛНЕ ПРОЦЕДУРЕ
Дизајн експеримента и статистичко образложење Циљ ове експлоративне студије је био да се открију промене у протеому целих феталних бубрега које потичу од ИУГР фетуса како би се продубило знање о феталним механизмима који предиспонирају мале особе у гестационом узрасту на хроничне болести у одраслом добу. Студија је била заснована на протеомском профилисању одоздо према горе коришћењем нано-ЛЦ система спојеног са масним спектрометром високе резолуције орбитрап. У ту сврху, шест Е18.5 хипоксичних бубрега и шест Е18.5 нормоксичних бубрега мушкараца коришћено је и анализирано у дупликату у контролисаном експерименту на слеп начин. Све репликације су биле успешне, ниједан експериментални налаз није могао бити реплициран. Подаци о протеомици су анализирани коришћењем софтвера МакКуант 1.5.2.8 (укључујући претраживач Андромеда и пакет за статистичку анализу Персеус) и функционалног груписања анотација. За дугорочне последице хроничне феталне хипоксије на бубрежну функцију, насумично је одабрано пет хипоксичних и пет нормоксичних мушких потомака и анализирано након 8 месеци (потребно је пет животиња да би се открило смањење ГФР од 30% код феталних хипоксичних животиња, на основу варијансе од 15%, Алфа=0.05, Повер=0.9). Експеримент ин виво је закључен проценом реналне фиброзе и серумских маркера након 15 месеци. Да би се потврдили неки од кључних налаза експеримената на животињама, анализирани су узорци људског серума, који су прикупљени у претходним контролисаним студијама на здравим добровољцима (10). Сви ин витро експерименти су анализирани и заслепљени одговарајућим контролама. Статистички тест и експериментални детаљи су дати у легенди сваке фигуре. Сви подаци су представљени и укључују све ванредне вредности.
Животиње
Ц57БЛ/6Н мишеви су купљени од Јанвиер лабораторија, Француска, и смештени на 23 ◦Ц и 50 до 60% влажности у ИВЦ кавезима са слободним приступом храни и води и циклусом од 12 сати дан/ноћ. Сви експерименти на животињама спроведени су у складу са швајцарским законом о добробити животиња и одобрени су од стране локалних власти (Кантон Берн БЕ96/11, БЕ105/14 и БЕ105/17). За временско парење, женке у приплоду су провераване на вагиналне чепове сваког јутра, а ако су присутни, временска тачка је постављена на дан гестације (Е) 0,5. Гравидне мајке су насумично распоређене у нормоксичну контролну групу (Н=11) или изложене константној хипоксији (Н=11) током 7 дана. За индукцију хипоксије, мајке на дан гестације Е11.5 су пребачене у хипоксичну кутију за рукавице (Цои Лаборатори Продуцтс), а садржај кисеоника је постепено снижен на 10% у року од 3 до 4 х. Електрични вентилатор унутар коморе је одржавао адекватну циркулацију ваздуха. Ниво ЦО2 је одржаван ниским хелирањем вишка ЦО2 у кертриџима напуњеним натријум-кречом (Сигма, 72073) повезаним са системом за циркулацију ваздуха. Вишак влаге је апсорбован силика гелом наранџастим гранулом (Сигма, 1.01969), мењаним сваки дан. Девет жена из сваке групе је еутаназирано на Е18.5, а фетуси и плаценте су сакупљени, измерени и припремљени за даљу анализу. Фетална крв је узета из трупа обезглављених Е18.5 фетуса. Фетални бубрези су сецирани у ПБС користећи Леица М80 стереоскоп. За дугорочне анализе, две мајке су уклоњене из хипоксије неколико сати пре рођења, а мушко потомство је коришћено за процену функције бубрега (брзина гломеруларне филтрације — ГФР) са 8 месеци као што је описано (11) и за процену фиброзе бубрега и нивоа клотоа и сиртуина 6 у серуму у 15 месеци.
Гломерулар Цоунт
За имунофлуоресцентно бојење бубрега Е18.5 на целој површини, примењен је иДисцо протокол бојења (12) (хттпс://идисцо.инфо/идисцо-протоцол/) са предтретманом метанолом коришћењем антинефринског антитела (Р&Д АФ3159). За релевантне кораке коришћено је време инкубације н=1 дана и запремина раствора од 1,6 мл. Бубрези су постављени у 8-слајдове са стакленом комором (Тхермо Фисхер, 154534) и одмах снимљени помоћу ИМИЦ дигиталног микроскопа (ФЕИ, тип 4001) са полихромним В светлом извор, контролер камере Орца-Р2 из Хамаматсуа (Ц10600) и софтвер за преузимање уживо (ФЕИ, верзија 2.6.0.14). З-стацк слике од 100 микрометара замрљаних бубрега Е18.5 су анализирани софтвером за обраду слика отвореног кода Фији (ИмагеЈ, верзија 2.0.0-рц69/1.52и, хттпс:// имагеј.нет/ Фиџи). У додатку ТрацкМате в3.8.0, Довнсампле ЛоГ детектор је постављен на 80,0 пиксела за процењени пречник мрље са 16- прагом пиксела и фактором смањења узорковања 2. Број тачака по кадру је додат да би се израчунао број гломерула по бубрегу. Размак од 100 μм између оквира је изабран да би се избегло двоструко бројање идентичних гломерула на узастопним сликама, с обзиром на просечан пречник гломерула од 80 μм.
Транскутана процена гломеруларне филтрације ГФР је одређен код свесних животиња као што је претходно описано (11). Укратко, плазма клиренс ФИТЦ-синистина (Фресениус-Каби, ЛИ9830076) се мери преко коже коришћењем светлећих диода са максимумом емисије за ФИТЦ на 470 нм и фотодиодом која детектује флуоресцентно светло са максималном осетљивошћу на 525 нм. Смањење интензитета флуоресценције током времена се затим претвара у ГФР.
РТ-кПЦР Укупна РНК је изолована коришћењем ТРИзол реагенса (Инвитроген 15596026) према протоколу произвођача. Концентрација и квалитет РНК су одређени спектрофотометром Нанодроп 1000 (Тхермо Фисхер Сциентифиц), а 1000 нг је транскрибовано у цДНК коришћењем ПримеСцрипт РТ Реагент Кит (Такара, РР037А). цДНК је разблажен до 2 нг/ул, а кПЦР је изведен са ФАМ-означеном УПЛ сондом (Роцхе) плус одговарајућим ген-специфичним прајмерима и ТакМан Фаст Универсал ПЦР Мастер мешавином (Апплиед Биосистемс, 4352042) на 7500 Фаст Реал-Тиме ПЦР систему (Примењени биосистеми). Анализа података је обављена помоћу Мицрософт Екцел-а. Метода 2(-ΔЦт) је коришћена за израчунавање релативних нивоа експресије за РТ-кПЦР. Секвенце сонде и прајмера наведене су у Додатној табели С1.
Припрема узорка за ЛЦ-МС/МС анализу Изоловани мушки фетални бубрези (н=3 за сваку групу) су хомогенизовани у пуферу за узорке (7,5 М уреа, 1,5 М тиоуреа, 4% ЦХАПС, 0.{{ 18}}5% СДС, 100 мМ дитиотреитола (ДТТ)) помоћу ултразвучног штапа. Концентрације протеина су одређене помоћу Брадфордовог теста (Био Рад-Лабораториес). Протокол варења у гелу је примењен као што је претходно описано (13, 14). Укратко, 80 уг сваког узорка је стављено на СДС-ПАГЕ, што нам је омогућило да префракционишемо узорак како бисмо смањили његову сложеност. Након фиксације са 50% метанола/10% сирћетне киселине, гелови су испрани и сензибилизовани са 0,02% На2С2О3. Гелови су затим обојени са 0,1% АгНО3 током 10 минута, испрани и развијени са 3% На2ЦО3/0,05% формалдехида. Свака протеинска трака је затим исечена на четири кришке и очишћена. Након редукције са ДТТ и алкилације јодоацетамидом (ИАА), протеини су ензимски дигестирани коришћењем Трипсин/Лис-Ц (МС квалитета; Промега Цорпоратион). Након дигестије, пептиди су елуирани, сушени и чувани на -20 ◦Ц до ЛЦ-МС/МС анализе.
ЛЦ-МС/МС анализа
Као што је претходно описано (13), узорци пептида су реконституисани у 5 ул 30% мравље киселине (ФА) која садржи 10 фмол сваки од четири синтетичка стандардна пептида и разблажени са 40 ул мобилна фаза А (97,9% Х2О, 2% АЦН, 0,1% ФА). Синтетички пептиди [Глу1-Фрибринопептид Б – ЕГВНДНЕЕГФФСАР; М28 – ТТПАВЛДСДГСИФЛИСК; ХК0 – ВЛЕТКСЛИВР; ХК1 – ВЛЕТК(ε-АЦ)СЛИВР] су додани у сваки узорак као интерна контрола квалитета за праћење стабилности ЛЦ-МС система. Десет микролитара овог раствора је затим убризгано у Дионек Ултимате 3000 нано ЛЦ-систем повезан са КЕкацтиве орбитрап масеним спектрометром опремљеним извором јона наноспреја (Тхермо Фисхер Сциентифиц). Као корак претходног концентрирања, пептиди су стављени на предколону од 2 цм × 75 μм Ц18 Пепмап100 (Тхермо Фисхер Сциентифиц) при брзини протока од 10 ул/мин користећи мобилну фазу А. Елуирање пептида из предколоне у 50 цм Пепмап1μм0 аналитичка колона (Тхермо Фисхер Сциентифиц) и накнадно одвајање су постигнути при брзини протока од 300 нл/мин коришћењем градијента од 8% до 40% мобилне фазе Б (80% АЦН, 19,9% Х2О, 0,1% ФА) током 235 мин. Масена спектрометријска детекција је остварена, вршећи МС скенирање у опсегу од м/з 400 до 1400 при резолуцији од 70.000 (на м/з =200). МС/МС скенирање 12 најзаступљенијих јона постигнуто је ХЦД фрагментацијом при 30% нормализоване енергије судара и анализирано у орбитрапу при резолуцији од 17,500 (на м/з =200). Сви узорци су анализирани у дупликату. Протеомички подаци масене спектрометрије депоновани су у Конзорцијум ПротеомеКсцханге (хттп:// протеомецентрал.протеомекцханге.орг) преко ПРИДЕ партнерског спремишта (15) са идентификатором скупа података ПКСД018999 и 10.6019/ ПКСД018999.
Идентификација протеина и без етикета
Квантификација (ЛФК) Идентификација протеина, квантификација без ознака (ЛФК) као и статистичке анализе су обављене коришћењем софтвера МакКуант 1.5.2.8, укључујући претраживач Андромеда и пакет за статистичку анализу Персеус (16, 17), који се често користи за обраду и статистичку процену података о протеомици сачмарица. Протеини су идентификовани коришћењем УниПрот базе података за протеине мусцулус (верзија 170428 са 16,854 уноса, ограничено само на прегледане уносе), толеранција масе пептида од 25 ппм, толеранција МС/МС подударања од 2{{21 }} ппм, и највише два пропуштена цепања са трипсином као протеазом. Критеријуми за претрагу су даље укључивали карбамидометилацију цистеина као фиксну модификацију, оксидацију метионина као и ацетилацију Н-терминалног протеина као променљиве модификације, и најмање две идентификације пептида по протеину, од којих је најмање једна јединствена. Штавише, подударање између серија је изведено коришћењем временског оквира меча од 5 минута и 15-минутног временског оквира за поравнање. И за пептиде и за протеине примењена је стопа лажног открића (ФДР) мања од 0,01. За статистичку анализу извршена су међусобна поређења између нормоксичних и хипоксичних узорака бубрега да би се одредиле групе протеина, које су биле значајно повећане или доле регулисане након хипоксије. У том циљу, коришћењем пакета статистичке анализе Персеус, израчунате су разлике вредности ЛФК. Промене вредности садржаја протеина између нормоксичних и хипоксичних узорака бубрега одређене су двостраним т-тестом са п < 0,05 и минималном двоструком разликом у обиљу. Сви протеини који испуњавају ове критеријуме разматрани су у овој студији. Поред тога, да би се нагласили најснажнији регулаторни ефекти на хипоксију, значајно регулисани протеини са глобалним ФДР-ом<0.05 as determined by a permutation-based method were analyzed.
Функционална анотација и груписање
Груписање функционалних анотација је извршено коришћењем базе података генских онтолошких ресурса (18–20) и ДАВИД платформе (21) (хттпс://давид.нцифцрф.гов). Протеинске мреже су генерисане коришћењем СТРИНГ базе података (22). Диференцијалне вредности експресије између бубрега контролне групе Е18.5 нормоксичне и хипоксичне су мапиране помоћу Хеатмаппер-а (23) (хттп://ввв.хеатмаппер.ца).
Имунохистоцхемистри
ПФА фиксирани, парафином уграђени делови ткива су рехидрирани, а ендогена пероксидаза је блокирана инкубацијом стакалца у 1,5% раствору Х2О2 (0.02 М лимунске киселине, 0.{101} {40}}6 М На2ХПО4) на собној температури 15 минута у мраку. Повлачење антигена је изведено кључањем у Трис-ЕДТА (пХ 9) или пуферу лимунске киселине током 20 минута, након чега је уследило лагано хлађење до собне температуре. Након блокирања у 2% БСА у ПБС на собној температури током 1 х, секције су инкубиране са примарним антителима у блокирајућем раствору о/н на 4 ◦Ц (МПО, аб208670; ЦАВ1, аб32577; оба Абам). Након три корака испирања у ПБС-у, секције су инкубиране са ХРП коњугованим секундарним анти-зечјим антителом (К4003, Дако ЕнВисион+ Систем од Агилента) током 1 х на собној температури. После три корака испирања у ПБС-у, сигнал је развијен са ДАБ-ом (Агилент, К3468). Секције су обојене, дехидриране и монтиране коришћењем Еукитт медијума (Сигма, 03989). За детекцију 8-ОХдГ (МОГ-100П, ЈаИЦА), коришћен је Вецтор МОМ имунодетекциони комплет (БМК-2202) према произвођачу. Слике светлог поља су добијене на Никон Е600 микроскопу (објектив План Флуор ЕЛВД 20×/0,45) са контролером камере Дигитал Сигхт ДС-УЕ и ДС-Ри1 камером (оба Никон) коришћењем Никон софтвера НИС Елементс 4.0.
Ензимски
Квантификација нивоа лактата лактата у Е18.5 бубрезима је одређена након депротеинације узорка са спин колонама коришћењем ензимског комплета МАК064- 1КТ (Сигма), према произвођачу.
Хуман Студиес
Студију на људима одобрио је Етички комитет Швајцарског федералног института за технологију (ЕК 2011-Н-51) и спроведено је у складу са Хелсиншком декларацијом. Укратко, добијен је информисани пристанак од девет здравих непушача из низије (осам мушкараца и једна жена). Ови добровољци су узастопно процењени на више физиолошких параметара пре, током и после 4-недеље непрекидног боравка на великој надморској висини, као што је раније објављено (10).
Ћелијска култура
Примарне проксималне тубуларне ћелије (пПТЦ) су изоловане од {{0}} до 4- седмично старих Ц57БЛ/6Н мушких бубрега, као што је претходно описано (24). Укратко, проксимални тубуларни фрагменти су добијени варењем кортикалног ткива бубрега са колагеназом и накнадном филтрацијом кроз мембрану величине пора од 250 μм и 80 μм. ПТЦ су узгајани у ДМЕМ/Ф12 (Гибцо, 21041-025) са додатком 15 мМ ХЕПЕС, 0,55 мМ НаПирувата, 1% НЕАА и суплемената медијума за раст бубрежних епителних ћелија (РЕГМ) (Лонза, ЦЦ-4127) . Након конфлуенције, пПТЦ су једном подељени коришћењем Аццутасе раствора (Сигма, А6964) и поново постављени. За хипоксију, ћелијска култура је изведена на 1% кисеоника током 48 х; нормоксичне контроле су узгајане на 19% кисеоника.
ЕЛИСА
Нивои Клотхо-а или Сирт6 у серуму су одређени коришћењем следећих комплета за узорке миша (ЦСБ-Е14362м, Цусабио технологија и ОКЦД02892, Авива Системс Биологи) и људске узорке (ЦСБ Е17018х и ЦСБ-Е13235х; оба Цусабио технологија) према датим протоколима. Фетална крв миша је сакупљена из дебла обезглављених фетуса Е18.5. Крв мишева одраслих животиња узоркована је из вене сафене. Узорци људског серума су добијени из претходне студије (10).
Бисулфите ПЦР
ДНК из животиња третираних хипоксијом или нормоксијом Е18.5 екстрахована је помоћу Киаген комплета за крв и ткиво и конвертована у бисулфит коришћењем ЕпиТецт Бисулфите Кит из Киагена према упутствима произвођача. Двадесет нанограма конвертоване ДНК коришћено је као шаблон у ПЦР реакцији са АмплиТак Голд (Инвитроген). Следећи прајмери су дизајнирани коришћењем МетхПример 2.0: Клотхо, фрагмент од 248 бп (−234/+14 ТСС), Кл_БС_Ф (ТАГ ТТТ ТАГ ГАА ГГТ ААА ГГГ АГТ Г) и Кл_БС_Р (ААЦ ААТ ААТ ТАТ ЦЦА ААА ЦАА АЦ) (25); Мки67, фрагмент од 497 бп (~1 кб узводно од ТСС), Мки67_БС_Ф (ТТГ ГАА ГАА ТАТ ТГА ТТТ АГГ АА) и Мки67_БС{{20} }Р (АЦЦ ТАТ ААА ЦТЦ ЦЦТ ЦТЦ ЦАА ААА Т). ПЦР производи су везани у пЦР4-ТОПО-вектор коришћењем ТОПО ТА комплета за клонирање за секвенцирање (Инвитроген) и трансформисани у ДХ10 бактерије. Клонови су послати на секвенционирање (Мицроситх Секлаб ГмбХ). Инспекција, поравнање, визуелизација и статистика су изведени помоћу КУМА квантификационог алата за анализу метилације (26).
Статистика
Извршена је статистичка анализа и направљени су графикони са ГрапхПад Присм верзија 8 (хттпс://ввв.грапхпад.цом). Две групе су тестиране на значајност непарним двостраним т-тестовима са или без Велчове корекције (Велчова корекција је била за ненормално распоређене податке, Ф тест варијансе је био статистички значајан, п < 0.05). Више група је тестирано коришћењем РМ једносмерне АНОВА са Гајсер-Греенхаус корекцијом и Дунеттовим тестом вишеструких поређења. п вредности<0.05 were assumed significant. Means with standard deviation (SD) are shown.
Изворни подаци
Необрађени подаци за све експерименте који нису резултат анализе масене спектрометрије могу се наћи у табели изворних података С1 у скупу додатних података. Ово укључује податке на којима се налазе слике 1А и Д–Х, слике 3Е и Ф, слике 5Б, слике 7Д–И, слике 8 и додатне слике С1 и слике С6.
РЕЗУЛТАТИ
Хронични
Фетална хипоксија доводи до ембриона са ограниченим растом и смањене бубрежне функције код одраслих потомака Да би се жене које су парене у време изложиле константној хипоксији (10% кисеоника) током 7 дана (слика 1А), коришћена је хипоксична комора. Слично нашем претходном раду (27), бране су се брзо прилагодиле хипоксичном окружењу, а при рођењу величина легла и маса плаценте били су слични нормоксичним контролним гестацијама (додатна слика С1, А–Ц). Без обзира на то, хипоксични Е18.5 фетуси су имали смањену телесну тежину у поређењу са нормоксичним контролама, испуњавајући критеријуме ИУГР (28) (Слика 1, допунска слика С1Д), и 40% смањен број нефрона (Слика 1, Ц и Д). Ово смањење није последица дегенерације нефрона (некрозе или апоптозе) током интраутериног развоја у условима хипоксије, као што је раније објављено (27). Штавише, упркос значајном периоду раста 3 недеље након рођења, о чему смо раније извештавали (27), одрасли хипоксични потомци су показали озбиљно смањену функцију бубрега у 8 месеци (Слика 1Е) и повећану експресију фиброзних маркера у 15 месеци (Сл. 1, Ф–Х), чиме потврђујемо ваљаност нашег приступа као робусног ИУГР модела и илустрације Баркерове теорије феталног програмирања болести одраслих.
Услуга подршке Вецистанцхе-а - највећи извозник цистанцхеа у Кини:
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com
Вхатсапп/тел:+86 15292862950
Купите за више детаља о спецификацијама:
хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/цистанцхе-схоп
