Дијететски цистанцхе ублажава акутно оштећење илеума код патака Ⅱ

3.1. Морфологија црева

У овој студији, врхунски патолошки преглед (Х&Е) и инструкција микроструктуре процењене ултраструктуром илеума су приказани на слици 1. У поређењу са Т0 група, илеум у Т0плус АФБ1 група показује смањење дебљине епитела, оштећење структуре ресица иинфламаторнеагрегацију ћелија, и деструкција микроструктуре, као што је велики број тешко сломљених микроресица и добро избочене митохондрије и скупљање. Оштећење у илеуму патака које садржи структурне уништавање ресица и микроресица након примене АФБ1 изазвало је појаву инфламаторнаоксидациони стрес. Као што је очекивано,дијететски цистанцхеимао способност даштити илеум од акутног оштећења изазваног АФБ1администрација, укључујући неколико сломљених ресица илеума,инфламаторна ћелијаприкупљено и мало оштећење илеума структурно оцењено од стране Х&Е, и смањење броја сломљених микровила, смањење митохондријалних отицање и елиминисање митохондрија смањивање старости процењено прстенастим структурним приказаним у структурној разлици између Т500плус АФБ1гроуп и Т0плус АФБ1гроуп.

група; Т500 плус АФБ1: цистанцхе плус АФБ1 група

Кликните овде да бисте добили Цистанцхе антиоксидативне додатке

Тражи више:

Имејл:wallence.suen@wecistanche.com Вхатсапп плус 86 15292862950

3.2. Нивои АФБ1-ДНК адуката у плазми

АФБ1-адукти ДНК у плазми патака мерени су индиректном компетитивном ЕЛИСА тестом и приказани на слици2. У поређењу са Т0 група, администрација АФБ1 је значајно повећала садржај АФБ1-ДНК адуката (p < 0.001) in the plasma. As expected, дијететски цистанцхесмањен садржај АФБ1-ДНК адуката (p = 0.001) у плазми патака у групи Т500 плус АФБ1 у односу на ону у Т0 плус група АФБ1.

плус АФБ1: цистанцхе плусАФБ1 група. Вредности су изражене као средња вредност± СЕМ (n= 15), ** значи < 0.01.

3.3. Антиоксидативни капацитет у плазми и илеуму

Антиоксидативни капацитет плазме приказан је на слици3. Излагање АФБ1 довело је до оксидационог стреса, показујући да Т-СОД (p = 0.073), ГСХ-ПКС (p = 0.034) и ГСХ-СТ (p = 0.003) активности у плазми су смањене у Т0 плус АФБ1 група од оних у Т0 група. Међутим, Т-СОД (p = 0.039), ГСХ-ПКС (p = 0.009) и ГСХ-СТ (p = 0.003) активности су значајно побољшане у Т500 плус АФБ1 група од оних у Т0 плус група АФБ1. Концентрација МДА (p = 0.028) у плазми је повећан у Т0 плус АФБ1 група од оне у Т0 група, и концентрација МДА (p < 0.001) in the plasma was decreased in the T500 плус АФБ1 група од оних у Т0 плус АФB1. 

3.4. Експресија гена повезаних са Нрф2-СУ сигнални пут у илеумуПримена АФБ1 изазвала је оксидациони стрес ћелија и даље резултирала променама у експресији гена укључујући Кеап1, Нрф2, ЦАТ, СОД1, ГПКС, ГСТ, НКО-1, ХО-1, ГЦЛЦ и ГЦЛМ у илеуму патке. Као што је приказано на слици4, администрација АФБ1 је значајно повећала мРНА (p = 0.001) ниво Кеап1 гена и инхибирани нивои мРНА гена укључујући Нрф2 (p = 0.171), ЦАТ (p = 0.166), СОД1 (p = 0.121), ГПКС (p = 0.065), ГСТ (p = 0.008), НКО-1 (p = 0.061), ХО-1 (p = 0.068), ГЦЛЦ (p = 0.800) и ГЦЛМ (p = 0.090) и садржај протеина Нрф2 (p = 0.001) у илеуму патака у Т0 плус АФБ1 група у односу на оне у Т0 група. Као што се очекивало, додавање цистанцхеа паткама храњеним исхраном током 70 дана значајно је смањило мРНА (p = 0.012) експресија Кеап1 гена у илеуму, значајно повећан ниво мРНА гена укључујући Нрф2 (p = 0.042), СОД1 (p = 0.038), ХО-1 (p = 0.041), НКО-1 (p = 0.047) и ГЦЛЦ (p = 0.043), и побољшани ниво мРНА гена укључујући ЦАТ (p = 0.229), ГПКС (p = 0.568), ГСТ (p = 0.454) и ГЦЛМ (p = 0.860), и Нрф2 протеин (p = 0.005) у илеуму патака у Т500 плус АФБ1 група у односу на оне у Т0 плус група АФБ1.

* значиp < 0.05, ** meansp < 0.01

3.5. Експресија гена повезаних са НФ-κБ Сигнални пут у илеуму

Експресија инфламаторних гена је приказана на слици5. У поређењу са Т0 група, администрација АФБ1 повећала је ниво мРНА неких гена као што је ТЛР4 (p = 0.037), НФ-κB (п <0.001), ТНФ- (p = 0.025), ИЛ-6 (p = 0.072), ТКСНИП (p = 0.007), НЛРП3 (п <0.001) и ИЛ-18 (p = 0.478) у илеуму патака у Т0 плус група АФБ1. Као што је очекивано,дијететски цистанцхезначајно потисну прекомерну експресију гена укључујући ТЛР4 (п <0.001), НФ-κB (p = 0.001), ТНФ- (p = 0.012), ИЛ-6 (p = 0.007), ТКСНИП (p = 0.001), НЛРП3 (p = 0.001) и ИЛ-18 (п <0.001) у илеуму патака у Т500 плус АФБ1 група у односу на оне у Т0 плус група АФБ1. Поред тога, садржај ПП 65 (p = 0.004) у илеуму повећан у Т0 плус АФБ1 група у односу на ону у Т0 група. Као што је очекивано,дијететски цистанцхезначајно потиснут ПП 65 (p = 0.015) садржај протеина.

интензитет циљног протеина до интерне референце (ГАПДХ). Вредности су изражене као средња вредност± СЕМ (n = 15), и* значиp < 0.05, ** means p < 0.01

4. Дискусија

Морфологија црева је један од маркера понашања за процену упале и оксидационог стреса црева изазваног применом АФБ1. Литература о ефектима примене АФБ1 на морфологију илеума патака је оскудна. Иан ет ал. (2020) су објавили да је примена АФБ1 довела до срчаног патолошког оштећења Спрагуе-Давлеи пацова, инфилтрације инфламаторних ћелија и веће дегенерације кардиомиоцита [29]. Катарални ентеритис са инфламаторним ћелијским инфилтрацијама у цревима бројлерских пилића изазван АФБ1 уништио је структуру црева [12]. Лузи и др. (2002) пријавили су акутне контракције илеума изазване администрацијом АФБ1 [30]. Резултати у овој студији показали су да је дијетални цистанцхе снажан заштитни агенс илеума против инхибиције упале, што може бити да је цистанцхе имао способност да инхибира антиинфламаторно код вишеструких инфламаторних поремећаја код мишева [31–33]. Оштећење ДНК узроковано оксидативним стресом ће уништити стабилност ДНК, што може подстаћи стварање различитих ДНК адуката [34]. АФБ1-ДНК адукт је биомаркер за процену степена повреде тела коју је индуковао АФБ1. Синтетизација и обогаћивање АФБ1-ДНК адукта уништило је структуру ткива, што је резултирало канцерогеним развојем [35]. АФБ1 би се метаболисао помоћу изоензима цитокрома П450с у АФБ1-8,9-епоксид (АФБО) и производио сродне адукте [36] и повећава оштећење ткива, оксидативни стрес и оштећење ДНК од стране РОС [37]. АФБ1-ДНК адукти могу да се вежу за нуклеопротеине и нуклеинске киселине, изазивајући тако оштећење ДНК и ћелија и смањујући ниво антиоксидативних ензима и синтезу протеина [38]. Зханг ет ал. (2016) су известили да суплементирани цистанцхе инхибирају оштећење јетре изазвано АФБ1 повећањем антиоксидативне активности антиоксидативних ензима (ГПк, СОД, ЦАТ и ГСТ) и инхибирањем производње АФБ1-ДНК [39]. У овој студији, примена АФБ1 је повећала садржај адукта АФБ1-ДНК у плазми. Дијететски цистанш је значајно умањио овај феномен, резултати су показали да је дијетална цистанша потенцијал да заштити илеум у овом моделу акутне примене АФБ1, што се може објаснити антиоксидативним ефектом цистанхе који је побољшао антиоксидациони капацитет тела [40,41]. Оксидациони стрес се јавља када је неравнотежа оксидације и антиоксидације у органима изазвана смањењем активности антиоксидативних ензима и повећањем нивоа пероксидације липида. Систем антиоксидативних ензима укључујући ЦАТ, ГСХ-Пк и СОД је прва линија ћелијске одбране од слободних радикала и реактивних врста кисеоника (РОС) и неопходан је у целокупној стратегији одбране антиоксиданата у телу [42]. 

ГСТ је кључни ензим за смањење реактивних врста кисеоника (РОС) и оксидативног стреса како би се постигла детоксикација тела [43]. Као што је приказано на слици3, оксидациони стрес у плазми и илеуму патака настао је током акутног оштећења илеума изазваног применом АФБ1. Као што се очекивало, дијетални цистанш је побољшао оксидациони стрес тела повећањем активности Т-СОД, ГСХ-ПКС и ГСХ-СТ у плазми и илеуму након примене АФБ1. Резултати у овој студији показали су да је цистанцхе моћно антиоксидационо средство за патке храњене применом АФБ1, што се може објаснити антиоксидативним капацитетом преко супресије оксидације липида и повећања активности антиоксидационог ензима уз помоћ цистанцхе допуњених [8,44,45]. Ови резултати су у складу са претходним извештајем који је показао да је цистанцхе побољшао АФБ{0}}индуковане промене у активностима глутатиона, СОД, ЦАТ и МДА [8]. Ово може бити због способности цистанцхеа да уклони слободне радикале обнављањем активности антиоксидативних ензима и ублажавањем оксидативног стреса [15,46]. Равнотежу између оксидације и антиоксидације ин виво регулисали су Т-СОД и ГСХ-Пк [47]. Нрф2 је пребачен у ћелијско језгро и комбинован са т елементом антиоксидативног одговора (АРЕ) и појачао је транскрипцију гена антиоксидантног ензима укључујући СОД, ЦАТ, ГСХ-Пк, ХО-1, НКО-1, ГЦЛЦ и ГЦЛМ [47,48]. Поред тога, ГСТ се појачава активацијом Нрф2 сигналног пута и као врста ензима за детоксикацију фазе ИИ који је укључен у различите детоксикације ин виво за ублажавање оксидативног стреса [49,50]. Оксидативни стрес и липидна пероксидација били су биомаркери за пацове изазвани применом АФБ1 [51,52]. Оксидативни стрес је смањен експресијом активационих гена под Нрф2-АРЕ сигналним путевима, као што су НКО-1, ХО-1 и ГЦЛЦ [40]. Бројна истраживања пријавио да је експресија индукованих гена додатком цистанцхе укључујући ХО-1, НКО-1, -ГЦЛЦ, -ГЦЛМ, ЦАТ и ГПКС преко активације Нрф2 код бројлера и пацова [40,41] и елиминише оштећење јетре изазвано применом АФБ1 [39,53]. 

Резултати у овој студији су показали да примена АФБ1 може да изазове оштећење илеума оксидативним стресом путем инхибиције Нрф2 сигналног пута. Дијететски цистанцхе је промовисао експресију Нрф2 низводних гена као што су антиоксидативни гени (ЦАТ, СОД1, ГПКС1, ГСТ) и гени ензима за детоксикацију фазе ИИ (НКО1, ХО-1, ГЦЛЦ, ГЦЛМ), што је показало да додавање цистанцхеа у исхрану за патке инхибирају акутно оксидационо оштећење илеума изазвано применом АФБ1 активирањем Нрф2-АРЕ сигналног пута. Резултати у овој студији су пружили доказе да би дијетални цистанш могао да буде моћно средство за побољшање илеума од оксидационог стреса изазваног применом АФБ1. НФ- активиран оксидационим стресомκБ сигнални пут је затим даље проценио производњу инфламаторних цитокина [54]. У овој студији, повреда илеума изазвана применом АФБ1 може бити последица упале. Примена АФБ1 може да изазове оштећење илеума директно кроз повећање експресије инфламаторних фактора и директно активирање инфламаторног сигналног пута. Постоји позитивна веза између оксидационог стреса и упале у ткивима [55]. Ко ет ал. (2020) су известили да НФ- активиран оксидационим стресомκБ сигнални пут, повећао је проинфламаторне цитокине и изазвао упалу у плућима пацова [56]. НФ-κБ сигнализација може бити активирана помоћу АФБ1 у ћелијској линији 3Д4/21 [57], што резултира низом инфламаторних реакција [58]. Кумара и др. (2020) су открили да примена АФБ1 изазива инфламаторно повећањем нивоа цитокина проинфламаторних фактора, ТНФ- , ИЛ-12 и ИЛ-6 у серуму албино мишева [59]. Излагање АФБ1 у исхрани је довело до прекомерне експресије гена ТНФ-а , ИЛ{0}} и ИЛ-6 у јетри свиња, као и нивои мРНА инфламаторних фактора (ТНФ- , ИЛ-12, ИЛ-6) у јетри свиња храњених храном која садржи 8 процената брашна од семенки грожђа и АФБ1 се вратио на контролне нивое [60]. Нивои ТНФ-а , ИЛ-6 и ИЛ-1 у јетри пацова са интраутериним ретардацијом раста, што је у јетри ИУГР пацова храњених цистанцхе 400 мг кг−1 дијета враћена на контролни ниво пацова са нормалном порођајном тежином [38]. Активација НФ-κБ сигнални пут је појачао експресију гена (НЛРП3 и каспаза-1), што је промовисало ИЛ-1 и ИЛ-18 сазревање и лучење и покренуо инфламаторни одговор [61]. Резултати у овој студији показали су да примена АФБ1 значајно процењује експресију гена фактора упале у илеуму патака, а дијетална цистанша инхибира ову експресију гена, у складу са студијом да је активација НЛРП3 сигналног пута помоћу АФБ1 код пацова [40]. Претходни резултати су показали да је цистанцхе имао способност да инхибира експресију протеина НЛРП3 супресијом каспазе-1 и ИЛ-1 [29]. Дакле, резултати у овој студији су открили да цистанцхе може бити један од обећавајућих додатака храни за ублажавање упале у илеуму и оштећења илеума изазваног применом АФБ1 инхибицијом НФ-κБ сигнални пут

5. Закључци

У закључку, примена АФБ1 изазвала је повреду илеума, оксидациони стрес и упалу инхибицијом експресије низводних гена Нрф2-АРЕ сигналног пута и активирањем експресије гена низводних гена НФ-κБ сигнални пут. Међутим, дијетална цистанша је значајно побољшала оштећење илеума, оксидациони стрес и запаљење патака изазвано применом АФБ1, вероватно због активације Нрф2-АРЕ и инхибиције НФ-κБ сигнални пут (Сл6). Резултати у овој студији пружили су снажне доказе да је дијетални цистанцхе ефикасан додатак храни за заштиту илеума од акутних повреда изазваних применом АФБ1 путем активирања Нрф2-АРЕ и инхибиције НФ-κБ сигнални пут.