Разлика фенилетанол гликозида у табели Цистанцхес Херба од 2 домаћина Лоша разлика фенилетанол гликозида у Табле Цистанцхес Херба од 2 домаћина на основу УПЛЦ-ККК-МС и ПЛС-ДА анализиране на УПЛЦ-ККК-МС и ПЛС-ДА анализи

Цистанцхе десертицолаје вишегодишња холопаразитска биљка која припада породици Оробанцхацеае. То је осушена месната стабљика прекривена љускавим листовимаЦистанцхе десертицола ИЦ Ма[1-2]. Ова биљка је углавном распрострањена у Унутрашњој Монголији, Синђангу и Гансуу, где паразитираХалокилон аммодендрон (ЦА Меи.) Бунге, ксерофитна пустињска биљка Цхеноподиацеае [3-4]. Примарне активне компонентеЦистанцхе десертицолаукључују фенилетаноидне гликозиде, иридоиде и полисахариде [5-7], који показују својства као што су заштита репродуктивне функције, антиоксидација и заштита јетре [8-10]. Са преко 2.000 година употребе у Кини, заузима прво место у рецептима традиционалне кинеске медицине чији је циљ јачање виталности и друго у формулацијама против старења [11]. Међутим, услед прекомерне жетве и уништавања животне средине, дивљи ресурси одЦистанцхе десертицоласу на ивици изумирања, што је довело до њене класификације као национално заштићене биљке (Категорија ИИ) и њеног укључивања уМеђународна листа заштите дивљих биљака[12]. Да би се решио неравнотежа понуде и потражње на тржишту лекова, вештачка култивација је постала неопходна за одрживи развојЦистанцхе десертицолаиндустрије.

 

 

 

Екстракт цистанцхе десертицола за продају

Контактирајте сада

 

 

 

Недавне студије су пријавиле успешну инокулацијуЦистанцхе десертицоланаАтриплек цанесценс[13], зимзелени жбун из породице Цхеноподиацеае. Обично се назива "биолошки десалинатор",Атриплек цанесценсје висококвалитетна врста дрвећа за заслањено-алкално побољшање земљишта [14]. КултивисањеЦистанцхе десертицоланаАтриплек цанесценснуди значајне предности, као што су висок принос и врхунски квалитет. Као резултат, оцењивање квалитетаАтриплек цанесценс-Цистанцхе десертицолаје постала жариште истраживања [15-16]. Претходна истраживања су се углавном фокусирала на лековита својства сушеногЦистанцхе десертицола, док студије о активним компонентама у свежем облику остају ретке. Посебно, након укључивањаЦистанцхе десертицолакао храна и лековита супстанца по систему управљања испитивањем (Обавештење бр.. 9 Националне здравствене комисије, 2023), његов развој и употреба као лековитог биља двоструке намене стекли су значајну пажњу у области традиционалне кинеске медицине [17]. СвежеЦистанцхе десертицолаје омиљен због свог одличног укуса и погодности, што га чини веома перспективним за развој. Свежи лековити материјали се односе на непрерађене свеже биљне, животињске или гљивичне супстанце са терапеутским или здравственим својствима. Међу 2.000 најчешће коришћених кинеских лековитих биљака, 486 су свеже сорте [18].

Метода течне хроматографије ултра-перформансе-троструке квадруполне тандем масене спектрометрије (УПЛЦ-ККК-МС) је веома осетљива, што је чини погодном за детекцију ниских концентрација и сложених компоненти [19]. За решавање питања високог садржаја воде уЦистанцхе десертицола, где су фенилетаноидни гликозиди склони ензимској хидролизи која резултира смањеним садржајем, метода сушења са инактивацијом ензима ефикасно чува садржај фенилетаноидних гликозида [20]. Ова студија користи УПЛЦ-ККК-МС за процену 8 фенилетаноидних гликозида, укључујући ехинакозид и актеозид, као кључне активне компоненте у свежемЦистанцхе десертицолаод две биљке домаћина [21-22]. Студија испитује разлике у садржају компоненти сока и остатака из свежегЦистанцхе десертицолаузгајана на два домаћина. Додатно, остатак је подвргнут третману инактивације ензима на 80 степени током 5 минута, након чега је уследило сушење, да би се даље упоредило задржавање активних компоненти уЦистанцхе десертицола. Налази имају за циљ да обезбеде научне доказе и техничку подршку за вредност свежег воћа двоструке наменеЦистанцхе десертицолаи оптимизација његових техника обраде.

1 Инструменти и материјали

1.1 Инструменти

1290-6460 течна хроматографија ултра-перформансе-троструки квадруполни тандем масени спектрометар (Агилент Тецхнологиес, ​​САД).

Електронска аналитичка вага АЛ104 (Меттлер-Толедо, Швајцарска).

H-2050R центрифуга (Цхангсха Ксиангии Центрифуге Инструмент Цо., Лтд.).

СБ25-12ДТД ултразвучни чистач (Нингбо Ксинзхи Биологицал Тецхнологи Цо., Лтд.).

1.2 Материјали

ТхеАтриплек цанесценс-Цистанцхе десертицолаиХалокилон аммодендрон-Цистанцхе десертицолаузорци су прикупљени у марту, априлу и мају 2024Цистанцхе десертицолабаза за узгој у граду Ксикуан, округ Јингтаи, провинција Гансу. Професор Сун Сјуеганг са Пољопривредног универзитета Гансу идентификовао је узорке као меснате стабљикеЦистанцхе десертицола ИЦ Маса листовима љуске.

Референтни стандарди:

Ехинакозид (број серије: 23031605; чистоћа: 99,74%).

Актеозид (број серије: 21102103; чистоћа: 98,83%).

Цистанозид А (број серије: 23041703; чистоћа: 98,30%).

Изоактеозид (број серије: 23052508; чистоћа: 99,90%).

2'-ацетилактеозид (број серије: 210053102; чистоћа: 97,12%).

Салидрозид (број серије: 22051208; чистоћа: 98,43%).

Цистанозид Б (број серије: 20120903; чистоћа: 98,57%).

Тубулозид А (број серије: 21060302; чистоћа: 93,24%).

Сви су купљени од Цхенгду Пфеиде Биотецхнологи Цо., Лтд.

Реагенси:

Метанол (број серије: О1140576, хроматографски чист).

Ацетонитрил (број серије: С3641440, хроматографски чист). Оба су купљена од Схангхаи Анпу Екпериментал Тецхнологи Цо., Лтд.

Мравља киселина (број серије: 20230710, хроматографски чиста) је купљена од Тиањин Кермио Цхемицал Реагент Цо., Лтд.

Пречишћена вода (Хангзхоу Вахаха Гроуп Цо., Лтд.).

2 Методе и резултати

2.1 Методе

2.1.1 Припрема узорка

Три серијеАтриплек цанесценс-Цистанцхе десертицола(бројеви серије: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) и три серијеХалокилон аммодендрон-Цистанцхе десертицола(бројеви серије: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), прикупљено је укупно шест серија, са пет биљака по серији. Биљке су опране чистом водом.

Обрада:

Узорци су уситњени и оцијеђени, што је резултирало соком и остатком од два домаћинаЦистанцхе десертицола.

Остаци су сушени под два услова:

Без инактивације ензима.

Са инактивацијом ензима (5 минута на 80 степени у рерни).

Осушени остаци су ускладиштени за даљу анализу. Свака серија медицинског материјала подељена је у четири групе, као што је приказано у табели 1.

 

Картица. 1 Пример информација о груписању

Група	Тип	Атриплек цанесценс-Цистанцхе десертицола	Халокилон аммодендрон-Цистанцхе десертицола
①	Остатак	C1	S1
②	Јуице	C2	S2
③	Остатак инактивиран ензимом (5 мин сушења, здробљен)	C3	S3
④	Остатак који није инактивиран ензимима (осушен и здробљен)	C4	S4

 

2.1.2 Услови хроматографије

Колона: Агилент Зорбак Ецлипсе Плус Ц18 колона (2,1 мм × 150 мм, 1,8 μм).

Брзина протока: 0,3 мЛ/мин.

Волумен убризгавања: 1 μL.

Температура колоне: 35 степени .

Мобилна фаза: 0,1% мравље киселине у води (А) и ацетонитрилу (Б).

Време анализе: 12 минута.

Градијент елуције:

0–1,5 мин: 10% → 20% Б.

1,5–3 мин: 20% → 30% Б.

3–5 мин: 30% → 32% Б.

5–8 мин: 32% → 38% Б.

8–9,6 мин: 38% → 10% Б.

9,6–12 мин: 10% Б.

Хроматограми мешаних референтних стандарда и узорака за испитивање приказани су на слици 1.(Молимо потврдите да ли је мобилна фаза 0,01% мравље киселине у води (А) и ацетонитрилу (Б).)

Слика. 1 Хромотограми референтних супстанци(А) и узорка(Б) 1-салидрозида; 2-ехинакозид; 3-цистанозидА; 4-тубулозидА; 5-актеозид; 6-изоактеозид; 7-2'-ацетилактеозид; 8-тубулозид Б.

 

 

2.1.3 Услови спектрометрије масе

Тип извора јона: Ионизација електроспрејом (ЕСИ).

Режим: Мониторинг вишеструких реакција (МРМ) у режиму негативних јона.

Температура извора јона: 350 степени .

Притисак небулизатора: 35 пси.

Гас судара: Азот, подешен на средњи ниво.

Параметри масене спектрометрије за компоненте које се анализирају приказани су у табели 2.

---

2.1.4 Припрема мешаног стандардног раствора

Прецизно измерите одговарајуће количине референтних стандардаехинакозид, актеозид, цистанозид А, изоактеозид, 2'-ацетилактеозид, салидрозид, цистанозид Б, итубулозид Аи ставите их у боце са реагенсом од 10 мЛ. Додајте 50% метанола да бисте припремили мешани стандардни раствор са концентрацијом од 0,2 мг·мЛ⁻¹ и сачувајте га за каснију употребу.

---

2.1.5 Припрема тестних раствора

Прецизно измерите 0,2 г свежегАтриплек цанесценс-Цистанцхе десертицолаостатак (Ц1), свежХалокилон аммодендрон-Цистанцхе десертицолаостатак (С1), осушенАтриплек цанесценс-Цистанцхе десертицолаостаци (Ц3, Ц4) и осушениХалокилон аммодендрон-Цистанцхе десертицолаостаци (С3, С4). Ставите узорке у одмерне боце од 10 мЛ ћилибара, додајте 50% метанола, доведите до запремине и забележите масу. Потопите 0,5 сати, ултразвучите 40 минута (250 В, 35 кХз), охладите на собну температуру и поново снимите масу. Користите 50% метанола да надокнадите губитак тежине, добро промешајте, центрифугирајте и оставите да се раствор слегне. Филтрирајте супернатант кроз микропорозну мембрану од 0,22 μм да бисте добили филтрат.

За свежеАтриплек цанесценс-Цистанцхе десертицоласок (Ц2) и свежХалокилон аммодендрон-Цистанцхе десертицоласока (С2), узмите по 10 мЛ сваког, тачно измерите, добро промешајте, центрифугирајте и оставите да се раствор слегне. Филтрирајте супернатант кроз микропорозну мембрану од 0,22 μм да бисте добили филтрат.

---

2.1.6 Студија линеарности

Одговарајуће количине мешаног стандардног раствора припремљеног у одељку 2.1.4 су разблажене да би се створио градијент концентрације од51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4,000,0 и 20,000,0 уг·Л⁻¹. Узорци су убризгавани узастопно од ниских до високих концентрација у складу са условима описаним у одељцима 2.1.2 и 2.1.3. Извршена је линеарна регресија, користећи концентрацију убризгавања као Кс-осу и површину пика као И-осу. Линеарни односи осам компоненти су приказани у табели 3.

 

Таб. 3 Резултати испитивања линеарног односа 8 компоненти у табели Цистанцхес Херба

 

Компонента	Регресиона једначина	r	Линеарни опсег (уг·Л⁻¹)
Ецхинацосиде	Y = 16.410 × X − 0.804	0.9996	51.2–20,000.0
Ацтеосиде	Y = 102.794 × X − 55.793	0.9998	51.2–20,000.0
Исоацтеосиде	Y = 31.007 × X − 45.169	0.9999	51.2–20,000.0
2'-Ацетилактеозид	Y = 110.235 × X − 8.953	0.9992	51.2–20,000.0
Салидросиде	Y = 19.678 × X − 0.557	0.9993	51.2–20,000.0
Тубулозид А	Y = 26.785 × X − 13.630	0.9997	51.2–20,000.0
Тубулозид Б	Y = 71.810 × X − 0.993	0.9998	51.2–20,000.0
Цистанозид А	Y = 0.578 × X + 1.531	0.9994	51.2–20,000.0

 

2.1.7 Тест прецизности

Мешани стандардни раствор припремљен под условима из одељка 2.1.4 је разблажен са 50% метанола и убризган шест пута узастопно под условима из одељака 2.1.2 и 2.1.3. Релативна стандардна девијација (РСД) површина врхова заехинакозид, актеозид, изоактеозид, 2'-ацетилактеозид, салидрозид, цистанозид Б, тубулозид А, ицистанозид Аизносили су 0,95%, 1,47%, 0,56%, 1,05%, 0,93%, 1,08%, 1,19% и 0,91%, респективно, што указује на добру прецизност.

 

2.1.8 Тест стабилности

Један узорак одЦистанцхе десертицола(С4) је припремљен под условима описаним у одељку 2.1.5. Испитни раствор је убризган и анализиран у 0, 2, 4, 8, 12 и 24 сата под условима описаним у одељцима 2.1.2 и 2.1.3. РСД вршних подручја заехинакозид, актеозид, изоактеозид, 2'-ацетилактеозид, салидрозид, цистанозид Б, тубулозид А, ицистанозид Аизносили су 1,46%, 0,79%, 0,95%, 1,29%, 1,22%, 0,56%, 0,49% и 1,18%, респективно, што указује да је раствор узорка био стабилан у року од 24 сата.

 

2.1.9 Тест поновљивости

Једна серијаЦистанцхе десертицола(С4) узорак (број серије: 20240420-2) је припремљен у шест паралелних тест раствора под условима описаним у одељку 2.1.5. Узорци су убризгани и анализирани под условима описаним у одељцима 2.1.2 и 2.1.3. РСД садржаја заехинакозид, актеозид, изоактеозид, 2'-ацетилактеозид, салидрозид, цистанозид Б, тубулозид А, ицистанозид Абили су 1,26%, 0,98%, 1,55%, 1,06%, 1,33%, 0,99%, 1,65% и 0,95%, респективно, показујући добру поновљивост.

 

2.1.10 Тест опоравка

Девет узорака из исте серијеЦистанцхе десертицола(С4, број серије: 20240420-2) припремљени су, са 0,1 г по узорку. Узорци су подељени у три групе, са три реплика по групи. Свака група је добила 80%, 100% и 120% референтног стандардног садржаја уЦистанцхе десертицолаузорак. Испитни раствори су припремљени према методи описаној у одељку 2.1.5 и анализирани под условима у одељцима 2.1.2 и 2.1.3. Израчунати су опоравак осам фенилетаноидних гликозида, а резултати су приказани у табели 4.

 

Таб. 4 Стопе опоравка 8 тестираних компоненти у Цистанцхес Херба

 

Компонента	Садржај узорка (мг)	са шиљцима (мг)	Измерено (мг)	Просечан опоравак (%)	РСД (%)
Ецхинацосиде	0.513 8	0.410 1	0.911 2	99.85	1.37
Ецхинацосиде	0.513 8	0.513 8	1.015 2	99.88	0.95
Ецхинацосиде	0.513 8	0.616 5	1.129 4	99.85	1.06
Ацтеосиде	0.421 5	0.337 2	0.759 6	99.90	1.02
Ацтеосиде	0.421 5	0.421 5	0.843 5	99.87	1.18
Ацтеосиде	0.421 5	0.505 8	0.926 7	99.84	1.24
Исоацтеосиде	0.327 1	0.261 7	0.588 6	99.85	0.86
Исоацтеосиде	0.327 1	0.327 1	0.654 2	99.86	1.05
Исоацтеосиде	0.327 1	0.392 5	0.719 1	99.84	1.13
2'-Ацетилактеозид	0.110 2	0.088 2	0.198 3	99.87	1.15
2'-Ацетилактеозид	0.110 2	0.110 2	0.220 1	99.86	1.09
2'-Ацетилактеозид	0.110 2	0.132 2	0.242 4	99.85	1.21
Салидросиде	0.081 6	0.065 3	0.146 7	99.84	1.18
Салидросиде	0.081 6	0.081 6	0.163 1	99.85	1.02
Салидросиде	0.081 6	0.097 9	0.179 7	99.84	1.17
Тубулозид Б	0.072 3	0.057 9	0.130 0	99.86	1.09
Тубулозид Б	0.072 3	0.072 3	0.144 1	99.86	1.05
Тубулозид Б	0.072 3	0.086 8	0.159 2	99.84	1.24
Тубулозид А	0.043 8	0.035 0	0.078 5	99.86	1.16
Тубулозид А	0.043 8	0.043 8	0.087 5	99.86	1.02
Тубулозид А	0.043 8	0.052 5	0.096 2	99.84	1.15