Ехинакозид модулира ЦГАС-СТИНГ пут за ублажавање упалних повреда изазваних ЛПС-ом у алвеоларним епителним ћелијама (А549)

 

Аутори:Јианфенг Луо; Тао Баи
припадност:Одељење 1, Одељење за инфективне болести, болница Вухан Јиниинтан, Вухан 430000, Хубеи, Кина

 

Кључни за понети (за читаоце истраживања и развоја природних састојака и додатака)

Излагање ЛПС-у је повредило А549 алвеоларне епителне ћелије, смањујући маркере пролиферације и повећавајући апоптозу и инфламаторне цитокине.

Ехинакозид (ЕЦХ) показао је заштиту у зависности од дозе: побољшана виталност/пролиферација ћелија и смањена апоптоза и инфламаторни медијатори.

Механички, користи су биле повезане сарегулација наниже сигналне осе цГАС–СТИНГ–ТБК1–ИРФ3и на нивоу мРНК и на нивоу протеина.

Активатор цГАС-СТИНГ пута (РоцА) ослабио/антагонизирао заштитне ефекте ЕЦХ-а, подржавајући укљученост у пут.

Релевантност за ботанички развој: Цистанцхе(肉苁蓉) је широко признат као ботанички препарат богат ехинакозидом, што га чини практичним материјалом узводно које треба узети у обзир за истраживање и развој производа - док се сећамо да је ова студијаин витрои користи пречишћени ЕЦХ.

Табела 1. Ефекти различитих концентрација ЕЦХ и РоцА на ћелије А549 (ОД570_{570}570​, кˉ±с\\бар{к}\\пм скˉ±с, н=6н=6н=6)

Концентрација (μмол/Л)	ЕЦХ (ОД570_{570}570​)	РоцА (ОД570_{570}570​)
0	0.45 ± 0.03	0.43 ± 0.04
3	0.42 ± 0.05	0.45 ± 0.06
6	0.43 ± 0.04	0.42 ± 0.05
9	0.46 ± 0.06	0.46 ± 0.07
12	0.44 ± 0.05	0.44 ± 0.05
24	0.47 ± 0.06	0.20 ± 0.03¹

Ф/П вредност:ЕЦХ: 0,857 / 0,521; РоцА: 22.050 /<0.001
Напомена:У поређењу са 0 μмол/Л: ¹ П<0.05P<0.05P<0.05.

 

Апстракт (преписан на енглеском, тачка по тачку)

Циљ

Да процени да лиехинакозид (ЕЦХ)штити ћелије алвеоларног епитела човека одинфламаторна повреда изазвана липополисахаридом (ЛПС).и да ли је ова заштита повезана са регулацијомцГАС–СТИНГсигнални пут.

Методе (дизајн студије)

Модел ћелије:Људска алвеоларна епителна ћелијска линијаA549.

Скрининг цитотоксичности/виабилности:МТТ тест за тестирање ЕЦХ и активатора цГАС-СТИНГ пута (РоцА) за токсичност.

Груписање:

Контрола (стандардна култура)

ЛПС (30 мг/Л)

ЛПС + ЕЦХ ниска/средња/висока доза (9, 12, 24 μмол/Л)

ЛПС + ЕЦХ (24 μмол/Л) + РоцА (12 нмол/Л)

Крајње тачке:

Пролиферација:ЕдУ бојењеиПЦНА(Вестерн блот)

апоптоза:Проточна цитометрија (Анексин В‑ФИТЦ/ПИ); Бак/Бцл‑2(Вестерн блот)

запаљење:ТНФ‑, ИЛ‑6у супернатанту (ЕЛИСА)

Очитавања путање:цГАС, СТИНГ мРНА(кРТ‑ПЦР);цГАС, СТИНГ, ТБК1, ИРФ3 протеини(Вестерн блот)

 

Табела 2. Поређење стопе ЕдУ-позитивности, експресије ПЦНА, стопе апоптозе, експресије Бак/Бцл-2 и нивоа ТНФ- /IL-6 у ћелијама А549 међу групама (кˉ±с\\бар{к}\\пм скˉ±с, н=6н=6н=6)

Група	ЕдУ-позитивна стопа	ПЦНА/ГАПДХ	Стопа апоптозе (%)	Бак/ГАПДХ	Бцл-2/ГАПДХ	ТНФ- (уг/мл)	IL-6 (нг/мл)
Контрола	57.38 ± 3.24	1.67 ± 0.15	4.38 ± 1.09	0.37 ± 0.06	1.63 ± 0.12	4.65 ± 1.08	18.47 ± 1.19
ЛПС	27.51 ± 1.68¹	0.49 ± 0.08¹	36.75 ± 2.31¹	1.59 ± 0.13¹	0.28 ± 0.06¹	30.71 ± 1.68¹	49.23 ± 2.75¹
ЕЦХ-Л	33.72 ± 1.96²	0.86 ± 0.10²	29.16 ± 2.27²	1.24 ± 0.11²	0.67 ± 0.08²	22.58 ± 1.52²	41.78 ± 2.46²
ЕЦХ-М	40.59 ± 2.40²,³	1.27 ± 0.13²,³	21.93 ± 1.64²,³	0.85 ± 0.09²,³	1.08 ± 0.10²,³	15.83 ± 1.16²,³	32.64 ± 2.18²,³
ЕЦХ-Х	48.21 ± 2.57²,³,⁴	1.58 ± 0.14²,³,⁴	13.86 ± 1.45²,³,⁴	0.49 ± 0.08²,³,⁴	1.35 ± 0.11²,³,⁴	7.91 ± 1.13²,³,⁴	23.59 ± 1.57²,³,⁴
РоцА	35.79 ± 2.38⁵	0.92 ± 0.11⁵	25.74 ± 1.69⁵	0.93 ± 0.10⁵	0.74 ± 0.09⁵	19.76 ± 1.20⁵	36.78 ± 2.61⁵

Ф вредност: 118.927; 85.600; 245.724; 131.552; 159.598; 321.852; 161.353
П вредност:све<0.001

Напомене (више поређења):
У поређењу саКонтрола: ¹ P<0.05P<0.05P<0.05
У поређењу саЛПС: ² P<0.05P<0.05P<0.05
У поређењу саЕЦХ-Л: ³ P<0.05P<0.05P<0.05
У поређењу саЕЦХ-М: ⁴ P<0.05P<0.05P<0.05
У поређењу саЕЦХ-Х: ⁵ P<0.05P<0.05P<0.05

 

 

Резултати (главни налази)

У поређењу са контролом,ЛПС:

СмањенаЕдУ-позитивна стопа,ПЦНА, иБцл‑2

Повећаностопа апоптозе,ТНФ‑, ИЛ‑6

УпрегулатедцГАС и СТИНГ на нивоу мРНА

ПовећаноБак и цГАС-СТИНГ протеини пута (цГАС, СТИНГ, ТБК1, ИРФ3)
(Сви статистички значајни, П<0.05P<0.05P<0.05.)

У поређењу са самим ЛПС,ЕЦХ (9→12→24 μмол/Л)дозно-зависно:

Обновљена пролиферација(већа стопа ЕдУ-позитивности и ПЦНА)

Смањена апоптоза(нижа стопа апоптозе, нижи Бак, већи Бцл-2)

Потиснута упала(нижи ТНФ‑ и ИЛ‑6)

Снижено регулисана цГАС–СТИНГ сигнализација(нижи цГАС/СТИНГ мРНА; нижи цГАС, СТИНГ, ТБК1, ИРФ3 протеини)
(Зависно од дозе, П<0.05P<0.05P<0.05.)

РоцА се супротставиоЕЦХ-ова заштита у условима повреде ЛПС (П<0.05P<0.05P<0.05), consistent with cGAS–STING pathway involvement.

Закључак

ЕЦХповећана одрживост и пролиферативна активносталвеоларних епителних ћелија изазваних ЛПС-ом ипотиснута апоптоза и инфламаторни одговори. Заштитни механизам је вероватно повезан саинхибиција/блокада прекомерно активиране цГАС–СТИНГ сигнализације.

 

Позадина (зашто је ово важно)

Код пацијената који су изложени или инфицирани ЛПС-ом (главном грам-негативном бактеријском компонентом),акутна повреда плућа (АЛИ)и његов тешки обликАРДСсу кључни покретачи морбидитета и морталитета. Карактеристична патологија укључује дифузну повредуалвеоларни епителикапиларни ендотел, што доводи до цурења баријере и плућног едема.

Упркос напретку у подпорној нези,ефикасне циљане терапије остају ограничене, па је идентификација нових кандидата и мета за лекове важна.

ехинакозид (ЕЦХ)је фенилетаноидни гликозид са пријављеним активностима укључујући антиоксидативне, антиинфламаторне, цитопротективне и антиапоптотичке ефекте.
За програмере природних производа:Цистанцхе (肉苁蓉)је традиционална ботаничка биљка која се често истиче каобогат ехинакозидом, што га чини практичним изворним материјалом када се истражују формулације оријентисане на ЕЦХ – док такође захтева пажљиву стандардизацију и рад на превођењу изван тестова ћелија.

ТхецГАС–СТИНГ путје оса цитосолне ДНК која промовише производњу интерферона типа И и инфламаторних медијатора. Докази то говорепрекомерна активацијацГАС-СТИНГ доприноси инфламаторној и аутоимуној патологији, и да сузбијање ове прекомерне активације може помоћи у ублажавању упалних повреда плућа.

 

Материјали и методе (сажетак прилагођен истраживању и развоју)

Ћелијска линија и култура

А549 ћелије су култивисане уДМЕМ са ниским садржајем глукозеса10% ФБСи1% антибиотика, са средњим променама свака 2 дана. Експерименти су изведени на~80–90% ушћа.

Реагенси (висок ниво)

ЕЦХ(информације о продавцу наведене у оригиналном раду)

ЛПС

РоцА(овде се користи као ацГАС–СТИНГ активатор пута)

Комплети за анализу: МТТ, ЕдУ, комплет за апоптозу (Анексин В‑ФИТЦ/ПИ), ЕЛИСА комплети за ТНФ‑ и ИЛ‑6

Молекуларни тестови: екстракција РНК, реверзна транскрипција, кРТ-ПЦР реагенси; антитела за Вестерн блот (ПЦНА, Бак, Бцл‑2, цГАС, СТИНГ, ТБК1, ИРФ3, ГАПДХ)

Избор дозе (скрининг одрживости)

ЕЦХ (0–24 μмол/Л)показаонема значајне цитотоксичностиу ћелијама А549 и стога9/12/24 μмол/Лсу коришћени.

РоцАбио нетоксичан изнутра0–12 нмол/Л, док је већа концентрација смањила виталност;12 нмол/Лје изабран.

Индукција и груписање ЛПС повреда

Повреда ЛПС је изазвана са30 мг/Л ЛПС.

Терапијске руке су биле као што је описано у сажетку (контрола; ЛПС; ЛПС+ЕЦХ низак/средњи/висок; ЛПС+ЕЦХ висок+РоцА).

Мерења исхода

Пролиферација:ЕдУ-позитивне ћелије помоћу флуоресцентне микроскопије; ПЦНА методом Вестерн блота.

апоптоза:Проточна цитометрија (Анексин В‑ФИТЦ/ПИ); Нивои протеина Бак и Бцл‑2.

Инфламаторни медијатори:ТНФ‑ и ИЛ‑6 у супернатанту културе помоћу ЕЛИСА.

Израз путање:цГАС и СТИНГ мРНА помоћу кРТ-ПЦР користећи ГАПДХ као интерну контролу; протеини (цГАС, СТИНГ, ТБК1, ИРФ3) Вестерн блот-ом.

Статистика:АНОВА са СНК‑к пост-хоц тестирањем (ГрапхПад Присм 9.0), значај постављен на П<0.05P<0.05P<0.05.

 

Резултати (шта се променило са ЛПС, ЕЦХ и РоцА)

1) Вијабилност ћелије / прозор токсичности

ЕЦХ се добро подносио до тестираног опсега коришћеног за механичке студије.

РоцА је захтевао опрезно дозирање; изабрана је нетоксична радна концентрација.

Слика 1. Пролиферација ћелија А549 у свакој групи (ЕДУ бојење, ×200)

 

2) Пролиферација је потиснута ЛПС-ом и обновљена ЕЦХ

ЛПС смањенЕдУ инцорпоратиониПЦНАекспресија, што указује на смањену пролиферативну активност.

ЕЦХ је повећао стопе позитивних на ЕдУ и ПЦНАна начин који зависи од дозе.

Додавање РоцА смањило је ове добитке, што сугерише да пут доприноси ЕЦХ-овом ефекту за преживљавање/пролиферацију.

3) Апоптоза се повећала са ЛПС-ом и инхибирала је ЕЦХ

ЛПС је повећао стопу апоптозе, повећаоБак, и смањенаБцл‑2.

ЕЦХ је преокренуо ове промене у зависности од дозе (нижа стопа апоптозе и Бак, виши Бцл-2).

РоцА је померио фенотип назад ка апоптози, ослабивши ЕЦХ заштиту.

Слика 2. Вестерн блот анализа експресије ПЦНА, Бак и Бцл-2 у свакој групи

 

4) Инфламаторни цитокини (ТНФ‑, ИЛ‑6) су смањени ЕЦХ

ЛПС је повећао ТНФ‑ и ИЛ‑6 у супернатантима.

ЕЦХ је смањио оба цитокина у зависности од дозе.

РоцА их је повећао у односу на саму високу дозу ЕЦХ, у складу са реактивацијом пута која појачава упалу.

5) транскрипцију цГАС и СТИНГ индуковао је ЛПС и потиснуо ЕЦХ

ЛПС је повећанцГАС и СТИНГ мРНА.

ЕЦХ је смањио њихову експресију (зависно од дозе).

РоцА је повећао експресију у поређењу са високом дозом ЕЦХ.

Слика 3. Поређење апоптозе А549 ћелија у свакој групи

 

6) Протеини цГАС-СТИНГ пута су били смањени од стране ЕЦХ

ЛПС је повећанцГАС, СТИНГ, ТБК1 и ИРФ3експресија протеина.

ЕЦХ је смањио ове протеине у зависности од дозе.

РоцА је повећао нивое протеина на путу у односу на саму високу дозу ЕЦХ.

 

Табела 3. Поређење експресије протеина цГАС/СТИНГ мРНА и цГАС–СТИНГ пута у ћелијама А549 међу групама (кˉ±с\\бар{к}\\пм скˉ±с, н=6н=6н=6)

Група	цГАС мРНА	СТИНГ мРНА	цГАС/ГАПДХ	СТИНГ/ГАПДХ	ТБК1/ГАПДХ	ИРФ3/ГАПДХ
Контрола	1.00 ± 0.12	1.00 ± 0.11	0.32 ± 0.07	0.36 ± 0.08	0.29 ± 0.05	0.25 ± 0.06
ЛПС	2.15 ± 0.16¹	2.28 ± 0.17¹	1.68 ± 0.13¹	1.85 ± 0.16¹	1.57 ± 0.13¹	1.62 ± 0.14¹
ЕЦХ-Л	1.74 ± 0.13²	1.83 ± 0.14²	1.34 ± 0.12²	1.42 ± 0.13²	1.24 ± 0.11²	1.23 ± 0.12²
ЕЦХ-М	1.36 ± 0.11²,³	1.31 ± 0.12²,³	0.82 ± 0.09²,³	1.03 ± 0.11²,³	0.86 ± 0.09²,³	0.78 ± 0.09²,³
ЕЦХ-Х	0.73 ± 0.09²,³,⁴	0.62 ± 0.08²,³,⁴	0.45 ± 0.08²,³,⁴	0.57 ± 0.09²,³,⁴	0.47 ± 0.08²,³,⁴	0.38 ± 0.07²,³,⁴
РоцА	1.58 ± 0.12⁵	1.69 ± 0.15⁵	1.17 ± 0.11⁵	1.28 ± 0.14⁵	1.12 ± 0.10⁵	0.97 ± 0.10⁵

Ф/П вредности:

цГАС мРНА: 103.612 /<0.001

СТИНГ мРНА: 124.857 /<0.001

цГАС/ГАПДХ: 160.066 /<0.001

СТИНГ/ГАПДХ: 124.141 /<0.001

ТБК1/ГАПДХ: 150.139 /<0.001

ИРФ3/ГАПДХ: 158.576 /<0.001

 

Слика 4. Експресија протеина пута цГАС-СТИНГ у ћелијама сваке групе

 

Дискусија (тумачење за читаоце производа и механизама)

ЛПС се обично користи за моделирање инфламаторне повреде плућа. Овде је ЛПС директно пореметио пролиферативни капацитет алвеоларних епителних ћелија и промовисао апоптозу, праћену повишеним ТНФ‑ и ИЛ‑6-два цитокина који су широко повезани са инфламаторним оштећењем плућа.

ЕЦХ је деловао као ацитопротективно и антиинфламаторно средствоу овом ин-витро окружењу, у складу са претходним извештајима да ЕЦХ може ублажити оксидативни стрес, упалу и апоптозу у контексту повреде плућа.

Оса цГАС–СТИНГ (и низводно ТБК1/ИРФ3) изгледа да је механистички чвор:ЕЦХ је смањио цГАС–СТИНГ маркере пута, иРоцА је умањила предности ЕЦХ-а, подржавајући хипотезу да ЕЦХ бар делимично штити ћелијеблокирање прекомерне активације цГАС-СТИНГ-а.

Шта ово сугерише за природни ботанички развој (контекст Цистанцхе)

ЈерЦистанцхе (肉苁蓉)је познат повисок садржај ехинакозида, то је логичан ботанички кандидат када истражује ЕЦХ-центриране формулације које имају за циљ теме инфламаторне равнотеже и заштите епитела.

Међутим, превођење овога на додатке захтева опрез: ово дело јестезасновано на ћелијској линији, користиПовреда ЛПСипречишћени ЕЦХ, и не утврђује ефикасност код људи, оралну биорасположивост, метаболизам или клинички релевантно дозирање.

Ограничења и следећи кораци (као што имплицирају аутори)

Налази захтевају валидацију уин виво АЛИ/АРДС моделида потврди ефикасност и механичку везу са цГАС-СТИНГ у физиолошким условима.

Даљи рад би био потребан да би се мапирали узводни окидачи и потврдили да ли су ефекти директна инхибиција пута у односу на секундарно смањени ћелијски стрес.

 

Референце (одржане комплетне, како је наведено)

Ли Н, Лиу Б, Ксионг Р, ет ал. Недостатак ХДАЦ3 штити од акутне повреде плућа одржавањем интегритета епителне баријере кроз очување контроле квалитета митохондрија.Редок Биол, 2023;63(1):102746-61.

Лонг МЕ, Маллампалли РК, Хоровитз ЈЦ. Патогенеза пнеумоније и акутне повреде плућа.Цлин Сци (Лонд), 2022;136(10):747-69.

Мокры АД. Акутна повреда плућа - од патофизиологије до лечења.Пхисиол Рес, 2020; 69 (Суппл 3): С353-66.

Ванг В, Јианг С, Зхао И, ет ал. Ехинакозид: обећавајући активни природни производи и фармаколошка средства.Пхармацол Рес, 2023;197(1):106951-66.

Пан И, Лиу И. Ецхинацосиде ублажава ремоделирање дисајних путева и упалу у неонаталном мишјем моделу астме изазваном овалбумином модулацијом СИРТ1-НФ-κБ пута.Аллергол Иммунопатхол (Мадр), 2023;51(4):71-7.

Цуи ИХ, Ли КФ, Јин Б, ет ал. Ехинакозид инхибира повреду епителних ћелија плућа изазвану блеомицином и инфламаторни одговор.Кинески часопис за патофизиологију, 2021;37(11):2024-30.

Ксие В, Денг Л, Лин М, ет ал. Сиртуин1 посредује у заштитним ефектима ехинакозида против акутне повреде плућа изазване сепсом регулацијом осе НОКС4-Нрф2.Антиоксиданси (Базел), 2023;12(11):1925-45.

Алонсо Паива ИМ, Сантос АР, Брито ЦБ, ет ал. Улога цГАС/СТИНГ пута у контролиБруцелла абортусинфекција добијена респираторним путем.Фронт Иммунол, 2023;14:1116811.

Зхао Ј, Зхен Н, Зхоу К, ет ал. НЕТ промовишу инфламаторне повреде активирањем цГАС-СТИНГ пута у акутној повреди плућа.Инт Ј Мол Сци, 2023;24(6):5125-45.

Ву Кс, Јианг И, Ли Р, ет ал. Фиколин Б који луче егзозоми алвеоларних макрофага погоршава повреду плућа изазвану блеомицином путем фероптозе преко цГАС-СТИНГ сигналног пута.Целл Деатх Дис, 2023;14(8):577-92.

Зханг СВ, Цхенг СЛ, Ксинг КФ. Пахимична киселина ублажава повреду епителних ћелија дебелог црева код пацова са улцерозним колитисом инхибирањем цГАС-СТИНГ сигналног пута.Јоурнал оф Иммунологи(Кина), 2023;39(8):672-80.

Зханг ЈЈ, Ли ИИ, Кин Ј. лнцРНА ЛУЦАТ1 циља миР-203а-3п да утиче на апоптозу и инфламаторни одговор у епителним ћелијама алвеоларног типа ИИ изазваним ЛПС-ом.Јоурнал оф Иммунологи(Кина), 2023;39(8):689-95.

Ли Ј, Денг СХ, Ли Ј, ет ал. Обацуноне ублажава фероптозу током акутне повреде плућа изазване липополисахаридом тако што регулише антиоксидативне одговоре зависне од Нрф2.Целл Мол Биол Летт, 2022;27(1):29-48.

Хонг Х, Лоу С, Зхенг Ф, ет ал. Хидноцарпин Д ублажава акутну повреду плућа изазвану липополисахаридом путем МАПК/НФ-κБ и Кеап1/Нрф2/HO-1 пута.Пхитомедицине, 2022;101(1):154143-50.

Сасаки М, Кисхимото М, Итакура И, ет ал. Интерфазна култура ваздуха-течност даје САРС-ЦоВ-2 осетљивост на ћелије алвеоларног епитела А549.Биоцхем Биопхис Рес Цоммун, 2021;577:146-51.

Ванг И, Фан И, Хуанг И, ет ал. ТРИМ28 регулише улазак у ћелије САРС-ЦоВ-2 циљајући АЦЕ2.Целл Сигнал, 2021;85:110064.

Ианг Кс, Ма Л. Пост-третман пропофолом инхибира инфламаторни одговор у ЛПС-индукованим алвеоларним епителним ћелијама типа ИИ.Екп Тхер Мед, 2022;23(4):249.

Дуан КСИ, Сун И, Зхао ЗФ, ет ал. Баицалин ублажава повреду А549 епителне ћелије алвеоларног типа ИИ изазвану ЛПС-ом слабљењем сигналног пута ФСТЛ1 повећањем експресије миР-200б-3п.Инате Иммун, 2021;27(4):294-312.

Леи Кс, Лиу Кс, Иу Ј, ет ал. 3-метиладенин ублажава акутну повреду плућа инхибирањем оксидативног оштећења и апоптозе.Хелиион, 2024;10(13):e33996.

Ли М, Сонг Ј, Танг Кс, ет ал. Критичне улоге PAI-1 у акутној повреди плућа изазваној липополисахаридом.Адв Мед Сци, 2024;69(1):90-102.

Јианг Т, Иуан Д, Ванг Р, ет ал. Ехинакозид, обећавајући инхибитор сортазе А, у комбинацији са ванкомицином против мишјих модела пнеумоније изазване МРСА.Мед Мицробиол Иммунол, 2023;212(6):421-35.

Ианг И, Лиу И, Ванг И, ет ал. Регулација СИРТ1 и његова улога у упали.Фронт Иммунол, 2022;13(1):831168-83.

Јианг З, Јианг И, Фан Ј, ет ал. Инхибиција цГАС-а ублажава акутну повреду плућа изазвану наночестицама цинк оксида.Токицол Летт, 2023;373(1):62-75.

Домизио ЈД, Гулен МФ, Саидоуне Ф, ет ал. Пут цГАС-СТИНГ покреће имунопатологију ИФН типа И код ЦОВИД-19.Природа, 2022;603(7899):145-51.

Мессаоуд-нацер И, Цулериер Е, Росе С, ет ал. СТИНГ агонист диАБЗИ индукује ПАНоптозу и ДНК посредован синдром акутног респираторног дистреса (АРДС).Целл Деатх Дис, 2022;13(3):269-85.

Вен Ј, Кин С, Ли И, ет ал. Флавоноиди добијени из сладића сузбијају ЛПС-индуковану акутну повреду плућа код мишева инхибирањем цГАС-СТИНГ сигналног пута.Фоод Цхем Токицол, 2023;175(1):113732.

 

О произвођачу екстракта Цистанцхе (肉苁蓉) (за програмере производа)

За тимове који истражујуЦистанцхе-баседразвој природних састојака - посебно стандардизовани екстракти позиционирани околоехинакозид-позадина произвођача и информације о могућностима могу се наћи овде:
хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/абоут-ус