Ефекти различитих екстрахованих делова Цистанцхе Десертицола на хипогликемијске ефекте Дб / Дб црних мишева Ⅱ

2 Експерименталне методе

2.1 Припрема Цистанцхе десертицола прерађених производа Цистанцхе десертицола:

Узмите лековите материјале Цистанцхе десертицола, исперите нечистоће, парите у лонцу на нормалном притиску 2 сата, исеците на 6 мм и осушите на 70 степени. Цистанцхе десертицола: Узмите комаде децокције Цистанцхе десертицола, додајте одговарајућу количину пиринчаног вина, добро промешајте, влажите 8 сати (жуто пиринчано вино: вода=1:1), парите под високим притиском 4 сата и сушите на 70 степени. (Користите 30 мЛ пиринчаног вина на сваких 100 г Цистанцхе десертицола).

ПРИРОДНИ ОРГАНСКИ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНЦХЕ

Служба подршке компаније Вецистанцхе-Највећи извозник цистанцхеа у Кини:

Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com

Вхатсапп/тел:+86 15292862950

Купите за више детаља о спецификацијама:

хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/цистанцхе-схоп

2.2 Обогаћивање различитих екстрахованих делова Цистанцхе десертицола/Цистанцхе десертицола

Узети 30 г праха Цистанцхе десертицола/Тамароцоццус десертицола, додати 10 пута већу количину воде, загрејати и рефлуксовати за екстракцију два пута, сваки пут по 2 сата, комбиновати екстракте, концентровати, додати етанол док садржај алкохола не достигне 60%, преципитирати на ниске температуре 12 сати, и филтрирати са усисом. , талог је сирови полисахаридни део. Концентровати супернатант до одговарајуће концентрације, нанети га на Д101 макропорозну адсорпциону смолу и елуирати са водом и етанолом различитих концентрација у низу. Сакупити водени елуат и концентровати под сниженим притиском до густе пасте, која представља укупну фракцију олигосахарида; опрати са 40% етанолом. Деликвидирати, концентровати и осушити под сниженим притиском, што је укупна фракција гликозида Цистанцхе десертицола.

2.3 Одређивање садржаја различитих екстрахованих делова Цистанцхе десертицола/Цистанцхе десертицола

2.3.1 Одређивање укупног садржаја полисахарида у Цистанцхе десертицола/Цистанцхе десертицола.

Измерите узорак глукозе 20. 00 мг у волуметријској тиквици од 50 мЛ да се направи 0. За стандардни раствор глукозе од 4 мг·мЛ-1, пипетирајте 3, 4, 5, 6 и 7 мЛ респективно у волуметријску тиквицу од 50 мЛ, разблажите водом до запремине и пипетирајте 2,0 мЛ сваки концентрацијски градијент раствора глукозе у епрувету. Узмите другу једнаку количину дестиловане воде као празну контролу, додајте 1 мЛ 5% фенола у сваку епрувету, добро промућкајте, брзо додајте 5 мЛ концентроване сумпорне киселине, оставите да одстоји 10 минута, ставите у водено купатило на 40 степени. 15 минута, извадите га, брзо охладите на собну температуру и измерите вредност апсорпције на 490 нм, узмите апсорбанцију (А) као ординату и концентрацију глукозе (Ц) као апсцису, нацртајте стандардну криву и добијте регресиона једначина И=8.37Кс-0.162 8 (Р2=0.994 6). Прецизно одмерити 1,0 г укупног полисахаридног праха сировина и производа, ставити их у одмерне боце од 50 мЛ респективно, додати воду да се раствори и прилагодити запремину до ознаке, тачно увући 2,0 мЛ у епрувету и измерити у истој начин као стандардни метод припреме криве. , то је то.

2.3.2 Одређивање садржаја бетаина у Цистанцхе десертицола/Цистанцхе десертицола

2.3.2.1 Припрема референтног раствора:

Прецизно одмерити 1,17 мг референтног раствора бетаина, ставити у волуметријску тиквицу од 5 мЛ, додати 50% метанола да се раствори и разблажити до запремине и спремно је.

2.3. 2. 2 Услови хроматографије

Хроматографска колона је Ецосил {{0}}АМИНО хроматографска колона (4,6 мм×250 мм, 5 μм), мобилна фаза: ацетонитрил-вода (99,5 ∶ 0}.5) , температура колоне: 30 степена, таласна дужина детекције: 194 нм, брзина протока: 0,6 мЛ·мин-1, запремина убризгавања 10 μЛ, хроматограм приказан на слици 1. 2.3.2.3 Припрема тест раствора Прецизно измерити прашак укупне фракције олигосахарида сирових и готових производа 1,0 г, односно ставити у одмерни балон од 5 мЛ, додати дестиловану воду да се раствори и разблажити до запремине, добро промућкати, проћи кроз микропорозну филтер мембрану од 0,45 μЛ и спремно је.

2.3.2.4 Одређивање садржаја узорка

Прецизно апсорбовати укупни тест раствор олигосахарида у сировом и припремљеном Цистанцхе десертицола, измерити га према условима под „2.3.2.2“ и израчунати садржај бетаина у узорку.

2.3.3 Одређивање садржаја ехинакозида, вербаскозида и хетероцимицифугарина у Цистанцхе десертицола/Цистанцхе десертицола

2.3.3.1 Припрема референтног раствора

Прецизно одмерити 4,50 мг ехинакозида, 4,80 мг вербаскозида и 5,05 мг хетерологног комимицина у волуметријске боце од 5 мЛ, додати 50% метанола да се раствори и разблажити до ознаке, и узети сваку контролу Ставити 200 μЛ раствора узорка у ињекцију. бочици, додати 400 μЛ 50% метанола и добро промешати да се добије мешани референтни раствор, добро промућкати и готово је.

2.3.3.2 Услови хроматографије

Хроматографска колона је Ецосил Ц18 (4,6 мм×250 мм, 5 μм), метанол је мобилна фаза А, 0.1% мравља киселина је мобилна фаза Б, градијент елуирања, {{ 12}}~45 мин, 30% А→ 70% А, брзина протока је 1,0мЛ·мин-1, температура колоне је 30 степени, таласна дужина детекције је 330 нм, запремина убризгавања је 10μЛ, и хроматограм је приказан на слици 2.

2.3.3.3 Припрема раствора за испитивање

Прецизно одмерити 1.0 г од укупног гликозидног праха сировина и производа, ставите их у волуметријске боце од 100 мЛ, додајте 50% метанола да се раствори, подесите запремину до ознаке и протресите добро. Прецизно увуците 5 мЛ сваког узорка у волуметријску тиквицу од 10 мЛ, додајте 50% метанола да бисте допунили запремину, добро промућкајте и прођите кроз микропорозну филтер мембрану од 0,45 μм да бисте добили.

2.3.3.4 Одређивање садржаја узорка

Прецизно извуците узорак укупних гликозида Цистанцхе десертицола и измерите га у складу са условима под "2.3.3.2". Израчунајте садржај ехинакозида, вербаскозида и хетерологног саучесника у узорку.

2.4 Груписање животиња, моделирање и примена лекова

Просторија за животиње има 12 сати светлости и 12 сати мрака, релативну влажност од 50% до 70%, а собну температуру од 18 до 22 степена. дб/дб црни мишеви и дб/м црни мишеви (нормална контролна група) храњени су нормално обичном храном, а експеримент је почео у доби од 9 недеља. Осим нормалне контролне групе, преостали дб/дб црни мишеви су насумично одабрани према нивоу шећера у крви и телесној тежини. Подељени у 8 група, и то модел група, позитивна контролна група, група укупних полисахарида Цистанцхе десертицола, група укупних олигосахарида Цистанцхе десертицола, група укупних глукозида Цистанцхе десертицола, група укупних полисахарида Тартсцхистанцхе десертицола, група укупних полисахарида Тартсцхистанцхе десертицола, група укупних олигосахарида пустиње Тартсцхистанцхе десертицола, група укупних глукостанида Тартсцхистанцхе десертицола. Осим нормалне контроле

Осим у групи модела и моделној групи, пацовима у другим групама је давана интрагастрична примена у дози од 2 мЛ/100 г током 4 узастопне недеље. Концентрација течности била је 4,1 г·кг-1. Нормална контролна група и група модела третиране су на исти начин. Дајте одређену количину нормалног физиолошког раствора у стомак.

2.5 Ефекти различитих екстрахованих делова Цистанцхе десертицола на нивое глукозе у крви дб/дб црних мишева

2.5.1 Тест оралне толеранције глукозе (ОГТТ).

Након 26 дана примене, постили су 12 сати и 60 минута након примене следећег дана, црним мишевима у свакој групи је дато 2.0 г·кг-1 глукозе на 0, {{10}}.5, 1.0, односно 2. .0 х узета је крв из вене репа за мерење вредности глукозе у крви. Уз вредност глукозе у крви као ординату и време као апсцису, направљен је дијаграм промене глукозе у крви, а површина испод линије криве глукозе у крви сваке експерименталне групе израчуната је према формули (АУЦ, хммоЛ·Л{ {13}}) [19]. АУЦ=А × {{20}}.25 + Б × 0.50 + Ц × 0.75 + Д. У формули: А, Б, Ц и Д су вредности глукозе у крви на 0, 0,5, 1,0 и 2,0 х, респективно.

2.5.2 Израчунавање индекса инсулинске резистенције и индекса артериосклерозе

Индекс инсулинске резистенције израчунат је према методи из литературе [20]: ХОМА-ИР=Глукоза × Инсулин / 22. 5. ХОМА - =20 × Инсулин / (Глукоза - 3.5) × 100%. ИР је инсулинска резистенција и (%) је функција ћелије. Моларна јединица глукозе је ммоЛ·Л-1

. Инсулин се даје у мУ·Л-1. Број глукозе и инсулина се мери током поста. Индекс артериосклерозе (атерогени индекс) израчунат је према методи коју су описали Зхенг ет ал. [21]. Метод израчунавања: Атерогени индекс=(ТЦ-ХДЛ-Ц) / ХДЛ-Ц.

2.5.3 Ефекти различитих екстрахованих делова Цистанцхе десертицола/Цистанцхе десертицола на серумски ИНС и ХбА1ц црних мишева дб/дб

Узмите смрзнуте узорке серума и доведите их на собну температуру пре него што их употребите за тестирање са ИНС и ХбА1ц комплетима за имунотестирање ензима. Строго пратите методе и кораке у упутствима за комплет.

2.6 Ефекти различитих екстрахованих делова Цистанцхе десертицола/Цистанцхе десертицола на ниво оксидативног стреса у јетри дб/дб црних мишева

Узмите замрзнуте узорке серума и доведите их на собну температуру пре него што их употребите за тестирање са МДА и СОД ензимским имунолошким тестовима. Строго пратите методе и кораке у упутствима за комплет.

2.7 Ефекти различитих екстрахованих делова Цистанцхе десертицола/Цистанцхе десертицола на метаболизам масти у јетри дб/дб црних мишева

Нивои ТГ, ТЦ, ХДЛ-Ц и ЛДЛ-Ц у серуму пацова су мерени коришћењем релевантних комплета. За специфичне кораке мерења погледајте упутства за комплет.

2.8 Ефекти различитих екстрахованих делова камфора Цистанцхе десертицола/Ратиана на УА, Цр и мАЛБ у плазми и урину дб/дб црних мишева

Узмите замрзнуте узорке плазме и урина и доведите их на собну температуру пре него што их употребите за тестирање УА, Цр и мАЛБ комплета за имунотестирање везаних за ензиме. Строго пратите методе и кораке у упутствима за комплет.

2.9 Посматрање патолошких пресека панкреаса и бубрега ХЕ бојењем

Ткива панкреаса и бубрега натопљена 10% параформалдехидним фиксативом током 24 сата су уклоњена, испрана дестилованом водом и чувана у 70% етанолу. Узорци ткива су уклоњени, дехидрирани градираним етанолом, очишћени, уграђени у парафин, пресечени, а затим обојени хематоксилином и еозином (Х&Е бојење). Након што се лепак пресека осуши, користите дигитални систем за снимање високе резолуције да бисте посматрали и фотографисали секције.

2.10 Одређивање колагена бубрежног ткива типа ИВ имунохистохемијом

За експресију, пресеци бубрега су депаратисани у воду и затим подвргнути преузимању антигена. Блокирани су са 10% козјег серума и инкубирани са примарним антителом на 4 степена преко ноћи. После испирања, секундарно антитело је инкубирано. Тренутно решење је ДАБ за развој боја. Прање, дехидрација и заптивање изведени су под оптичким микроскопом. Посматрајте експресију протеина колагена типа ИВ у ткиву бубрега.

2.11 Статистичке методе

Коришћење софтвера ГрапхПад Присм Верзија 5.01 (2007, ГрапхПад Софтваре ре инц) за анализу података и резултата

Резултат је средња вредност±СЕМ Указује да је разлика између две групе једносмерна

ＡＮＯＶＡ( ｏｌｌｏｅｄｅＢｏｎｅｒｒｎｎ′ један пар тестова колона) метода, П<0.05 is a significant difference and has statistical significance.