Експеримент 4 Ефекат фенилетанол гликозида Цистанцхе Десертицола на перименопаузални синдром код миша Материјали и методе модела депресије 1 Експериментални материјали

1.1 Експерименталне животиње

СПФ мишеви, раса Кунминг, женке, 18 ~ 22 г, обезбеђен од Схандонг Луканг Пхармацеутицал Цо., Лтд., ова серија мишева број сертификата: 0016003; лабораторијски сертификат број СИКСК (Иу) 2010-001. 1.2 Експериментални лекови

Цистанцхе фенилетанол гликозидје припремљен по методи Експеримента 1, а садржај је достигао 66,47%. Генгниан'ан капсула, састојци: Рехманниа глутиноса, Рехманниа глутиноса, Алисма, Опхиопогон јапоницус, Сцропхулариацеае, кора божура, Пориа кокос, седеф, цурцулиго, Сцхисандра цхиненсис, магнетит, Полигонум, мултифлора, полигонум, мултифлора . Функције и индикације:Негујте јин и савладајте јанг, ослободити невољеисмири ум. Користи се за валунге и знојење у менопаузи, вртоглавицу, тинитус, раздражљивост и несаницу. Спецификације: 0.3 г по капсули. Употреба и дозирање: Орално, по 3 капсуле, 3 пута дневно. Произвођач: Сханки Тианкинг Пхармацеутицал Цо., Лтд. Број серије производње: 121104. Број одобрења: Национално одобрење за лек З14021848.

КОЛИКО ЈЕ ТРЕБА ДА ЦИСТАНЦХЕ проради?

Сојини изофлавони и витамин Е меке капсуле, листа састојака: прах изофлавона соје, витамин Е, сунцокретово уље, желатин, глицерин, вода, тартразин, титанијум диоксид. Иконични састојци и садржај: Сваких 100 г садржи 55,2 мг сојиних изофлавона (израчунатих као генистеин) и 608,5 мг витамина Е. Здравствене функције: Повећава густину костију. Упутство и дозирање: Узимајте 1 капсулу 2 пута дневно са топлом водом. Спецификације: 500 мг × 100 капсула. Произвођач: Веихаи Зигуанг Биотецхнологи Девелопмент Цо., Лтд. Број серије производње: 13070302. Број одобрења: Гуосхијианзи Г20080032. 1.3 Експериментални реагенси

Натријум карбоксиметил целулоза, Тиањин Хенгкинг Цхемицал Реагент Мануфацтуринг Цо., Лтд., број серије: 20120418; пеницилин натријум за ињекције, Нортх Цхина Пхармацеутицал Цо., Лтд., спецификација: 4 милиона јединица, број производне серије: ц1206807; раствор формалдехида (аналитичка квалитета), Иантаи Цити Схуангсхуанг Цхемицал Цо., Лтд., производна серија број: 20130902; 0,9% ињекција натријум хлорида, Цхенкин Пхармацеутицал Цо., Лтд.; спецификација: 250мл, број производне серије: 1301265303;

Хлоралхидрат, Тиањин Гуангфу Фине Цхемицал Ресеарцх Институте, број серије 20120827; комплет за детекцију миша Е2 ЕЛИСА, компанија за истраживање и развој, број серије: 20140101А; комплет за детекцију Т ЕЛИСА за миш, компанија за истраживање и развој, број серије: 20140101А; комплет за детекцију ЛХ ЕЛИСА за миш, компанија за истраживање и развој, број серије: 20140101А; Комплет за детекцију ФСХ ЕЛИСА за миш, компанија за истраживање и развој, број серије: 20140101А;

Комплет за детекцију ДА ЕЛИСА за миш, компанија за истраживање и развој, број серије: 20140101А; Миш 5-Кит за детекцију ХТ ЕЛИСА, компанија за истраживање и развој, број серије: 20140101А. 1.4 Експериментални инструменти

Електронска вага, Схангхаи Минкиао Медицал Инструмент Цо., Лтд., модел: ЈИ601; електронска аналитичка вага, компанија Охаус (Шангај), модел: АР1140/Ц; брза десктоп центрифуга, Шангајска фабрика научних инструмената Антинг, модел: ТГЛ-168 ; Електрично термостатско водено купатило, Схангхаи Иихенг Сциентифиц Инструмент Цо., Лтд., модел: ХВС12; Тестер аутономне активности миша, Цхенгду Таименг Тецхнологи Цо., Лтд., модел: ЗЗ-6; Мерач избегавања мрака мишем, Цхенгду Таименг Тецхнологи Цо., Лтд., модел: БА-200; тестер репног вешања, Цхенгду Таименг Тецхнологи Цо., Лтд., модел: ТС-200; расхладна центрифуга велике брзине, Зхонгјиа Бранцх оф ХКУСТ Инноватион Цо., Лтд., модел: КДЦ-160ХР; подесиви инструмент за пипетирање, Схангхаи Леибо Аналитицал Инструмент Цо., Лтд.;

Читач микроплочица, америчка компанија БИО-РАД, модел: 680;

Електрични микроскоп, јапанска компанија ОЛИМПУС, модел: БКС61.

2 Експерименталне методе

2.1 Моделирање и примена лекова

Изабрано је 90 женки Кунминг мишева са телесном тежином од 23-25г, а 10 је насумично одабрано као празна група и подвргнуто лажној операцији, а преостали мишеви су коришћени за креирање модели перименопаузе. Након вагања, мишеви су анестезирани интраперитонеалном ињекцијом 10% хлорал хидрата (0,03мл/10г) и фиксиран је абдоминални положај. Затим је длака ошишана са задње стране миша испод последњег ребра, на пресеку средње аксиларне линије и око 1 цм од спољашње стране кичме, а затим урезана након дезинфекције. Кожа и мишићи леђа су широки око 0.5-1цм. Млечно бела сјајна масна маса се може видети у пољу реза, а јајник је уграђен у њега. Малом пинцетом нежно ухватите масну масу и извуците је из реза, одвојите масну масу и видећете групу танких, неправилних, жутоцрвених јајника. Приликом сечења, прво подвезите јајоводе (укључујући маст) испод јајника танким нитима, а затим уклоните јајнике. После операције, рогови материце се враћају у трбушну дупљу, шивају се мишићи и кожа, а на исти начин се уклањају оба јајника. Након операције, животиње су пажљиво узгајане и пеницилин 200,000 у/кг (0,1 мЛ сваки) је интрамускуларно убризган да би се спречила инфекција током 3 узастопна дана, једном дневно. 5 дана након операције, рађен је преглед вагиналног размаза на сваком мишу један по један, једном дневно током 5 узастопних дана да би се утврдило да ли су јајници потпуно уклоњени. Мишеви који су показивали еструсну реакцију у размазу су одбачени, а 60 потпуно кастрираних мишева је насумично и равномерно подељено у 6 група за експерименталне сврхе, наиме група модела, група Менгнианан, група изофлавона соје, велика, средња иНиска доза Цистанцхе фенилетанол гликозидне групе. Животињама у свакој групи су давани одговарајући лекови 10. дана након операције. После 6 дана примене, мишеви у празној групи су узгајани на 5 по кавезу, са нормалном храном и водом, без икакве стимулације. Свих 6 моделних група су узгајане по 1 миш по кавезу, и сваки дан су насумично добијане различите стимулације. Седам фактора стреса је примењено насумично у року од 18 дана: влажна стеља (1г легла/1мл воде); пливање у леденој води (4 степена, 5 мин); топлотни стрес (45 степени, 5 мин); ноћно осветљење (24х); стезање репа (1 мин); недостатак воде (24 х); пост (24х). Стимулус је даван насумично сваког дана, а сваки стимулус није могао да се појављује непрекидно 18 дана.

Начин припреме: 0.5% ЦМЦ Начин припреме: Измерити 4 г натријум карбоксиметил целулозе и помешати са дестилованом водом да добијете 800 мл.

Дозе великих, средњих и малих доза групе Цистанцхе фенилетанол гликозида биле су 200мг/кг, 10{{20}}мг/кг и 50мг/кг респективно (примењена запремина 0,1мл/10г). Начин припреме: Одмерити 2000мг, 1000мг, односно 500мг Цистанцхе фенилетаноид гликозида, растворити их са малом количином 0,5% ЦМЦ, затим прилагодити запремину на 100мл, добро промешати и то је то. Генгнианган капсуле (675мг/кг, помешане са дестилованом водом до 67,5 мг/мл, 0,1мл/10г, што одговара 15 пута већој клиничкој дози); начин припреме: узмите 9 Генгнианан капсула, прво употребите малу количину 0,5% ЦМЦ раствора, затим подесите запремину на 40мл и добро промешајте да бисте добили дозу Генгнианан капсуле суспензије (675мг/кг). Соја изофлавон витамин Е мека капсула (250мг/кг, користите дестиловану воду да направите 25мг/мл, 0,1мл/10г, што је еквивалентно 15 пута већој од клиничке дозе); Начин припреме: Узмите 2 меке капсуле сојиног изофлавона витамина Е, прво их употребите. Растворите малу количину 0,5% ЦМЦ, затим подесите запремину на 40 мл и добро промешајте да бисте добили дозу суспензије меких капсула витамина Е соје изофлавона (250 мг/кг ). Начин складиштења: у фрижидеру, топло током употребе.

Начин примене: Животињама у свакој групи су давани одговарајући лекови 10. дана након операције. Групи Генгниан'ан је орално давана суспензија Генгниан'ан капсула од 675 мг·кг-1, група сојиних изофлавона орално је давана 250 мг·кг-1 меке суспензије сојиног изофлавона витамина Е, и велика, средње имале дозе Цистанцхеафенилетанол. Групи гликозида су орално даване велике, средње и мале дозе Цистанцхе фенилетанол гликозида 200мг·кг-1, 10мг·кг-1, 50мг·кг{{ 5}}, 0,1мл/10г респективно. Слепа група и група модела су даване истом запремином 0,5% раствора ЦМЦ једном дневно током 30 узастопних дана.

2.2 Ставке посматрања и методе детекције

Принудно пливање: Првог дана након завршетка стимулације хроничним стресом, мерено је време непокретности мишева у свакој групи у року од 6 минута у трајању од 2-6 минута. (Ставите мишеве из сваке групе у чашу од 2000 мЛ. Температура воде је 25 степени. Поред неопходног минималног покрета потребног за одржавање плутања, удови животиње престају да се крећу и евидентирају се као непокретни. Забележите укупно време непокретности од 2 до 6 минута у року од 6 минута ) Тест добровољне активности: Другог дана након завршетка стимулације хроничним стресом мерен је број спонтаних активности мишева у свакој групи у року од 5 минута.

Метода избегавања мрака: Трећег дана након завршетка стимулације хроничним стресом, ставите реп миша у кутију за мерење окренут према малом отвору у мрачној комори и спроведите обуку. После 24 сата, поново измерите латенцију миша који први пут улази у мрачну комору и време потребно да уђе у тамну собу у року од 5 минута. Број струјних удара.

Тест суспензије репа: Петог дана након завршетка стимулације хроничним стресом, мерено је време непокретности мишева у свакој групи у року од 6 минута у трајању од 2-6 минута.

2 сата након последње дозе (12 сати без хране и воде), мишеви су измерени, очне јабучице су уклоњене, крв је сакупљена, серум је одвојен и садржај Е2, Т, ЛХ и ФСХ у серуму је измерен. измерена; мишеви су затим убијени дислокацијом вратних пршљенова, а мишеви су сецирани. , уклоните тимус, слезину и ткиво материце, измерите њихову влажну тежину и израчунајте индекс органа (индекс органа=влажна тежина органа мг/тежина миша г), затим уклоните мозак, одсеците половину и припремите мозак хомогенат ткива. Ензимски имунотест је коришћен за одређивање садржаја моноаминских неуротрансмитера 5-ХТ и ДА у хомогенату можданог ткива. Ткива тимуса, слезине, материце и мозга су фиксирани у 10% раствору формалдехида, убачени у парафин, исечени и обојени ХЕ. Морфолошке промене сваке групе посматране су под светлосним микроскопом. 2.3 Метода одређивања комплета

Узмите узорке серума: Користите епрувете које не садрже пирогене и ендотоксине. Избегавајте било какву ћелијску стимулацију током операције. Након сакупљања крви, центрифугирајте је на 3000 обртаја у минути 10 минута да бисте брзо и пажљиво одвојили серум и црвена крвна зрнца. Узмите узорке хомогената ткива: Додајте одговарајућу количину физиолошког раствора у ткиво и изгњечите. Центрифугирајте на 3000 о/мин 10 минута и узмите супернатант.

Метода одређивања ЕЛИСА комплета за миш (Е2) естрадиола (Е2) је иста као у експерименту 2. Концентрације стандардних производа (С0-55) су: 0, 4, 8, 16, 32 и 64 пмол/Л.

Метода одређивања мишјег тестостерона (Т) ЕЛИСА комплета је иста као она за естрадиол (Е2). Концентрације стандардних производа (С0-55) су: 0, 50, 100, 200, 400, 800 пг/мЛ.

Метода одређивања ЕЛИСА комплета за мишји фоликул-стимулишући хормон (ФСХ) је иста као и за естрадиол (Е2). Концентрације стандардних производа (С0-55) су: 0, 5, 10, 20, 40 и 8{{30} }мИУ/мЛ. Метода одређивања ЕЛИСА комплета за лутеинизирајући хормон (ЛХ) миша (миша) је иста као и за естрадиол (Е2). Концентрације стандарда (С0-55) су: 0, 0,5, 1, 2, 4 и 8мИУ/мЛ. Метода одређивања мишјег 5-хидрокситриптамина (5-ХТ) ЕЛИСА комплета је иста као и за естрадиол (Е2). Концентрације стандардних производа (С0-55) су: 0, 15, 30, 60, 120, 240 нг/мл. Метода одређивања ЕЛИСА комплета за откривање допамина (ДА) миша (миша) је иста као она за естрадиол (Е2). Концентрације стандардних производа (С0-55) су: 0, 7,5, 15, 30, 60 и 120 пг/мл.

Из табеле 21 и слике 25 може се видети да се у поређењу са групом слепих мишева, време непокретности мишева у групи модела значајно повећало у експериментима принудног пливања и вешања репа (П<0.01), indicating that perimenopausal model mice with depression Increased levels of despair about adverse circumstances. Compared with the model group, the forced swimming immobility time and tail suspension immobility time of mice in each drug group were significantly reduced (P<0.01).

2 Ефекти на аутономне активности код мишева модела перименопаузалне депресије

Резултати теста аутономне активности мишева у свакој експерименталној групи приказани су у табели 22 и слици 26.

Из табеле 23 и слика 27 и 28 може се видети да је у поређењу са слепом групом, период латенције мишева у групи модела значајно смањен и број електрошокова значајно повећан (П<0.01), reflecting the decline in memory of the perimenopausal depression model mice. . Compared with the model group, the number of electric shocks received by mice in each administration group was significantly reduced (P<0.01), and the latency of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Mengnianan group, and soybean isoflavones group was significantly reduced (P<0.01). extension (P<0.01). The latent period of mice in the medium and small doses of Cistanche phenylethanoid glycoside group was significantly prolonged (P<0.05).

4 Ефекти на индекс органа код мишева модела перименопаузалне депресије

Из табеле 24 и слике 29 се може видети да су у поређењу са празном групом, индекс тимуса, индекс слезине и утерални индекс групе модела значајно смањени (П<0.01), indicating that the perimenopausal depression mouse model had thymus, spleen, and uterus index. Shrinkage of the organization. Compared with the model group, the thymus index, spleen index, and uterine index of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Gengnianan group, and soybean isoflavone group could be significantly increased (P<0.01). The medium-dose Цистанцхе фенилетанол гликозидгрупа Тимусни индекс и утерални индекс код мишева могу бити значајно повећани (П<0.01), and the spleen index can be significantly increased (P<0.05).