Експериментална студија о заштитном ефекту укупних гликозида Цистанцхе (ЦТГ) на реналну исхемијску реперфузијску повреду

Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com

ЗХУ Јун, ЗХАО Кси

Апстрактан:Циљ Успоставити модел хеморагичног шока и реанимације код пацова како би се уочио заштитни ефекатцистанцхе укупни гликозиди(ЦТГ)на бубрежномисхемијско-реперфузиона повреда. Методе СД пацови су рандомизирани у лажну – операцијску групу, групу за шок и реанимацију (експерименталну групу) и ЦТГ групу, са по 10 пацова у свакој. Након моделирања, пацови у ЦТГ групи су примили интраперитонеалну ињекцију ЦТГ 400 мг/кг. У експерименталној групи и групи лажне операције убризган је физиолошки раствор од 3 мл. Нивои Цр, БУН и Цис － Ц су одређени да би се открила функција бубрега у свакој групи. Проточна цитометрија је коришћена за откривање брзине апоптозе бубрежних ћелија. ЕЛИСА је коришћена за откривање експресије КСИАП у ткиву бубрега. Резултати У поређењу са експерименталном групом, нивои Цр, БУН и Цис － Ц су очигледно смањени уЦТГгрупа (П < {{0}}}.01),="" а="" апоптоза="" бубрежних="" ћелија="" је="" смањена="" (п="">< 0,01).="" цтг="" је="" значајно="" побољшао="" експресију="" ксиап=""><0.05). conclusion="">ЦТГдоноси заштитни ефекат наисхемијска реперфузијаповреда бубрега код пацова, што је вероватно повезано са промоцијом експресије КСИАП.

【Кључне речи】 Бубрег; Исхемијска реперфузиона повреда; Цистанцхе Тотал Глицосидес; КСИАП; Апоптоза ћелије

Цистанцхе укупни гликозиди

Исхемијско-реперфузиона (И/Р) повредаје чест патофизиолошки феномен оштећења бубрега у процесу хеморагичног шока, тешке трауме, трансплантације бубрега и операције тумора бубрега. Студије су показале да је апоптоза важна карика у оштећењу бубрежне функције изазване И/Р повредом [1]. Инхибитор протеина апоптозе повезан са Кс-хромозомима (КСИАП) је један од најјачих ендогених инхибитора апоптозе до сада пронађених [2]. Постоји неколико студија о анти-апоптотичком ефекту КСИАП у бубрежном ткиву након И/Р повреде.Цистанцхе укупни гликозиди(ЦТГ) су са листе једињења фенилетанол гликозида екстрахованих изЦистанцхеимају различите биолошке функције. Постоји неколико студија о његовој бубрежној заштити након И/Р повреде. У овом експерименту, успостављен је модел реанимације хеморагичног шока код пацова и успостављен је системски модел И/Р повреде да би се истражио заштитни ефекат ЦТГ претретмана на бубрег од И/Р повреде и истражио његов могући механизам.

Ефекти цистанче: спречитиИсхемијско-реперфузиона (И/Р) повреда

1 Материјал и методе

1.1 Експериментални материјали

1.1.1 Лабораторијске животиње 30 здравих мужјака СД пацова чистог квалитета, које је обезбедио Експериментални центар Шангајског универзитета традиционалне кинеске медицине, број сертификата за животиње: СИКСК (Шангај) 2009-0069, телесна тежина (320 ± 30) г.

1.1.2 Експериментални реагенсЦТГ(купљено од Зхејианг Хангзхоу Ксингхуи Тианли Пхармацеутицал Цо., Лтд., број серије: 20081516); натријум пентобарбитал (број серије: П3761), пропидијум јодид (ПИ), родамин123 (оба купљена (од Сигма, САД); комплет за одређивање КСИАП за пацове ЕЛИСА комплет (купљен од Схангхаи Кемин Биотецхнологи Цо., Лтд., серијски број ЦСБ-ЕЛО26172) .

1.1.3 Лабораторијски инструмент Читач микроплоча (Америцан Тхермо Цомпани); Вишепараметарски физиолошки детектор (купљен од компаније НИХОН КОХДЕН, Јапан); Проточни цитометар (купљен од компаније Бецтон-Дицкинсон, САД); 24 Г трокар (Схандонг Јиеруи Медицал Екуипмент Цомпани).

1.2 Експерименталне методе

1.2.1 Припрема животињског модела СД пацови су изглађени 12 сати пре експеримента и анестезирани интраперитонеалном ињекцијом натријум пентобарбитала (50 мг/кг). Пацови су фиксирани у лежећем положају, а у левом доњем делу стомака направљен је рез од 3 цм и одвојен. У феморалну артерију се убацује трокар 24 Г, повезује се вишепараметарски физиолошки тестер, хепаринизује се шприц од 20 мл, крвни притисак пада на 40 мм Хг. Крвни притисак пада на 40 мм Хг. Сматра се да је шок започео, а крвни притисак се одржава 90 минута. То је (13 ± 3) мл, а затим се аутологна крв у шприцу полако враћа. Потребно је око 30 минута да се крвни притисак врати на више од 90 одсто основне вредности. Сматра се да је реанимација успешна [3]. Извуците иглу трокара, подвезите феморалну артерију и зашијте рез. Након што су пацови били будни, враћени су у кавез на посматрање и имали су слободан приступ храни и води. 24 сата након реанимације, пацови су анестезирани пентобарбитал натријумом (50 мг/кг) интраперитонеалном ињекцијом, лапаротомијом и 5 мл крви је сакупљено из доње шупље вене. Пацови су одмах убијени, а леви и десни бубрег извађени на употребу.

1.2.2 Груписање животиња и примена 30 пацова је насумично подељено у групу лажне хирургије, групу за реанимацију шока (експериментална група) и ЦТГ групу, са 10 пацова у свакој групи.

Експерименталној групи је интраперитонеално убризгано 3 мл нормалног физиолошког раствора 2 сата пре пуштања крви. УЦТГгрупи, ЦТГ је даван 2 сата пре пуштања крви пацова, а доза је убризгана у трбушну дупљу у дози од 400 мг/кг. Група за лажну операцију само је подвргнута анестезији, лапаротомије и одвајању трокара феморалне артерије и резовима шавова и сл., пуштање крви и реанимација нису вршени, а остало је исто као и експериментална група.

1.3 Индикатори и методе испитивања

1.3.1 Одређивање креатинина у крви (Цр), азота урее (БУН), цистатина Ц Цр, БУН и цистатина Ц одређује лабораторија наше болнице. Цистатин Ц је ендогени маркер промена у брзини гломеруларне филтрације. Када је бубрежна функција оштећена, брзина гломеруларне филтрације се смањује, а концентрација цистатина Ц у крви може се повећати више од 10 пута. Дијагностичка тачност цистатина Ц је знатно боља од серумског креатинина.

1.3.2 Одређивање брзине апоптозе ћелија Проточна цитометрија је коришћена за детекцију брзине апоптозе ћелија бубрега. Узмите бубрег и исецкајте га сечивом, додајте мало ПБС-а и пребаците у епрувету. Додајте 0.3 процента трипсина за варење у водено купатило од 37 степени и инкубирајте 20 мин. Када супстанца у епрувети постане замућена, додајте два пута ПБС да бисте зауставили варење, филтрирајте помоћу најлонске мреже од 300 месх, одбаците нечистоће и користите центрифугу на ниској температури Центрифуге на 1500 г/с за 5 мин, баците супернатант, подесите концентрацију ћелија на 1 × 106 ~ 1,5 × 106 / мл, узмите 0,4 мл горње ћелијске суспензије и додајте 10 ул / мл родамина123 0 ．4 мл, инкубирајте у Водено купатило од 37 степени заштићено од светлости, затворите епрувету, исперите два пута ПБС после 30 мин, затим центрифугирајте на 1500 г/с 5 мин, баците супернатант и поново исперите на исти начин. Додајте ПИ 0,4 мл, бојите 15 минута и проверите проценат нормалних, некротичних и апоптотичких ћелија у бубрегу. Према афинитету ове две боје у различитим типовима ћелија, познато је да су само ћелије боје ПИ мртве ћелије, само Рходамин123 обојене ћелије су живе ћелије, а обе обојене ћелије су апоптотичке ћелије.

1.3.3 Ензимски имунотест (ЕЛИСА) је коришћен за детекцију експресије КСИ-АП у ткивима бубрега пацова. Узети су бубрези сваке групе, а свеже ткиво бубрега третирано је лизатом ткива. Центрифугирајте на 1500 г/с у нискотемпературној центрифуги 5 мин. Узмите супернатант и радите у складу са упутствима КСИ-АП ЕЛИСА комплета. Схангхаи Јиаода Фенгхе Тецхнологи Цо., Лтд. је одговоран за тестирање.

1.4 Статистичка обрада

Сви подаци су статистички анализирани коришћењем софтвера СПСС17.0, а подаци су изражени као средња вредност ± стандардна девијација (к ± с) и П<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

цистанцхе укупни гликозиди

2 резултата

2.1 Индекси функције бубрега Цр, БУН, Цистатин Ц Поређење Цр, БУН, Цистатин Ц у експерименталној групи били су значајно виши од оних у групи лажне операције (П<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">

У поређењу са експерименталном групом, вредности Цр, БУН и Цистатин Ц уЦТГгрупе су значајно смањене, а разлика је била статистички значајна (П<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">

Табела 1 Поређење индекса бубрежне функције Цр, БУН и Цистатин Ц пацова у свакој групи (к ± с)

Напомена: У поређењу са лажном оперативном групом, а П＜{{0}}.01; у поређењу са експерименталном групом, бП<>

2.2 Стопа апоптозе бубрежних ћелија и експресија КСИАП у бубрежном ткиву. Само неколико ћелија у бубрежном ткиву групе лажне операције пролази кроз апоптозу.

Број апоптозе у експерименталној групи је значајно повећан, а разлика је била статистички значајна у поређењу са групом лажне операције (П.<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>

Група лажне операције имала је само слабу експресију КСИАП, док је експериментална група имала значајно повећање експресије КСИАП (П<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">

Табела 2 Поређење брзине апоптозе и експресије КСИАП ћелија бубрега пацова у свакој групи (к± с)

Напомена: У поређењу са лажном оперативном групом, аП＜{{0}}. 01; У поређењу са експерименталном групом, б П<0. 05,=""><0.>

3 Дискусија

Механизам И/Р повреде бубрега је веома компликован. То је патолошки процес који се одвија кроз многе путеве под дејством различитих фактора, као што су преоптерећење јонима калцијума, оштећење пероксидације липида, апоптоза и некроза, међу којима је ендогене каспазе Каспаза зависна апоптоза један од главних облика бубрежног тубуларног епитела. оштећење ћелија изазвано И/Р повредом бубрега [4]. Инхибитор породице протеина апоптозе (ИАП) је једини инхибитор каспазе пронађен у ћелијама сисара до сада, који може ефикасно спречити појаву апоптозе. КСИАП је најјачи члан породице ИАП који инхибира каспазу, који може инхибирати ћелијску апоптозу узроковану различитим патолошким стимулусима и имати заштитни ефекат на оштећене органе [5].

Тренутно је метода успостављања животињских модела са оштећењем бубрега И/Р углавном уклањање једне стране бубрега и стезање друге стране бубрежне педикуле или бубрежне артерије [6] да би се симулирало стање трансплантације бубрега. Аутор је у овој студији користио модел хеморагијског шока/реанимације, који је ближи патофизиолошком процесу системске исхемије-реперфузије који се јавља у клиничком трауматском шоку. У овом експерименту, крвни БУН, Цр и цистатин СД пацова Количина Ц је значајно повећана и бубрежна функција је озбиљно оштећена. То је идеалан животињски модел за проучавање И/Р бубрежне повреде.

ЦТГ је важна медицинска компонента традиционалне кинеске медицинеЦистанцхе. Цистанцхе, који је топао по природи, сладак и слан, припада меридијану бубрега и дебелог црева и првобитно се налазио у Шенонговој Материа Медици. „Бен Ђинг“, каже: „Одржава пет трудова и седам повреда, храни средину, храни пет унутрашњих органа, јача јин и храни суштину и чи“. Такође."Цистанцхекористи се у мојој земљи две хиљаде година. У прошлости је на првом месту у формулама за повећање снаге, а на другом месту после гинсенга у хранљивим формулама.Цистанцхемоћипобољшавају сексуалну функцију, регулишу неуроендокрину и побољшавају имунолошку функцију тела. Антиоксиданси, промовишу метаболизам материјала, штите исхемијски миокард и друге функције. Као главни лековити састојакЦистанцхе, ЦТГ има много функција. Истраживање церебралнихисхемија-реперфузијамодел

Студије су то открилеЦТГможе смањити ексцитаторне аминокиселине у можданом ткиву након исхемије-реперфузије и заштитити мождано ткиво СД пацова [7]. ЦТГ делује антиоксидативно на ткива мишева и има одређени заштитни ефекат на акутну церебралну хипоксију код мишева и оштећење срчаног мишића код мишева [8]. ЦТГ може значајно да побољша неуропонашање мишева Паркинсоновог модела и инхибира смањење броја допаминских неурона у супстанцији нигра [9]. Повећавајући активност ензима за уклањање слободних радикала, спречавајући пероксидацију липида, инхибирајући таложење -амилоидног пептида у мозгу и инхибирајући апоптозу можданих ћелија, ЦТГ је значајно повећао способност учења и памћења код мишева Алцхајмерове болести изазване -амилоидним пептидом [10]. Ова студија је показала да је након примене ЦТГ предтретмана садржај БУН, Цр и цистатина Ц у крви СД пацова значајно смањен, а оштећење бубрежне функције смањено. ЦТГ је повећао протеин КСИАП који инхибира апоптозу у бубрежним ткивима И/Р повреде и блокирао ћелије. Појава апоптозе игра заштитну улогу у оштећењу бубрега.

референце

[1] Цассис П, Аззоллини Н, Солини С, ет ал. И дарбепоетин алфа и карбамиловани еритропоетин спречавају дисфункцију трансплантата бубрега због исхемије/реперфузије код пацова［Ј］． Трансплантација, 2011, 92 (3): 271-279.

[2] Вест Т, Стумп М, Лодигенски Г, ет ал. Недостатак Кс-везаног инхибитора протеина апоптозе доводи до повећане апоптозе и губитка ткива након неонаталне повреде мозга［Ј］． АСН Неуро, 2009, 1 (1). ПИИ: е00004. дои:10. 10421АН20090005.

[3] Фу Кс, Тиан Х, Ванг Д, ет ал. Вишеструке повреде и откази органа узроковани шоком и реперфузијом након прострелних рана［Ј］． Ј Траума, 1996, 40 (3 Суппл): С135-139.

[4] Паданилам БЈ. Ћелијска смрт изазвана акутним оштећењем бубрега: перспектива доприноса апоптозе и некрозе［Ј］． Ам Ј Пхисиол Ренал Пхисиол, 2003, 284 (4): Ф608-Ф627.

[5] Галбан С, Хванг Ц, Румбле ЈМ, ет ал. Цитопротективни ефекти ИАП-а откривени од стране антагониста малих молекула［Ј］． Биоцхем Ј, 2009, 417 (3): 765-771.

[6] Ву Јиангуо, Зханг Дан, Ву Ксинсхенг, итд., Успостављање и искуство модела акутне исхемије-реперфузије бубрега код мишева [Ј]. Медицинске информације: Хандбоок оф Сургери, 2007, 20 (12): 1103-1105.

[7] Зху Зхенг. Ефекти гликозида Цистанцхе на ексцитаторне аминокиселине у можданом ткиву пацова након церебралне исхемије и реперфузије [Ј]. Анхуи Медицине, 2010, 14 (12): 1393 -1394.

[8] Јулиа И, Ванг КСВ, Вубули АС, ет ал. Заштитни ефекат укупних гликозида цистанцхе десертицола на недостатак кисеоника ［Ј］． Реп Цхин Пхарм, 2003, 20 (1): 73-76.

[9] Ли Венвеи, Ианг Ру, Цаи Донгфанг, ет ал. Заштитни ефекат укупних гликозида цистанхе на допаминергичке неуроне у супстанцији нигра код мишева модела МПТП Паркинсонове болести

[10] Лиу Фенгкиа, Ванг Ксиаовен, Луо Лан, итд. Ефекат и механизам укупних гликозида цистанцхеа на учење и памћење модела миша са Алцхајмеровом болешћу индукованог -амилоидним пептидом [Ј]. Кинески фармаколошки билтен, 2006, 22 (5): 595-599.