Исхрана са високим садржајем фосфора изазива појачану регулацију експресије МРНА Бмп2 и Спп1 у бубрезима пацова

Да би се разјаснио механизам развојанефрокалцинозаизазвано адијета са високим садржајем фосфора (П)., фокусирали смо се на протеине везане за кости као што су коштани морфогенетски протеин 2 и остеопонтин. Ова студија је истраживала ефекте исхране са високим П на експресију мРНА Бмп2 и Спп1 у бубрезима пацова. Вистар пацови су подељени у две групе и храњени су контролном исхраном (контролна група) или исхраном са високим П (група са високим П).Калцијум у бубрезимаи концентрације П су значајно повећане у групи са високим П у поређењу са контролном групом. Експресија мРНК и Бмп2 и Спп1 је значајно повећана у групи са високим П у поређењу са контролном групом. Ови резултати указују на то да исхрана са високим П изазива повећање регулације Бмп2 и Спп1мРНА у бубрегу.

Кључне речи:дијета са високим садржајем фосфора, нефрокалциноза, Бмп2, Спп1,бубрега, пацов

КЛИКНИТЕ ОВДЕ ДА ДОБИЈЕТЕ ПРИРОДНИ ОРГАНСКИ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНЦХЕ СА 25% ЕХИНАКОЗИДА И 9% АКТЕОЗИДА ЗА ФУНКЦИЈУ БУБРЕГА

Увод

Нефрокалцинозакарактерише се депозитима калцијума (Ца) убубрежни паренхим. Дијетални фосфор(П), посебно, је кључни фактор у развоју овог поремећаја. Показало се да примена дијете са високим садржајем П доводи до повећане концентрације Ца убубрегаи депозити Ца у бубрежном паренхиму1-6). Иако је ефекат исхране са високим П на развој нефрокалцинозе био у фокусу текућих студија, мало се зна о механизму одговорном за развој овог поремећаја. Стога је потребно правовремено решавање овог питања.

Изјавили смо да су након хистолошког прегледа коришћењем трансмисионе електронске микроскопије уочени кристали у облику игле налик хидроксиапатиту у бубрежним тубулима пацова који су храњени храном са високим садржајем П6, 7). Рендгенска микроанализа је показала да депозити Ца изазване исхраном са високим садржајем П углавном садрже Ца и П7). Ови резултати су открили да су наслаге Ца изазване исхраном са високим садржајем П облик хидроксиапатита. На основу овог налаза, претпостављамо да је развој нефрокалцинозе контролисан механизмом сличним оном у формирању кости. Стога се ова студија фокусирала на протеине повезане са костима, као што је коштани морфогенетски протеин 2 (БМП2). БМП2 је остеогени фактор који показује активност која индукује остеогенезу, 9). Важно је напоменути да је БМП2 идентификован као фактор који индукује формирање ектопичне кости10, 11). Стога смо претпоставили да ако БМП2 игра важну улогу у развоју нефрокалцинозе, експресија овог протеина у бубрезима би била појачана исхраном са високим П. Ова студија је имала за циљ да утврди да ли исхрана са високим П утиче на експресију мРНАБмп2 у бубрегу.

У међувремену, наша претходна студија је известила да дијета са високим П повећава експресију остеопонтина (ОПН) у бубрежним тубулима користећи имунохистохемијску анализу, што сугерише да ОПН може бити умешан у развој депозита Ца изазваних исхраном са високим П12. Стога смо истраживали промене у експресији мРНА Спп1 иу бубрезима.

Резултати ове студије могу пружити вредан увид у механизам одговоран за развој нефрокалцинозе изазване исхраном са високим П.

материјали и методе

Животиње и дијета. Ова студија је одобрена од стране Комитета за коришћење животиња Пољопривредног универзитета у Токију, а све животиње су одржаване у складу са смерницама универзитета за негу и употребу лабораторијских животиња (Одобрење бр. 300049).

Важно је напоменути да женке пацова лакше развијају нефрокалцинозу него мужјаци пацова13, 14). Поред тога, известили смо да исхрана са високим П повећава експресију ОПН у бубрежним тубулима женки пацова12). Ова студија је затим користила женке пацова као експерименталне животиње. Четворонедељне женке Вистар пацова (Цлеа Јапан, Токио, Јапан) биле су смештене у појединачним кавезима од нерђајућег челика. Током експерименталног периода, кавези су били смештени у просторији са контролисаним осветљењем под светлошћу 12-х: тамни циклус (светло, 0800-2000 х), температура од 22 ± 1 степен и релативна влажност од 60% до 65%.

Састав експерименталних дијета је приказан у табели 1. Експерименталне дијете су припремљене у односу на АИН-93Г дијету15). Експерименталне дијете су садржале две различите концентрације П (контролна дијета, 0.3%; дијета са високим садржајем П, 1,5%). Концентрација П у исхрани са високим П је постављена на 1,5%, пошто су наше претходне студије приметиле да аконцентрација П у исхраниод 1,5% изазива тешку нефрокалцинозу6, 7, 12, 14) и високу експресију ОПН12). Све експерименталне дијете имале су исту концентрацију Ца (0.5%). Концентрације П и Ца, утврђене анализом експерименталне исхране, приказане су у табели 1. Пре почетка студије, сви пацови су аклиматизовани 7 дана, за које време су добили слободан приступ контролној исхрани и дејонизованој води. . Након периода аклиматизације, пацови су насумично подељени у две групе са сличном средњом телесном тежином и храњени су или контролном исхраном (контролна група) или исхраном са високим П (група са високим П) током 14 дана. Пацовима је дат слободан приступ додељеној експерименталној исхрани и дејонизованој води током експерименталног периода. На крају експерименталног периода, пацови су еутаназирани интраперитонеалним убризгавањем смеше анестетика (медетомидин, мидазолам и буторфанол) и узети су узорци крви и бубрега за анализу. Узорци крви су центрифугирани и супернатанти су коришћени као узорци серума. Бубрези су уклоњени, а бубрежна капсула је одбачена. Тхеузорци серума и бубрегасу чувани на -80 степени док нису били потребни за анализу. Десни бубрег је коришћен за квантитативну анализу мРНА Бмп2 и Спп1, а леви бубрег за анализу концентрација Ца и П.

Анализа минерала.

Узорци експерименталне исхране и бубрега пепели су се на 550 степени током 48 х у муфлној пећи, а минерали су екстраховани у 1 мол/Л ХЦл за анализу. Концентрације Ца у експерименталној исхрани и бубрезима одређене су атомском апсорпционом спектрофотометријом16). Концентрације П у експерименталним дијетама и бубрезима анализиране су методом Гомори17).

Квантитативна анализа мРНА Бмп2 и Спп1.

Укупна РНК је изолована из хомогенизованог бубрега коришћењем ТРИзол реагенса (Лифе Тецхнологиес, ​​Калифорнија, САД) према спецификацијама произвођача. Количина и чистоћа РНК су процењени коришћењем НаноДроп 2000ц (Тхермо Фисхер Сциентифиц, МА, САД). цДНК је синтетизована коришћењем СуперСцрипт ИИИ Фирст-Странд Синтхесис СуперМик-а за кРТ-ПЦР (Лифе Тецхнологиес) и затим подвргнута квантитативном РТ ПЦР-у у реалном времену коришћењем СИБР Селецт Мастер Мик-а (Лифе Тецхнологиес). Специфични прајмери18-20) су коришћени за анализу Бмп2 (напред, 5'-АЦЦГТГЦТЦАГЦТТЦЦАТЦАЦ-3'; обрнуто, 5'-ТТЦЦТГЦАТТТГТТЦЦЦГААА-3'), Спп1 (напред, 5'- ТГАГАЦТГГЦАГТГГТТТГЦ-3' ; уназад, 5'-ЦЦАЦТТТЦАЦЦГГГАГАЦА-3'), и Гапдх (напред, 5'-ТГГГААГЦТГГТЦАТЦААЦ-3'; уназад, 5'-ГЦАТГГТЦАТЦААЦ-3' ; реверс, 5'-ГЦАТГГЦЦ}2} '). ПЦР реакција у реалном времену је изведена коришћењем СтепОне ПЦР система у реалном времену (Апплиед Биосистемс, Калифорнија, САД), а нивои експресије мРНА су нормализовани на нивое Гапдх мРНА. Вредност контролне групе је сматрана 1,00.

Статистичка анализа.

Резултати су представљени као средња вредност ± СЕМ за сваку групу од 6 пацова. Након спровођења Ф-теста за одређивање хомогености варијанси, коришћен је Студентов т-тест за утврђивање значајних разлика између две групе. Ако хомогеност варијанси није била једнака, коришћен је Велчов т-тест уместо Студентовог т-теста. Разлике су сматране значајним на п ＜ 0.05

Резултати

Телесна тежина, унос хране и анализа серума.

Коначна телесна тежина и унос хране су значајно смањени у групи са високим П у поређењу са контролном групом (Табела 2).

Тежина бубрега и концентрација минерала.

Тежина мокре и суве бубрега значајно је повећана у групи са високим П у поређењу са контролном групом (Табела 3). Концентрације Ца и П у бубрезима су такође значајно повећане у групи са високим П у поређењу са контролном групом.

Експресија мРНА бубрега Бмп2 и Спп1. Нивои мРНА Бмп2 у групи са високим П су значајно повећани у поређењу са контролном групом (слика 1А). Експресија мРНК Спп1 је такође значајно повећана у групи са високим П у поређењу са контролном групом (Слика 1Б).

Услуга подршке Вецистанцхе-а - највећи извозник цистанцхеа у Кини:

Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com

Вхатсапп/тел:+86 15292862950

Купите за више детаља о спецификацијама:

хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/цистанцхе-схоп