Како активни састојци Цистанцхе Тубулоса играју улогу у Алцхајмеровој болести?

ЈИАНХУА ИАНГ1*, БОВЕИ ЈУ1,2*, ИАО ИАН1, ХУАНХУАН КСУ1, СХАНСХАН ВУ1, ДАНДАН ЗХУ1, ДАНДАН ЦАО1 и ЈУНПИНГ ХУ2

Апстрактан.Ова студија је имала за циљ да истражи неуропротективне ефектефенилетаноидни гликозиди(ПхГс) на Х2О2- и -амилоидним пептидом (А)1-42-индуковане повреде ПЦ12 ћелија као ин витро моделАлцхајмерова болест (АД). Оптимални услови индукције су успостављени скринингом различитих времена инкубације и концентрација. ПЦ12 ћелије су третиране са 0.5 µМ А 1-42 и Х2О2 у присуству ПхГс током 24 х, а виталност ћелија је затим процењена МТТ тестом; Такође је мерено ослобађање лактат дехидрогеназе (ЛДХ) и садржај малондиалдехида (МДА). Оптимални услови за успостављањеАДмодел су третман ПЦ12 ћелија са 0.5 µМ А 1-42 током 48 х, или са 25 µМ Х2О2 раствореним у ДМЕМ са ПБС. ПхГ у концентрацијама од 5, 25 и 50 µг/мл повећавају виталност и смањују ослобађање ЛДХ и МДА из ПЦ12 ћелија повређених А 1-42 или Х2О2. У закључку, модел повреде ПЦ12 ћелија изазване А 1-42- и Х2О2- је успешно успостављен. Показало се да ПхГ имају значајан неуропротективни ефекат против оштећења ћелија изазваних А 1-42- или Х2О2-.

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ ВхатсАпп: 008618081934791

Цистанцхе тубулоса има много ефеката, кликните овде да бисте сазнали више

Увод

Алцхајмерова болест (АД), неуродегенеративни поремећај са клиничким карактеристикама прогресивног губитка памћења и оштећења когнитивних функција (1), најчешћи је узрок деменције широм света (2). Финансијски трошкови су огромни због распрострањености АД (3). Стога је хитно потребно развити одговарајућа средства за управљање и превенцијуАД.

Патогенеза одАДје блиско повезан са акумулацијом неурофибриларних чворова и сенилних плакова (СП) у захваћеним регионима мозга (4,5). Пријављено је да амилоидни пептид (А), главна компонента СП-а, има узрочну улогу у прогресијиАДкао има токсично дејство на неуронске ћелије (6). А фрагменти, укључујући А 1-40, А 25-35 и А 1-42, су генерисани кроз цепање протеина прекурсора амилоида (7). Утврђено је да је неуротоксичност А 1-42 значајно већа од оне А 25-35 и А 1-40, а А 1-42 је у стању да изазовеАДмодел (1,8-10). Оксидативни стрес може бити укључен у патогенезуАДи главни је механизам који лежи у основи неуротоксичности изазване А (11-13). Неколико студија сугерише да је А 1-42 изазвао интрацелуларну акумулацију реактивних врста кисеоника (РОС), што је довело до оксидације липида и протеина, оштећења ДНК и активације сигнализације контролних тачака ћелијског циклуса (1,14,15). Прекомерне количине Х2О2 могу довести до оксидативног оштећења и индуковати апоптозу ПЦ12 ћелија (16). Стога, циљање оксидативног стреса може бити обећавајући приступ за развој терапијских стратегија за инхибицију неуротоксичности изазване А у АД.

Херба (Х.)Цистанцхе, кинески биљни лек који се обично користи у континенталној Кини за исхрану бубрега и допуну есенције и крви, коришћен је за лечење губитка памћења и сенилног затвора (17). Фенилетаноид гликозид (ПхГ), један од главних састојака Х.Цистанцхе, побољшава оштећење неуронске апоптозе изазване А 25-35 преко својих антиоксидативних ефеката (18,19). Претходна студија је идентификовала пет главних компоненти из укупних ПхГ, наимеактеозид, 2'-ацетилактеозид,ехинакозид, цистанозиди и изоактеозид (20). Међу овим компонентама,актеозидиехинакозидпријављено је да имају неуропротективне ефекте на неуротоксичност изазвану А 25-35- или Х2О2- (21-23). На пример, Ву и сарадници (24) су предложили да актеозид иехинакозид

Кључне речи:фенилетаноидгликозиди, ПЦ12 ћелије, Х2О2, -амилоидни пептид1-42, неуропротецтион,цистанцхе

материјали и методе

Припрема ПхГс. Укупни ПхГ су екстраховани из Х.Цистанцхекао што је претходно описано (25). Ваздушно осушена стабљика Х.Цистанцхеје у праху и екстрахован перколацијом са 80 процената ЕтОХ. Перколат је упарен под сниженим притиском, након чега је уследила поновна суспензија у одговарајућој количини Х2О2 (1{{20}}0 µмол/л). Смеша је изолована на колони СП-825 макропорозне смоле (Митсубисхи Цхемицал, Токио, Јапан) и елуирана са 0, 30, 50, 70 и 90 процената ЕтОХ у води. Да би се добила фракција богата ПхГ, елуенти од 30-50 процената ЕтОХ су концентровани и осушени под сниженим притиском. Урађена је ултраљубичаста (УВ) спектрофотометрија да би се одредио укупни ПхГс. Садржај ехинакозида и актеозида је одређен течном хроматографијом високог притиска према претходном протоколу (26). Коришћена је Хиперсил ОДС-2 колона (4,6к250 мм, 5 µм; Далиан Елите Аналитицал Инструментс, Цо., Лтд., Далиан, Кина) и одржавана на собној температури. Мобилне фазе су били метил цијаниди и вода која садржи 0,4 процента фосфорне киселине (в/в; Сигма-Алдрицх; Мерцк КГаА, Дармстадт, Немачка). Брзина протока је била 0,75 мл/мин, а таласна дужина је подешена на 333 нм.

Ћелијска култура и лечење лековима. Ћелијску линију феохромоцитома пацова ПЦ12 обезбедио је др Хе Цхунхуи, Медицински факултет, Медицински универзитет Ксињианг (Урумки, Кина). Ћелије су узгајане у високоглукозном Дулбеццо-овом модификованом медијуму Еагле (ДМЕМ; Тхермо Фисхер Сциентифиц, Инц., Валтхам, МА, САД) који садржи 10 проценат феталног говеђег серума (Сангон Биотецх Цо. Лтд., Шангај, Кина) , 100 У/мл пеницилина и 100 У/мл стрептомицина у инкубатору на 37˚Ц који садржи 5 процената ЦО2 и 95 процената ваздуха. Након достизања 80 процената конфлуенције, ћелије су третиране са 0,25 процената трипсина и пасиране.

Да би се елиминисало ометање самог лека на раст ПЦ12 ћелија, изведен је експеримент токсичности. Укратко, ПЦ12 ћелије (3к104 ћелије/мл) су засејане у 96- плоче са 100 µл/бунарићу и инкубиране на 37˚Ц преко ноћи. Након одбацивања супернатанта, 200 µл комплетног ДМЕМ-а је додато у празну групу, док су ћелије у интервентним групама третиране ПхГ у различитим дозама (5, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 и 200 µг/ мл). Након инкубације ћелија на 37°Ц током 48 х, 20 µл МТТ раствора (Сигма-Алдрицх; Мерцк КГаА) је додато у сваки бунар. После инкубације од 4 х, супернатант је одбачен и додато је 150 µл диметилсулфоксида по бунарчићу, након чега је уследило мешање током 10 мин. Вредности оптичке густине (ОД) на 490 нм детектоване су коришћењем ЕЛИСА читача плоча.

Повреда ПЦ12 ћелија изазвана 1‑42. 1-42 пептид купљен од Биосс Биотецх (Пекинг, Кина) растворен је у води (100 µг/мл). Након тога, смеша је инкубирана на 37˚Ц током 4 дана и чувана на 4˚Ц пре употребе.

ПЦ12 ћелије су засејане у 96-плоче са бунарчићима (3кл04 ћелије у 100 µл по бунарчићу). Након култивације током 24 х ради адхеренције, додато је 50 µл А 1-42 у различитим коначним концентрацијама (0, 0,25, 0,5, 1, 1,5 или 2 µМ) раствореног у ДМЕМ-у без серума, а затим инкубација 24, 48, 72 или 96 х. Вијабилност ћелија је процењена МТТ тестом. Оптимална концентрација А 1-42 била је 0,5 за µМ.

ПЦ12 ћелије (3кл04 ћелије по бунарчићу) третиране су различитим дозама ПхГс (0, 0.5, 5, 25 или 50 µг/мл) у присуству 0,5 µМ А 1-42 током 24 х. Вијабилност ћелија је процењена МТТ тестом.

Повреда ПЦ12 ћелија изазвана Х2О2. ПЦ12 ћелије су посејане у 96-плоче са бунарчићима (3кл04 ћелије у 100 µл по бунарчићу). Након култивисања током 24 х ради пријањања, додато је 100 µл Х2О2 у различитим коначним концентрацијама (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 и 500 µМ) раствореног у ДМЕМ са или без ПБС (0,01 мол/л). након чега следи инкубација од 24 х. Вијабилност ћелија је процењена МТТ тестом. Оптимална концентрација Х2О2 и растварач су одређени да би се успоставио ин витро модел АД.

ПЦ12 ћелије (3кл04 ћелије по бунарчићу) третиране су различитим дозама ПхГс (0, 0,5, 5, 25 и 50 µМ). После култивисања током 24 х ради адхеренције, ПЦ12 ћелије су третиране са 100 µл Х2О2 раствореног у ДМЕМ са ПБС у присуству ПхГс током 24 х. Вијабилност ћелија је процењена МТТ тестом.

Тест ослобађања лактат дехидрогеназе (ЛДХ). Повреда ћелије је процењена мерењем активности ЛДХ у супернатанту ПЦ12 ћелија коришћењем ЛДХ комплета према протоколу произвођача (кат. бр. 20150604; Нањинг Јианцхенг Биоенгинееринг Институте, Нањинг, Кина). Укратко, двоструко дестилована Х2О, 0,2 µмол/мл пирогрожђане киселине, матриксни пуфер и пуфер коензим И додани су у низу 48 х након третмана леком. После инкубације на 37˚Ц током 15 мин, додат је 2,4‑динитро‑фенилхидразин. Након тога, 250 ул 0,4 М раствора НаОХ је додато у сваки бунар. Супернатант је сакупљен након инкубације од 30 мин на собној температури. Апсорбанца на 450 нм је затим мерена читачем микроплоче.

Мерење малондиалдехида (МДА). МДА је мерен у супернатанту ПЦ12 ћелија коришћењем комерцијалног комплета (кат. бр. 20150604; Нањинг Јианцхенг Биоенгинееринг Институте) у складу са протоколом произвођача Укратко, дехидрирани алкохол и други реагенси су додавани редом, након чега је уследила инкубација у воденом купатилу. на 95˚Ц 40 мин. Смеша је центрифугирана на 1,006 кг и 25˚Ц током 10 мин након хлађења. Супернатант је затим коришћен за одређивање садржаја МДА. Апсорбанца је накнадно мерена читачем микроплоче на 532 нм.

Процена заштитних ефеката ехинакозида и актеозида против АД ин витро. ПЦ12 ћелије су засејане у густини од 3кл04 ћелије/бунарићу у 96-плоче са бунарчићима (100 µл/бунарићу). Ћелије су инкубиране са лековима укључујући ехинакозид (кат. бр. 111670-200503; Национални институти за контролу хране и лекова, Пекинг, Кина) и ацетонид (кат. бр. 111530-200505; Национални институти за контролу хране и лекова ) у различитим концентрацијама (0,5, 25 и 50 µг/мл). Након тога, ћелије су третиране са А 1-42 или Х2О2 током 24 х, а виталност ћелија је мерена МТТ тестом.

Статистичка анализа. Вредности су изражене као средња вредност ± стандардна девијација. За међугрупна поређења коришћен је студентов т-тест. Статистичке анализе су обављене коришћењем СПСС 18.0 (СПСС, Инц., Чикаго, ИЛ, САД). П<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Резултати

Квантификација ПхГс из Х. Цистанцхес. УВ спектриПхГсекстраховани као и стандардна решења одехинакозидиактеозидсу снимљени, а резултати су показали да су УВ спектри конзистентни (слика 1). УВ спектрофотометрија

показало је да је садржај ПхГ био 87,6 одсто . ХПЛЦ резултати су показали да је садржај ехинакозида 37,7 и актеозида 17,8 одсто (слика 2).

Одређивање идеалне концентрације ПхГ. У поређењу са празном групом, ПхГ при 75, 100, 125, 150, 175 и 200 µг/мл је имао значајан инхибиторни ефекат на ПЦ12 ћелије (П<0.05), while="" phg="" at="" 5,="" 25="" and="" 50="" µg/ml="" showed="" low="" toxicity="" on="" pc12="" cells,="" and="" the="" cell="" viability="" was="">80 одсто (слика 3). Тако су ПхГ у концентрацији од 5, 25 и 50 µг/мл коришћени за третирање ПЦ12 ћелија у наредним експериментима због тога што нису утицали на виталност ћелија.

Повреда ПЦ12 ћелија изазвана 1‑42. У поређењу са оним у контролној групи, виталност ћелија у групи са повредама 0.5 µМ А 1-42 била је 63 процента (П<0.05). the="" cell="" viability="" was="" decreased="" by="" aβ1-42="" in="" a="" concentration-dependent="" manner,="" and="" the="" viability="" was=""><50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups="" (fig.="" 4).="" thus,="" treatment="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" in="" vitro="" ad="">

Такође је одређена активност ПЦ12 ћелија третираних са 0.5 µМ А 1-42 у присуству безбедних доза ПхГс (5, 25 и 50 µг/мл) током 24 х. У поређењу са групом модела (П<0.01), phgs="" showed="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" rescued="" by="" phgs="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="">

Повреда ПЦ12 ћелија изазвана Х2О2. Вијабилност ПЦ12 ћелија третираних са 25 µМ Х2О2 раствореним у ДМЕМ са ПБС била је 56,43 процента. Вијабилност ПЦ12 ћелија третираних са 200 µМ Х2О2 раствореним у ДМЕМ без ПБС-а била је 71,64 процената (Табела И). Тако су ПЦ12 ћелије третиране са 25 µМ Х2О2 раствореним у ДМЕМ са ПБС изабране као оптимални услов за успостављање АД модела.

У поређењу са контролном групом, виталност ћелија у групи модела била је 48,8 процената (П<0.05). compared="" with="" the="" model="" group,="" phgs="" had="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" dose-dependently="" increased="">

ПхГс, а виталност ПЦ12 ћелија третираних ПхГс у концентрацијама од 5, 25 и 50 µг/мл била је 54, 57 и 64 процента, респективно (Табела ИИ).

ПхГс инхибирају ослобађање ЛДХ изазвано повредама од стране ПЦ12 ћелија. У поређењу са контролном групом, повећан је садржај ЛДХ у супернатанту повређених ПЦ12 ћелија, који су ПхГ инхибирали на начин зависан од концентрације. Овај резултат је показао да ПхГ имају значајан неуропротективни ефекат на ПЦ12 ћелије (слика 6).

Табела И. Вијабилност ћелије (проценти) после третмана Х2О2.

Табела ИИ. Вијабилност ћелија након мешања лека.

инхибирани ПхГс на начин који зависи од концентрације. Овај резултат је показао да ПхГ имају значајан неуропротективни ефекат на ПЦ12 ћелије (слика 7).

ПхГ и његове компоненте ехинакозид и актеозид спасавају одрживост повређених ПЦ12 ћелија. У поређењу са моделном групом, третман са актеозидом је значајно повећао одрживост А 1-42-повређених ПЦ12 ћелија на начин који зависи од дозе. ПхГс и ехинакозид такође значајно повећавају виталност А 1-42-повређених ПЦ12 ћелија при свим тестираним концентрацијама (слика 8А).

**P<0.05, vs.="" model="" group.="" aβ,="" â-amyloid="" peptide;="" phgs,="" phenylethanoid="" glycosides;="" ech,="" echinacoside;="" as,="">

У поређењу са моделном групом, актеозид је значајно повећао виталност ПЦ12 ћелија третираних са Х2О2. ПхГс такође повећавају виталност ПЦ12 ћелија третираних са Х2О2, док ефекат није био значајан при концентрацијама од 5 и 25 µг/мл (слика 8Б). Поред тога, ехинакозид је повећао виталност ћелија на 25 µг/мл.

У закључку, актеозид, ПхГс и ехинакозид су испољили значајне неуропротективне ефекте на ПЦ12 ћелије подвргнуте повреди са А 1-42 или Х2О2.

Дискусија

Оксидативни стрес је главни механизам који лежи у основи неуротоксичности посредоване А код АД (11-13). Стога, циљање оксидативног стреса може представљати приступ за лечење АД. У овој студији, успешно је успостављен ин витро модел АД који се састоји од А 1-42- и Х2О2-индуковане повреде ПЦ12 ћелија. Резултати МТТ, ЛДХ и МДА тестова показали су да ПхГ повећавају виталност ћелија и смањују ослобађање ЛДХ и МДА од стране ПЦ12 ћелија подвргнутих повреди. Може се закључити да ПхГ имају значајне неуропротективне ефекте на ПЦ12 ћелије.

Да би се смањили ефекти самих ПхГ на раст ПЦ12 ћелија и спречила абнормална пролиферација, безбедна доза ПхГс је одређена скрининг тестом. Резултати су показали да су ПхГ при 75, 100, 125, 150, 175 и 200 µг/мл имали значајан инхибиторни ефекат на ПЦ12 ћелије (П<0.05,><0.01), while="" cell="" viability="" remained="">80 процената при концентрацијама од 5, 25 и 50 µг/мл. Дакле, ПхГс у концентрацији од 5, 25 и 50 µг/мл су безбедни за ПЦ12 ћелије.

На повреду од А {{0}} утицали су одређени фактори, укључујући растварач, време инкубације и квалитет производа. У овој студији, А 1-42 пептид је растворен у води (100 µг/мл) и инкубиран на 37˚Ц током 4 дана у ЦО2 инкубатору пре употребе. ПЦ12 ћелије су третиране са А 1-42 у концентрацијама од 0,5, 1, 1,5 и 2 µМ. Резултати су показали да је виталност ћелије смањена са повећањем А 1-42, а виталност је била<50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups.="" thus,="" treatment="" of="" pc12="" cells="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" ad="" model.="" aβ25-35="" has="" been="" commonly="" used="" to="" establish="" ad="" models="" due="" to="" its="" low="" cost="" and="" simple="" operation="" (27-29).="" the="" neurotoxicity="" of="" aβ1-42="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" aβ25-35,="" and="" aβ1-42="" is,="" therefore,="" the="" optimal="" aβ="" fragment="" for="" establishing="" an="" ad="" model="">

Х2О2 је оксидант и прекомерна Х2О2 може изазвати оксидативно оштећење и индуковати ћелијску апоптозу (30). У овој студији, ПЦ12 ћелије су третиране са 25-500 µМ Х2О2 раствореним у ДМЕМ са или без ПБС. Резултати су показали да Х2О2 растворен у ДМЕМ-у без ПБС-а изазива абнормалну пролиферацију ПЦ12 ћелија. Стога је третман ПЦ12 ћелија са 25 µМ Х2О2 раствореним у ДМЕМ са ПБС био оптималан услов за успостављање АД модела. 1-42-индукована повреда била је већа од повреде изазване Х2О2- због лоше стабилности Х2О2 и ефеката растварача.

Када је ћелија оштећена, цурење ЛДХ у медијум културе је значајно повећано. Познато је да РОС изазива производњу МДА. Садржај МДА и ЛДХ, дакле, одражава количину оксидативног оштећења. У овој студији, активност ЛДХ и МДА изазвана оштећењем је смањена са повећањем доза ПхГс. Ови резултати су показали да ПхГ има значајан неуропротективни ефекат на ПЦ12 ћелије. МТТ тест је показао да ПхГс показују неуропротективни ефекат зависан од дозе на ПЦ12 ћелије.

У закључку, ин витро модел АД који се састоји од А 1-42- и Х2О2-индуковане повреде ПЦ12 ћелија успешно је успостављен. Третман са ПхГс повећао је виталност ћелија и смањио ослобађање ЛДХ и МДА од стране ПЦ12 ћелија третираних са А 1-42 или Х2О2. ПхГ су имали значајан неуропротективни ефекат на А 1-42- или Х2О2-индуковане повреде ћелија.

Референце

1. Ку М, Зхоу З, Ксу С, Цхен Ц, Иу З и Ванг Д: Прекомерна експресија морталина смањује неуротоксичност изазвану бета-амилоидом у ћелијама СХ-СИ5И. Браин Рес 1368: 336-345, 2011.

2. Узун С, Козумплик О, и Фолнеговић-Смалл В: Алцхајмерова деменција: тренутни преглед података. Цоллегиум антропологицум 35: 1333-1337, 2011.

3. Броокмеиер Р, Јохнсон Е, Зиеглер-Грахам К, и Арригхи ХМ: Предвиђање глобалног оптерећења Алцхајмерове болести. Алцхајмерова болест и деменција 3: 186-191, 2007.

4. Цастеллани РЈ, Ролстон РК и Смитх МА: Алцхајмерова болест. Дисеасе-а-монтх 56: 484-546, 2010.

5. Матсон МП: Путеви ка и далеко од Алцхајмерове болести. Натуре 430: 631-639, 2004.

6. Гоурас ГК, Тсаи Ј, Наслунд Ј, ет ал: Интранеуронска акумулација А 42 у људском мозгу. Амерички часопис за патологију 156: 15-20, 2000.

7. Схен Ц, Цхен И, Лиу Х, ет ал: Водоник пероксид подстиче производњу А кроз ЈНК зависну активацију -секретазе. Јоурнал оф Биологицал Цхемистри 283: 17721-17730, 2008.

8. Схих ПХ и Ву ЦХ, Иех ЦТ и Иен ГЦ: Заштитни ефекти антоцијанина против оштећења изазваних амилоидним пептидима у Неуро-2А ћелијама. Часопис за пољопривредну и прехрамбену хемију 59: 1683-1689, 2011.

9. Фигуеиредо ЦП, Бицца МА, Латини А, Предигер Р, Медеирос Р и Цаликто ЈБ: Фолна киселина плус -токоферол ублажава неуротоксичност изазвану амилоидом- - кроз модулацију активности митохондријалних комплекса. Часопис за Алцхајмерову болест: ЈАД 24: 61-75, 2010.

10. Думонт М, Лин МТ и Беал МФ: Терапијске стратегије усмерене на митохондрије и антиоксидансе за Алцхајмерову болест. Часопис за Алцхајмерову болест: ЈАД 20: С633, 2010.

11. Соннен ЈА, Бреитнер ЈЦ, Ловелл МА, Маркесбери ВР, Куинн ЈФ и Монтине ТЈ: Оштећење мозга посредовано слободним радикалима код Алцхајмерове болести и њених трансгених модела миша. Слободна радикална биологија и медицина 45: 219-230, 2008.

12. Лин МТ и Беал МФ: Митохондријална дисфункција и оксидативни стрес код неуродегенеративних болести. Натуре 443: 787-795, 2006.

13. Трусхина Е и МцМурраи Ц: Оксидативни стрес и митохондријална дисфункција у неуродегенеративним болестима. Неуросциенце 145: 1233-1248, 2007.

14. Хуанг СХ, Лин ЦМ и Цхианг БХ: Заштитни ефекти екстракта Ангелица Синенсис на неуротоксичност изазвану амилоидним пептидом. Фитомедицина 15: 710-721, 2008.

15. Бурханс ВЦ и Хеинтз НХ: Ћелијски циклус је редокс циклус: повезивање фазно специфичних циљева са судбином ћелије. Слободна радикална биологија и медицина 47: 1282-1293, 2009.

16. Ксуе ХИ, Гао ГЗ, Лин КИ, Јин Љ и Ксу ИП: Заштитни ефекти аукубина на апоптозу изазвану ХО у ПЦ12 ћелијама. Фитотерапија

18. Лиу, Фк Ванг, Ксв Луо Л, и Ксин Х, На Б и Ванг Ксф: Ефекти гликозида цистанцхеа на учење и памћење код Алцхајмерове болести изазване бета-амилоидним пептидом код мишева и њен могући механизам. Кинески фармаколошки билтен 22: 595, 2006.

19. Бао Б, Танг Кс, Тиан Х, Тонг И, Ву В и Хонг И: Антиоксидативна активност екстраката из пустињске живе Цистанцхе тубулоса (Сцхренк) Р. Вригхт Схангхаи Ј Традит Цхин Мед 44: 68-71, 2010. .

20. Јианг И, Ли С, Ванг И, Цхен Кс и Ту П: Диференцијација Херба Цистанцхес према отиску прста са течном хроматографијом високих перформанси-диодним низом детекције-масеном спектрометријом. Часопис за хроматографију А 1216: 2156-2162, 2009.