Идентификација гена сата повезаних са хипертензијом у бубрезима код спонтано хипертензивних пацова
Feb 20, 2022
ПОЗАДИНАПостоји дневна варијација у флуктуацији крвног притиска код хипертензије, а абнормалност флуктуације крвног притиска се сматра независним фактором ризика за оштећење органа укључујући кардиоваскуларне компликације. У овој студији, покушали смо да идентификујемо молекуле одговорне за формирање циркадијалног ритма крвног притиска под контроломбубрегабиолошки сат код хипертензије.
МЕТОДЕ Анализа ДНК микромрежа је извршена убубрезиод 5-недељних пацова са спонтаном хипертензијом (СХРс)/Изм, пацова СХР склоних можданом удару (СХРСП)/Изм и Вистар Киото (ВКИ)/Изм пацова. Да би се откриле варијације, мишје тубуларне епителне ћелије (ТЦМК-1) су стимулисане дексаметазоном. Урадили смо имунобојење и Вестерн блот анализу убубрежнимедулла офбубрегаод 5-недељних пацова ВКИ и СХР.
РЕЗУЛТАТИЕкстраховали смо 1.032 гена помоћу Е-бока, везујуће секвенце за БМАЛ1 и ЦЛОЦК користећи анализу обогаћивања скупа гена. У анализи микромрежа, идентификовали смо 12 гена који су повећани више од 2-пута убубрезиСХРс и СХРСП у поређењу са ВКИ пацовима. У периодичној регресионој анализи, фосфорибозил пирофосфат амидотрансфераза (Ппат) и крхка Кс ментална ретардација, аутозомни хомолог 1 (Фкр1) су показали циркадијални ритам. Имуноцитохемија је открила ППАТ-позитивност у језгрима и цитоплазми у тубулима и ФКСР1-позитивност у цитоплазми ТЦМК-1. У 5-недељни стари ВКИ пацов и СХРбубрезиППАТ је био локализован у језгру и цитоплазми проксималних и дисталних тубула, а ФКСР1 је био локализован у цитоплазми проксималних и дисталних тубула.
ЗАКЉУЧЦИППАТ и ФКСР1 су кључни молекули у контроли циркадијалног ритма крвног притиска од странебубрегакод хипертензије.
Кључне речи:крвни притисак;; хипертензија; бубрег; нефротубулус; спонтано хипертензивни пацов
Различити биолошки феномени, укључујући циклус спавања, откуцаје срца и крвни притисак, имају циркадијални ритам. За циркадијални ритам откривено је присуство биолошког сата, затим је утврђено да циркадијални ритам постоји у свим живим организмима од архебактерија до људи. 1
Супрахијазматично језгро (СЦН), за које се сматра да функционише као централни сат, је центар који врши аутономну осцилацију циркадијалног ритма. Поред тога, унутрашњи сатови присутни у периферним органима контролишу се централним сатовима и означавају одговарајући ритам за сваки орган. 2 Централни сат контролише периферне сатове преко нервних и хуморалних фактора. СЦН се састоји од великог броја неурона који осцилирају аутономно, када су ове ћелије изоловане и дисперговане код пацова и мишева, показале су циркадијалне ритмове са малим разликама у њиховој фреквенцији покретања и експресији гена. Дакле, појединачни неурони у СЦН су ћелије сата са сопственим циркадијалним осцилаторима. 3
Недавно су разјашњени молекуларни механизми који леже у основи ритма биолошких сатова. Биолошки сат се састоји од главне петље у којој мозак и мишићи арнт-лике 1 (БМАЛ1), циркадијални локомоторни излазни циклуси капут (ЦЛОЦК), Период (ПЕР) и Цриптохром (ЦРИ) раде као основни протеини. ЦЛОЦК и БМАЛ1 формирају димер који делује као фактор транскрипције и везује се за Е-бок секвенцу (ЦАЦГТГ). 4 Циљни гени укључују друге гене сата, као што су Пер и Цри. Генерисани ПЕР и ЦРИ протеини се транслоцирају у језгро и потискују БМАЛ1 и ЦЛОЦК гене. Након тога, ПЕР и ЦРИ се разлажу током времена кроз вишестепену фосфорилацију помоћу казеин киназе (ЦКИε), гликоген синтазе (ГСК-3) и АМП-активиране протеин киназе (АМПК). Тако се потискивање БМАЛ1 и ЦЛОЦК поништава од стране ПЕР и ЦРИ, а промоција експресије гена помоћу ЦЛОЦК и БМАЛ1 поново почиње, и сат се врти. Поред ове главне петље, постоји и подциклус који укључује члан 1 групе Д подфамилије нуклеарних рецептора 1 (НР1Д1), рецептор сирочета повезан са рецептором ретиноичне киселине (РОР), Д-место протеина који везује промотор албумина (ДБП) и Е4 промотор везујући протеин 4 (Е4БП4). НР1Д1 се везује за РРЕ (АГГТЦА) секвенцу и потискује главну петљу путем негативне повратне спреге, док ДБП промовише главну петљу путем позитивне повратне спреге везивањем за Д-бок (ТТАТГТАА) секвенцу. 5 Такође се наводи да протеини који откуцавају циркадијални ритам под контролом биолошког сата достижу приближно 15 процената у сваком ткиву. 6 Биолошки сат је укључен у формирање циркадијанских ритмова различитих физиолошких појава.
Познато је да постоји дневна варијација у флуктуацији крвног притиска код хипертензије, а абнормалност флуктуације крвног притиска се сматра независним фактором ризика за оштећење органа укључујући кардиоваскуларне компликације. 7 Поремећај циркадијанског ритма крвног притиска изазива оштећење органа. Постоји много извештаја о односу између крвног притиска и биолошких сатова, као што су Пер, Цри, Бмал1 и Цлоцк. Смањење крвног притиска, губитак дневне флуктуације крвног притиска и повреда васкуларних ендотелних ћелија пријављени су код Бмал1 нокаут мишева. 8 Мишеви са нокаутирањем сата су пријавили да показују повећано излучивање натријума у урину, смањен крвни притисак, па чак и смањен број откуцаја срца и смањену циркадијалну амплитуду срчаног удара. 9 Дасхти ет ал. известили да гени сата индукују велики део фенотипске варијансе у систолном крвном притиску. 10
Што се тиче доприносабубрезина циркадијалне ритмове, нормалнобубрезиимају веће излучивање електролита и производњу урина током дана него ноћу, а постоји циркадијални ритам у излучивању натријума, калијума и хлора. 11 Код хипертензије се наводи да је неуспех циркадијалног ритма ових функција повезан са кардиоваскуларним компликацијама. 12 Пер1 нокаут мишева показују повећано излучивање натријума и смањен крвни притисак у односу на подјединицубубрежниепителни натријум канал (ЕНаЦ) у сабирном каналубубрега, што указује на присуство биолошког сата убубрега.13 Поред тога, дневне варијације крвног притиска (недиппер статус) примећене су код пацијената са хроничним болестимаобољење бубрега. 14 Дакле, централни сат који се налази у СЦН регулишебубрежнипериферни сат, означавајући оптимално време забубрега.
Пријављено је да спонтано хипертензивни пацов (СХР), генетски модел есенцијалне хипертензије, показује одступање у срчаном ритму и дневне флуктуације крвног притиска, које се појачавају старењем. 15 Раније смо истраживали циркадијални сат надбубрежне жлезде код СХР и Вистар Киото (ВКИ) пацова који су одржавани у 12-сатном циклусу светло-тамни и открили да СХР поседује абнормални циркадијални сат надбубрежне жлезде.
и показују измењен циркадијални ритам сатом контролисаног гена који кодира ензим који ограничава брзину у генези стероида, као и измењен ниво глукокортикоида у серуму. 16 Поред сигнала из централног СЦН сата, познато је да глукокортикоид који се ослобађа из надбубрежне жлезде синхронизује периферни циркадијални сат у другом органу. 17 Стимулација дексаметазоном може репродуковати циркадијалну флуктуацију гена сата и бити применљива за ин витро студије. 18 У овим околностима, могуће је да СХР такође има абнормалне периферне циркадијалне сатове у различитим органима, укључујућибубрегакоји игра кључну улогу у регулацији крвног притиска. Ипак, циркадијални сат убубрегаиз СХР није у потпуности схваћено.
У тренутној студији, покушали смо да идентификујемо одговорне гене сатабубрегау хипертензији користећи СХР и пацове СХР склоних можданом удару (СХРСП), и процењивали улоге сатних гена укључених у регулацију абнормалног циркадијалног ритма крвног притиска.
МЕТОДЕ
Етика и животињеНаше истраживање је било у складу са Водичем за негу и употребу лабораторијских животиња које су објавили Национални институти за здравље САД (публикација НИХ бр. 85-23, 1996). Етичка комисија Медицинског факултета Универзитета Нихон (бр. 11–034) оценила је протоколе истраживања који укључују употребу живих животиња. ВКИ/Изм пацови и СХР/ Изм који се одржавају у удружењу за кооперативно истраживање модела болести купљени су од Јапана СЛЦ (Хамаматсу, Схизуока, Јапан). Систолни крвни притисак је мерен методом таил-цуфф. У овој студији, да бисмо избегли секундарне промене у експресији гена повећањем крвног притиска и идентификовали одговорне гене који утичу на циркадијалне ритмове и на крају повезују хипертензију, изабрали смо прехипертензивне 5-недељне пацове.
Потражите гене помоћу Е-бока у целом геному
Користили смо базу података молекуларних потписа у анализи обогаћивања скупа гена (ГСЕА; Броад Институте, Бостон, МА) да претражимо кластер гена за циљеве хуманог фактора транскрипције и користили смо базу података са највећим бројем гена узводно од почетне тачке А транскрипције гена, у којој је Е-бок (ЦАЦГТГ) био присутан на 2,000 бп узводно.
Анализа ДНК микромрежа
Бубрезису уклоњени са 5-недељних пацова СХР/Изм, СХРСП/Изм и ВКИ/Изм у 12:00. Ресециранибубрегаје хомогенизован са ТаКаРа БиоМасхер стандардом (Такара, Отсу, Схига, Јапан), а укупна РНК је екстрахована. Након хибридизације и скенирања, квантификација је извршена помоћу Агилент Феатуре Ектрацтион 10.7.3.1 (Агилент Тецхнологиес). Експресија гена је упоређена и испитана. Гени чија експресија варира између сојева екстраховани су са прагом већим од 2- пута или мањим од 0.5- пута.
Детекција варијације гена кандидата у ТЦМК-1 ћелијама
Мишје тубуларне епителне ћелије (ТЦМК{{0}}) из Америцан Типе Цултуре Цоллецтион (АТЦЦ, Манассас, ВА) су стимулисане са 0,5 µмол/л дексаметазона као што је описано
претходно. 18 Подлога је промењена у Дулбеков модификовани Еагле медијум без серума. Укупна РНК је екстрахована свака 4 сата након стимулације дексаметазоном, а обиље мРНК Нпм1, Нптк1, Трим46, Плбд1, Плагл1, Бцл6, Фкр1, Тбл1, Хнрнпа3, Ппат и Теф квантификовано је коришћењем ланчане реакције у реалном времену. У истом кораку, изведена је ланчана реакција полимеразе у реалном времену на РНК глицералдехид 3-фосфат дехидрогеназе (ГАПДХ) и коришћена као интерни стандард. Коришћени прајмери наведени су у додатној табели С1 на мрежи. Периодичност флуктуације мРНА након стимулације ТЦМК-1 ћелија дексаметазоном анализирана је мултиваријантном регресионом анализом која је одредила мрежну криву (МЕСС), амплитуду (АМП), фазу (ТЗ1) оптимизацијом косинусне криве користећи метода најмањих квадрата Процене МЕСС, АМП и ТЗ1; њихови интервали поверења од 95 процената израчунати су методом једне случајности.
Имунофлуоресцентно бојење ТЦМК-1 ћелијаТЦМК-1 ћелије су фиксиране са 4 процента параформалдехида. Након испирања физиолошким раствором пуферованим фосфатом, ћелије су инкубиране са зечјим моноклонским анти-ППАТ антителом
(Сигма-Алдрицх) разблажено 250 пута и зечје моноклонско анти-ФКСР1 антитело (Абцам, Цамбридге, УК) разблажено 300 пута на собној температури током 1 сата. 1,000-разблажење Алека Флуор 488 анти-зечјег ИгГ (Инвитроген), као секундарног антитела, реагује у мраку 1 сат.
Имунобојење бубрега од ВКИ пацова и СХРТхебубрежнимедула оф тхебубрегаод 5-недељних пацова ВКИ/ Изм и СХР/Изм су изоловани и уграђени у парафин, и инкубирани са зечјим моноклонским анти-ППАТ антителом разблаженим 250 пута и зечјим моноклонским анти-ФКСР1 антителом разблаженим 200 пута. Хистофине Симпле Стаин Рат МАКС-ПО (МУЛТИ) (Ницхиреи Биосциенцес, Токио, Јапан) је примењен као секундарно антитело. Резови су дехидрирани, очишћени, запечаћени маринолом и посматрани под оптичким микроскопом.
Вестерн блоттинг за ФКСР1 и ППАТ протеине у бубрезима од ВКИ пацова и СХРТхебубрежнимедула је подвргнута екстракцији протеина коришћењем пуфера за радио-имунопреципитацију (Нацалаи Тескуе, Кјото, Јапан). Резови су пребачени на поливинилиден дифлуоридну мембрану са иблотом (Инвитроген) и блокирани са 5% раствором обраног млека током 1 сата. Примењена су примарна антитела, која су била зечје моноклонско анти-ФКСР1 антитело и зечје моноклонско анти-ППАТ антитело. Као секундарно антитело коришћено је козји антизечји ИгГ коњугован са пероксидазом рена (Јацксон ИммунеРесеацх, Вест Грове, ПА). ГАПДХ је коришћен као интерни стандард.
статистичке анализеВредности су приказане као средња вредност ± СЕ. За анализу непарних података коришћен је Студентов т-тест. Такође је коришћена 2-анализа варијансе са Бонферони/Дун поступком као пост-тестом. П вредности од<0.05 were="" considered="" to="" indicate="" statistical="">
РЕЗУЛТАТИ
Крвни притисакСистолни крвни притисак {{0}}недељних пацова ВКИ/Изм, СХР/Изм пацова и СХРСП/Изм пацова био је 116 ± 3,0 (н=6), 121 ± 3,3 (н=6), и 125 ± 3,4 (н=5) мм Хг, респективно. Систолни крвни притисак није се разликовао међу 3 соја у статистички значајној мери.
Потражите гене помоћу Е-бока у промотеру помоћу ГСЕА анализеТражили смо гене који носе Е-бок (ЦАЦГТГ) везујућу секвенцу ЦЛОЦК и БМАЛ1 хетеродимера у целом геному. Као резултат, идентификовано је 1.032 гена који носе Е-кутију између 2,000 бп узводно или низводно од тачке иницијације транскрипције (додатна табела С2 на мрежи).
Поређење експресије гена у бубрезима ВКИ, СХР и СХРСП пацова анализом ДНК микромрежаУпоредили смо експресију гена убубрезиод 5-недељних пацова ВКИ/Изм и СХР/Изм пацова који користе ДНК микромреже. Триста шездесет три гена била су високо експримирана (више од 2- пута) убубрежникортекс СХР/Изм пацова у поређењу са ВКИ/Изм пацовима. Нивои експресије 281 гена убубрегабили су више од 0.5- пута у поређењу са ВКИ/Изм пацовима. Убубрежнимедула СХР/Изм пацова, 284 гена су показала виши ниво експресије и 203 гена
показао ниже нивое експресије у поређењу са ВКИ/Изм пацовима. Убубрежникортекса СХРСП/Изм пацова, нивои експресије 267 гена су били више него 2-пута у поређењу са онима код пацова ВКИ/Изм. Нивои експресије 580 гена били су мањи од 0.5-пута у поређењу са ВКИ/Изм пацовима. Убубрежнимедуле СХРСП/Изм, 639 гена је показало виши ниво експресије, а 251 ген је показао ниже нивое експресије у поређењу са ВКИ/Изм пацовима. Међу 1.032 гена са Е-боксом, ниво експресије 17 генских мРНК био је више него 2- пута убубрежникортекс СХР/Изм пацова у поређењу са
Слика 2. Варијација експресије мРНК кандидата гена у ТЦМК-1 ћелијама након стимулације дексаметазоном. ТЦМК-1 ћелије су стимулисане са 0.5 µмол/л дексаметазона током 2 сата. Укупна РНК је екстрахована свака 4 сата након стимулације дексаметазоном, а обиље мРНК Нпм1, Нптк1, Трим46, Плбд1, Плагл1, Бцл6, Фкр1, Тбл1, Хнрнпа3, Ппат и Теф је процењено ланчаном реакцијом полимеразе у реалном времену. Релативна експресија гена је анализирана поређењем са ГАПДХ мРНА. Подаци су представљени као средња вредност ± СЕМ (н=6).
ВКИ/Изм пацови. Међу ових 17 гена, експресија 4 гена (Бцл6, Нр1д1, Ппат и Теф) је повећана више од 2-пута убубрежникортекса СХРСП/Изм пацова у поређењу са ВКИ/Изм пацовима (Табела 1). Убубрежникортексу СХР/Изм пацова, откривена је експресија мРНК 10 гена, који су смањени за мање од 0.5- пута у поређењу са ВКИ/Изм пацовима; 8 од ових гена (Фкр1, Хнрнпа3, Нпм1, Нптк1, Плагл1,
Плбд1, Тбл1к и Трим46) су такође смањени на мање од 0.5- пута убубрежникортекса СХРСП/Изм пацова (табела 1). Експресија мРНА 10 гена убубрежнимедула код СХР/Изм пацова је повећана више од 2-пута у поређењу са ВКИ/Изм пацовима. Међу ових 10 гена, експресија мРНК Нр1д1 и Теф убубрежнимедула код СХРСП/Изм пацова је повећана више од 2-пута у поређењу са ВКИ/Изм пацовима (Табела 1). Експресија мРНК рецептора трансферина (Тфрц) убубрежнимождина СХР/Изм пацова показала је мање од 0.5- пута у поређењу са пацовима ВКИ/Изм. Међутим, експресија Тфрц мРНА је повећана убубрежнимождина СХРСП/Изм пацова (табела 1).
Индукција мРНК гена сата у нефротубуларним ћелијамаСлика 1 показује варијацију у експресији Пер1, Бмал1, Нр1д1 и Цри1 мРНК након додавања дексаметазона у ТЦМК-1 ћелије. Амплитуде експресије мРНА Пер1, Бмал1 и Нр1д1 показале су максимуме на 28 и 44 сата након 4 сата стимулације дексаметазоном. Амплитуда експресије Цри1 мРНА показала је врхунце на 4, 28 и 44 сата након 4 сата стимулације дексаметазоном. Дакле, стимулација дексаметазоном је изазвала флуктуацију експресије мРНА гена сата у ТЦМК-1 (Слике 1 и 2).
стимулација дексаметазоном. Експресија мРНА Ппат достигла је врхунац 28 сати након стимулације дексаметазоном, а затим се поново повећала 44 сата. Хнрнпа3 је показао пикове на 16, 28 и 44 сата и показао је амплитуде релативно сличне Пер1. Нпм1 је показао максимум након 28 сати, слично као и Пер1. Фкр1 је показао врхунац на 24 и 44 сата (Слика 2). Извршили смо периодичну регресиону анализу да бисмо проценили статистичку значајност ових варијација. Анализа је показала да је варијација експресије Цри1 и Бмал1 мРНА показала значајну (П < 0.05)="" периодичност="" након="" пуњења="" дексаметазоном="" у="" тцмк-1="" ћелијама="" (додатна="" слика="" с1="" и="" табела="" с3="" онлајн).="" резултати="" периодичне="" регресионе="" анализе="" 7="" гена="" приказани="" су="" на="" додатној="" слици="" с2="" и="" табели="" с3="" на="" мрежи.="" анализа="" је="" показала="" да="" су="" фкр1="" и="" ппат="" показали="" значајну="" (п="">< 0,05)="" регресију.="" у="" регресији="" фкр1,="" и="" период="" и="" амплитуда="" су="" показали="" велике="" таласе,="" док="" су="" у="" ппат="" и="" период="" и="" амплитуда="" били="" мали="" и="" показали="" су="" ултрадијански="">
Имунолошко бојење ППАТ и ФКСР1 у нефротубуларним ћелијама и у бубрезима од ВКИ и СХР пацоваППАТ је локализован и у цитоплазми и у језгру. ФКСР1 је локализован само у цитоплазми ТЦМК-1 ћелија (слика 3). ППАТ је обојен и у језгрима и у цитоплазми у проксималним и дисталним тубулима (Слика 4). ФКСР1 је углавном обојен у цитоплазми проксималних и дисталних тубула (Слика 4). Није било очигледних разлика у бојењу или локализацији у бубрезима ВКИ и СХР пацова.
Експресија ФКСР1 и ППАТ протеина у бубрезима ВКИ и СХР пацоваСлика 5 приказује вестерн блотинг протеина ФКСР1 и ППАТ убубрежнимождина од 5-недељних пацова ВКИ и СХР. Обиље ФКСР1 протеина било је убубрежнимедула СХР пацова је била значајно нижа у поређењу са ВКИ пацовима (П < 0.05).="" експресија="" ппат="" протеина="">бубрежнимедула ВКИ и СХР пацова није се разликовала у статистички значајној мери.
ДИСКУСИЈАХипертензија изазива кардиоваскуларне ибубрежникомпликације, као што су хроничнеобољење бубрега(ЦКД). Познато је да пацијенти са ЦКД развијају абнормалности флуктуације крвног притиска, што сугерише дабубрегамогу бити укључени у абнормалне циркадијалне ритмове крвног притиска код хипертензије. 19 У овој студији, ми смо стога имали за циљ да идентификујемо молекуле одговорне за формирање циркадијанског ритма крвног притиска под контролом биолошког сатабубрегакод хипертензије. Добили смо 1,032 кандидата гена који носе Е-бок секвенцу из ГСЕА базе података. Пошто хетеродимер БМАЛ1/ЦЛОЦК везује Е-бок да регулише низводну транскрипцију гена, сматра се да ови гени контролишу биолошки циркадијални сат. Да бисмо идентификовали молекуле који су укључени у циркадијални ритам крвног притиска у бубрезима, свеобухватно смо истражили експресију гена у бубрезима СХР, СХРСП и ВКИ пацова користећи ДНК микромреж. Међу 1.032 гена, одабрали смо транскрипте који су се повећали више од 2-пута или смањили мање од 0.5- пута
у СХРбубрегау односу на оне ВКИ пацова. Затим смо се фокусирали на гене који су показали сличне трендове убубрезиод СХРСП-а, конкретно, Бцл6, Нр1д1, Ппат, Теф, Фкр1, Хнрнпа3, Нпм1, Нптк1, Плагл1, Плбд1, Тбл1к и Трим46. Ових 12 гена који носе Е-бок секвенцу, који су показали више или ниже нивое експресије код оба хипертензивна модела пацова (СХР и СХРСП) у поређењу са нормотензивним ВКИ пацовима, вероватно су повезани са циркадијалним ритмом крвног притиска. Међу овим генима, пријављено је да Нр1д1 који се такође назива вирус реверзне еритробластозе (Рев-ерб) формира подкружницу биолошког сата. 20
Потврђено је да подвргавање култивисаних ћелија оптерећењу дексаметазоном или шоку коњског серума високе концентрације репродукује амплитуду експресије сатног гена ин витро. 21,22 Додавање серума високе концентрације и глукокортикоида се сматра корисним за репродукцију циркадијалног ритма експресије сатног гена у периферним ткивима. 18,23 У овој студији, успели смо да ин виво изазовемо амплитуду гена Пер1, Цри1 и Нр1д1 мРНА сата са оптерећењем дексаметазоном у ћелијама тубуларног епитела миша. Са пуњењем дексаметазоном, Пер1 је повећан на 4, 20–24 и 44 сата након стимулације, Цри1 је повећан на 0–8 и 24–32 сата, а Нр1 д1 је повећан на 0– 4, 16–24 и 40–44 сата. Ове промене су сличне онима описаним у претходним извештајима. 21 Користећи овај систем дексаметазона, идентификовали смо индукцију амплитуда 2 гена: Фкр1 и Ппат. Штавише, имунолошко бојење је показало да је ППАТ експримиран у језгру и цитоплазми тубула, а ФКСР1 је експримиран у цитоплазми тубула. Ови резултати сугеришу да ова 2 молекула контролишубубрежнипериферног сата и потенцијални су кандидати за формирање циркадијалног ритма крвног притиска.
Вестерн блотинг је открио да је експресија протеина ФКСР1 била нижа убубрежнимедуле СХР пацова него код ВКИ пацова. Експресија ППАТ у бубрежној медули ВКИ пацова и СХР није се разликовала у статистички значајној мери. Фкр1 припада истој породици гена као ген 1 фрагилне Кс менталне ретардације (Фмр1), који се сматра узрочним геном крхког Кс синдрома. ФКСР1 је протеин који се везује за РНК који је у интеракцији са ФМР1 и ФКСР2. Претпоставља се да цитоплазма и језгро могу бити реципрочни јер имају сигнале нуклеарне локализације и сигнале нуклеарног извоза. 24 Код људи се показало да аберантна експресија Фкр1 у скелетним мишићима изазива фациоскапулохумералну мишићну дистрофију. 25 У овој студији, експресија Фкр1 је смањена убубрезиСХР и СХРСП пацова и експримиран је у тубуларној цитоплазми мезодермалног порекла, која је иста као и код скелетних мишића, и може бити укључена у пролиферацију и раст тубуларних ћелија. ППАТ формира хомотетрамер у облику крофне и постаје инактивирани хомотетрамер везивањем пуринских нуклеотида да утиче на метаболизам мокраћне киселине. У овој студији, експресија ППАТ је повећана убубрезиСХР и СХРСП пацова, а ППАТ је локализован у цитоплазми и језгру тубуларних ћелија. Пошто мокраћна киселина има јаку васкуларну токсичност и независан је фактор ризика за артериосклерозу. Дакле, аберантна ППАТ функција може бити повезана са патофизиолошким карактеристикама СХР-а.
Ова студија је применила анализе секвенце и експресије и експерименте са култивисаним ћелијама у новом покушају да се сузи молекули који су повезани са регулацијом крвног притиска и који су контролисани биолошким сатом. Штавише, Фкр1 и Ппат контролише биолошки сат и повезани су са регулацијом крвног притиска. Даља истраживања су неопходна да би се измерила и потврдила временска варијација експресије Фкр1 и Ппат гена код пацовабубрега.Очекује се да ће механизми деловања ових молекула бити разјашњени. Контрола ових молекула се сматра метом за биолошки третман абнормалности флуктуације крвног притиска.
На основу налаза ове студије, могућа циркадијална повратна петља убубрегаод СХР је приказан на слици 6. ППАТ и ФКСР1 имају ЕБОКС у коме се БМАЛ1 и ЦЛОЦК везују за промотер, што сугерише да су укључени у формирање циркадијалног ритма у тубулима под контролом гена сата. Сматра се да су укључени у реапсорпцију и излучивање воде и електролита у тубулима и да могу утицати на хипертензију и циркадијални ритам крвног притиска.
Стога су ППАТ и ФКСР1 сматрани молекулима укљученим у формирање циркадијалног ритма крвног притиска убубрега. Што се тиче механизама регулације крвног притиска, ови молекули су водећи кандидати за студије које желе да разјасне механизме који леже у основи формирања циркадијалног ритма крвног притиска.
