Идентификовање улоге екстраката црвеног и белог вина у сузбијању старења коже: ефекти антиоксиданата на понашање фибробласта

Контактирајтеoscar.xiao@wecistanche.comза више информација

Апстрактан:Дермални фибробласти су главни актери у лучењу многих протеина, укључујући колаген, чувајући функцију коже. Слободни радикали су укључени у старење коже и оштећења која укључују различите ћелијске компоненте. Неравнотежа између количине реактивних врста кисеоника (РОС) и природних антиоксидативних ензима негативно утиче на хомеостазу коже. Природна једињења су се недавно појавила као потенцијално средство против старења у регенерацији ткива. У овом раду је процењена антиоксидативна активност белих и црвених вина, с обзиром на њихову вероватну употребу, као сировине, за формулацију козметичких производа са својствима против старења. Проучавали смо методу која би омогућила уклањање алкохолне фракције вина и одредили њихов састав ЛЦ-МС анализом. Затим смо тестирали могуће цитотоксичне ефекте црвених и белих вина на фибробласте помоћу 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолија (МТТ) ) и њихову антиоксидативну активност тестом активности каталазе у условима стреса. Коначно, проценили смо њихов потенцијал против старења путем колориметријског теста -галактозидазе. Наши резултати су показали да екстракти вина показују изузетну антиоксидативну и анти-агинг активност, посебно на ћелијама изложеним стресном догађају. Ова својства могу указивати на њихову могућу примену као козметички производи за регенерацију коже.

Кључне речи:пролиферација ћелија; антиоксиданси; старење ћелија; биоактивни молекули; старење коже; оксидативни стрес

Кликните овде да бисте сазнали више

1. Представљање

Кожа је најобимнији орган тела и има вишеструке функције, штитећи основна ткива од хемијских и механичких увреда, УВ зрачења, слободних радикала и инфекција. Има улогу у терморегулацији, има ендокрине и биохемијске функције и орган је примене и/или апсорпције ксенобиотика (лекова, отрова, козметике)[1-3]. У дермису, еластинска влакна и колагена влакна обезбеђују одговарајућу еластичност коже. Старост, хормони и штетно дејство ултраљубичастог зрачења могу смањити дебљину и еластичност дермиса, што резултира борама и губитком тонуса коже[4,5]. Већ је познато да старење коже угрожава баријерну функцију коже, што резултира сувим изгледом и подложношћу агресорима из околине [6]. Реактивне врсте кисеоника (РОС), које настају губитком електрона током аеробног метаболизма или након излагања факторима животне средине, су нестабилне врсте способне да оштете различите биомолекуле [7,8]. Да би се супротставили њиховом дејству, природна антиоксидативна одбрана у телу је у стању да задржи РОС унутар физиолошки прихватљивих нивоа. Чини се, у ствари, да РОС, ако је присутан у контролисаним количинама, такође има физиолошко дејство, функционишући као сигнални молекули између ћелија [9,10].Чистанче Џингис канОва неравнотежа између РОС и антиоксидативних ензима, као што су каталаза, глутатион редуктаза и супероксид дисмутаза, узрокује оштећење протеина, липида и ДНК [11], негативно ометајући интрацелуларне сигналне путеве кератиноцита и фибробласта и мењајући експресију ММП. (матрикс металопротеиназе), проколаген и проинфламаторни цитокини [12,13]. Фенолна једињења као што су ресвератрол, хидрокситиросол и епигалокатехин-3-галат, присутна у поврћу, воћу и дериватима, главни су одбрамбени молекули против гљивица, бактерија и вируса [14]. Благотворни ефекти полифенола—— широко присутних у вину—привукли су значајну пажњу у фармацеутској и козметичкој индустрији последњих година[15,16]. Конзумација полифенола може имати заштитно дејство код акутних и хроничних болести, као иу регулацији метаболизма и пролиферације ћелија [17]. Развој јединствене ефикасне процедуре за екстракцију и карактеризацију фенолних једињења има многа ограничења, углавном због структурне разноликости фенолних једињења и њихове интеракције са другим ћелијским компонентама[18,19]. Савремене технике зелене екстракције и масена спектрометрија високе резолуције (ЛЦ-ЕСИ-ЛТК-Орбитрап-МС) представљају обећавајуће приступе за управљање овим биоактивним молекулима [20]. Стога смо проучавали јефтину, флексибилну, робусну и ефикасну методу која би омогућила уклањање алкохолне фракције вина, употребљиве као козметички производи. Бројни здравствени ефекти везани за конзумацију вина су одавно познати, а посебно висок садржај антиоксидативних полифенолних једињења чини га корисним у лечењу болести са високим оксидативним стресом[21,22] Локална примена антиоксиданата може да подржи антиоксидативни систем коже против оксидативног стреса и може да је заштити од дуготрајног фото-старења [23,24]. У том контексту, у овом раду смо имали за циљ да проценимо антиоксидативне ефекте екстраката црног и белог вина у ћелијама изложеним јаком стресном догађају, како бисмо се супротставили старењу ћелија, сугеришући њихово могуће укључивање у различите локалне формулације са анти-агингом. својства, за третман зреле и оштећене коже.

Цистанцхе може против старења

2. Материјал и методе

Црвена и бела вина коришћена у овој студији била су Буио, са деноминацијом контролисаног порекла, добијена од грожђа Царигнано дел Сулцис, произведених у Цантина Меса, Сардегна, и Гиунцо, произведена од исте Цантина Меса, добијене од грожђа Верментино.

За ин витро експерименте, коришћени су ин-лине фибробласти људске коже (ХФФ1) (АТЦЦ, Манассас, ВА, УСА) на пасусу 5. Ћелије су узгајане у присуству базалног медијума за раст, састављеног од Дулбековог модификованог Еаглеовог медијума (ДМЕМ) (Лифе Тецхнологиес Гранд Исланд, НИ, САД) са додатком 10 процента феталног говеђег серума (ФБС) (Лифе Тецхнологиес , Гранд Исланд, НИ, САД), 200 мМ Л-глутамина (Еуроцлоне, Милано, Италија) и 200 У/мЛ пеницилина—0,1 мг/мЛ стрептомицина (Еуроцлоне, Милано, Италија). Ћелије су узгајане у термостатским инкубаторима на 37 степени и 5 процената (в/в) ЦО2. 2.1. Припрема винских екстраката: сушара у спреју

Током почетних корака истраживања проучавали смо методу за уклањање алкохолне фракције вина, токсичне за ћелије. За процедуру сушења коришћена је мини машина за сушење распршивањем Б{{0}} (БУЦХИИталиа срл, Цорнаредо, Италија). У почетку, аликвот од 100 мЛ вина је сушен на улазној и излазној температури (азот), респективно, од 25 и 70 степени; проток је постављен на 15 процената. Након тога, порцији од 100 мЛ вина је додато 0,2 г ксантан гуме и минимална запремина воде неопходна за растворљивост гуме. Улазна и излазна температура (азота) су биле 135 и 70 степени, респективно; брзина протока хране је постављена на 12 процената.

2.2. Припрема винских екстраката: Ротавапор

Испарили смо тачно 500г и измерили црвена и бела вина Буцхи Ротавапор卵Р-10 (БУЦХИ Италиа срл, Цорнаредо, Италија) у боцама од 500мЛ, са температуром од 55 степени, брзином ротације бочице једнака 5, и условима вакуума једнака 60 ммХг. У почетку су 2 узорка вина донета потпуно сува. Затим смо их подвргли контролисаном испаравању, са дефинисаним временом од 20 мин, да бисмо уклонили алкохолну фракцију.

2.3.ХПЛЦ анализа

Анализа течном хроматографијом-масеном спектрометријом (ЛЦ-МС) је спроведена према Д'Урсо ет ал. （2020） 【25】 са малим модификацијама. Укратко, 5 μЛ црног и белог вина пре и после ротационог испаравања у коначној концентрацији од 1 мг/мЛ (у Хо) је убризгано у систем течне хроматографије који се састоји од кватернарног Аццела 600 пумпа и Аццела аутосамплер, повезан са линеарним Трап-Орбитрап хибридним масеним спектрометром (ЛТК-Орбитрап КСЛ, Тхермо Фисхер Сциентифиц, Бремен, Немачка) са електроспреј јонизацијом (ЕСИ). Хроматографско одвајање је спроведено на Ц18 Моон колони (100 × 2,0 мм, величина честица 5 ум; Пхеноменек), користећи 0,1 процента мравље киселине (растварач А) и 0,1 процента мравље киселине (растварач Б) Х2О и ЦХСЦН као елуентне фазе. Следећи бинарни градијент је примењен на 200 μЛ/мин∶ 0-35 мин,5 до 95 процената (Б) и 35-40 мин, изократских 95 процената (Б ЕСИ параметри извора су следећи: Капиларски напон {{ 25}} В; напон цевног сочива-176.47; температура капилара 280 степени; Плашт и проток помоћног гаса (Н2),15 и 5; Свееп гас 0; Напон распршивања 5. МС спектри су добијени аквизицијом пуног опсега покривајући м/з180-1400. За студије фрагментације, изведен је експеримент скенирања зависан од података, одабиром прекурсора јона који одговарају најинтензивнијим пиковима у ЛЦ-МС анализи. Ксцалибур софтвер верзија 2.1 је коришћен за контролу инструмента, прикупљање података и анализу података.

2.4. Испитивање одрживости МТТ

Да би се проценио њихов могући цитотоксични ефекат, екстракти црвеног и белог вина су тестирани на ХФФл у различитим концентрацијама (100,200,300,400 и 500мг/мЛ) од укупно 24 до 72х, коришћењем колориметријског теста 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил)-2.5-дифенилтетразолијум (МТТ) (Сигма-Алдрицх, Саинт Лоуис, МО, САД). Виталне ћелије су успеле да редукују ово једињење, производећи формазан који се може квантификовати спектрофотометром на 570 нм. ХФФ1 је засејан у концентрацији од 5000 ћелија/бунарићу у 96-плоче са бунарима. Ћелије које су коришћене као нетретирана контрола су узгајане у једином основном медијуму за узгој. На крају периода инкубације, медијум који садржи екстракте је уклоњен и 10 μЛ МТТТ у коначној концентрацији од 0,65 мг/мЛ је додато у сваки бунар и инкубирано 2 сата.цистанцхе продужење животаПосле инкубације, формазан је растворен у ДМСО и апсорбанција је детектована спектрофотометријским очитавањем на 570 нм (Акрибис Сциентифиц, Цоммон Фарм, Фрог Лн, Кнутсфорд ВА16 ОЈГ, Велика Британија). Вијабилност култивисаних ћелија у присуству различитих екстраката израчуната је као проценат виталности ћелија у поређењу са нетретираном контролом: (ОД570 третиране ћелије)×100/(ОД570 контрола).

(1)

2.5. Антиоксидативна активност

Антиоксидативна активност винских екстраката је процењена испитивањем активности каталазе, ензима способног да разгради водоник пероксид у води и кисеонику. Коришћени колориметријски тест (Цаталасе Ассаи Кит) (Сигма-Алдрицх, Саинт Лоуис, МО, САД) омогућава процену активности овог ензима у третираним ћелијама спектрофотометријским очитавањем. Ћелије су индуковане на старење 1 х третманом са 100 μМ водоник пероксида (Х2О2) и потом култивисане у присуству екстраката у различитим концентрацијама (10, 200 300, 400 и 500 мг/мЛ) за 24,48 , и 72 ч. Ћелије које су коришћене као позитивна контрола оксидативног стреса су узгајане у базалном медијуму за узгој након излагања Х2. Ћелије коришћене као контрола узгајане су само у базалном медијуму за узгој, без претходног излагања Х2О2. На крају времена инкубације, узорци, и третирани и контролни, инкубирани су са реагенсима присутним у комплету на собној температури током 15 минута да би се проценио развој боје, а апсорбанција сваког од њих је мерена спектрофотометријским очитавањем на 520 нм (Акрибис Сциентифиц, Цоммон Фарм, Фрог Лн, Кнутсфорд ВА16 ОЈГ, Велика Британија). Активност каталазе је израчуната на основу броја микромола присутних у сваком узорку и упоређена са активношћу нетретиране контроле.

2.6. - Тест старења галактозидазе

Колориметријски тест -галактозидазе (Целл Сигналинг, МА, САД) је коришћен за идентификацију старења ћелија у култури. ХФФ1 је узгајан у 24-плочама са бунарима, у присуству екстракта белог и црног вина, у концентрацији од 500 мг/мЛ, укупно 72 сата. Ћелије су претходно индуковане на старење 1 х третманом са 100 уМ водоник пероксида (Х-О2) На крају времена инкубације, медијум који садржи пероксиде је уклоњен, а свеж медијум који садржи кондициониране концентрате је додат ћелијама. Ћелије које су коришћене као нетретирана контрола су култивисане само у присуству медијума за узгој, без претходног излагања Х2О2. Уместо тога, ћелије претходно третиране пероксидима коришћене су као позитивна контрола старења, узгајане у нормалном медијуму за раст. После 72 х третмана са екстрактима, све ћелије су фиксиране и инкубиране са бојом за посматрање под светлосним микроскопом. 2.7.Статистичка анализа

Статистичка анализа је обављена коришћењем Статистицал Пацкаге фор тхе Социал Сциенцес версион 13 Софтваре (СПССИНц, Цхицаго, ИЛ, УСА).цистанцхе нзЕксперименти су изведени 2 пута са 3 техничке реплике за сваки третман. Дистрибуције сваке групне варијансе су процењене Крускал-Волисовим збиром ранга и Вилцокон-овим тестом рангирања, уз претпоставку п-вредности<0.05 as="" statistically="">

3. Резултати

3.1. Екстракција вина помоћу Ротавапор-а побољшава квалитет екстракције Одржавајући фенолне профиле вина

Први покушај добијања винског екстракта изведен је помоћу сушаре за распршивање, што је била брза и једноставна техника погодна за уклањање алкохолне фракције из вина. У сваком случају, добијени екстракт није био погодан за наш обим, па се сматрало једноставним и јефтинијим испаравањем у вакууму да би се добио узорак за биолошку и хемијску анализу. Почевши од 500 г вина и радећи на 55 степени, након 20 минута добијено је 262 г екстракта.

Да би се открило било какво пропадање полифенола садржаних у вину током фазе испаравања, узорци пре и после третмана су подвргнути анализи течном хроматографијом. На сликама 1 и 2 приказани су ЛЦ-ЕСИ-ЛТК-Орбитрап МС профили црних и белих вина пре и после испаравања. Прикупљање података је обављено у режиму негативне јонизације; било је познато да је режим негативне јонизације селективнији и омогућава да се добије већа осетљивост за фенолна једињења. У узорцима црног вина идентификована су 33 фенолна једињења, а у узорцима белог вина 26 једињења (табеле 1 и 2). Отисак прста је показао присуство фенолних киселина, катехина и сродних проантоцијанидина, стилбена и флавоноидних гликозида у узорцима. Профили црног вина пре и после испаравања открили су незнатне квантитативне разлике (слика 1). Као што се и очекивало, хроматограми црног вина су били гушћи у поређењу са хроматограмима белог вина, што значи да црно вино садржи више полифенола него бело. (слика 2). Са квалитативне тачке гледишта, сирови узорци и одговарајући екстракт вина били су еквивалентни.

3.2. Екстракти вина побољшавају виталност ћелија и антиоксидативни одговор

МИТ тест је показао нетоксичност екстракта вина за све тестиране концентрације (слика 3) и време излагања, одржавајући виталност ћелија у поређењу са контролним нетретираним ћелијама. Само за веће концентрације (400 и 500 мг/мЛ екстракта белог и 500 мг/мЛ екстракта црног вина), ћелије су показале значајно смањену виталност ћелија после 24 х (панел А) и 48 х (панел Б), у поређењу са контролишу нетретиране ћелије. Ћелије третиране различитим екстрактима такође су показале бољу антиоксидативну активност, стимулишући активност каталазе у разградњи Х-О2 у кисеонику и води, штитећи ћелије од оштећења изазваних оксидативним стресом (Слика 4). Побољшање антиоксидативне активности у третираним ћелијама, у поређењу са контролама, било је видљиво већ након 24 х третмана, посебно за веће концентрације (500 мг/мЛ) (Слика 4А), достижући максимум у 48 х, статистички значајно за веће концентрације ( Слика 4Б), а затим се стабилизовао након 72 х (Слика 4Ц).

3.3. Екстракти вина спречавају старење ћелија, упркос изложености јаком стресном догађају

Слика 5 приказује активност -галактозидазе у различитим условима узгоја. Ћелије култивисане у присуству два екстракта (белог и црвеног при 500 мг/мЛ) показале су јасно смањење броја плавих позитивних ћелија и, према томе, старење, у поређењу са нетретираним контролним ћелијама култивисаним у присуству једине медијум за узгој (Цтрл) и ћелије изложене Х2О2 без екстраката (Цтрл Х2О2).

4. Дискусија

Полифеноли су најзаступљенији биоактивни молекули у вину, који се у последње време интересују и у области козметичке примене [26]. Полифеноли су група једињења широко распрострањених у биљкама, веома различита са структурне тачке гледишта, али одговорна за органолептичка и нутритивна својства хране и биљака [14]. Такође имају позитиван ефекат, штитећи од рака, кардиоваскуларних болести, дијабетеса, остеопорозе и неуродегенеративних болести [27-29]. Други аутори су раније описали њихова својства да се супротставе оксидативном стресу и запаљењу [30]. Конкретно, добро познати превентивни ефекат атеросклерозе зависи од антиоксидативне активности ЛДЛ холестерола, чија би оксидација довела до хватања белих крвних зрнаца праћеног формирањем атероматозног плака [31,32]. У том контексту, вино се недавно показало као један од најбољих начина за превенцију цревних инфекција, показујући антивирусну и антибактеријску активност против грам-позитивних и грам-негативних микроорганизама, као што су салмонелоза, шигелоза, колибацилоза, стафилококи и стрептококи [334] .

Ресвератрол се сматра једним од најефикаснијих антиоксиданата присутних у вину, који штити кожу од слободних радикала и одлаже процес старења инхибицијом активације тирозиназе [35]. Штавише, утиче на производњу гликозаминогликана, који олакшавају и регулишу редистрибуцију воде у дермису, враћајући њену равнотежу и доводећи до трајне хидратације [36]. Поред тога, ресвератрол модулира ћелијске циклусе, апоптозу и старење, показујући заштитне ефекте против оксидативног оштећења ДНК[37]. Гална киселина и сви њени деривати сматрају се најважнијим фенолним киселинама, са високом активношћу уклањања слободних радикала, способним да ометају сигналне путеве ћелије и апоптозу ћелија рака [38]. Флавоноиди и антоцијанини испољавају значајну антиоксидативну активност.величина пениса цистанцхеДобро је познат по својој изразитој способности да смањи пролиферацију ћелија рака и да заштити од кардиоваскуларних болести, гојазности и дијабетеса [39,40]. Поред тога, они су такође укључени у модулацију неуронских функција и превенцију болести повезаних са старењем [41]. Ефикасна екстракција је од критичне важности да би се одржала стабилност фенолних једињења[42]. У том контексту, у овом раду смо анализирали компоненте две врсте винских екстраката добијених у вакууму да би се добио концентрат без алкохола. Да бисмо били сигурни да процес испаравања није утицао на квалитет и квантитет вина, анализирани су хемијски профили узорака црног и белог вина и упоређени са онима након испаравања. Анализа отисака прстију у узорцима показала је присуство великих количина фенолних киселина, катехина и сродних проантоцијанидина, стилбена и флавоноидних гликозида (Слике 1 и 2), корисних као сировина за топикалну козметичку припрему [43]. Њихов потенцијални терапеутски ефекат код многих кожних поремећаја, укључујући инфициране ране и УВ зрачење, вероватно је повезан са синергистичким деловањем ових биоактивних молекула [4]. Ова једињења могу инхибирати ензиме који стварају РОС као што су ксантин оксидаза и никотинамид аденин динуклеотид фосфат(НАДПХ)оксидаза[45,46].

Оксидативни стрес је узрокован вишком реактивних врста кисеоника. РОС, који настаје губитком електрона током аеробног метаболизма или након излагања факторима животне средине, су нестабилне врсте способне да индукују промене у структури и функцији биомолекула [47,48]Природна антиоксидативна одбрана учествују у одржавању РОС у физиолошки одговарајућим нивоима[49,50]. Свака промена у овом процесу може негативно утицати на старење коже[51,52]. У овом контексту, многи природни екстракти су добро познати по својим благотворним ефектима у стимулисању зарастања рана и антиоксидативним реакцијама оштећене коже након излагања стресу околине [53-56]. Сада је познато да старење коже доводи до оштећења баријерне функције, што резултира сувим изгледом и подложношћу агресорима из околине, те стога представља већи ризик за кожне поремећаје [57,58]. Штавише, зарастање рана је сложен и динамичан процес поправке, обнављања интегритета коже и хомеостазе ткива [59]. Локална примена активних антиоксидативних молекула може подржати антиоксидативни систем коже против оксидативног стреса, штитећи је на тај начин од дуготрајног фото-старења [24,60]. Добро је познато да су биоактивни молекули, који делују као антиоксиданси, у стању да се супротставе старењу ћелија и процесима старења. Старење ћелије је стабилна фаза заустављања раста ћелија коју карактерише лучење секреторних фактора повезаних са фенотиповима старења (САСП)[61]. САСП може да модулише суседне ћелије, што доводи до активације сигналних каскада укључених у различите патолошке процесе [62]. Стареће ћелије су повезане са скраћивањем теломера и стабилним проинфламаторним миљеом, промовишући ћелијску трансдиференцијацију [63]. У оквиру овог контекста, недавно смо показали да Миртус Цоммунис Л. показује важна антиоксидативна и регенеративна својства модулацијом плурипотентности матичних ћелија и инфламаторног одговора[64]. Екстракти ове биљке, богати полифенолима, у стању су да заштите ћелије од оксидативног стреса, индукујући експресију реверзне транскриптазе теломеразе (ТЕРТ) и спречавајући прерано старење [65].

Други аутори су раније показали да терапеутске интервенције према старим ћелијама могу да поврате здравље спречавањем хроничне упале и изазивањем поправке рана[66]. Без обзира на то, други аутори су такође открили да кверцетин, флавоноиди и гална киселина могу да спрече повреде изазване директном активношћу уклањања слободних радикала, подржавајући системе детоксикације ћелија, као што су супероксид дисмутаза, каталаза и глутатион пероксидаза [67]. Каталаза је један од најважнијих ензима укључених у детоксикацију РОС-а, чија дисрегулација доводи до многих дегенеративних болести повезаних са узрастом[68,69].цистанцхе прахДобро је познато да је недостатак каталазе повезан са убрзаном дијабетичком повредом бубрега кроз пероксизомалну дисфункцију [70], чиме утиче на биолошке процесе, укључујући пролиферацију ћелија, диференцијацију, миграцију и апоптозу [71]. У овом раду показујемо да екстракти црног и белог вина, у различитим концентрацијама, могу да се супротставе старењу ћелија изазваном оксидативним стресом, модулишући активност каталазе, главног ензима укљученог у регулацију оксидативног стреса (Слика 4) и -галактозидаза (слика 5). Наши резултати показују да су екстракти вина у стању да се супротставе акумулацији РОС-а, повећавајући активност каталазе након третмана Х-О2, чиме се спречавају хронична обољења коже и смањује број старачких ћелија. Узети заједно, наши налази сугеришу да ови екстракти вина, добијени вакуумским испаравањем, могу стога представљати занимљиву сировину за формулацију нових козметичких производа за спречавање старења коже. Даље ин витро и ин виво студије такође на појединачним једињењима могу бити од помоћи за превођење ових резултата у будуће примене за регенерацију ткива.

5. Закључци

Старење коже је динамичан и мултифакторски процес изазван излагањем УВ зрачењу и повезаним стварањем реактивних врста кисеоника. Једина позната одбрана против фотостарења су филтери за сунце и антиоксиданси, посебно у комбинацији, за смањење и неутрализацију производње слободних радикала. У овом раду пажњу смо усмерили на антиоксидативни потенцијал винских екстраката, чији флавоноиди могу да спрече старење, посебно када се примењују на ћелије изложене изразитом стресном догађају. Захваљујући новој процедури екстракције, уклонили смо алкохолну фракцију без квалитативне промене флавоноидних антиоксидативних компоненти. Са економске тачке гледишта, јасно је да је вино скупље од неколико нуспроизвода. Познато је да козметичка индустрија користи и неколико сировина скупљих од вина. Екстракти црвеног и белог вина стога могу представљати интересантну сировину за формулацију нових козметичких производа за спречавање старења коже и побољшање регенерације ткива.

Овај чланак је преузет из Антиокидантс 2021, 10, 227. хттпс://дои.орг/10.3390/антиок10020227 хттпс://ввв.мдпи.цом/јоурнал/антиокидантс