Ин виво администрација конзорцијума цревних бактерија реплицира метаботипове уролитина А и Б у моделу пацова који не производи уролитинⅡ

Резултати

Анализа специфичности и осетљивости пројектованих прајмера и сонде за Еллагибактер и Ентероклостер

Специфичност прајмера и сонде Еллагибацтер и Ентероцлостер потврђена је постављањем њихових секвенци у овај програм за поравнање секвенци ПробеМатцх.31 Резултати су приказаниу табелама 1С и 2С.† Након тога, специфичност прајмера и сонде је верификована кПЦР коришћењем оптимизованих услова реакције описаних у одељку Материјали и методе. Репрезентативне врсте бактерија из породица Еггертхелацеае и Лацхноспирацеае са највећом сличношћу са Еллагибацтером и Ентероцлостером у секвенци гена 16С рРНА тестиране су поред других блиско сродних врста које се често откривају у људском цреву (Табеле 1С и 2С†).Сл. 2 приказује графиконе појачања који одговарају стандардним квантификационим кривама.

Кликните за лечење опстипације

ЦТ вредности су уцртане у односу на концентрацију бактерија (Цо) као лог 10 геномских еквивалената/реакција (6,25 × 10-6 нг, за хаплоидни геном). Нагиб криве линеарне регресије, израчунат коришћењем геномске ДНК, био је −3,78, а вредност Р2 била је већа од 0,99. Што се тиче ове осетљивости кПЦР система, било је потребно 1,5 еквивалената генома као минимум за позитивну реакцију коришћењем ТакМан режима. ЦТ вредности добијене калибрационом кривом Е. исоуролитхинифациенс и Е. болтед кретале су се у распону од 15,5±0,7 до 37,8±0,7, док за остале тестиране сојеве није откривено појачање ДНК.

Квантификација Еллагибактера и Ентероклостера у узорцима фекалија пацова извршена је овом методом (кПЦР), узимајући у обзир средњу вредност за три понављања. Резултати су изражени као лог 10 бактерија по г фецеса и упоређени са вредностима релативне заступљености добијеним секвенцирањем 16С рРНА. Приметили смо позитивну корелацију између резултата добијених обе методе у Еллагибацтер (р=0.660, п < 0.001) и Ентероцлостер (р=0.459, п< 0.001) (data not shown).

Утицај орално примењених бактеријских конзорцијума на ин виво производњу уролитина

Уро анализа у фецесу је показала да у почетку (Т{{0}}), пацови нису производили Урос након узимања ЕА праха (сл. 3А–Ц). Међутим, након давања бактеријског конзорцијума А (слика 3А ) и Б (слика 3Б), пацови су постали способни да производе Урос. Током прве три недеље, када су пацови из група А и Б уносили само ЕА прах, концентрација Уро (опсег:0–1,43 µг г− 1) и њихов претходник ЕА (опсег: 0,07–4,54 µг г-1) у фецесу је био низак. Међутим, од 21. дана, када је потрошња ораха почела као другог извора ЕА, дошло је до веома значајног повећања фекалне ЕА (сл. 3А–Ц) и производње Уро у групама А (слика 3А) и Б (слика 3Б). ).

Штавише, уочене су разлике у Уро профилу између група А и Б. У групи А, фекални Уро-Ц, Уро-М6, Уро-М7 и коначни метаболит Уро-А су били доминантни. Насупрот томе, у групи Б, три коначна Уроса (Уро-А, УроБ и ИсоУро-А) су била присутна, док су међупродукти били оскудни. Међутим, виша фекална концентрација недавно описаног Уро-Г је откривена у групи Б него у групи А. Осим тога, концентрација Уро-Б је била нижа од концентрације Уро-А и ИсоУро-А у групи Б. Даље, Уро-А и ИсоУро-А, али не и Уро-Б, произведен је код свих пацова групе Б (слика 3Б). Када су ораси додавани у исхрану контролних пацова (група Ц) 21. дана, примећена је и већа концентрација ЕА у фецесу. него пре конзумирања ораха, где је концентрација фекалног ЕА била веома ниска (слика 3Ц). Међутим, ни унос ЕА праха нити потрошња ораха нису подстакли производњу Уроса у цревима контролних пацова (тј. без бактеријских конзорцијума).

Интестинална колонизација орално примењених бактерија У почетку, пре него што су пацови група А и Б почели да конзумирају бактеријске конзорцијуме, Гордонибацтер или Еллагибацтер су били испод границе детекције у узорцима фекалија када је извршена анализа метагеномског секвенцирања помоћу МиСек-Иллумина платформе (Слика 3Д-Ф ). Када је коришћен кПЦР,Ниво Гордонибацтер код пацова је био низак (<5.8 log bacteria per g faeces), and Ellagibacter levels were under the limit of detection (data not shown). In contrast, Enterocloster was detected using the MiSeq-Illumina and qPCR in the faeces of rats from all groups (A, B, and C) at the baseline (Fig. 3D–F). 

Релативна заступљеност (средња вредност ± СД) ентероклостера у групама А, Б и Ц је {{0}}.03 ± 0.02, {{10 }}.04 ± 0.06 и 0.13 ± 0.17%, респективно, али без значајних разлика (п=0.570). Примена бактеријских конзорцијума А и Б је резултирала појавом и постепеним повећањем Гордонибацтер и Еллагибацтер у фецесу одговарајуће групе А и Б (сл. 3Д и Е). Штавише, нивои фекалног ентероклостера су се повећавали током студије у групама А и Б (Слика 3Д и Е).

Међутим, ЛЕфСе анализа је показала оскудне разлике у другим бактеријским групама црева када су подаци о метагеномском секвенцирању група А и Б били у поређењу са онима из контролне групе (слике 4А и Б). Занимљиво је да је у групама А примећено смањење рода Стрептоцоццус и породице Стрептоцоццацеае. и Б у поређењу са контролном групом (сл. 4А и Б). Пет дана након престанка оралне примене бактеријских конзорцијума (датум завршетка студије), у групи Б је откривено смањење количине Еллагибацтер анд Ентероцлостер, што је такође резултирало значајним смањењем производње Уро (Слике 3Б и Е). У групи А је такође примећено смањење количине Гордонибацтер али не Ентероцлостер (слика 3А), што је резултирало смањењем концентрације Уро, али је било мање изражено него у групи Б (сл. 3Д и Е). У контролној групи, Еллагибацтер је био испод границе детекције током студије, а Ентероцлостер и Гордонибацтер су остали на веома ниским нивоима (Слика 3Ф).

Студија токсичности орално примењених цревних бактерија

Истражени су потенцијални нежељени ефекти гутања бактеријских конзорцијума. Нису примећени нежељени ефекти на раст, повећање телесне тежине, унос хране и виталне органе после 4 недеље оралне примене гаважом бактеријских конзорцијума код пацова из група А и Б у поређењу са контролном групом. Међутим, мужјаци пацова су добили 107,4 ± 2,4 г, док су женке добиле мањетежине (25,7 ± 5 г) на крају студије без разлике у поређењу са контролном групом. Потрошња хране по кавезу била је 63,1 ± 1,4 г за мужјаке пацова и 33,8 ± 1,8 г за женке пацова. Међутим, унос воде је био 136,1 ± 37,2 г и 76.0 ± 12,6 г, мужјаци и женке пацова по кавезу. .

Уочене су хематолошке разлике између мушкараца и жена у неким варијаблама, као што су дистрибуција еритроцита (РДВ, п {{0}}.005), леукоцити (п=0.005), ширина дистрибуције тромбоцита (ПДВ, п =0.005), и садржај хемоглобина ретикулоцита (ЦХр, п=0.013) (Табела 2). Ипак, нису примећене разлике ни за једну варијаблу између група које су конзумирале бактеријске конзорцијуме (групе А и Б) и контролне групе (група Ц). Биохемијске вредности су такође анализиране, а разлике су откривене само између мушкараца и жена у неким варијаблама као што су индекс креатинина (п < 0,001), фосфор (п=0.007), алкална фосфатаза (АЛП) (п {{13 }}.003), и тироксин (Т4) (п=0.002) (Табела 3). Међутим, нису примећене разлике ни за једну од варијабли између група које су конзумирале бактеријске конзорцијуме (групе А и Б) и контролне групе (група Ц).

Природни биљни лек за ублажавање опстипације-Цистанцхе

Цистанцхе је род паразитских биљака који припада породици Оробанцхацеае. Ове биљке су познате по својим лековитим својствима и вековима се користе у традиционалној кинеској медицини (ТЦМ). Цистанцхе врсте се претежно налазе у сушним и пустињским регионима Кине, Монголије и других делова Централне Азије. Цистанцхе биљке се одликују својим меснатим, жућкастим стабљикама и веома су цењене због својих потенцијалних здравствених користи. У ТЦМ-у се верује да Цистанцхе има тоник и да се обично користи за исхрану бубрега, повећање виталности и подршку сексуалне функције. Такође се користи за решавање проблема старења, умора и општег благостања. Док Цистанцхе има дугу историју употребе у традиционалној медицини, научна истраживања о његовој ефикасности и безбедности су у току и ограничена. Међутим, садржи различита биоактивна једињења као што су фенилетаноидни гликозиди, иридоиди, лигнани и полисахариди, што може допринети његовим лековитим ефектима.

Вецистанцхе'сцистанцхе прах, цистанцхе таблете, цистанцхе капсуле, а други производи се развијају користећипустињацистанцхекао сировине, а све то добро утиче на отклањање опстипације. Специфичан механизам је следећи: Верује се да Цистанцхе има потенцијалне користи за ублажавање опстипације на основу његове традиционалне употребе и одређених једињења која садржи. Док су научна истраживања посебно о ефекту Цистанцхеа на констипацију ограничена, сматра се да има више механизама који могу допринијети његовом потенцијалу за ублажавање опстипације. Лаксативан ефекат:Цистанцхесе дуго користи у традиционалној кинеској медицини као лек за затвор. Верује се да има благи лаксативан ефекат, који може помоћи у промовисању пражњења црева и изазвати затвор. Овај ефекат се може приписати различитим једињењима која се налазе у Цистанцхеу, као што су фенилетаноидни гликозиди и полисахариди. Влажење црева: На основу традиционалне употребе, сматра се да Цистанцхе има хидратантна својства, посебно усмерена на црева. Промовисање хидратације и подмазивања црева може помоћи у омекшавању алата и олакшавању пролаза, чиме се ублажава затвор. Анти-инфламаторни ефекат: Затвор понекад може бити повезан са упалом у дигестивном тракту. Цистанцхе садржи одређена једињења, укључујући фенилетаноидне гликозиде и лигнане, за која се верује да имају антиинфламаторна својства. Смањењем упале у цревима, може помоћи у побољшању редовности пражњења црева и ублажавању затвора.