Иридоидни и ациклични монотерпенски гликозиди, канканозиди Л, М, Н, О и П из Цистанцхе Тубулоса

Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Цистанцхе тубулоса(СЦХРЕНК) Р. ВИГХТ (Оробанцхацеае) је вишегодишња паразитска биљка која расте на корену врста Салвадора или Цалотропис, распрострањена у Северној Африци, Арабији и азијским земљама.1) Стабљике ове биљке (Канка-никујуиоу на јапанском) су традиционално биле користи се за лечење импотенције, стерилитета, лумбага и телесне слабости, као и средство за подстицање циркулације крви.1,2) Током наших студија о биоактивним састојцима из стабљике Цистанцхе тубулоса,3—6) смо претходно известили двадесет четири фенилетаноидна аминогликозида укључујући канканозиде Х1, Х2, И, Ј1, Ј2, К1 и К2 и два ацилирана олигошећера из свежих стабљика Цистанцхетубулоса.5,6) Надаље, главнифенилетаноидни гликозиди,ехинакозид, актеозид,и изоактеозид, откривено је да инхибирају повећање нивоа аспартат аминотрансферазе (сАСТ) и аланин аминотрансферазе (сАЛТ) у повређеној јетри мишева изазвано Д-галактозамином (Д-ГалН)/липополисахаридом у дозама од 25-100 мг/кг пер ос ( по).Структурни захтеви фенилетаноидних гликозида за хепатопротективну активност су такође разјашњени.5) У овој континуираној студији о састојцима у свежим стабљикама Цистанцхетубулоса, даље смо изоловали једанаест иридоидних гликозида укључујући канканозиде Л (1), М (2), и Н (3), седам ацикличних монотерпенских гликозида укључујући канканозиде О (4) и П(5), три фенилпропаноида и четири лигнана. Овај рад се бави изолацијом и разјашњавањем структуре пет нових једињења (1—5).

Свеже стабљике Ц. тубулоса (узгајене у Урумукију, провинција Ксин јианг, Кина) су екстраховане метанолом под рефлуксом да би се добио метанолни екстракт (8,36 процената из свежих стабљика). Из метанолног екстракта, фракције елуиране Х2О- и МеОХ (5,63 процента и 2,73 процента, респективно) добијене су Диаион ХП-20 колонском хроматографијом (Х2О→МеОХ) као што је претходно описано.5) Фракција елуирана са МеОХ је подвргнуто СиО2 и ОДС колонској хроматографији и на крају ХПЛЦ-у да би се добиле каканозиди Л (1, 0.0026 процената), М (2, 0.{{ 27}}001 проценат ), Н (3, 0.00{{60}}7 процената ) , О (4, 0.0{{90}}2{{105}} процената) и П (5, {{118} }.0002 процента ), 6-деоксикаталпол3,7) (6, 0.197 процената), барциозид3,7) (7, 0.0583 процента), глурозид3,7) (8, 0.0443 процента), канканоизид А3) (9, 22,3 мг, 0,0010 процената), мусенозидна киселина3,7) (10, 0,0056 процената), 8- епилоганска киселина3,8) (11, 0,0023 процената), 8-епидеоксилоганска киселина3,7) (12, 0,0004 процената), генипосидна киселина3,7) (13, 0,0040 проценат ), канканозид Е3) (14, 0,0026 процената ), (2Е,6З)-8-б Д-глукопираносилокси-2,6-диметил-2,6-октадиенска киселина3,9) (15, 31,0 мг, 0,0014 процената), (2Е,6Е){{95 }},7-диметил-8-хидроксиоктадиен-1-ил-ОбД-глу цопиранозид10) (16, 0,0082 процента), 8-хидроксигераниол 8-Об-Д-глукопиранозид11 ) (17, 0,0044 процента), бетулалбузид А12) (18, 0,0004 процента), четинари13) ​​(19, 0,0002 процента), сирингин13) (20, 0,0015 процената), синапски алдехид {{128}4)опијан (128)4121 0,0001 процената), ()-пинорезинол ОбД-глукопиранозид4,8,15) (22, 0,0010 процената), еукомин А16) (23, 0,0002 процената), изоеукомин А17) (24, 0,0010 процената)-Д, и аресинол Обси-прстен, глуцопира носиде4,8,18) (25, 0,0044 процента).

Цистанцхе тубулосапобољшати сексуалну функцију

Структуре канканозида Л (1), М (2) и Н (3)

Канканозид Л (1) је добијен као бели прах са негативном оптичком ротацијом ([а]Д 26 45,7 у МеОХ). Његов ИР спектар је показао јаку апсорпциону траку на 3433 и 1{{20}}80 цм 1 што указује на гликозидни део. Бомбардовање брзим атомом (ФАБ)-МС од 1 циклуса у режимима позитивних и негативних јона показало је пикове квазимолекуларних јона при м/з 371 [М На] и 347 [МХ], респективно, а молекулска формула је одређена као Ц15Х24О9 ФАБ-МС мерењем високе резолуције. Кисела хидролиза 1 са 1,0 М хлороводоничном киселином (ХЦл) ослобађа Д-глукозу, која је идентификована ХПЛЦ анализом коришћењем оптичког детектора ротације.3—6) 1Х- и 13Ц-НМР спектри 1 (ЦД3ОД, табеле 1, 2), који су додељени различитим НМР експериментима,19) показали су сигнале као знаке за четири метилена [д 1,43 (1Х, бр дд, Ј око 5, 13 Хз, 4а-Х), 1,73 (1Х, бр дд, Ј око 12, 14 Хз, 6а-Х), 1,85 (1Х, м, 4б-Х), 1,93 (1Х, бр дд, Ј= око 8, 14 Хз, 6б-Х), 3,50 ( 1Х, ддд, Ј 2,4, 12,5, 13,0 Хз, 3а-Х), 3,83 (1Х, бр дд, Ј= око 5, 13 Хз, 3б-Х), 3,78, 4,12 (1Х, оба д, Ј 13,1 Хз, 10-Х2)], два метина [д 2,15 (1Х, дд, Ј 7,2, 8,9 Хз, 9-Х) и 2,23 (1Х, м, 5- Х)], и ацетал група [д 4.81 (1Х, д, Ј 8.9 Хз, 1-Х)] заједно са б-глукопиранозил остатком [д 4.70 (д, Ј 7.9 Хз, 1 - Х)]. Као што је приказано на слици 1, експеримент корелационе спектроскопије 1 Х–1Х (1 Х–1 Х ЦОСИ) на 1 је показао присуство парцијалних структура написаних подебљаним линијама. У експерименту хетеронуклеарне корелације вишеструких веза (ХМБЦ) на 1, уочене су корелације дугог домета између следећих протона и угљеника (1-Х и 3-Ц, 8-Ц; {{ 124}Х и 1-Ц; 7-Х и 8-Ц, 10-Ц; 9-Х и 8-Ц; {{131 }}Х2 и 7-Ц, 8-Ц; 1 -Х и 1-Ц) као што је приказано на слици 1. Затим, релативну стереоструктуру 1 карактерише нуклеарно осетљиво на фазу Експеримент Оверхаусерове спектроскопије побољшања (НОЕСИ осетљив на фазу), који је показао НОЕ корелације између следећих протонских парова (1-Х и 3а Х; 3а-Х и 4а-Х; 3б-Х и 4б-Х; 4б-Х и 5-Х, 9-Х; 5- Х и 6б-Х, 9-Х; 6а-Х и 7-Х; 7-Х и 10-Х2), као што је приказано на Слици 1. 1Х- и 13Ц-НМР спектри 1 су се могли преклапати са онима главног иридоидног састојка 6-деоксикаталпола (6), осим за сигнале на засићени д-лактолни део. Коначно, хидрогенација 6 је дала 1, тако да је стереоструктура канканозида Л разјашњена као 3,4- дихидро{179}}деоксикаталпол (1).

Канканозид М (2) је добијен као бели прах са негативном оптичком ротацијом ([а]Д 26 18,7 у МеОХ). ИР спектар 2 је показао апсорпционе траке на 3433, 1736, 1655 и 1076 цм 1 које се могу приписати хидроксилним, д-лактонским, олефинским и етарским деловима. ФАБ-МС спектар позитивних јона од 2 показао је квазимолекуларни пик јона на м/з 353 [М На] , а молекулска формула је одређена као Ц15Х22О8 ФАБ-МС мерењем високе резолуције позитивних јона. Кисела хидролиза 2 са 1,0 М ХЦл ослобађа Д-глукозу. 1 Х- и 13Ц НМР спектри 2 (ЦД3ОД, табеле 1, 2) показали су сигнале који се могу приписати четири метилена [д 1,66, 2,11 (1Х сваки, оба м, 4-Х2), 2,15, 2,75 (1Х сваки , оба м, 6-Х2), 4,29 (1Х, ддд, Ј 2,8, 8,4, 14,3 Хз, 3б-Х), 4,32, 4,51 (1Х сваки, оба д, Ј 13,1 Хз, 10- Х2), 4,35 (1Х, ддд, Ј 3,1, 6,7, 14,3 Хз, 3а-Х)], два метина [д 2,97 (1Х, м, 5-Х), 3,82 (1Х, бр с, {{ 84}}Х)], олефин [д 5,94 (1Х, м, 7-Х)] и засићена лактонска група (д Ц 174,9) заједно са бД-глукопиранозилном остатком [д 4,32 (1Х, д , Ј 7,9 Хз, 1 -Х)]. Као што је приказано на слици 1, експеримент 1 Х–1Х ЦОЗИ на 2 показао је присуство делимичних структура написаних подебљаним линијама и, у ХМБЦ експерименту, уочене су корелације дугог домета између следећих протонских и угљеничних парова ({{105 }}Х и 1-Ц; 7-Х и 9-Ц; 9-Х и 1-Ц, 8-Ц; {{112} }Х2 и 7-Ц, 8-Ц, 9-Ц; 1 -Х и 10-Ц). Релативну стереоструктуру 2 карактерише НОЕСИ експеримент осетљив на фазу, који је показао корелације НОЕ између следећих протонских парова (3а-Х и 4а-Х; 3б-Х и 4б-Х; 4б-Х и 5- Х; 5-Х и 6б-Х, 9-Х) као што је приказано на слици 1. Дакле, стереоструктура 2 је разјашњена као што је приказано.

Канканозид Н (3) је изолован као бели прах са негативном оптичком ротацијом ([а]Д 25 24,6 у МеОХ). У ФАБ-МС са позитивним јонима од 3, примећен је пик квазимолекуларних јона на м/з 371 [М На]. Молекуларна формула Ц16Х28О8 одређена је ФАБ-МС мерењем високе резолуције. Кисела хидролиза 3 са 1.0 М ХЦл ослобађа Д-глукозу. Подаци 1Х- и 13Ц-НМР (ЦД3ОД, табеле 1, 2) показали су сигнале који се могу приписати метилу [д 1.07 (3Х, д, Ј 7,2 Хз, 10-Х3)] , четири метилена {д 1,37, 1,87 (1Х сваки, оба м, 7-Х2), 1,65, 1,81 (1Х сваки, оба м, 6-Х2), [3,65 (1Х, дд, Ј 9,1 , 9,8 Хз), 3,90 (1Х, дд, Ј 5,9, 9,8 Хз), 11-Х2] и [3,70 (1Х, дд, Ј 3,3, 12,0 Хз), 3,88 (1Х, м), {{ 71}}Х2]}, четири метина [д 1,69 (1Х, м, 4-Х), 1,75 (1Х, м, 9-Х), 2,06 (1Х, м, 8- Х), 2,16 (1Х, м, 5-Х)], и хемиацетална група [д 4,67 (1Х, д, Ј 7,4 Хз, 1-Х)] заједно са бД-глукопиранозилном групом [ д 4,26 (ИХ, д, Ј 7,9 Хз, 1 -Х)]. Иридоидна структура 3 је разјашњена експериментима 1 Х–1 Х ЦОЗИ и ХМБЦ, а релативна стереоструктура је окарактерисана фазно осетљивим НОЕСИ експериментом као што је приказано на слици 1. Сходно томе, стероструктура 3 је разјашњена као што је приказано.

Цистанцхе тубулоса

Структуре канканозида О (4) и П (5)

Канканозиди О (4) и П (5), Ц16Х26О8, такође су добијени као бели прахови са негативним оптичким ротацијама (4: [а]Д 23 26,1; 5: [а]Д 21 32,7 оба у МеОХ). ИР спектри 4 и 5 су показали апсорпционе траке на 3433, 1696, 1647 и 1076 цм 1 за 4 и на 3434, 1701, 1647 и 1{{96} }76 цм 1 за 5, приписује се гликозидним, карбоксилним и олефинским функцијама. Њихови УВ спектри су показали заједнички максимум апсорпције на 217 нм што указује на присуство б-незасићеног дела карбоксилне киселине у оба. Кисела хидролиза 4 и 5 ослобађа Д-глукозу, док ензимском хидролизом са б глукозидазом, 4 и 5 даје (2Е,6Е)-8-хидрокси-2,6-диметил{{39 }},{{40}}октадеценска киселина20) (4а) и (2Е,6Е)-8-хидрокси-3,7- диметил{{ 48}},6-октадеценска киселина21) (5а), респективно. 1Х- и 13Ц-НМР подаци за 4 (ЦД3ОД, табеле 2, 3) показали су сигнале који се могу приписати два метила [д 1,71 (3Х, бр с, 10-Х3), 1,81 (3Х, д, Ј 1,0 Хз , 9-Х3)], три метилена {д 2,19 (2Х, бр т, Ј око 7 Хз, 5-Х2), 2,36 (2Х, м, 4-Х2), [ 4,24 (1Х, дд, Ј 7,6, 12,0 Хз), 4,33 (1Х, дд, Ј 6,2, 12,0 Хз), 8-Х2]}, и два трисупституисана олефина [д 5,41 (1Х, ддд, Ј 1,2, 6,2, 7,6 Хз, 7- Х), 6,75 (1Х, тк, Ј 7,2, 1,0 Хз, 3-Х)] заједно са бД глукопиранозилним делом [д 4,34 (д, Ј 7,8 Хз, 1 -Х)]. Поређењем сигнала угљеника у 13Ц-НМР спектру 4 са онима 4а, примећен је помак гликозилације на позицији 8- (д Ц 4: 65,5; 4а: 59,4). Положај глукозидне везе је такође потврђен ХМБЦ експериментима као што је приказано на слици 2. Као последица тога, стереоструктура 4 је разјашњена као (2Е,6Е)-8-бД-глукопираносилокси-2,{{ 143}}диметил-2,6-октадеценска киселина. С друге стране, 1Х- и 13Ц-НМР подаци за 5 (ЦД3ОД, табеле 2, 3) указују на присуство (2Е,6Е)-8-хидрокси-3,{{158} }диметил-2,6-остатка октадеценске киселине [д 1,70 (3Х, бр с, 10-Х3), 2,14 (3Х, бр с, 9-Х3), 2,24 ( 2Х, м, 4-Х2), 2,27 (2Х, м, 5-Х2), 4,05, 4,20 (по 1Х, оба бр д, Ј око 12 Хз, 8-Х2) , 5,47 (1Х, тк, Ј 7,1, 0,9 Хз, 6-Х), 5,67 (1Х, бр с, 1-Х)] заједно са бД-глукопиранозил делом [д 4,23 (д, Ј 7,7 Хз, 1 -Х)]. Повезаност бД-глукопиранозилног дела у 5 је разјашњена на основу ХМБЦ експеримената као што је приказано на слици 2. Штавише, уочен је типичан померај гликозилације за сигнале на 8- позицији (д Ц 5: 75,6; 5а: 68.8). На основу горе наведених доказа, утврђено је да је стереоструктура 5 (2Е,6Е)-8-бД-глукопираносилокси-3,7-диметил-2,{ {230}}окта диенска киселина.

Ефекти састојака на цитотоксичност изазвану фактором некрозе тумора-а (ТНФ-а) у ћелијама Л929

Познато је да ТНФ-а посредује у разним повредама органа путем индукције ћелијске апоптозе. У случају јетре, биолошки ефекти ТНФ-а су умешани у повреде јетре изазване токсинима јетре, исхемијом/реперфузијом, вирусним хепатитисом и алкохолом.22—24) Стога се ТНФ-а сматра важним циљ откривања антиинфламаторних и хепатопротективних агенаса. На основу горе поменутог концепта, истражили смо заштитне састојке из производа који се природно појављују на ћелијској смрти изазваној ТНФ-а у ћелијама Л929, ТНФ-а-сензитивној ћелијској линији.25) Раније смо известили да неколико састојака из Пипер Цхаба, 26—29) Боесенбергиа ротунда, 30,31) Пуница гранатум, 32) Хелицхрисум аренариум, 33—35) и Сапиндус рарак, 36—38) откривено је да показују инхибиторне ефекте ТНФ-а -индукована цитотоксичност у ћелијама Л929. Пошто су фенилетаноидни састојци Ц. тубулоса (нпр. ехинакозид, актеозид и изоактеозид, итд.) 5 такође инхибирали ову цитотоксичност, даље смо испитали иридоидне, фенилпропаноидне и лигнанске састојке као што је приказано у табели 4. Као резултат, канканозид А (9, инхибиција: 16,3 2.0 процената на 100 мМ), мусаенозидна киселина (10, 44,7 8,7 процената), 8-епилоганска киселина (11, 10,7 0,4 процента), 8-хидроксигераниол 8-Откривено је да ОбД-глукопиранозид (17, 21,3 2,4 одсто) и ( )-пинорезинол ОбД-глукопиранозид (22, 22,3 1,6 одсто) показују значајну активност. Иако су њихове активности биле слабије од активности ехинакозида (ИЦ50 31,1 мМ), актеозида (17,8 мМ) и изоацетеозида (22,7 мМ), главни састојци фенилетаноида.5)

Експериментално

За добијање спектралних и физичких података коришћени су следећи инструменти: специфичне ротације, Хориба СЕПА{0}} дигитални полариметар (л 5 цм); УВ спектри, Схимадзу УВ-1600 спектрометар; ИР спектри, Схимадзу ФТИР-8100 спектрометар; 1 Х- и 13Ц-НМР спектри, ЈЕОЛ ЈНМ-ЕЦА600 (600, 150 МХз) и ЈЕОЛ ЈНМ-ЕЦС400 (400, 100 ХМз) спектрометри са тетраметилсиланом као интерним стандардом; ФАБ-МС и ФАБ-МС високе резолуције, масени спектрометар ЈЕОЛ ЈМС-СКС 102А; ХПЛЦ детектор, Схимадзу РИД-10А индекс преламања, Схимадзу СПД-10А УВ–ВИС и Сходек ОР-2 оптички детектори ротације. ХПЛЦ колона, Цосмосил 5Ц18-МС-ИИ, и пНАП (Нацалаи Тескуе Инц., 250 4,6 мм ид) и (250 20 мм ид) колоне су коришћене у аналитичке и препаративне сврхе, респективно.

За хроматографију су коришћени следећи експериментални услови: хроматографија на колони силика гела нормалне фазе (ЦЦ), силика гел 60Н (Канто Цхемицал Цо., Лтд., 63—210 мрежа, сферни, неутралан); силика гел реверзне фазе ЦЦ, Диаион ХП-20 (Ниппон Ренсуи) и Цхроматорек ОДС ДМ1020Т (Фуји Силисиа Цхемицал, Лтд., 100—200 месх); ТЛЦ нормалне фазе, претходно обложене ТЛЦ плоче са силика гелом 60Ф254 (Мерцк, 0,25 мм); ТЛЦ реверзне фазе, претходно обложене ТЛЦ плоче са силика гелом РП-18 Ф254С (Мерцк, 0,25 мм); ХПТЛЦ реверзне фазе, претходно обложене ТЛЦ плоче са силика гелом РП-18 ВФ254С (Мерцк, 0,25 мм), детекција је постигнута прскањем са 1 проценат Це(СО4)2– 10 процената воденог раствора Х2СО4, након чега је уследило загревање .

Садни материјал

Ова ставка је описана у претходном извештају.

Екстракција и изолација

Свеже стабљике Ц. тубулоса (2,98 кг) су фино исечене и екстраховане три пута метанолом под рефлуксом 3 х. Упаравање растварача под сниженим притиском дало је метанолни екстракт (249,1 г, 8,36 процената). Метанолни екстракт је подвргнут Диаион ХП-20 ЦЦ (5.0 кг, Х2О→МеОХ) да би се добиле Х2О- и МеОХ-елуиране фракције (167,84 г, 5,63 процента и 81,21 г, 2,73 процента, редом). Фракција елуирана МеОХ (61.00 г) је подвргнута силика гелу нормалне фазе ЦЦ [1,8 кг, ЦХЦл3– МеОХ–Х2О (15 : 3 : 0}.4→1{{ 36}} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, в/в/в)→МеОХ] да би се добило седам фракција [Фр. 1 (1,12 г), 2 (9,56 г), 3 (0,89 г), 4 (10,69 г), 5 (8,84 г), 6 (12,52 г) и 7 (4,6{{104}}} г)], као што је претходно описано.5) Фракција 1 (1,12 г) је одвојена силика гелом реверзне фазе ЦЦ [55 г, МеОХ–Х2О (4 0 : 60, в/в)→МеОХ] да би се добило пет фракција [Фр. 1-1 (132,8 мг), 1-2 (267.0 мг), 1-3 (182,8 мг), {{80} (31{{ 156}}.9 мг) и 1-5 (91.4 мг)]. Фракција 1-1 (132,8 мг) је даље пречишћена помоћу ХПЛЦ [Цосмосил 5Ц{{9{{160}}}}МС-ИИ, ЦХ3ЦН–1 проценат воденог АцОХ (1{{166} } : 90, в/в)] за давање канканозида М (2, 2,8 мг, 0.{{203}}{{22{{24{{248 }}}}}}01 проценат ), барциозид (7, 5,2 мг, 0.0002 процента ), синапински алдехид {{1{{295 }}6}}О-бД-глукопиранозид (21, 1,4 мг, {{3{{3{{3{{310}}9}}5}}{{320} }}}.0001 проценат ). Фракција 1-2 (267.{{350}} мг) је даље пречишћена помоћу ХПЛЦ [Цосмосил 5Ц18-МС-ИИ, ЦХ3ЦН–1 проценат воденог АцОХ (7 : 93, в/в)] за давање (2Е,6Е)-3,7-диметил-8-хидроксиоктадиен{{13{{360}}}}ил-О-бД -глукопиранозид (16, 15,8 мг, {{370}.{{406}}007 процената), 8-хидроксигераниол 8-ОбД глукопиранозид (17, 5,2 мг, 0,0002 процента), ( )-пинорезинол ОбД-глукопиранозид (22, 22,0 мг, 0,0010 процената), еукомин А (23, 5,0 мг, 0,0002 процента), исцом (24, 21,3 мг, 0,0010 процената), и ( )-сирингарезинол ОбД-глукопијски ранозид (25, 98,0 мг, 0,0044 процената). Фракција 2 (9,56 г) је одвојена силика гелом реверзне фазе ЦЦ [400 г, МеОХ–Х2О (10 : 90, в/в)→МеОХ→ ацетон] да би се добило пет фракција [Фр. 2-1 (55,9 мг), 2-2 (4,48 г), 2-3 (3,42 г), 2-4 (1,16 г) и 2-5 (31,9 мг) ], као што је претходно описано.5) Фракција 2-2 (500,0 мг) је подвргнута ХПЛЦ [Цосмосил 5Ц18-МС-ИИ, ЦХ3ЦН–1 проценат воденог АцОХ (5 : 95, в/в )] да се добије канканозид Л (1, 6,6 мг, 0,0026 процената) и 6-деоксикаталпол (6, 455,5 мг, 0,182 процената). Фракција 2-3 (1,00 г) је подвргнута ХПЛЦ [Цосмосил 5Ц18-МС-ИИ, ЦХ3ЦН–1 проценат воденог АцОХ (7 : 93, в/в)] да би се добило седам фракција [Фр . 2-3-1 (66,5 мг), 2-3-2 (20,4 мг), 2-3-3 (26,0 мг), 2-3-4 (136,6 мг), 2-3-5 [7 (380,6 мг , 0,0581 процената)], 2-3-6 [глурозид (8, 285,1 мг, 0,0435 процената)] и 2-3-7 (84,9 мг)]. Фракција 2-3-4 (106,6 мг) је даље пречишћена помоћу ХПЛЦ [Цосмосил пНАП, ЦХ3ЦН–1 проценат воденог АцОХ (5 : 95, в/в)] да се добије 6 (68,4 мг, 0,0134 процента) заједно са салидрозидом5. (13,7 мг, 0,0027 процената). Фракција 2-4 (1,16 г) је подвргнута ХПЛЦ [Цосмосил 5Ц18-МС-ИИ, ЦХ3ЦН–1 проценат воденог АцОХ (15 : 85, в/в) и Цосмосил пНАП, ЦХ3ЦН–1 проценат водени АцОХ (10:90 или 15:85, в/в)] да би се добили канканозиди Н (3, 15,6 мг, 0,0007 процената), О (4, 44,1 мг, 0,0020 процената) и П (5, 4,2 мг, 0,0002 процената), 6 (24,0 мг, 0,0011 процената), 8 (17,7 мг, 0,0008 процената), канканоизид А (9, 22,3 мг, 0,0010 процената), 8-епидеоксилоганска киселина (12, 8,1 мг, 0,000 процената), 0,000 процената, канканозид Е (14, 58,1 мг, 0,0026 процената), (2Е,6З)-8-бД-глукопија раносилокси-2,6-диметил-2,6-октадиенска киселина (15, 31,0 мг, 0,0014 процената), 16 (168,6 мг, 0,0075 процената), 17 (94,3 мг, 0,0042 процената), бетулалбузид А (18, 8,1 мг, 0,0004 процената), четинари, 0,3 процената (19,0,02 процената) ), и сирингин (20, 33,9 мг, 0,0015 процената). Фракција 4 (10,69 г) је одвојена силика гелом реверзне фазе ЦЦ [500 г, МеОХ–Х2О (30 : 70, в/в)→МеОХ→ацетон] да би се добиле четири фракције [Фр. 4-1 (878,2 мг), 4-2 (7,06 г), 4-3 (1,57 г) и 4-4 (792,8 мг)], као што је претходно описано.5) фракција 4-1 (500,0 мг) је пречишћена помоћу ХПЛЦ [Цосмосил 5Ц18-МС-ИИ, ЦХ3ЦН–1 проценат воденог АцОХ (10 : 90, в/в)] да би се добила мусенозидна киселина (10, 39,1 мг, 0,0031 процената) и генипосидна киселина (13, 51,2 мг, 0,0040 процената). Фракција 5 (8,84 г) је одвојена помоћу силика гела реверзне фазе ЦЦ [400 г, МеОХ–Х2О (20 : 80→30 : 70, в/в)→МеОХ→ацетон] да би се добило седам фракција [Фр. 5-1 ​​(870,2 мг), 5-2 (478,9 мг), 5-3 (3,72 г), 5-4 (979,9 мг), 5-5 (1,19 г), 5-6 (1,27 г) и 5-7 (130,1 мг)], као што је претходно описано.5) Фракција 5-1 (870,2 мг) је даље пречишћена помоћу ХПЛЦ [Цосмосил пНАП, ЦХ3ЦН –1 проценат воденог АцОХ (5 : 95, в/в)] да се добије 10 (55,3 мг, 0,0025 процената) и 8-епилоганска киселина (11, 51,5 мг, 0,0023 процената).

Канканозид Л (1): Бели прах, [а]Д 26 45,7 (ц 0.48, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц15Х24О9На [М На] 371,1318; Пронађено 371.1309. ИР (КБр, цм1): 3433, 2928, 1080. 1Х-НМР (600 МХз, ЦД3ОД) д: дато у табели 1. 13Ц-НМР (150 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дато у табели 2. Позитивно- јонски ФАБ-МС м/з: 371 [М На]. ФАБ-МС негативних јона м/з: 347 [МХ].

Канканозид М (2): Бели прах, [а]Д 26 18,7 (ц 0.11, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц15Х22О8На [М На] 353,1212; Пронађено 353.1208. ИР (КБр, цм1): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1Х-НМР (600 МХз, ЦД3ОД) д: дато у табели 1. 13Ц-НМР (150 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дато у табели 2. ФАБ-МС позитивних јона м/з: 353 [М На].

Канканозид Н (3): Бели прах, [а]Д 25 24,6 (ц 100, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц16Х28О8На [М На] 371,1682; Пронађено 371.1686. ИР (КБр, цм1): 3415, 2874, 1076, 1028. 1Х-НМР (600 МХз, ЦД3ОД) д: дато у табели 1. 13Ц-НМР (150 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дато у табели 2. ФАБ-МС позитивних јона м/з: 371 [М На].

Канканозид О (4): Бели прах, [а]Д 23 26,1 (ц 2,30, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц16Х26О8На [М На] 369,1525; Пронађено 369.1528. УВ [л мак (лог е), МеОХ, нм]: 217 (4,04). ИР (КБр, цм1): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 1Х-НМР (600 МХз, ЦД3ОД) д: дато у табели 3. 13Ц-НМР (150 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дато у табели 2. ФАБ-МС позитивних јона м/з: 369 [М На].

Канканозид П (5): Бели прах, [а]Д 21 32,7 (ц 0.18, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц16Х26О8На [М На] 369,1525; Пронађено 369.1520. УВ [л мак (лог е), МеОХ, нм]: 217 (4,08). ИР (КБр, цм1): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 1Х-НМР (600 МХз, ЦД3ОД) д: дато у табели 3. 13Ц-НМР (150 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дато у табели 2. ФАБ-МС позитивних јона м/з: 369 [М На].

Кисела хидролиза канканозида Л—П (1—5): раствори 1—5 (сваки 1.0 мг) у 1.0 М ХЦл (1.0 мл) су загреван на 80 степени 3 х. Након хлађења, реакциона смеша је неутрализована са Амберлите ИРА-400 (ОХ облик), а смоле су уклоњене филтрацијом. После уклањања растварача под сниженим притиском, остатак је одвојен са Сеп-Пак Ц18 картриџ колоном (Х20→МеОХ). Х2О-елуирана фракција је подвргнута ХПЛЦ анализи под следећим условима: ХПЛЦ колона, Касеисорб ЛЦ НХ2-60-5, 4,6 мм ид 250 мм (Токио Касеи Цо., Лтд., Токио, Јапан); детекција, оптичка ротација [Сходек ОР-2 (Схова Денко Цо., Лтд., Токио, Јапан); мобилна фаза, ЦХ3ЦН–Х2О (85:15, в/в); споредна брзина 0,8 мл/мин]. Идентификација Д-глукозе присутне у Х2О-елуираним фракцијама од 1—5 извршена је поређењем њиховог времена задржавања и оптичке ротације са оним аутентичног узорка [тР 17,9 мин (позитивно)].

Хидрогенација {{0}}деоксикаталпола (6) Суспензија од 6 (12.0 мг) и 10 процента угљеника паладијума (5.0 мг) у МеОХ (2.0 мл) је мешан на собној температури у атмосфери Х2 током 2 х. Катализатор је одфилтриран, а филтрат је кондензован под сниженим притиском да би се добило 1 (12.0 мг, квант.).

Ензимска хидролиза канканозида О (4) и П (5) са б-глукозидазом У раствор од 4 (8.0 мг) у Х2О (1,5 мл) додата је б-глукозидаза (4,7 мг, из бадема, Ориентал Иеаст Цо., Токио, Јапан), и раствор је мешан на 37 степени током 24 х. Реакција је угашена додатком ЕтОХ (50 мл), смеша је кондензована под сниженим притиском. Остатак је екстрахован са ЕтОАц и испаравањем растварача се добија (2Е,6Е)-8-хидрокси-2,{{20}диметил-2,{{22} }октадеценска киселина20) (4а, 3,9 мг, 92 процента). Сличном процедуром, (2Е,6Е)-8-хидрокси-3,7-диметил-2,6-октадеценска киселина21) (5а, 0,9 мг, 94 процента ) је добијен из канканозида П (5, 1,8 мг).

Метода биолошке анализе Инхибиторни ефекат на цитотоксичност изазвану ТНФ-а у ћелијама Л929 је анализиран методом описаном у претходном раду.5)

Статистике Вредности су изражене као средње вредности СЕМ За статистичку анализу коришћена је једносмерна анализа варијансе (АНОВА) праћена Данетовим тестом. Вредности вероватноће (п) мање од 0.05 сматрају се значајним.

цистанцхе херб