Оса хепцидина/феропортина бубрега контролише реапсорпцију гвожђа и одређује величину бубрежног и системског преоптерећења гвожђем

Контакт: emily.li@wecistanche.com

Горан Мохаммад1, Атхена Матакидоу2, Петер А. Роббинс1 и Самира Лакхал-Литтлетон1

КЉУЧНЕ РЕЧИ:феропортин; хемохроматоза; хепцидин; гвожђе; преоптерећење гвожђем;бубрежнитубуле

Феропортин (ФПН) је једини познати протеин за извоз гвожђа код сисара. Посредује ослобађање гвожђа у циркулацију из дуоденалних ентероцита и ретикулоендотелних макрофага слезине, одговарајућих места апсорпције и рециклаже гвожђа.1,2 ФПН-посредовано ослобађање гвожђа је антагонизовано хормоном хепцидином, такође познатим као хепцидин антимикробни пептид (АМПХАМП). Произведен првенствено у јетри, хепцидин се везује за и индукује интернализацију ФПН-а, чиме ограничава ослобађање гвожђа у циркулацију и његову доступност периферним ткивима.3,4 Дакле, ХАМП/ФПН оса функционише на местима апсорпције и рециклаже како би контролисала системске хомеостаза гвожђа.

Бубрег је место реапсорпције гвожђа. И гвожђе које није везано за трансферин и гвожђе везано за трансферин може да пређе у гломеруларни фифилтрат.5 Огромна већина овог гвожђа се враћа назад у тубуларни епител. Неколико транспортера је укључено у ово поновно преузимање, укључујући мултилигандни мегалин-кубилински рецепторски комплекс, рецептор трансферина 1, транспортер двовалентног метала 1, транспортер цинка ЗИП8 и транспортер цинка ЗИП14.5–10.

Једном убубрежниепитела, гвожђе се поново апсорбује у циркулацију. ФПН је у изобиљу убубрегаи умешан је у реапсорпцију гвожђа.11–14 Међутим, остаје непознато да ли је ФПН бубрега такође подложан регулацији ендогеног ХАМП-а у нормалним физиолошким условима, и ако јесте, да ли је таква регулација важна за системску и/или реналну хомеостазу гвожђа.

Да бисмо одговорили на ова питања, направили смо нови модел миша са индуцибиломбубрежнитубулу-специфично убацивање фпнЦ326И, који кодира протеин ФПНЦ326И отпоран на ХАМП. Поред тога, да бисмо потврдили претходно пријављену улогу ФПН-а у реапсорпцији гвожђа, такође смо генерисали модел миша са индуцибилнимбубрежнитубулу–специфична делеција фпн гена. Наши резултати показују да ендогени ХАМП директно регулише апсорпцију гвожђа посредовану ФПН-ом и да је ова регулација важна за обабубрежнии системска хомеостаза гвожђа, посебно у условима вишка доступности гвожђа.

Ова студија је прва која је користила мишеве који носе ренално-специфичан губитак одзива на ХАМП да би се формално одредиозначајодбубрежниХАМП/ФПН оса. Пружа нове увиде у улогу реапсорпције гвожђа у одређивању степена бубрежног и екстрареналног преоптерећења гвожђем у условима хемохроматозе.

МЕТОДЕ

Мишеви

Све процедуре на животињама биле су у складу са Законом о кућним канцеларијама Уједињеног Краљевства (научне процедуре) из 1986. и одобрене од стране Одбора за етичку проверу Одељења за медицинске науке Универзитета у Оксфорду.

Условни фпнфлфл и фпнЦ326Ифлфл алели су генерисани како је претходно описано.15,16

Мишеви који носе трансген Пак8.ЦреЕРТ2þ били су поклон др Атене Матакидоу, УК Кембриџ институт за истраживање рака, Универзитет у Кембриџу. Ови мишеви су генерисани како је претходно описано.17 Сви мишеви су били на позадини Ц57БЛ/6.

Дијете

Осим ако није другачије наведено, животињама је обезбеђена стандардна исхрана за глодаре која садржи 200 делова на милион (ппм) гвожђа. У експериментима са манипулацијом гвожђем, мишеви су добијали исхрану пуну гвожђа (5000-ппм гвожђе; Теклад ТД.140464) или одговарајућу контролну исхрану (200- ппм гвожђа; Теклад ТД.08713) након одвикавања од 3 месеци.

Квантификација гвожђа и индекси гвожђа 

Нивои гвожђа и феритина у серуму одређивани су коришћењем АБКСПентра система (Хориба Медицал). Вредности хемоглобина су одређене ХемоЦуе Хб 201 Хемоглобин микрокуветама. Нивои еритроферона у серуму су мерени ензимским имуносорбентним тестом (Интринсиц Лифесциенцес). Одређивање укупног елементарног гвожђа у ткивима обављено је индуктивно спрегнутом плазма масеном спектрометријом, као што је претходно описано.15,16,18 Калибрација је постигнута поступком стандардних адиција, где су шиљци од 0 нг/г, 0,5 нг/ г, 1 нг/г, 10 нг/г, 20 нг/г и 100 нг/г гвожђа додато је у репликације одабраног узорка. Екстерни стандард гвожђа (Хигх Пурити Стандардс ИЦП-МС-68-раствор) је разблажен и измерен да би се потврдила валидност калибрације. Родијум је такође додат на сваки слепи узорак, стандард и узорак као унутрашњи стандард у концентрацији од 1 нг/г. За квантификацију гвожђа у урину, урин је сакупљен од мишева током периода од 24 сата и подвргнут индуктивно спрегнутој масеној спектрометрији плазме. Нивои креатинина у истим узорцима мерени су помоћу колориметријског комплета за анализу креатинина (Абцам; аб65340), а вредности гвожђа су нормализоване на концентрацију креатинина.

Имунохистоцхемистри 

Флуоресцентно имунолошко бојење је обављено у деловима ткива фиксираних формалином, у парафинима, коришћењем ФПН антитела (Новус Биологицалс; НБП1-21502) у 1:100 и Про-Хепцидин (АА 39-59) антитела у 1:50 (Антибодиес Онлине; АБИН350367). Специфичности ФПН и хепцидин антитела су потврђене коришћењем Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ животиња и Хамп–/– животиња као негативних контрола, респективно (додатна слика С1). Маркери бубрежног сегмента су идентификовани коришћењем аквапорин-1 антитела у 1:200 (Биотецхне; НБ600- 749), аквапорин-2 антитела у 1:200 (Биотецхне; НБП1-70378), или калбиндин антитело на 1:100 (Абцам; аб82812). Секундарна антитела су била анти-зечји ИгГ Алека Флуор-488 (Абцам; аб150073), антимагарћи ИгГ Ци3 (Абцам; аб6949) и анти-мишји ИгГ Алека568 (Абцам; аб175473). Слајдови су снимљени помоћу микроскопа ФВ1000 Олимпус.

цистанцхе може заштититибубрегафункција

Вестерн блоттинг

Ткива су брзо замрзнута у течном азоту, здробљена, а затим лизирана коришћењем РИПА система пуфера за лизу (Санта Цруз; сц-24948), према упутствима произвођача. Лизати ткива су очишћени центрифугирањем на 15 000г током 10 минута на 4 Ц. Концентрација протеина у лизатима је мерена БЦА тестом протеина (Пиерце; 23225) и нормализована на исту концентрацију за сваку серију. Лизати су затим разблажени у нередукционом Лаеммли натријум додецил сулфатном пуферу за узорке и загревани на 95°Ц током 5 минута. Протеин (30–50 мг) је стављен на Мини-ПРОТЕАН ТГКС гелове (Биорад; 4561096). После електрофорезе, протеин је пребачен на поливинилиден диффлуоридну мембрану коришћењем БиоРад Транслоттер система, а мембране су блокиране сат времена у пуферу за блокирање који је садржао 5 процената говеђег серумског албумина. Мембране су затим обојене преко ноћи на 4 Ц са зечјим поликлоналним анти-мишјим ФПН антителом (НБП1-21502; Новус Биологицалс) на 1:1000 или анти-б-актин антителом коњугованим пероксидазом рена (Протеинтецх; ХРП{{18} }) у 1:5000. Блотови су развијени коришћењем ЕЦЛ приме детекције кита (РПН2232; ВВР Интернатионал). Интензитет сигнала је квантификован помоћу ИмагеЈ, а однос између сигнала ФПН и б-актина је израчунат да би се произвели нормализовани интензитети.

Перлс боја побољшана диаминобензидином (ДАБ).

Делови ткива фиксирани формалином, парафином уграђени су депарафинизовани коришћењем ксилена, а затим рехидрирани у етанолу. Плоче су затим обојене 1 сат са 1 процентом калијум-ферицијанида у 0.1 мол/Л ХЦл пуфера. Активност ендогене пероксидазе је угашена, а затим су плочице обојене ДАБ хромогеним супстратом и контраобојене хематоксилином. Они су визуелизовани помоћу стандардног микроскопа са светлим пољем.

Квантитативна ланчана реакција полимеразе

Експресија гена је мерена коришћењем сонде за испитивање експресије примењених Биосистема ТакМангене за Хамп и бактин гена за одржавање домаћинства (Лифе Тецхнологиес). Вредност граничног циклуса (ЦТ) за ген од интереса је прво нормализована одузимањем ЦТ вредности за б-актин да би се добила ДЦТ вредност. ДЦТ вредности тестних узорака су даље нормализоване на просек ДЦТ вредности за контролне узорке да би се добиле ДДЦТ вредности. Релативни нивои експресије гена су затим израчунати као 2–ДДЦТ.

Статистика

Вредности су приказане као средњи СЕМ. Упарена поређења су обављена коришћењем Студентовог т теста. Вишеструка поређења су направљена коришћењем анализе варијансе. Пост хоц тестови су користили Бонферонијеву корекцију.

Слика 1|Оса хепцидин/феропортина (ФПН) у бубрежним тубулима контролише реапсорпцију гвожђа и важна је за хомеостазу гвожђа у бубрезимакод женки мишева. (а)Репрезентативне слике имунофлуоресцентног бојења за ФПН, аквапорин 1 (АКП1), аквапорин 2 (АКП2) и калбиндин (ЦалД) у бубрезима мишева дивљег типа. Шипке ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. Крајњи панел, шипка ¼ 25 мм, оригинално увећање 60. (б) Вестерн блот за ФПН убубрезиженки и мужјака ФпнЦ326Ифлфл/флфл,Пак8.ЦреЕР Т2 þ мишева и ФпнЦ326И флфл/флфл контрола 1 недељу након третмана тамоксифеном. Квантификација интензитета сигнала је приказана на доњем панелу. (ц) Вестерн блот за ФПН у бубрезима женки и мужјака Фпнфлфл/флфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и Фпнфлфл/флфл контрола 1 недељу након третмана тамоксифеном. Квантификација интензитета сигнала је приказана на доњем панелу. (д) Нивои гвожђа у бубрезима код жена и мушкараца ФпнЦ326И^флфл/^флфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишеви и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контроле 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након третмана тамоксифеном. (е) Репрезентативне слике Перлсовог гвожђа побољшаног диаминобензидином (ДАБ) у кортикалном региону бубрега одговарајућих животиња 3 месеца након индукције тамоксифена. Шипке ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. (ф) Нивои гвожђа у бубрезима код женки и мужјака Фпнфлфл/флфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и Фпнфлфл/флфл контрола 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након индукције тамоксифена. (г) Репрезентативне слике ДАБ-појачане боје Перлс гвожђа у пределу бубрежне коре одговарајућих животиња 3 месеца након индукције тамоксифеном. (наставак)

Слика 1 |(Наставак) Пречке ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. (х) Нивои гвожђа у серуму код женки и мужјака ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контрола 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након третмана тамоксифеном. (и) Нивои гвожђа у серуму код женки и мужјака Фпнфлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и Фпнфлфл/флфл контрола 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након индукције тамоксифеном. Вредности су приказане као средњи СЕМ. *П < 0,05,="" **п="">< 0,01="" и="" ****п="">< 0,0001.="" б-акт,="" б-актин;="" наставак,="" контрола;="" дапи,="" 40="" ,6-диамидино-2-фенилиндол;="" ппм,="" делови="" на="" милион.="" да="" бисте="" оптимизовали="" гледање="" ове="" слике,="" погледајте="" онлајн="" верзију="" овог="" чланка="" на="">

РЕЗУЛТАТИ

Оса хепцидина/ФПН у бубрежним тубулима контролише реапсорпцију гвожђа и важна је за хомеостазу бубрежног гвожђа код женки мишева

Прво смо покушали да утврдимо тачно место експресије ФПН-а убубрега. У том циљу, тестирали смо бубреге миша на ФПН и сегментно специфичне маркере аквапорин 1 (маркер проксималних увијених тубула и танког силазног удова Хенлеиа), аквапорин 2 (маркер сабирних канала и тубула за повезивање) и калбиндин (маркер дисталних увијених тубула и кортикалних спојних и сабирних канала). Открили смо да је ФПН снажно изражен у кортексу, колокализујући се са аквапорином 1 до проксималних увијених тубула. Било је нешто ФПН-а у унутрашњој медули, колокализујући се са аквапорином 2 у медуларне сабирне канале. Није било колокализације ФПН-а са калбиндином (слика 1а; већи панел приказан на додатној слици С2). Ови резултати потврђују да је ФПН најзаступљенији у кортикалном региону унутар проксималних увијених тубула.

Да бисмо утврдили да ли је ренални ФПН регулисан ХАМП-ом, користили смо мишеве који носе Пак8.ЦреЕРТ2þ кноцк-ин трансген, који покреће експресију Цре рекомбиназе изазвану тамоксифеном под контролом упареног бок гена 8 пак8 промотора у проксималним и дисталним тубулима и у сабирни канали.17 Укрштали смо мишеве Пак8.ЦреЕРТ2þ са онима који имају условно убачени флоксирани алел ФпнЦ326И, који кодира ФПН отпоран на хепцидин. Поред тога, и да бисмо потврдили претходно пријављену улогу бубрежног ФПН-а у реапсорпцији гвожђа, укрстили смо Пак8.ЦреЕРТ2 þ мишеве са мишевима који носе Фпнфлфл/флфл алел. Недељу дана након третмана тамоксифеном да би се индуковао трансген Пак8.ЦреЕРТ2, нивои бубрежног ФПН-а су повећани код женки и мужјака ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева у односу на ФпнЦ326Ифлфл/флфл контроле (Слика 1б), што показује да је ФПН подложан регулацији бубрега ендогени ХАМП у нормалним физиолошким условима, и поред тога потврђује ефикасност трансгена Пак8.ЦреЕРТ2þ. Супротно томе, нивои бубрежног ФПН су смањени код женки и мужјака Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2- мишева у односу на Фпнфлфл/флфл контроле, додатно потврђујући ефикасност Пак8.ЦреЕРТ2- трансгена (Слика 1ц). Специфичност овог Пак8.ЦреЕРТ2þ трансгена је такође потврђена присуством делеционог алела (ДФпн) убубрегаали не у јетри или слезини Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2 мишева (додатна слика С2А).

Затим смо кренули да утврдимо да ли бубрежна ХАМП/ФПН оса контролише реапсорпцију гвожђа. У том циљу, измерили смо нивое гвожђа у бубрезима и серуму 1 недељу, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након третмана тамоксифеном. Нашли смо то бубрежно гвожђе

садржај је био нижи код женки ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ него код контролних женки ФпнЦ326Ифлфл/флфл у свим временским тачкама (Слика 1д). Садржај гвожђа у бубрезима код мушкараца није био различит према генотипу (Слика 1д). Перл-ова мрља гвожђа побољшана ДАБ-ом је такође потврдила смањење нивоа гвожђа у проксималним тубулима ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2 женки (слика 1е; већи панел приказан на додатној слици С2). Супротно томе, открили смо да је садржај гвожђа у бубрезима био већи код Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ женки него код Фпнфлфл/флфл контролних женки од 1 месеца надаље (Слика 1ф). Садржај гвожђа у бубрезима код мушкараца није се разликовао према генотипу (Слика 1ф). ДАБ-појачана боја Перлс гвожђа такође је потврдила акумулацију гвожђа у проксималним тубулима Фпнфлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ женки (слика 1г; већи панел приказан на додатној слици С2).

Нивои гвожђа у серуму су пролазно повећани и код мужјака и код женки ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева у односу на ФпнЦ326Ифлфл/флфл контроле у ​​временској тачки 1- (Слика 1х). Супротно томе, нивои гвожђа у серуму су смањени код женки Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ у односу на Фпнфлфл/флфл контролне женке у временској тачки 1-, док су остали упоредиви код мужјака различитих генотипова у свим временским тачкама (Слика 1и ). Враћање нивоа гвожђа у серуму у односу на оне уочене код контролних животиња у доби од 3 месеца не може се приписати обнављању нормалног нивоа бубрежног ФПН-а. Заиста, промене нивоа бубрежног ФПН изазване Пак8.ЦреЕРТ2 и даље су се одржавале 3 месеца након третмана тамоксифеном (додатна слика С2Б и Ц). Смањен садржај гвожђа у бубрезима и повећани нивои гвожђа у серуму код женки ФпнЦ326Ифлфл/флфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ показују да је реапсорпција гвожђа зависна од ФПН-а у проксималним тубулима подложна регулацији ХАМП-а у нормалним физиолошким условима. Повећан садржај гвожђа у бубрезима и смањени нивои гвожђа у серуму код Фпнфлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ женки потврђују претходне налазе да бубрежни ФПН доприноси реапсорпцији гвожђа. Поред тога, у нормалним физиолошким условима, чини се да је контрола реапсорпције гвожђа преко реналне ХАМП/ФПН осе важнија код жена него код мушкараца, барем код соја Ц57БЛ/6.

Цистанцхе може побољшати функцију бубрега

Бубрежна ХАМП/ФПН оса доприноси, али није неопходна за нормалну системску хомеостазу гвожђа у условима нормалне доступности гвожђа.

Затим смо кренули да одредимо допринос бубрежне ХАМП/ФПН осе системској хомеостази гвожђа. Открили смо да су жене ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ имале пролазно повећање серумског феритина (Слика 2а), садржаја гвожђа у јетри (Слика 2б) и садржаја гвожђа у слезини (Слика 2ц) у временској тачки 1- када у поређењу са контролним женкама ФпнЦ326Ифлфл/флфл. Њихови нивои хемоглобина остали су упоредиви са нивоима контрола у свим временским тачкама (Слика 2д). Ниједан од ових параметара се није разликовао између ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мужјака и њихових ФпнЦ326Ифлфл/флфл контрола (Слика 2а–д). Нивои еритроферона нису се разликовали према генотипу (додатна слика 3А). Супротно томе, открили смо да жене Фпнфлфл/ флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ имају ниже нивое феритина у серуму у 1- и 3-месечним временским тачкама (Слика 2е), нижи садржај гвожђа у јетри на 3- и 6-месечне временске тачке (Слика 2ф), и нижи садржај гвожђа у слезини на 1- и 3-месечним временским тачкама (Слика 2г), у поређењу са Фпнфлфл/флфл контролним женкама. Такође су имали пролазно и благо смањење нивоа хемоглобина у временској тачки 3- (Слика 2х). Ниједан од ових параметара се није разликовао између Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мужјака и њихових Фпнфлфл/флфл контрола (Слика 2е–х). Нивои еритроферона такође нису промењени према генотипу (додатна слика 3Б). Заједно, ови подаци показују да, у нормалним физиолошким условима, ренална ХАМП/ФПН оса доприноси системским нивоима гвожђа, али сама по себи није неопходна за одржавање нормалне системске хомеостазе гвожђа.

Слика 2|Оса реналног хепцидина антимикробни пептид/феропортин (ФПН) доприноси, али није од суштинског значаја за нормалну системскухомеостаза гвожђа у условима нормалне доступности гвожђа. (а–д)Системски индекси гвожђа код женки и мушкараца ФпнЦ326Ифлфл/флфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контрола 1 недељу, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након третмана тамоксифеном, укључујући (а) серумски феритин, (б) садржај гвожђа у јетри , (ц) садржај гвожђа у слезини и (д) хемоглобин. (е–х) Системски индекси гвожђа код женки и мужјака Фпнфлфл/флфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и Фпнфлфл/флфл контрола 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након индукције тамоксифеном, укључујући (е) серумски феритин, ( ф) садржај гвожђа у јетри, (г) садржај гвожђа у слезини и (х) хемоглобин. Вредности су приказане као средњи СЕМ. *П < 0.05,="" **п="">< 0.01="" и="" ***п="">< 0,001.="" ппм,="" делови="" на="">

Слика 3|Оса бубрежног хепцидинског антимикробног пептида (ХАМП)/феропортина (ФПН) одређује величину бубрежног и системског преоптерећења гвожђем у условима вишка доступности гвожђа. (а–ф)Екстраренални индекси гвожђа код женки и мушкараца ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контрола обезбеђују или контролну исхрану (200 делова на милион [ппм]) или исхрану пуну гвожђа (5000 ппм) током 3 месеца. (наставак)

Слика 3 |(Наставак) Индекси укључују (а) серумско гвожђе, (б) серумски феритин, (ц) садржај гвожђа у слезини, (д) ​​садржај гвожђа у срцу, (е) садржај гвожђа у плућима и (ф) садржај гвожђа у јетри. (г) Садржај гвожђа у бубрезима код женки и мужјака ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контроле су обезбеђивале или контролну исхрану (200 ппм) илигвожђемдијета (5000 ппм) током 3 месеца. (х, и) Репрезентативне слике диаминобензидином (ДАБ) - побољшане Перлсове мрље гвожђа у јетри и критичном делу бубрега одговарајућих животиња. Шипке ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. (ј) Релативна експресија хамп гена у јетри одговарајућих животиња. Вредности су приказане као средњи СЕМ. *П < 0,05,="" **п="">< 0,01,="" ***п="">< 0,001,="" ****п="">< 0,0001,="" *****п="">< 0,00001="" и="" ******п="">< 0,000001.="" да="" бисте="" оптимизовали="" гледање="" ове="" слике,="" погледајте="" онлајн="" верзију="" овог="" чланка="" на="">

Бубрежна ХАМП/ФПН оса одређује величину бубрежног и системског преоптерећења гвожђем у условима вишка доступности гвожђа 

Затим смо кренули да одредимо улогу бубрежне ХАМП / ФПН осе у подешавању преоптерећења гвожђем. У том смислу, ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ животиње и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контроле су индуковане тамоксифеном, а затим су дате или контролну исхрану, која садржи 200 ппм гвожђа, или исхрану пуну гвожђа, која садржи 5000 ппм и 3 месеци. . Открили смо да је исхрана пуна гвожђа повећала садржај серумског гвожђа, серумског феритина и гвожђа у ткиву код мушкараца и жена оба генотипа. Међутим, ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ животиње су имале већи пораст серумског гвожђа (Слика 3а), серумског феритина (Слика 3б) и садржаја гвожђа у слезини (Слика 3ц), срцу (Слика 3д), плућима (Слика 3е) , и јетра (Слика 3ф) од ФпнЦ326Ифлфл/флфл контрола. Насупрот томе, имали су мањи пораст садржаја гвожђа у бубрезима (Слика 3г). Разлике између генотипова у степену оптерећења гвожђем у проксималним тубулима и у јетри такође су биле очигледне у ДАБ-појачаној боји Перлс гвожђа (Слика 3х и и; већи панели приказани на Додатној слици С4). У складу са већим системским преоптерећењем гвожђем, ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ животиње су такође имале веће повећање експресије гена хемп у јетри у поређењу са контролама ФпнЦ326Ифлфл/флфл (Слика 3ј). Ниво хемоглобина није био под утицајем ни исхране ни генотипа, иу складу са тим, нивои серумског еритроферона су такође остали непромењени (додатна слика 4А и Б). Ови налази показују да, у условима вишка доступности гвожђа, контрола реапсорпције гвожђа преко реналне ХАМП/ФПН осе смањује системско преоптерећење гвожђем док повећава преоптерећење бубрега гвожђем.

Бубрежна ХАМП/ФПН оса одређује образац преоптерећења ткива гвожђем у хемохроматози 

Затим смо кренули да истражимо улогу реналне ХАМП/ФПН осе у контексту наследне хемохроматозе, генетског стања преоптерећења гвожђем узрокованог дефектима у производњи хепцидина или реаговању на хепцидин.19 У том смислу, користили смо мишеве генерисане у. кућа у којој се налази хетерозиготни свеприсутни кноцк-ин алела фпнЦ326И (Фпнвт/Ц326И). Раније смо показали да ови мишеви развијају фенотип преоптерећења гвожђем карактеристичан за наследну хемохроматозу.15,18 Упоредили смо узорак ткивапреоптерећење гвожђемкод ових мишева са оним што је примећено код мишева дивљег типа који су храњени храном богатом гвожђем од одбијања 3 месеца. И мишеви Фпнвт/ Ц326И и мишеви дивљег типа храњени исхраном пуном гвожђа имали су

повећан садржај гвожђа у јетри, срцу и плућима у поређењу са њиховим одговарајућим контролама (Слике 4а и б). Садржај гвожђа у бубрезима код Фпнвт/Ц326И мишева био је нормалан у доби од 3 месеца (слика 4а) и порастао је само за 32 процента у односу на контроле у ​​доби од 6 месеци (допунска слика 5А). Насупрот томе, животиње дивљег типа које су давале исхрану пуну гвожђа имале су 260 процената повећање садржаја гвожђа у бубрезима у поређењу са онима на нормалној исхрани (Слика 4б). Релативне разлике у преоптерећењу гвожђем у бубрезима и јетри између 2 модела такође су биле очигледне у ДАБенханцед Перлс боји гвожђа (Слике 4ц и д; већи панели приказани на Додатној слици С5). Величина екстрареналног преоптерећења гвожђем била је упоредива између 2 модела, док је величина преоптерећења бубрега била знатно већа код животиња дивљег типа које су давале исхрану са гвожђем него код Фпнвт/Ц326И мишева (Слика 4е). ФПН је повећан у кортексу и код Фпнвт / Ц326И мишева и код мишева дивљег типа који су обезбедили исхрану пуну гвожђа (Слика 4ф и г; већи панели су приказани на Додатној слици С5). Ближе испитивање места експресије ФПН-а у проксималним тубулима открило је да се чини да се локализује интрацелуларно, као и на базолатералној мембрани код Фпнвт/Ц326И мишева. Насупрот томе, изгледало је да се ФПН локализује првенствено на цитоплазму, апикалну мембрану и изненађујуће да је језгро код мишева обезбедило исхрану пуну гвожђа (Слика 4ф и г, доњи панели). Образац локализације ФПН-а који произилази из обезбеђивања исхране пуне гвожђа даље је потврђен коришћењем Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ животиња као негативних контрола (додатна слика С5Б). Ова запажања, заједно са претходним открићем да ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ животиње имају ниже оптерећење гвожђем у бубрезима од контрола након обезбеђивањагвожђемдијету, показују да губитак деловања ХАМП-а на бубрежни ФПН штитибубрегаод оптерећења гвожђем у окружењу наследне хемохроматозе.

ДИСКУСИЈА

Најважнији налаз ове студије је да ендогени ХАМП контролише реапсорпцију гвожђа посредовану ФПН-ом. Претходне студије су пријавиле регулацију ФПН-а егзогеним ХАМП-ом у култивисаним бубрежним ћелијама и инверзну везу између нивоа ХАМП-а и ФПН-а убубреганакон унилатералне оклузије уретера.12,13 Међутим, ово је прва демонстрација да таква регулација функционише ин виво у нормалним физиолошким условима и на начин који утиче на бубрежну и системску хомеостазу гвожђа. Посебна снага ове студије је употреба нових мишева, генерисаних у кући, како би се уклонио губитак реаговања ХАМП-а који је специфичан за бубреге. Овај приступ омогућава проучавање реналне ХАМП/ФПН осе без збуњујућих ефеката измењене системске хомеостазе гвожђа, која се иначе види на свеприсутним животињским моделима.

Слика 4|Бубрежни хепцидин антимикробни пептид/феропортин (ФПН) одређује образац преоптерећења ткива гвожђем у хемохроматози. (а)Нивои гвожђа у бубрезима, јетри, срцу и плућима Фпнвт/Ц326И животиња и Фпнвт/вт контрола у доби од 3 месеца. (б) Ниво гвожђа убубрега, јетра, срце и плућа код животиња дивљег типа давале су или контролну исхрану (200 дела на милион [ппм]) или исхрану пуну гвожђа (5{{4{{ 42}}}}00 ппм) од одвикавања од 3 месеца. (ц) Репрезентативне слике Перлс гвожђа побољшане диаминобензидином (ДАБ) у кортексу бубрега и јетри Фпнвт/Ц326И животиња и Фпнвт/вт контрола у доби од 3 месеца. Шипка ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. (д) Репрезентативне слике Перлс гвожђа побољшане ДАБ-ом у кортексу бубрега и јетри животиња дивљег типа дале су или контролну исхрану (200 ппм) или исхрану пуну гвожђа (5000 ппм) након одбијања од 3 месеца. Бар ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. (е) Поређење степена оптерећења ткива гвожђем између Фпнвт/Ц326И животиња и животиња дивљег типа које су храњене храном богатом гвожђем. Приказане вредности за сваку животињу су нормализоване на средњу вредност одговарајуће контролне групе. (ф) Репрезентативне слике ФПН имунофлуоресцентног бојења у кортексу бубрега Фпнвт/Ц326И животиња и Фпнвт/вт контрола у доби од 3 месеца. Горњи панел, шипке ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. Доњи панел, шипка ¼ 25 мм, оригинално увећање 60. (г) Репрезентативне слике ФПН имунофлуоресцентног бојења у бубрежном кортексу дивљих животиња давале су или контролну исхрану (200 ппм) или дијета пуна гвожђа (5000 ппм) од одвикавања од 3 месеца. Горњи панел, шипке ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. Доњи панел, шипка ¼ 25 мм, оригинално увећање 60. Вредности су приказане као средња СЕМ. *П < 0,05,="" **п="">< 0,01,="" ***п="">< 0,001="" и="" ****п="">< 0,0001.="" да="" бисте="" оптимизовали="" гледање="" ове="" слике,="" погледајте="" онлајн="" верзију="" овог="" чланка="" на="">

Други важан налаз ове студије је да бубрежни ХАМП/ФПН одређује величину и бубрежног и системског преоптерећења гвожђем (Слика 5). Заиста, губитак реаговања на ХАМП у бубрежним тубулима повећао је величину преоптерећења гвожђем у јетри, слезини, срцу и плућима, док је смањио величину бубрежног преоптерећења гвожђем након исхране пуне гвожђа. У складу са овим, веће преоптерећење бубрега гвожђем је примећено након обезбеђивања исхране богате гвожђем животињама дивљег типа (код којих је бубрежна ХАМП/ФПН оса нетакнута) него код хемохроматских мишева (код којих је бубрежна ХАМП/ФПН оса такође поремећен) (графички сажетак). Овај налаз може објаснити клиничко запажање дабубреганије уобичајено погођен код пацијената са наследном хемохроматозом.19

Слика 5|Улога реналног хепцидин антимикробног пептида (ХАМП)/феропортин (ФПН) осе у постављању преоптерећења гвожђем.Обезбеђивање исхране богате гвожђем повећава доступност гвожђа у серуму и нивое гвожђа у гломеруларном фифилтрату и повећава производњу и ослобађање хепцидина (ХАМП) у јетри. Повећани серумски ХАМП инхибира реапсорпцију гвожђа блокирањем ФПН у бубрежним тубулима. Инхибиција реапсорпције гвожђа узрокује задржавање гвожђа у бубрезима док истовремено смањује системску доступност гвожђа и последично смањује преоптерећење јетре гвожђем. Код мишева ФпнЦ3326Ифлфл/флфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ, губитак одзива на ХАМП у бубрежним тубулима узрокује нерегулисану реапсорпцију гвожђа. Ово, заузврат, спречава задржавање гвожђа у бубрезима док повећава системску доступност гвожђа и последично повећава преоптерећење јетре гвожђем.

Иако су и хемохроматоза и преоптерећење гвожђем у исхрани повећале ФПН у бубрежним тубулима, чини се да резултирају различитим обрасцима локализације у апикалним, интрацелуларним или базолатералним одељцима. Слична запажања су обављена на дванаестопалачном цреву пацова, где је нађено да гаважа гвожђа мења релативну дистрибуцију ФПН између ових одељења у дуоденалним ентероцитима.20 Једно тумачење ових резултата је да је у окружењу преоптерећења гвожђем у исхрани, повећана транслација ФПН (посредована регулаторни протеини гвожђа) деловали би тако да одржавају високу укупну производњу ФПН-а у бубрежној тубуларној ћелији, док би повећани серумски ХАМП смањио удео ФПН-а који се може локализовати на базолатералној мембрани. Из овог тумачења следи да би разлика између претходних извештаја у вези са локализацијом ФПН-а у проксималним тубулима могла да одражава разлике у садржају гвожђа у бубрежним тубулама и у нивоима хепцидина у серуму између животињских модела коришћених у различитим студијама.5,11–14,21 Алтернативно, ова дивергенција би могла да одражава степен неспецифичне реактивности који је раније објављен у односу на комерцијална ФПН антитела, укључујући и оно коришћено у овој студији.14 Функционални значај апикалне локализације ФПН-а у бубрежним тубулима остаје нејасан и нисмо могли да откријемо никакве промене у излучивању гвожђа у урину код мишева напуњених гвожђем (додатна слика 5Ц). Још једно занимљиво запажање је да се неки ФПН појавио локализован на језгру у бубрежним тубулима мишева напуњених гвожђем. Слична запажања су дали други у макрофагима напуњеним гвожђем и у јетри пацова. Последња студија је открила да је нуклеарни ФПН укључен у задржавање нуклеарног гвожђа као део одговора на акутну фазу.22,23 Потребне су детаљне студије субћелијске локализације ФПН у различитим стањима гвожђа и у различитим патологијама да би се додатно унапредило наше разумевање улоге ФПН-а у бубрегу.

Регулација и функција бубрежног ХАМП-а такође нису у потпуности схваћени. Открили смо да је експресија хамп гена у бубрезима повећана код животиња дивљег типа након исхране пуне гвожђа (допунска слика 5Е), али је остала непромењена код мишева са хемохроматозом (додатна слика 5Д), и код оних који имају бубрежне тубуле- специфичан губитак ФПН или бубрежних тубула – специфичан губитак одзива на ХАМП (додатна слика С5Ф и Г). Ови резултати не подржавају идеју да је експресија бубрежног хамп гена локално регулисана нивоима гвожђа у бубрезима. У погледу функције бубрежног ХАМП-а, претходна студија на моделу једностране оклузије уретера сугерише да је укључен у контролу бубрежног ФПН-а. Открили смо да је бубрежни ХАМП (откривен коришћењем антитела против про-ХАМП пептида) колокализован са калбиндином (маркером дисталних увијених тубула и кортикалних сабирних канала и повезних канала) (додатна слика С5Х). С друге стране, експресија ФПН-а се не колокализује са калбиндином, чак ни код мишева који имају губитак одзива на ХАМП специфичан за бубреге (слика 1а и додатна слика С5И). Ови резултати нису у складу са аутокрином улогом бубрежног ХАМП-а у регулацији бубрежног ФПН-а. Без обзира на то, бубрежни ХАМП може бити укључен у паракрину регулацију бубрежног ФПН-а. У будућности би било занимљиво проучавати паракрине функције бубрежног ХАМП-а и квантификовати релативне доприносе бубрежних и јетрених ХАМП-а контроли реапсорпције гвожђа.

Још једно занимљиво запажање из ове студије је да, у условима нормалне доступности гвожђа, бубрежна ХАМП/ФПН оса није од суштинског значаја за одржавање нормалне системске хомеостазе гвожђа, већ је важнија за регулисање нивоа гвожђа у бубрезима, барем код женки мишева. сој Ц57БЛ/6. Заиста, иако су уочене промене у нивоима гвожђа у бубрезима које су резултат губитка ФПН-а или одзива на ХАМП у бубрежним тубулима биле упорне, промене у системским индексима гвожђа биле су пролазне природе. Пролазна природа системских ефеката сугерише компензациони механизам(е) укључивања. Један од могућих компензационих механизама је модулација апсорпције гвожђа у исхрани помоћу хепатичног ХАМП-а. Заиста, открили смо да је код мишева који су носили ренално специфичан губитак реаговања на ХАМП, експресија хепатичног хамп гена повећана након повећања нивоа гвожђа у серуму у временској тачки 1- и остала је повећана у каснијим временским тачкама. Супротно томе, експресија хепатичног хамп гена је потиснута код мишева који су носили губитак ФПН-а специфичан за бубреге након смањења нивоа гвожђа у серуму у временској тачки 1- и остала је потиснута у каснијим временским тачкама (додатна слика С6А и Б). Поред тога, повећана експресија хепатичног хамп гена у првој поставци била је праћена смањеним нивоима ФПН у цревима, док је смањена експресија хепатичног хамп гена у другом окружењу била праћена вишим ФПН црева (додатна слика С6Ц и Д). Ови резултати указују да је деловање хепатичног ХАМП-а на апсорпцију гвожђа из исхране активан компензациони механизам укључен у одржавање нормалне системске хомеостазе гвожђа у условима поремећене бубрежне реапсорпције гвожђа.

Цистанцхе може поправити функцију бубрега

Треба напоменути, у условима нормалне доступности гвожђа, чини се да је бубрежна ХАМП/ФПН оса важнија код женки мишева него код мужјака мишева, барем у соју Ц57БЛ/6. Ово запажање се не може приписати разликама између мушкараца и жена у активности Пак8.ЦреЕРТ2þ трансгена. Сексуални диморфизам у нивоима и обрасцима транспортера дуж нефрона је раније забележен код овог соја мишева.24 У складу са овим, пронашли смо већу базалну експресију ФПН убубрезиженки него у бубрезима мужјака легла (додатна слика С2Д). Претходна студија која је користила другачији трансген Цре рекомбиназе, вођена конститутивно активним Нестин промотером да избрише фпн у целом нефрону, такође је известила о повећању нивоа гвожђа у бубрезима и смањењу залиха гвожђа у серуму и јетри. Међутим, та студија је спроведена на другом соју мишева (129/СвЕвТац) и није анализирала фенотип према полу или временском току.14

хемохроматоза и други поремећаји гвожђа.

ОТКРИВАЊЕ

Сви аутори су се изјаснили да нема супротстављених интереса.

ЗАХВАЛНИЦЕ

СЛ-Л је добио постдокторску стипендију Британске фондације за срце (ФС/12/63/29895). ГМ је финансирао аПројекат истраживања бубрега у Великој Британијигрант (РП_020_20160303) додељен СЛ-Л.

ПРИЛОЗИ АУТОРА

СЛ-Л осмишљена студија. СЛ-Л и ГМ су спровели експерименте. СЛ-Л је анализирао и интерпретирао резултате. СЛ-Л је написао рукопис. АМ је допринео материјалима. ПАР је коментарисао рукопис.

ДОПУНСКИ МАТЕРИЈАЛ

Додатни фајл (ПДФ)

Слика С1. Потврда специфичности ФПН и ХАМП антитела. (А) Репрезентативне слике ФПН имунофлуоресцентног бојења у кортексу бубрега Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ животиња и Фпнфлфл/флфл контрола у доби од 3 месеца. Горњи панели, шипка ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. Доње плоче, шипка ¼ 25 мм, оригинално увећање 60. (Б) Репрезентативне слике ХАМП имунофлуоресцентног бојења у бубрежном кортексу Хамп–/– животиња и контрола дивљег типа на 3 месеци старости. Горњи панели, шипка ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. Доње плоче, шипка ¼ 25 мм, оригинално увећање 60.

Слика С2. Потврда активности и специфичности Пак8.ЦреЕРТ2þ. (А) Генотипизација Фпнфлфл/флфл и Фпнфлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева коришћењем геномске ДНК екстраховане из јетре, слезине ибубрега1 недељу након индукције тамоксифена. (Б) Вестерн блот за ФПН инбубрезиженки и мужјака ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и ФпнЦ326И контрола 3 месеца након третмана тамоксифеном. Квантификација интензитета сигнала приказана на доњем панелу. (Ц) Вестерн блот за ФПН у бубрезима женки и мужјака Фпнфлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и Фпнфлфл/флфл контрола 3 месеца након третмана тамоксифеном. Квантификација интензитета сигнала приказана на доњем панелу. (Д) Вестерн блот за ФПН у бубрезима женки дивљег типа и мужјака легла у доби од 3 месеца. Квантификација интензитета сигнала приказана на доњем панелу. (Е–Г) Веће верзије панела на слици 1а, г и е. Вредности су приказане као средњи СЕМ. *П < 0.05,="" ***п=""><>

Слика С3. Нивои еритроферона у серуму нису промењени код ФпнЦ326Ифлфл/флфл Пак8.ЦреЕРТ2þ и Фпнфлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2 мишева. (А) Нивои еритроферона у серуму код женки и мужјака ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и контроле ФпнЦ326Ифлфл/флфл 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након третмана тамоксифеном. (Б) Нивои еритроферона у серуму код женки и мужјака Фпнфлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и контроле Фпнфлфл/флфл 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након индукције тамоксифена. Вредности су приказане као средњи СЕМ.

Слика С4. Нивои хемоглобина и еритроферона у серуму нису промењени код ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ храњених исхраном богатом гвожђем. (А) Ниво хемоглобина код женки и мушкараца ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контроле храњене су или контролном исхраном (која садржи 200 ппм гвожђа) или исхраном са гвожђем (садржи 5000 ппм гвожђа) 3 месеца од веан и. . (Б) Ниво еритроферона у серуму код женки и мужјака ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контрола које су храњене или контролном исхраном (која садржи 200 ппм гвожђа) илидијета пуна гвожђа(садржи 5000 ппм гвожђа) од одбијања 3 месеца. Вредности су приказане као средњи СЕМ. (Ц,Д) Веће верзије панела на слици 3х и и.

Слика С5. Руковање бубрежним гвожђем и експресија бубрежне шапе у различитим моделима мишева. (А) Нивои гвожђа у бубрезима код Фпнвт/Ц326И животиња и Фпнвт/вт контрола у доби од 6 месеци. (Б) Репрезентативне слике ФПН и АКП1 имунофлуоресцентног бојења у бубрежном кортексу Фпнфлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ животиња и Фпнфлфл/флфл контроле су храњене исхраном пуне гвожђа која садржи 5000 ппм3 месеца од одвикавања. Бар ¼ 25 мм, оригинално увећање 60. (Ц) Нивои гвожђа у урину (нормализовани на креатинин у урину) код животиња дивљег типа које су храњене храном богатом гвожђем која садржи 5000 ппм гвожђа или контролном исхраном која садржи 200 ппм гвожђа од одбијања током 3 месеца. (Д) Експресија бубрежног хамп гена код Фпнвт/Ц326И животиња и Фпнвт/вт контрола у доби од 3 месеца. (Е) Експресија бубрежног хамп гена код животиња дивљег типа које су храњене храном пуне гвожђа која садржи 5000 ппм гвожђа или контролном исхраном која садржи 200 ппм гвожђа од одбијања током 3 месеца. (Ф) Експресија бубрежног хамп гена код женки и мужјака ФпнЦ326Ифлфлфлфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и контрола ФпнЦ326Ифлфлфлфл 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након третмана тамоксифеном. (Г) Експресија бубрежног хамп гена код женки и мужјака Фпнфлфлфлфл,Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и контроле Фпнфлфл/флфл 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након индукције тамоксифена. (Х) Репрезентативне слике ХАМП и ЦалД имунофлуоресцентног бојења у кортексу бубрега дивљег типа животиња у доби од 3 месеца. Бар ¼ 25 мм, оригинално увећање 60. (И) Репрезентативне слике ФПН и ЦалД имунофлуоресцентног бојења у кортексу бубрега ФпнЦ326Ифлфл/флфл ,Пак8.ЦреЕРТ2þ животиња у доби од 1 месеца. Шипка ¼ 25 мм, оригинално увећање 60. (Ј–М) Веће верзије панела на слици 4ц, д, ф и г, респективно. Вредности су приказане као средњи СЕМ. *П <>

Слика С6. Експресија хемп гена јетре и нивои ФПН у цревима су промењени код мишева са фпн специфичним за бубрежне тубуле и код мишева са нокаутом фпнЦ326И специфичним за бубрежне тубуле. (А) Релативна експресија хамп мРНА у јетри женки мишева ФпнЦ326Ифлфл/флфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ и контрола ФпнЦ326Ифлфл/флфл 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након третмана тамоксифеном. (Б) Релативна експресија хамп мРНА у јетри женки мишева Фпнфлфлфлфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ и Фпнфлфл/флфл контрола 1 недеље, 1 месец, 3 месеца и 6 месеци након третмана тамоксифеном. (Ц) Репрезентативне слике ФПН имунолошког бојења у цревима женки ФпнЦ326И флфлфлфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и ФпнЦ326Ифлфл/флфл контрола 1 месец након третмана тамоксифеном. Бар ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. (Д) Репрезентативне слике ФПН имунолошког бојења у цревима женки Фпнфлфлфлфл, Пак8.ЦреЕРТ2þ мишева и Фпнфлфл/флфл контрола 1 месец након третмана тамоксифеном. Бар ¼ 200 мм, оригинално увећање 10. Вредности су приказане као средња СЕМ. *П < 0,05,="" **п="">< 0,01="" и=""><>

Цистанцхе може ублажити инфекцију бубрега

РЕФЕРЕНЦЕ

1. Донован А, Лима ЦА, Пинкус ЈЛ, ет ал. Извозник гвожђа феропортин/слц40а1 је неопходан за хомеостазу гвожђа. Целл Метаб. 2005;1:191–200.

2. Ганц Т. Ћелијско гвожђе: феропортин је једини излаз. Целл Метаб. 2005;1:155–157.

3. Неметх Е, Туттле МС, Повелсон Ј, ет ал. Хепцидин регулише ћелијски ефлукс гвожђа везивањем за феропортин и изазивањем његове интернализације. Наука. 2004;306:2090–2093.

4. Киао Б, Сугианто П, Фунг Е, ет ал. Ендоцитоза феропортина изазвана хепцидином зависи од убиквитинације феропортина. Целл Метаб. 2012;15:918–924.

5. Вареинг М, Фергусон ЦЈ, Греен Р, ет ал. Ин виво карактеризација бубрежног транспорта гвожђа код анестезираних пацова. Ј Пхисиол. 2000;524:581–586.

6. Цхристенсен И, Бирн Х, Сторм Т, ет ал. Ендоцитни рецептори у проксималном тубулу бубрега. Пхисиологи. 2012;27:223–236.

7. Зханг Д, Меирон-Холтз Е, Роуаулт Т. Бубрежни метаболизам гвожђа: испорука гвожђа трансферином и улога регулаторних протеина гвожђа. Ј Ам Соц Непхрол. 2007;18:401–406.

8. Цанонне-Хергаук Ф, Груенхеид С, Понка П, Грос П. Ћелијска и субћелијска локализација транспортера гвожђа Нрамп2 у ивици црева и регулација гвожђа из исхране. Крв. 1999;93: 4406–4417.

9. Ванг Ц, Јенкиткасемвонг С, Дуарте С, ет ал. ЗИП8 је транспортер гвожђа и цинка чија је експресија на површини ћелије регулисана оптерећењем ћелијског гвожђа. Ј Биол Цхем. 2012;287:34032–34043.

10. Мартинес А, Масерееув Р, Тјалсма Х, ет ал. Метаболизам гвожђа у патогенези оштећења бубрега изазваних гвожђем. Нат Рев Непхрол. 2013;9:385–398.

11. Волфф Н, Лиу В, Фентон Р, ет ал. Феропортин 1 се експримира базолатерално у ћелијама проксималних тубула бубрега пацова и вишак гвожђа повећава његову мембранску трговину. Ј Целл Мол Мед. 2011;15:209–219.

12. Пан С, Киан ЗМ, Цуи С, ет ал. Локални хепцидин је повећао интрацелуларно преоптерећење гвожђем кроз разградњу феропортина у бубрезима. Биоцхем Биопхис Рес Цоммун. 2020;522:322–327.

13. Моулоуел Б, Хоуамел Д, Делаби Ц, ет ал. Хепцидин регулише интраренално руковање гвожђем на дисталном нефрону. Киднеи Инт. 2013;84:756–766.

14. Ванг Кс, Зхенг Кс, Зханг Ј, ет ал. Физиолошке функције феропортина у регулацији бубрежног рециклирања гвожђа и исхемијске акутне повреде бубрега. Ам Ј Пхисиол Ренал Пхисиол. 2018;315:Ф1042–Ф1057.

15. Лакхал-Литтлетон С, Волна М, Цхунг ИЈ, ет ал. Битна ћелијска аутономна улога хепцидина у хомеостази гвожђа у срцу. Елифе. 2016;5: е19804.

16. Лакхал-Литтлетон С, Волна М, Царр ЦА, ет ал. Срчани феропортин регулише ћелијску хомеостазу гвожђа и важан је за срчану функцију. Проц Натл Ацад Сци УС А. 2015;112:3164–3169.

17. Еспана-Агусти Ј, Зоу Кс, Вонг К, ет ал. Генерисање и карактеризација Пак8-ЦреЕРТ2 трансгене линије и Слц22а6-ЦреЕРТ2 кноцк-ин линије за индуцибилну и специфичну генетску манипулацију бубрежних тубуларних епителних ћелија. ПЛоС Оне. 2016;11:е0148055.

18. Лакхал-Литтлетон С, Цросби А, Фризе М, ет ал. Интрацелуларни недостатак гвожђа у ћелијама глатких мишића плућне артерије изазива плућну артеријску хипертензију код мишева. Проц Натл Ацад Сци УС А. 2019;116:13122–13130.

19. Цамасцхела Ц. Разумевање хомеостазе гвожђа кроз генетску анализу хемохроматозе и сродних поремећаја. Крв. 2005;106: 3710–3717.

20. Нуњез МТ, Тапиа В, Рохас А, ет ал. Снабдевање гвожђем одређује апикалну/базолатералну дистрибуцију интестиналних транспортера гвожђа ДМТ1 и феропортина 1. Ам Ј Пхисиол Целл Пхисиол. 2010;298:Ц477–Ц485.

21. Веутхеи Т, Д'Анна МЦ, Рокуе МЕ. Улога бубрега у хомеостази гвожђа: бубрежна експресија прохепцдина, феропортина и ДМТ1 код анемичних мишева. Ам Ј Пхисиол Ренал Пхисиол. 2008;295:Ф1213–Ф1221.

22. Наз Н, Малик И, Схеикх Н, ет ал. Феропортин-1 је „нуклеарно“-негативни протеин акутне фазе у јетри пацова: поређење са другим протеинима за транспорт гвожђа. Лаб Инвест. 2012;92:842–856.

23. Аидемир Ф, Јенкиткасемвонг С, Гулец С, Кнутсон МД. Оптерећење гвожђем повећава нивое хетерогене нуклеарне РНК и мРНК феропортина у мишјим Ј774 макрофагима. Ј Нутр. 2009;139:434–438.

24. Веирас ЛЦ, Гирарди АЦЦ, Цурри Ј, ет ал. Сексуални диморфни образац бубрежних транспортера и хомеостазе електролита. Ј Ам Соц Непхрол. 2017;28: 3504–3517.