Активација ТЛР9 изазива аберантну гликозилацију ИгА преко АПРИЛ- и ИЛ-6-посредованих путева у ИгА нефропатији
Mar 11, 2022
Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ ВхатсАпп: 008618081934791
Иуко Макита1 , Хитосхи Сузуки1 , Тосхики Кано1 , Акико Такахата1 , Бруце А. Јулиан2,3 , Јан Новак3 и Иусуке Сузуки1
КЉУЧНЕ РЕЧИ: АПРИЛ; ИгА1 са недостатком галактозе; ИгА нефропатија; ИЛ-6; имуни комплекс
ИгА1 са недостатком галактозе (Гд-ИгА1) игра кључну улогу у развојуИгА нефропатија(ИгАН). Међутим, патогени механизми који покрећу производњу Гд-ИгА1 нису у потпуности разјашњени. Познато је да је урођена имунолошка активација преко Толл-лике рецептора 9 (ТЛР9) укључена у производњу Гд-ИгА1. Познато је да лиганд који индукује пролиферацију (АПРИЛ) и ИЛ-6 побољшавају синтезу Гд-ИгА1 у ИгАН. Уз ово као позадину, истражили смо како активација ТЛР9 у ћелијама које луче ИгА доводи до прекомерне производње нефритогеног ИгА код ддИ миша склоних ИгАН-у и у ћелијама које луче ИгА{14}}људи. Ињекција ТЛР9 лиганда ЦпГ-олигонуклеотида повећала је производњу аберантно гликозилованих ИгА и ИгГ-ИгА имуних комплекса код ддИ мишева, што је заузврат погоршалоповреда бубрега. Мишеви стимулисани ЦпГ-олигонуклеотидом имали су повишене нивое АПРИЛ-а у серуму који су били у корелацији са нивоима аберантно гликозилованих ИгА и ИгГ-ИгА имуних комплекса. ин витро,Активација ТЛР9побољшала производњу нефритогеног ИгА, као и АПРИЛ и ИЛ-6 у спленоцитима ддИ мишева и у ћелијама које луче хумани ИгА{1}}. Међутим, пад сиРНА у АПРИЛ-у потпуно је потиснуо прекомерну производњу Гд-ИгА1 изазвану ИЛ-6. Неутрализација ИЛ-6 смањила је прекомерну производњу Гд-ИгА1 изазвану ЦпГ-олигонуклеотидом. Штавише, АПРИЛ и ИЛ-6 путеви су сваки независно посредовали ТЛР9-индуковали прекомерну производњу Гд-ИгА1. Тако је активација ТЛР9 побољшала синтезу аберантног гликозилованог ИгА који је, у мишјем моделу ИгАН, додатно појачао повреду бубрега. Дакле, АПРИЛ и ИЛ-6 синергистички, као и независно, појачавају синтезу Гд-ИгА1.
Транслатионал Статемент
Терапија специфична за болест усмерена на ИгА1 са недостатком галактозе може представљати будући третманИгА нефропатија. Резултати ове студије, која је показала учешће лиганда који индукује пролиферацију (АПРИЛ) и интерлеукина-6 (ИЛ-6) у прекомерној производњи аберантно гликозилованог ИгА, подржавају образложење за циљање на АПРИЛ и ИЛ{ {3}} код ИгА нефропатије (ИгАН). У ствари, недавна студија је показала позитивне ефекте анти-АПРИЛ моноклонског антитела на мишји ИгАН,1 и клиничка студија са неутралишућим АПРИЛ антителом је тренутно у току код пацијената са ИгАН-ом.
ИгА нефропатија (ИгАН), најчешћи примарни гломерулонефритис,2 узрокује завршну бубрежну болест код 20% до 40% пацијената у року од 20 година након појаве ове болести.3 Иако патогенеза ИгАН остаје да се у потпуности разјасни, епизодично Макроскопска хематурија упоредна са инфекцијом горњих дисајних путева сугерише да имуни систем слузокоже игра важну улогу у клиничким манифестацијама ИгАН.4
Цистанцхетубулосаспречавабубрегаболест, кликните овде да бисте добили узорак
Аберантна гликозилација ИгАје централна у патогенези ИгАН. Гломеруларни ИгА код пацијената са ИгАН је ограничен на подкласу ИгА1 и обогаћен је за молекуле који имају неке О-гликане у зглобном региону са недостатком галактозе (ИгА1 са недостатком галактозе [Гд-ИгА1]).5,6 Штавише, нивои Гд у серуму -ИгА1 и ИгА{11}}садржеимуни комплекси(ИЦ) са Гд-ИгА1-специфичним аутоантителима су повишене код пацијената са ИгАН.7–9 Међутим, механизми за производњу Гд-ИгА1 још увек нису у потпуности схваћени.
У овој студији смо користили модел ддИ миша склон ИгАН-у. ддИ мишеви развијају гломеруларне повреде које опонашају повреде људи са ИгАН-ом.10 Иако мишеви немају ИгА молекуле са О-гликанима типичним за људски ИгА1, људски ИгАН и овај модел ддИ миша склон ИгАН-у имају неке карактеристике специфичне за болест, као што је повишење серума аберантног гликозилованог ИгА и ИгГ-ИгА ИЦ.6,11 У ствари, аберантна гликозилација ИгА због недостатка б1,4-галактозилације Н-гликана индукује мишји ИгАН због повишења нивоа у серуму високе молекулске тежине ИЦ који садржи ИгА и ИгА са њиховом накнадном депозицијом у бубрегу и повредом гломерула.12 ддИ мишеви показују протеинурију и мезангијални пролиферативни гломерулонефритис са заједничким таложењем ИгА и Ц3 у гломерулима. Студија асоцијације која обухвата читав геном идентификовала је локусе кандидата повезане са прогресијом ИгАН код ддИ мишева.13 Локуси укључују гене који су функционално слични онима повезаним са хуманим ИгАН.14,15 Ови налази сугеришу да ИгАН код ддИ мишева и код људи може бити погођен бар делимично истим генима осетљивости. Иако се молекуларне карактеристике мишјег ИгА и хуманог ИгА1 разликују, аберантно гликозиловани ИгА има тенденцију да формира полимерне ИгА и ИгГ-ИгА ИЦ-ове који накнадно покрећу прогресију оштећења бубрега у ддИ мишјем моделу ИгАН, као и код хуманог ИгАН. Тако модел ддИ мишева има неке заједничке карактеристике са људским ИгАН-ом и може бити користан алат за анализу различитих патогенетских карактеристика ИгАН-а.
Толл-лике рецептори (ТЛР) су кључни молекули у урођеном имунолошком систему и укључени су у патогенезу ИгАН.16–20 Егзогени антигени изведени из патогена активирају ТЛР9-МиД88 сигнални пут.21 Овај процес доводи до значајно повећана синтеза инфламаторних цитокина, као што су интерферон типа 1 и интерлеукин-6 (ИЛ-6).22 Недавно смо показали да се активација ТЛР9 погоршаваповреда бубрегакод ддИ мишева склоних ИгАН-у, са повишеним серумским нивоима ИгА и ИгГ-ИгА ИЦс.16 Штавише, специфични ТЛР9 полиморфизми су повезани са прогресијом болести код пацијената са ИгАН.16 Нивои фактора некрозе тумора-а и ИЛ{{ у серуму 6}} су повишене код пацијената са ИгАН.23 Штавише, ИЛ-6 и ИЛ-4 повећавају производњу ИгА1 и наглашавају степен недостатка галактозе, повећавајући синтезу Гд-ИгА1 помоћу ИгА{{13} }секретирање ћелијских линија пацијената са ИгАН.24 Ови налази сугеришу да ИЛ-6 може бити кључни посредник овог процеса.24,25.
Ген 13. члана суперпородице лиганда фактора туморске некрозе (ТНФСФ13) кодира лиганд који индукује пролиферацију (АПРИЛ) који је централни цитокин за сазревање и преживљавање Б ћелија.26 АПРИЛ дели неке сигналне рецепторе важне за развој Б ћелија са другим ТНФ суперфамилија лиганд, фактор активирања Б-ћелија (БАФФ). БАФФ је такође укључен у сазревање афинитета Б ћелија. Студија асоцијације која обухвата читав геном идентификовала је ТНФСФ13 као један од гена кандидата повезаних са ИгАН.27 Заиста, код пацијената са ИгАН, нивои АПРИЛ у серуму су повишени28 и нивои су повезани са прогнозом бубрега.28
Да бисмо боље разумели основне механизме укључене у прекомерну производњу аберантног гликозилованог ИгА преко ТЛР9 активације помоћу лиганд ЦпГ олигодеоксинуклеотида (ОДНс), користили смо ддИ мишеве склоне ИгАН-у и ћелије које луче хумани ИгА{2}}.
РЕЗУЛТАТИ
Активација ТЛР9 погоршала је оштећење бубрега код ддИ мишева преко повећане производње нефритогеног ИгА
ТЛР9 се може активирати одговарајућим лигандима, као што је ЦпГ-ОДН. Да бисмо тестирали ефекат активације ТЛР9 у мишјем моделу ИгАН-а, користили смо ињекцију лиганда код ддИ мишева склоних ИгАН-у. Мишеви којима је убризган ЦпГ-ОДН развили су мезангијалну пролиферацију и експанзију екстрацелуларног матрикса (Слика 1а). Хистолошки резултати бубрега засновани на мезангијалној пролиферацији и експанзији мезангијалног матрикса код мишева којима је убризган ЦпГ-ОДН били су значајно виши од оних код контролних мишева (П < 0.01;="" слика="" 1а).="" нивои="" албумина="" у="" урину="" код="" мишева="" којима="" је="" убризган="" цпг-одн="" били="" су="" значајно="" повишени="" у="" поређењу="" са="" онима="" код="" контролних="" мишева="" (п="">< 0.{{20}}1;="" слика="" 1а).="" само="" мишеви="" којима="" је="" убризган="" цпг-одн="" развили="" су="" мезангијалне="" наслаге="" ига,="" игг="" и="" комплемента="" ц3="" (слика="" 1б).="" мишеви="" којима="" је="" убризган="" цпг-одн="" показали="" су="" значајно="" више="" серумске="" нивое="" ига="" (п=""><0,01) и="" игг="" (п=""><0,01) него="" контролни="" мишеви="" (слика="" 1ц).="" серум="" ига="" мишева="" којима="" је="" убризган="" цпг-одн="" мишева="" имао="" је="" нижу="" реактивност="" са="" лектинима="" рицинус="" цоммунис="" аглутинин-и="" (рца-и)="" и="" самбуцус="" нигра="" аглутинина="" него="" код="" контролних="" мишева="" (слика="" 1ц),="" што="" указује="" на="" нижи="" садржај="" галактозе="" и="" сијаличне="" киселине="" на="" н="" -гликани="" мишјег="" ига.="" штавише,="" ниво="" игг-ига="" иц="" у="" серуму="" код="" мишева="" којима="" је="" убризган="" цпг-одн="" био="" је="" значајно="" виши="" од="" оног="" код="" контролних="" мишева="" (п=""><0,05; слика="" 1ц).="" ови="" налази="" су="" указивали="" на="">Активација ТЛР9ЦпГ-ОДН је резултирало прекомерном производњом аберантно гликозилованих ИгА и ИгГ-ИгА ИЦ, што је довело доимуно-комплексталожење и повреда бубрега.
Б ћелије и дендритичне ћелије биле су укључене у ЦпГ-ОДН одговоре
Истражили смо који типови ћелија су укључени у индукцију прекомерне производње аберантно гликозилованог ИгА као одговор на ЦпГ-ОДН. Б ћелије и дендритичне ћелије (ДЦ) су изоловане из слезине ддИ мишева коришћењем анти-мишјих ЦД19 и ЦД11ц антитела сортирањем ћелија активираним ФЛ флуоресценцијом, респективно. ЦпГ-ОДН стимулација изолованих Б ћелија изазвала је прекомерну производњу ИгА. Поред тога, ЦпГ-ОДН је значајно повећао производњу ИгА када су Б ћелије биле заједно култивисане са ДЦ (додатна слика С1). Ови резултати сугеришу да ЦпГ-ОДН директно активира Б ћелије и да ДЦС додатно појачава производњу ИгА након активације ТЛР9.
Прекомерна производња АПРИЛ појачане синтезе аберантно гликозилованих ИгА и ИгГ-ИгА ИЦс
Процењивали смо да ли су АПРИЛ и/или БАФФ били укључени у синтезу нефритогеног ИгА индукованог активацијом ТЛР9. Ињекција ЦпГ-ОДН код ддИ мишева значајно је подигла нивое АПРИЛ-а и БАФФ-а у серуму (Слика 2а). Нивои експресије АПРИЛ-а у спленоцитима су у корелацији са производњом аберантног гликозилованог ИгА и формирањем ИгГ-ИгА ИЦ (Слика 2б). Нивои експресије БАФФ у спленоцитима корелирају са производњом аберантно гликозилованог ИгА, али не и са формирањем ИгГ-ИгА ИЦ (Слика 2б). Штавише, серумски нивои АПРИЛ-а, али не и БАФФ-а, значајно су корелирали са повишеним серумским нивоима аберантно гликозилованог ИгА и ИгГ-ИгА ИЦ код мишева убризганих ЦпГ-ОДН (Слика 2ц). Ови налази сугеришу да и АПРИЛ и БАФФ могу бити укључени у производњу аберантно гликозилованог ИгА, иако АПРИЛ може бити више укључен у производњу ИгГ-ИгА ИЦ.
Слика 1|Производња нефритогеног ИгА изазвана стимулацијом ЦпГ-олигодеоксинуклеотида (ОДН). Ињекција са ЦпГ-ОДН повећала је нивое у крви аберантно гликозилованог ИгА и ИгГ-ИгА имунолошког комплекса (ИЦ) и погоршала повреду бубрега код ддИ мишева. (а) ддИ мишеви пре развојаИгА нефропатија(ИгАН) ип је убризган ЦпГ-ОДН три пута недељно током 12 недеља. У хистолошкој анализи гломеруларних лезија, мишеви којима је убризган ЦпГ-ОДН показали су пролиферацију мезангијалних ћелија и експанзију екстрацелуларног матрикса. Десни панел приказује процену бубрежних повреда полуквантитативним бодовањем. Хистолошки резултати бубрега, процењени процентима гломерула са горе поменутим лезијама, показали су да је оштећење бубрега код мишева којима је убризган ЦпГ-ОДН погоршано. Нивои албумина у урину код мишева којима је убризган ЦпГ-ОДН били су значајно повишени у поређењу са онима код контролних мишева. Шипке у доњим панелима ¼ средња вредност ± СЕМ. (б) Имунохистохемијска анализа гломеруларних депозита ИгА, ИгГ и Ц3. Само мишеви којима је убризган ЦпГ-ОДН развили су мезангијалне наслаге ИгА, ИгГ и Ц3. (ц) Нивои ИгА, ИгГ и ИгГ-ИгА ИЦ у серуму су значајно повећани након третмана ЦпГ-ОДН током 12 недеља. Серум ИгА код мишева којима је убризган ЦпГ-ОДН показао је значајно нижу реактивност са лектинима Рицинус цоммунис аглутинин-И (РЦА-И) и Самбуцус нигра аглутинин (СНА) него ИгА код контролних мишева. Ови резултати указују на то да је ињекција ЦпГ-ОДН повећала нивое аберантног гликозилованог ИгА у серуму. Приказане су појединачне тачке. *П < 0.05,="" **п="">< 0,01.="" од,="" оптичка="" густина.="" да="" бисте="" оптимизовали="" гледање="" ове="" слике,="" погледајте="" онлајн="" верзију="" овог="" чланка="" на="">
Слика 2|Корелација између прекомерне производње лиганда који индукује пролиферацију (АПРИЛ) и аберантно гликозилованог ИгА код мишева којима је убризган ЦпГ-олигодеоксинуклеотид (ОДН). (а) Ињекција ддИ мишева са ЦпГ-ОДН повећала је нивое фактора активације Б-ћелија (БАФФ) у серуму и АПРИЛ. (б) Нивои експресије БАФФ-а у целим спленоцитима били су у корелацији са смањеном реактивношћу са лектином Рицинус цоммунис аглутинин-И (РЦА-И), али нису били у корелацији са формирањем имуног комплекса ИгГ-ИгА (ИЦ). У међувремену, нивои експресије АПРИЛ-а били су повезани са производњом аберантног гликозилованог ИгА и формирањем ИгГ-ИгА ИЦ. (ц) Код мишева којима је убризган ЦпГ-ОДН, нивои АПРИЛ-а у серуму су били повезани са смањеном реактивношћу ИгА са РЦА-И лектином и повишеним нивоима ИгГ-ИгА ИЦ. Нивои БАФФ у серуму нису били у корелацији са производњом гликозилованог ИгА и формирањем ИгГ-ИгА ИЦ. Цртице ¼ значе - СЕМ. *П < 0.05.="" од,="" оптичка="">
ИЛ-6 је изазвао производњу аберантног гликозилованог ИгА
Нивои ИЛ{{0}} у серуму код мишева којима је убризган ЦпГ-ОДН били су значајно виши у поређењу са контролним мишевима (П <0,05; слика="" 3а).="" користећи="" спленоците="" дди="" мишева="" склоних="" иган-у,="" испитали="" смо="" да="" ли="" је="" тлр9-индукована="" ћелијска="" активација="" и="" прекомерна="" производња="" аберантно="" гликозилованог="" ига="" посредована="" ил-6.="" цпг-одн="" стимулација="" је="" повећала="" производњу="" ил-6="" од="" стране="" спленоцита="" ин="" витро.="" додавање="" ил-6="" медијуму="" културе="" спленоцита="" повећало="" је="" производњу="" ига.="" штавише,="" ил-6="" је="" побољшао="" синтезу="" аберантног="" гликозилованог="" ига="" и="" формирање="" игг-ига="" иц="" и="" повећао="" производњу="" април="" (слика="" 3а).="" ил-6–неутрализирајуће="" антитело="" је="" смањило="" цпг-одн–="" индуковано="" укупни="" ига,="" аберантну="" производњу="" гликозилованог="" ига="" и="" формирање="" игг-ига="" иц="" (слика="" 3б).="" ови="" налази="" указују="" да="" је="" активација="" тлр9="" посредовала,="" барем="" делимично,="" ил-="" 6.="" штавише,="" други="" тлр{20}путеви="" посредовани="" могу="" бити="" укључени="" у="" производњу="" аберантног="" гликозилованог="">
цистанцхеможе побољшатибубрегафункција
АПРИЛ и ИЛ{0}} појачавају синтезу Гд-ИгА1 у људским ћелијама које луче ИгА{3}}
Даље смо тестирали да ли су АПРИЛ и ИЛ-6 заједнички главним медијаторима који повећавају производњу нефритогеног ИгА у људским ћелијама које луче ИгА{1}}. Додатак ЦпГ-ОДН појачао је повећање ИЛ-6, експресију АПРИЛ-а, производњу АПРИЛ протеина и производњу ИгА и Гд-ИгА1 (Слика 4а). Стимулација са ИЛ-6 и са АПРИЛ-ом је појачала производњу ИгА и Гд-ИгА1 (Слика 4б, ц). Ефекти ЦпГ-ОДН стимулације на производњу ИгА и Гд-ИгА1 делимично су смањени антителима која неутралишу ИЛ-6- (Слика 4д). Штавише, АПРИЛ мала, интерферирајућа (си)РНА рушење такође је смањила производњу ИгА и Гд-ИгА1 изазвану ИЛ-6 стимулацијом (слика 4б), што указује да АПРИЛ и ИЛ-6 синергистички промовишу стварање Гд -ИгА1.
ДИСКУСИЈА
Мезангијални ИгА у хуманом ИгАН је искључив ИгА1 подкласе која показује абнормалну О-гликозилацију. 29,30 Људски ИгА1 има зглобни регион са О-гликанима који је одсутан у мишјем ИгА.6,31,32 Међутим, аберантна гликозилација Н-гликана је укључена у патогенезу мишјег модела ИгАН код ддИ мишева, са повишење аберантног гликозилованог ИгА и ИЦ који садржи ИгА.11,12 Аберантне модификације ИгА угљених хидрата у О- или Н-гликанима су карактеристична својства нефритогеног ИЦ који садржи ИгА.
Неколико студија је показало активацију ТЛР9 у прогресији ИгАН.17–19 У овој студији, показали смо да активација ТЛР9 ип ињекцијом ЦпГ-ОДН код ддИ мишева погоршава бубрежне повреде праћене гломеруларним депозитима ИгА и ИгГ, вероватно зато што повећаних серумских нивоа аберантног гликозилованог ИгА и ИгГ-ИгА ИЦ. Штавише, показали смо да је активација ТЛР9 укључена у синтезу Гд-ИгА1 у људским ћелијским линијама које луче ИгА1-.
Слика 3|Ефекат ЦпГ-олигодеоксинуклеотида (ОДН) и интерлеукина (ИЛ)-6 на култивисане спленоците ддИ мишева. (а) Нивои ИЛ-6 у серуму код мишева којима је убризган ЦпГ-ОДН били су значајно виши у поређењу са контролним мишевима. ЦпГ-ОДН стимулација је повећала производњу ИЛ-6 спленоцита ддИ мишева у култури. Инкубација спленоцита ддИ мишева са рекомбинантним ИЛ-6 повећала је производњу укупног ИгА и аберантно гликозилованог ИгА, што је резултирало формирањем ИгГ-ИгА имунолошког комплекса (ИЦ). Рекомбинантни ИЛ-6 је повећао прекомерну производњу лиганда који индукује пролиферацију (АПРИЛ). (б) Спленоцити у култури су стимулисани ЦпГ-ОДН у присуству или одсуству ИЛ-6-неутрализирајућег антитела. Анти-ИЛ-6 антитело је смањило производњу укупног ИгА и аберантно гликозилованог ИгА и, последично, смањило формирање ИгГ-ИгА ИЦ изазвано ЦпГ-ОДН. Трагови ¼ средња вредност ± СЕМ. * П < 0.05,="" **п="">< 0,01.="" од,="" оптичка="" густина;="" пбс,="" физиолошки="" раствор="" пуферован="" фосфатом;="" рца-и,="" рицинус="" цоммунис="" аглутинин-и;="" сна,="" самбуцус="" нигра="">
Слика 4|Ефекат ЦпГ-олигодеоксинуклеотида (ОДН) или суплементације лиганда који индукује пролиферацију (АПРИЛ) на ћелијске линије човека који луче ИгА1- на ИгА1, ИгА1 са недостатком галактозе (Гд-ИгА1) и интерлеукин (ИЛ){{ 9}} производња. (а) Додатак ЦпГ-ОДН је побољшао производњу ИЛ-6. ЦпГ-ОДН је побољшао експресију гена АПРИЛ-а. Вестерн блот анализа је показала да је ЦпГ-ОДН повећао нивое протеина у АПРИЛ-у. Резултати су процењени дензитометријски. Стимулација са ЦпГ-ОДН индуковала је производњу ИгА и Гд-ИгА1. (б) АПРИЛ мала, интерферирајућа РНК (сиРНА) срушена је смањила прекомерну производњу ИгА и Гд-ИгА1 изазвану ИЛ-6. (ц) Ћелије које производе ИгА{{2{{30}}}}}елије стимулисане рекомбинантним АПРИЛ-ом произвеле су више ИгА и Гд-ИгА1. (д) Ћелије које луче ИгА1- су инкубиране са анти-ИЛ-6 антителом после ЦпГ-ОДН стимулације. Повећана производња ИгА и Гд-ИгА1 изазвана ЦпГ-ОДН смањена је анти-ИЛ-6 антителом и сиРНА срушењем АПРИЛ-а. Трагови ¼ средња вредност ± СЕМ. *П < 0,05,="" **п="">< 0,01.="" гадпх,="" глицералдехид-3-фосфат="" дехидрогеназа;="" пбс,="" физиолошки="" раствор="" пуферован="">
Процијенили смо механизам којим је активација ТЛР9 посредовала повећану производњу аберантног гликозилованог ИгА. БАФФ и АПРИЛ су познати по својој улози у преживљавању и диференцијацији Б-ћелија. МцЦартхи и сар.33 су показали да трансгени мишеви са прекомерном експресијом БАФФ-а развијају мезангијалне наслаге ИгА са оштећењем бубрега и уринарним абнормалностима.33 Недавно смо показали да је експресија гена АПРИЛ повишена у тонзиларним герминалним центрима пацијената са ИгАН-ом. Штавише, прекомерна експресија АПРИЛ-а у герминалним центрима крајника корелирала је са нивоима Гд-ИгА1 у серуму и тежином болести код пацијената са ИгАН-ом.34 Ови налази сугеришу да и БАФФ и АПРИЛ могу бити укључени у патогенезу ИгАН-а. Међутим, веза између БАФФ/АПРИЛ и активације ТЛР9 није јасна. У овој студији, активација ТЛР9 је повећала експресију гена и нивое у серуму АПРИЛ-а. Нивои аберантног гликозилованог ИгА у серуму корелирају са нивоима експресије БАФФ и АПРИЛ у спленоцитима. Међутим, нивои ИгГ-ИгА ИЦ у серуму су корелирали са нивоима експресије у АПРИЛ-у, али не и БАФФ. Штавише, нивои АПРИЛ-а у серуму су повезани са прекомерном производњом аберантног гликозилованог ИгА и ИгГ-ИгА ИЦ код мишева активираних ТЛР{12}}. У ћелијама које луче ИгА{13}}, активација ТЛР9 је такође изазвала прекомерну производњу Гд-ИгА1 преко АПРИЛ-а. Ови резултати сугеришу да АПРИЛ игра важну улогу у ТЛР9-индукованој прекомерној производњи нефритогеног ИгА и формирању ИгГ-ИгА ИЦ.
Треба разјаснити одговор према типу ћелије да би се одредила улога Б и Т ћелија и ДЦ. У овој студији, проценили смо улогу Б ћелија и плазмацитоидних ДЦ. ТЛР9 се експримује преко ДЦ, Б ћелија и макрофага, али не и од Т ћелија.35–37 Допринос БАФФ/АПРИЛ одговору антитела независног од Т ћелија је познат.38,39 Овде смо тестирали да ли активација ТЛР9 може побољшати синтезу аберантно гликозиловани ИгА и формирање ИгГ-ИгА ИЦ преко АПРИЛ-а на начин независан од Т ћелија. Такође смо користили клониране ћелијске линије хуманог ИгА1- и показали да је активација ТЛР9 повећала производњу Гд-ИгА1 преко АПРИЛ-а и ИЛ-6, што сугерише да је процес независан од Т ћелија. Штавише, проценили смо улоге Б ћелија и ДЦ. Показали смо да је ЦпГ-ОДН специфичан за Б ћелије и ДЦ повећао производњу аберантно гликозилованог ИгА у целим спленоцитима. Штавише, истражили смо да ли ЦпГ-ОДН стимулација ин витро може побољшати производњу ИгА. ЦпГ-ОДН стимулација изолованих Б ћелија изазвала је прекомерну производњу ИгА. Поред тога, ЦпГ-ОДН је значајно повећао производњу ИгА када су Б ћелије биле кокултивисане са ДЦ (додатна слика С1). Ови резултати сугеришу да активација ЦпГ-ОДН резултира већомПроизводња ИгА и аберантна гликозилацијапосредује ТЛР9 на начин независан од Т ћелија.
Познато је да ИЛ-6 наглашава пролиферацију ћелија које производе имуноглобулин и терминалну диференцијацију плазма ћелија.40–42 Штавише, ИЛ-6 такође може бити цитокин примарни кандидат за диференцијацију Т фоликуларних помоћних ћелија .43,44 Т фоликуларне помоћне ћелије су од суштинског значаја за сазревање афинитета Б-ћелија, рекомбинацију промене класе и стварање меморије Б-ћелија и плазма ћелија унутар герминалног центра.43,44 У моделу лупуса миша, ИЛ-6 недостатак је спречио диференцијацију Т фоликуларних помоћних ћелија и експанзију Б-ћелија герминалног центра, што је резултирало смањеном производњом аутоантитела.45 Ова студија је разјаснила да активација ТЛР9 помоћу ЦпГ-ОДН повећава производњу ИЛ-6 у спленоцитима мишјег ИгАН. ИЛ-6 је изазвао прекомерну производњу аберантног гликозилованог ИгА и ИгГ-ИгА ИЦ у мишјем моделу ИгАН. У ћелијама које луче хумани ИгА{21}, потврдили смо да ИЛ-6 појачава производњу Гд-ИгА1.24 Наши налази сугеришу да ИЛ-6 може бити један од главних молекула који изазивају прекомерну производњу нефритогеног ИгА посредовано активацијом ТЛР9.
АПРИЛ игра важну улогу у пребацивању класе ИгА и диференцијацији плазмацитоида.46,47 ИЛ-6 промовише терминалну диференцијацију Б ћелија у плазма ћелије које луче ИгА.41,42 Ова студија је показала да ИЛ{{7} } стимулација је изазвала производњу АПРИЛ. Затим смо претпоставили да постоји повезаност између АПРИЛ-а и ИЛ-6 посредоване активацијом ТЛР9 која је изазвала производњу аберантног гликозилованог ИгА. Открили смо да ИЛ-6-неутрализирајуће антитело није у потпуности блокирало прекомерну производњу Гд-ИгА1 изазвану ЦпГ-ОДН-ом и да је сиРНА срушена АПРИЛ-а смањила прекомерну производњу Гд-ИгА1 изазвану ИЛ-6. Ови подаци сугеришу да АПРИЛ и ИЛ-6 синергијски подстичу производњу Гд-ИгА1 посредовану активацијом ТЛР9. Штавише, и ИЛ-6-неутрализирајуће антитело и сиРНА срушена АПРИЛ-а су смањили производњу ИгА и Гд-ИгА1 више него што је то учинило само ИЛ-6-неутрализирајуће антитело. Стога, пут активације ТЛР9 укључује синергистичке ефекте ИЛ-6 и АПРИЛ-а на производњу антитела и гликозилацију (Слика 5). Недавне студије су такође показале да ИЛ-6, у комбинацији са АПРИЛ-ом, изазива стварање и преживљавање плазма ћелија.48,49 Међутим, потребна су будућа истраживања да би се разјаснили међућелијски сигнални путеви између АПРИЛ-а и ИЛ-6 у производња нефритогеног ИгА.
цистанцхезабубрегаинфекција
У закључку,Активација ТЛР9погоршала повреду бубрега у мишјем моделу ИгАН повећањем производње аберантно гликозилованог ИгА и формирања ИгГ-ИгА ИЦ. У овом процесу, прекомерна производња АПРИЛ-а и ИЛ-6 изазвана активацијом ТЛР9 повећала је производњу нефритогеног ИгА. Поред тога, ова студија је разјаснила да АПРИЛ и ИЛ-6 функционишу синергистички, као и независно, да би произвели аберантно гликозиловани ИгА. Ови налази могу дати информације о будућем развоју нових терапијских приступа за ИгАН.
Слика 5|Синергистичка улога између Толл-лике рецептора 9 (ТЛР9), лиганда који индукује пролиферацију (АПРИЛ) и интерлеукина (ИЛ)-6 у ћелијама које производе ИгА у ИгА нефропатији (ИгАН). Активација ТЛР9 је изазвала производњу АПРИЛ-а и ИЛ-6, што је резултирало
прекомерна производња аберантног гликозилованог ИгА. АПРИЛ и ИЛ-6 функционишу синергистички како би промовисали стварање аберантног гликозилованог ИгА. Поред тога што АПРИЛ изазива производњу ИЛ-6, као што је раније објављено, ИЛ-6 такође може побољшати синтезу АПРИЛ-а. Штавише, АПРИЛ и ИЛ-6 независно промовишу производњу аберантног гликозилованог ИгА. НФ-кБ, нуклеарни фактор-кБ.
МЕТОДЕ
Животиње и експериментални протоколи
ддИ миш склон ИгАН-у је познати модел спонтаног ИгАН-а са променљивом инциденцом и обимом гломеруларне повреде која имитира људски ИгАН.10 ддИ мишеви су подељени у 3 групе на основу манифестацијеоштећење бубрега: мишеви са раним или касним почетком и мирни мишеви. Болест са раним почетком код ддИ мишева се манифестује протеинуријом и гломеруларним депозитима ИгА након 20 недеља старости.13 Стога смо користили ддИ мишеве у доби од 18 недеља да проценимо да ли је активација ТЛР9 погоршала ИгАН у овом моделу. Укупно 30 женки ддИ мишева (СЛЦ Јапан, Схизуока, Јапан) одржавано је у објекту за животиње Универзитета Јунтендо, Токио, Јапан. Мишеви су храњени редовном храном (Ориентал Иеаст Цо., Токио, Јапан) и водом ад либитум и смештени су у посебну просторију без патогена. Експериментални протокол је одобрила Етичка комисија за експериментисање на животињама Медицинског факултета Универзитета Јунтендо. У доби од 6 недеља, мишеви су насумично подељени у 2 групе. Једна група је примала ЦпГ-ОДН ињектиран ип 3 пута недељно током 12 недеља; другој групи (контролној) је убризган не-ЦпГ-ОДН. ЦпГ-ОДН и не-ЦпГ-ОДН су хемијски синтетизовани (Инвитроген; Тхермо Фисхер Сциентифиц, Канагава, Јапан). Секвенце ОДН-а су ТЦГТЦГТТ ТТЦГГЦГЦГЦГЦГЦЦГ или ТГЦТГЦТТТТГГГГГГЦЦЦЦЦЦ (50/30) за ЦпГ или не-ЦпГ ОДН, респективно.
Одређивање ИгА, ИгГ, ИгГ-ИгА ИЦ и аберантно гликозилованог ИгА у мишјем серуму
Узорци крви су узети из букалне вене. ИгА, ИгГ и ИгГ-ИгА ИЦ у серуму су мерени сендвич ензимским имуносорбентним тестом (ЕЛИСА; Бетхил Лабораториес, Монтгомери, ТКС) коришћењем модификоване методе засноване на нашем претходном извештају.50 Тестови везивања лектина су користи се за приступ гликоформу ИгА. У овом тесту коришћени су биотиниловани РЦА-И (Вецтор Лабораториес, Бурлингаме, Калифорнија) и лектин коре Самбуцус нигра (Вецтор Лабораториес) који су препознали галактозу и сијаличну киселину везану за галактозу (претежно у вези а2,6).51 Разблажени серуми су коришћени у овом тесту. додато је 100 нг ИгА по бунарчићу. Микротитарске плоче обложене са 1 мг/мл козјег анти-мишјег ИгА (100 мл/бажирић) за квантификацију серумског ИгА су инкубиране са овим узорцима, а затим је додат биотиниловани Самбуцус нигра аглутинин или РЦА-И. Примењен је коњугат авидин-пероксидазе рена (ЕктрАвидин; Сигма-Алдрицх, Ст. Лоуис, МО). Нивои аберантно гликозилованог везаног ИгА у серуму су изражени у јединицама (1 јединица као оптичка густина 1.0 мерена на 490 нм). Нивои АПРИЛ и БАФФ у серуму су мерени коришћењем комплета АПРИЛ ЕЛИСА за миша (МиБиоСоурце, Сан Диего, ЦА) и БАФФ ЕЛИСА комплета за миша (Р&Д Системс, Миннеаполис, МН), у складу са протоколима произвођача.
Тест за Гд-ИгА1 произведен од ћелија које луче хумани ИгА{2}}
Сендвич ЕЛИСА за Гд-ИгА1 је конструисана коришћењем Гд-ИгА1–специфичног антитела (ИБЛ, Јапан).52 Гд-ИгА1–специфично антитело (7,5 мг/мл) разблажено у физиолошком раствору пуферованом фосфатом је обложено на ЕЛИСА плочу током 18 сати на собној температури. Узорци су примењени и инкубирани 2 сата на собној температури. Плоче су испране и инкубиране 2 сата на собној температури са 1:1000- разблаженим мишјим анти-хуманим ИгА1 а1--специфичним моноклонским антителом (Соутхерн Биотецх, Бирмингхам, АЛ). Након испирања, плоче су развијене раствором СИГ-МАФАСТ о-фенилендиамина (Сигма-Алдрицх), а реакција је заустављена додатком 1 М сумпорне киселине (Вако, Осака, Јапан). Нивои Гд-ИгА1 су екстраполирани позивањем на стандардну криву (4-параметарско прилагођавање логистичке криве) оптичке густине на 490 нм и изражене у јединицама. Ензимски генерисани Гд-ИгА1 из ИгА152 људске плазме је серијски разблажен (1,37–1000 нг/мл) да би се добила стандардна крива. У овој студији, 1 јединица је дефинисана као 1 нг/мЛ стандардног Гд-ИгА1.52
Процена оштећења бубрега код ддИ мишева
Бубрезиwere removed after perfusion with normal saline solution. Renal tissue specimens for microscopic examination were fixed in 20% formaldehyde, embedded in paraffin, cut into 3-mm-thick sections, and then stained with periodic acid–Schiff. Specimens were quantitatively analyzed to determine the percentage of glomeruli with segmental and global sclerosis and/or mesangial cell proliferation and/or increase in the mesangial matrix. Each section was scored semiquantitatively for percentages of glomeruli with aforementioned lesions (0, 0%; 1, 1% to 24%; 2, 25% to 49%; and 3, >50 процената од 20 гломерула).13,53,54 Укупан максимални резултат за сваку секцију био је 9. Узорци бубрега за имунофлуоресценцију су уроњени у једињење оптималне температуре резања (Сакура Финетек Јапан Цо., Токио, Јапан) и чувани на –80 степени. Узорци су исечени на делове дебљине 3- мм, фиксирани ацетоном на -20 степени у трајању од 5 минута, испрани физиолошким раствором пуферованим фосфатом, блокирани блокатором (ДС Пхарма Биомедицал Цо., Осака, Јапан) на собној температури 30 минута, а затим инкубирано на собној температури 2 сата са следећим примарним антителима: козји анти-мишји ИгА, Алека коњуговани козји анти-мишји ИгГ и пацовски анти-Ц3 (Бетхил Лабораториес). После још 3 испирања физиолошким раствором пуферованим фосфатом, плочице су монтиране са медијумом за монтажу (Дако, Токио, Јапан). Узорци су анализирани и снимљени коришћењем конфокалне ласерске микроскопије (Олимпус Цорпоратион, Токио, Јапан).
Квантитативна ланчана реакција полимеразе у реалном времену
РНК из ћелија слезине је екстрахована коришћењем Торизол раствора (Инвитроген, Токио, Јапан) и пречишћена са РНеаси Мини Кит (74106; Киаген, Валенсија, Калифорнија). Квантитативна ланчана реакција полимеразе у реалном времену изведена је коришћењем система ланчане реакције полимеразе у реалном времену Апплиед Биосистемс 7500 помоћу СИБР Греен ПЦР Мастер Мик-а (Апплиед Биосистемс, Токио, Јапан) и специфичних прајмера: мишји ТЛР9 прајмер ТЦТЦЦЦААЦАТГГТТЦТЦЦГТЦГ, реверзни прајмер ТЦТЦЦЦААЦАТГГТТЦТЦЦГТЦГ; реверзни прајмер ТТЦТЦЦАГ миш МиД88 унапред прајмер ГЦАЦЦТГТГТЦТГГТЦЦАТТ, реверзни прајмер ЦТГТТГГА ЦАЦЦТГГАГАЦА; и предњи прајмер гена за одржавање глицералдехид-3-фосфат дехидрогеназе ЦАТТГТГГААГ ГГЦТЦАТГА, реверзни прајмер ТЦТТЦТГГГТГГЦАГТГАТГ. Услови амплификације су били следећи: претходно загревање на 95 степени у трајању од 20 секунди, а затим 40 циклуса денатурације на 95 степени у трајању од 3 секунде, и жарење и екстензија на 60 степени током 30 секунди. Тестови експресије ТакМан гена специфични за Хомо сапиенс (Лифе Тецхнологиес, Царлсбад, Калифорнија) су купљени за прајмер АПРИЛ, Хс{15}}г1, Мм03809849-с1 и БАФФ, Мм01168134-м1 . Услови циклуса ланчане реакције ТакМан полимеразе били су следећи: претходно загревање на 95 степени у трајању од 20 секунди, а затим 40 циклуса денатурације на 95 степени у трајању од 3 секунде, и жарење и продужење на 60 степени у трајању од 30 секунди
Ин витро студије са спленоцитима ддИ мишева
Спленоцити су култивисани у медијуму Росвелл Парк Мемориал Институте-1640 са додатком 20 процената феталног телећег серума, 100 мг/мл стрептомицина и 100 У/мл пеницилина. Црвена крвна зрнца су лизирана у пуферу за лизирање црвених крвних зрнаца (Р7757; Сигма-Алдрицх) на собној температури 1 минут, након чега је уследило прање у медијуму Росвелл Парк Мемориал Институте–1640.50 Ћелијске културе су држане у влажном инкубатору на 37 степени са 5 процената ЦО2. ЦпГ-ОДН класе Ц (ТЦГТЦГТТТТЦГГЦГЦГЦГЦЦГ) је коришћен као лиганд ТЛР9. Рекомбинантно ИЛ-6, анти-ИЛ-6 антитело и контрола изотипа ИгГ1 пацова добијени су од Р&Д Системс. Ћелије су култивисане или са медијумом или са препорученим концентрацијама ЦпГ-ОДН, 10 нг/мл рекомбинантног ИЛ-6 и 100 нг/мл анти-ИЛ6 антитела. ИгА, аберантно гликозиловани ИгА, ИгГ-ИгА ИЦ и АПРИЛ произведен од спленоцита мерени су ЕЛИСА после 72-часовне инкубације ин витро.
Ин витро студије са ћелијским линијама које луче хумани ИгА{0}}
Б ћелије из крви здраве особе су овековечене Епстеин-Барр вирусом, субклониране да би се добиле ћелијске линије које луче ИгА1- и култивисане како је описано.9 Штавише, потврдили смо експресију рецептора за АПРИЛ/БАФФ и ИЛ -6. Ћелије су узгајане у медијуму Росвелл Парк Мемориал Институте–1640 са додатком 20 процената феталног телећег серума, стрептомицина и пеницилина у влажном инкубатору на 37 степени са 5 процената ЦО2. ЦпГ-ОДН класе Б (ТЦГТЦГТТТТГТЦГТТТТГТЦГТТ) је коришћен као ТЛР9 лиганд. Рекомбинантно ИЛ-6, рекомбинантно АПРИЛ, анти-ИЛ-6 антитело и контролно антитело козјег ИгГ добијени су од Р&Д Системс. Ћелије су култивисане са средњом или препорученом концентрацијом ЦпГ-ОДН, 50 нг/мл рекомбинантног ИЛ-6, 40 нг/мл рекомбинантног АПРИЛ и 100 нг/мл анти-ИЛ-6 антитела током 72 сата
Вестерн блоттинг
Супернатанти из ћелија које луче ИгА{0}} су раздвојени електрофорезом натријум додецил сулфат-полиакриламидног гела у редукционим условима коришћењем 5 до 15 процената градијентних плочастих гелова. Гелови су пребачени на поливинилиден дифлуоридне мембране и инкубирани са антителима специфичним за АПРИЛ (Абцам Инц., Цамбридге, МА) и глицералдехид-3-фосфат дехидрогеназом (Абцам Инц). Мрље су визуелизоване хемилуминисценцијом коришћењем побољшане хемилуминисценције (ГЕ Хеалтхцаре, Токио, Јапан) и детектора луминисценције (Коница Минолта Хеалтхцаре, Токио, Јапан). Резултати су процењени дензитометријски.
АПРИЛ сиРНА нокдаун
Ћелије које луче хумани ИгА1- су култивисане у 24-плочама за културу бунара и трансфектоване са АПРИЛ специфичном сиРНА (ГС8741, Киаген) или сиРНА нециљаном контролом (ГС10673, Киаген) коришћењем протокола трансфекције према упутствима произвођача . После инкубације од 24 сата, ћелије су инкубиране са 50 нг/мл рекомбинантног ИЛ-6 (Р&Д Системс) током 72 сата. После инкубације, ћелије и супернатанти су сакупљени за мерење ИгА и Гд-ИгА1.
Статистичка анализа
Корелација између различитих параметара анализирана је анализом варијансе. Подаци су изражени као средња вредност ± СД или средње вредности. П вредности < {{0}}.05="" сматране="" су="" статистички="" значајним.="" све="" статистичке="" анализе="" су="" обављене="" коришћењем="" грапхпад="" присм="" верзије="" 6.0="" за="" виндовс="" (грапхпад="" софтваре,="" сан="" диего,="">
цистанцхезабубрегасимптоми болести
ОТКРИВАЊЕ
Сви аутори су се изјаснили да нема супротстављених интереса.
ЗАХВАЛНИЦЕ
Ова студија је делимично подржана од стране ЈСПС КАКЕНХИ Грант бр. 18К08252 и Пројекта практичног истраживања за бубрежне болести Јапанске агенције за медицинска истраживања и развој, АМЕД. ЈН и БАЈ су делимично подржани грантовима Националног института за здравље ДК078244 и ДК082753. Захваљујемо се госпођи Теруми Шибати на одличној техничкој помоћи. Такође се захваљујемо госпођи Такако Икегами и госпођи Томоми Икеда (Одељење за молекуларна и биохемијска истраживања, Висока медицинска школа Универзитета Јунтендо) и госпођи Тамами Саканисхи (Одсек за ћелијску биологију, Висока медицинска школа Универзитета Јунтендо) на њиховој одличној техничкој помоћи .
ДОДАТНИ МАТЕРИЈАЛ
Додатни фајл (ПДФ)
Слика С1. Б ћелије и дендритичне ћелије (ДЦ) активиране ЦпГ-олигодеоксинуклеотидом (ОДН) додатно повећавају производњу ИгА. Б ћелије и ДЦ су изоловани из слезине ддИ мишева. ЦпГ-ОДН стимулација је повећала производњу ИгА у изолованим Б ћелијама. Ово повећање је додатно побољшано заједничком култивацијом Б ћелија са ДЦ. *П < 0.05.="" детаљне="" методе="" су="" дате="" у="" додатним="" методама.="" допунске="">
РЕФЕРЕНЦЕ
1. Миетте ЈР, Кано Т, Сузуки Х, ет ал. Циљано антитело за лиганд који индукује пролиферацију (АПРИЛ) је сигуран и ефикасан третман мишје ИгА нефропатије. Киднеи Инт. 2019;96:104–116.
2. Леви М, Бергер Ј. Светска перспектива ИгА нефропатије. Ам Ј Киднеи Дис. 1988;12:340–347.
3. Д'Амицо Г. Најчешћи гломерулонефритис на свету: ИгА нефропатија. КЈ Мед. 1987;64:709–727.
4. Феехалли Ј, Беаттие ТЈ, Бренцхлеи ПЕ, ет ал. Секвенцијално проучавање ИгА система у релапсирајућој ИгА нефропатији. Киднеи Инт. 1986;30:924–931.
5. Виатт РЈ, Јулиан БА. ИгА нефропатија. Н Енгл Ј Мед. 2013;368:2402–2414.
6. Сузуки Х, Иасутаке Ј, Макита И, ет ал. ИгА нефропатија и ИгА васкулитис са нефритисом имају заједничку карактеристику која укључује патогенезу оријентисану на ИгА1- са недостатком галактозе. Киднеи Инт. 2018;93:700–705.
7. Глассоцк РЈ. Анализа активности антитела код ИгА нефропатије. Ј Цлин Инвест. 2009;119:1450–1452.
8. Молдовеану З, Виатт РЈ, Лее ЈИ, ет ал. Пацијенти са ИгА нефропатијом имају повећан ниво ИгА1 са недостатком галактозе у серуму. Киднеи Инт. 2007;71: 1148–1154.
9. Сузуки Х, Молдовеану З, Халл С, ет ал. Ћелијске линије које луче ИгА1- пацијената са ИгА нефропатијом производе аберантно гликозиловане ИгА1. Ј Цлин Инвест. 2008;118:629–639.
10. Имаи Х, Накамото И, Асакура К, ет ал. Спонтано гломеруларно таложење ИгА код ддИ мишева: животињски модел ИгА нефритиса. Киднеи Инт. 1985;27:756–761.
11. Оказаки К, Сузуки И, Отсуји М, ет ал. Развој модела ране ИгА нефропатије. Ј Ам Соц Непхрол. 2012;23:1364–1374.
12. Нисхие Т, Мииаисхи О, Азума Х, ет ал. Развој болести налик нефропатији имуноглобулина А код мишева са недостатком бета-1,4-галактозилтрансферазе-И. Ам Ј Патхол. 2007;170:447–456.
13. Сузуки Х, Сузуки И, Иаманака Т, ет ал. Скенирање целог генома у новом моделу ИгА нефропатије идентификује локус осетљивости на мишјем хромозому 10, у региону синтетичном за људски ИГАН1 на хромозому 6к22-23. Ј Ам Соц Непхрол. 2005;16:1289–1299.
14. Такеи Т, Иида А, Нитта К, ет ал. Повезаност једнонуклеотидних полиморфизама у генима селектина и имуноглобулинске А нефропатије. Ам Ј Хум Генет. 2002;70:781–786.
15. Гхарави АГ, Иан И, Сцолари Ф, ет ал. ИгА нефропатија, најчешћи узрок гломерулонефритиса, повезана је са 6к22-23. Нат Генет. 2000;26:354–357.
16. Сузуки Х, Сузуки И, Нарита И, ет ал. Толл-лике рецептор 9 утиче на тежину ИгА нефропатије. Ј Ам Соц Непхрол. 2008;19:2384–2395.
17. Наката Ј, Сузуки И, Сузуки Х, ет ал. Промене у нефритогеном серуму са недостатком галактозе ИгА1 у ИгА нефропатији након тонзилектомије и терапије стероидима. ПЛоС Оне. 2014;9:е89707.
18. Сато Д, Сузуки И, Кано Т, ет ал. Експресија ТЛР9 крајника и ефикасност тонзилектомије са стероидном пулсном терапијом код пацијената са ИгА нефропатијом. Трансплантација Непхрол Диал. 2012;27:1090–1097.
19. Цоппо Р, Цамилла Р, Аморе А, ет ал. Експресије рецептора 4 сличне Толл-у су повећане у циркулишућим мононуклеарним ћелијама пацијената са имуноглобулинском А нефропатијом. Цлин Екп Иммунол. 2010;159:73–81.
20. Маигума М, Сузуки И, Сузуки Х, ет ал. Цинк у исхрани је кључни модификатор животне средине у прогресији ИгА нефропатије. ПЛоС Оне. 2014;9: е90558.
21. Каваи Т, Акира С. Сигнализација НФ-каппаБ помоћу Толл-лике рецептора. Трендови Мол Мед. 2007;13:460–469.
22. Кувата Х, Матсумото М, Атарасхи К, ет ал. ИкаппаБНС инхибира индукцију подскупа гена зависних од Толл рецептора и ограничава упалу. Имунитет. 2006;24:41–51.
23. Ростокер Г, Ример ЈЦ, Барнард Г, ет ал. Неравнотеже у серумским проинфламаторним цитокинима и њиховим растворљивим рецепторима: претпостављена улога у прогресији идиопатске ИгА нефропатије (ИгАН) и Хеноцх Сцхонлеин пурпура нефритиса, и потенцијална мета имуноглобулинске терапије? Цлин Екп Иммунол. 1998;114:468–476.
24. Сузуки Х, Рашка М, Иамада К, ет ал. Цитокини мењају ИгА1 О-гликозилацију дисрегулацијом ензима Ц1ГалТ1 и СТ6ГалНАц-ИИ. Ј Биол Цхем. 2014;289:5330–5339.
25. Иамада К, Хуанг ЗК, Рашка М, ет ал. Инхибиција СТАТ3 сигнализације смањује производњу ИгА1 аутоантигена код ИгА нефропатије. Киднеи Инт Реп. 2017; 2: 1194–1207.
26. Сцхнеидер П, МацКаи Ф, Стеинер В, ет ал. БАФФ, нови лиганд из фамилије фактора туморске некрозе, стимулише раст Б ћелија. Ј Екп Мед. 1999;189: 1747–1756.
27. Кирилук К, Ли И, Сколари Ф, ет ал. Откриће нових локуса ризика за ИгА нефропатију имплицира гене укључене у имунитет против цревних патогена. Нат Генет. 2014;46:1187–1196.
28. Хан СС, Ианг СХ, Цхои М, ет ал. Улога члана 13 суперфамилије ТНФ у прогресији ИгА нефропатије. Ј Ам Соц Непхрол. 2016;27:3430–3439.
29. Хики И, Одани Х, Такахасхи М, ет ал. Масена спектрометрија доказује под-О гликозилацију гломеруларног ИгА1 у ИгА нефропатији. Киднеи Инт. 2001;59: 1077–1085.
30. Аллен АЦ, Баилеи ЕМ, Бренцхлеи ПЕ, ет ал. Месангиал ИгА1 у ИгА нефропатији показује аберантну О-гликозилацију: запажања код три пацијента. Киднеи Инт. 2001;60:969–973.
31. Хики И. О-везани олигосахариди ИгА1 зглобног региона: улоге његове аберантне структуре у настанку и/или прогресији ИгА нефропатије. Цлин Екп Непхрол. 2009;13:415–423.
32. Местецки Ј, Томана М, Молдовеану З, ет ал. Улога аберантне гликозилације ИгА1 молекула у патогенези ИгА нефропатије. Киднеи Блоод Пресс Рес. 2008;31:29–37.
33. МцЦартхи ДД, Кујава Ј, Вилсон Ц, ет ал. Мишеви који прекомерно експримирају БАФФ развијају нефропатију зависну од флфлоре, ИгА. Ј Цлин Инвест. 2011;121:3991–4002.
34. Муто М, Манфрои Б, Сузуки Х, ет ал. Стимулација рецептора 9 сличног Толл-у индукује аберантну експресију лиганда који индукује пролиферацију Б ћелијама герминалног центра крајника у ИгА нефропатији. Ј Ам Соц Непхрол. 2017;28:1227–1238.
35. Латз Е, Сцхоенемеиер А, Висинтин А, ет ал. ТЛР9 сигнали након транслокације са ЕР на ЦпГ ДНК у лизозому. Нат Иммунол. 2004;5:190–198.
36. Хорнунг В, Ротхенфуссер С, Бритсцх С, ет ал. Квантитативна експресија мРНА рецептора налик на толл-лике 1-10 у ћелијским подскуповима мононуклеарних ћелија периферне крви човека и осетљивост на ЦпГ олигодеоксинуклеотиде. Ј Иммунол. 2002;168:4531–4537.
37. Кадоваки Н, Хо С, Антоненко С, ет ал. Подгрупе прекурсора људских дендритичних ћелија изражавају различите рецепторе сличне наплати и реагују на различите микробне антигене. Ј Екп Мед. 2001;194:863–869.
38. Хе Б, Ксу В, Сантини ПА, ет ал. Интестиналне бактерије покрећу промену класе имуноглобулина А(2) независног од Т ћелија индукујући секрецију епителних ћелија цитокина АПРИЛ. Имунитет. 2007;26:812–826.
39. Мацкаи Ф, Сцхнеидер П. Креирање БАФФ кода. Нат Рев Иммунол. 2009;9: 491–502.
40. Кунимото ДИ, Нордан РП, Стробер В. ИЛ-6 је моћан кофактор ИЛ-1 у синтези ИгМ и ИЛ-5 у синтези ИгА. Ј Иммунол. 1989;143:2230–2235.
41. Беаглеи КВ, Елдридге ЈХ, Лее Ф, ет ал. Синтеза интерлеукина и ИгА. Људски и мишји интерлеукин 6 индукују високу секрецију ИгА у Б ћелијама ангажованим на ИгА. Ј Екп Мед. 1989;169:2133–2148.
42. Рамсаи АЈ, Хусбанд АЈ, Рамсхав ИА, ет ал. Улога интерлеукина{1}} у одговорима на мукозна ИгА антитела ин виво. Наука. 1994;264:561–563.
43. Нуриева РИ, Цхунг И, Мартинез ГЈ, ет ал. Бцл6 посредује у развоју Т фоликуларних помоћних ћелија. Наука. 2009;325:1001–1005.
44. Похолек АЦ, Хансен К, Хернандез СГ, ет ал. Ин виво регулација развоја Бцл6 и Т фоликуларних помоћних ћелија. Ј Иммунол. 2010;185: 313–326.
45. Јаин С, Парк Г, Спроуле ТЈ, ет ал. Интерлеукин 6 убрзава смртност промовишући прогресију болести налик системском еритематозусу код БКССБ.Иаа мишева. ПЛоС Оне. 2016;11:е0153059.
46. Литинскии МБ, Нарделли Б, Хилберт ДМ, ет ал. ДЦ индукују ЦД40-независну промену класе имуноглобулина кроз БЛиС и АПРИЛ. Нат Иммунол. 2002;3:822–829.
47. Цастигли Е, Вилсон СА, Сцотт С, ет ал. ТАЦИ и БАФФ-Р посредују пребацивање изотипа у Б ћелијама. Ј Екп Мед. 2005;201:35–39.
48. Јоурдан М, Цхен М, Роберт Н, ет ал. ИЛ-6 подржава стварање људских дуговечних плазма ћелија у комбинацији са АПРИЛ или факторима растворљивим у стромалним ћелијама. леукемија. 2014;28:1647–1656.
49. Цху ВТ, Фрохлицх А, Стеинхаусер Г, ет ал. Еозинофили су потребни за одржавање плазма ћелија у коштаној сржи. Нат Иммунол. 2011;12: 151–159.
50. Сузуки Х, Сузуки И, Аизава М, ет ал. Тх1 поларизација код мишје ИгА нефропатије усмерене ћелијама добијеним из коштане сржи. Киднеи Инт. 2007;72: 319–327.
51. Цхинталацхаруву СР, Еманципатор СН. Гликозилација ИгА коју производе мишје Б ћелије мењају Тх2 цитокини. Ј Иммунол. 1997;159:2327–2333.
52. Иасутаке Ј, Сузуки И, Сузуки Х, ет ал. Нови приступ независан од лектина за откривање ИгА1 са недостатком галактозе код ИгА нефропатије. Трансплантација Непхрол Диал. 2015;30:1315–1321.
53. Катафуцхи Р, Кииосхи И, Ох И, ет ал. Гломеруларни скор као прогностичар код ИгА нефропатије: његова корисност и ограничења. Цлин Непхрол. 1998;49:1–8.
54. Баллардие ФВ, Робертс ИС. Контролисано проспективно испитивање преднизолона и цитотоксичних средстава у прогресивној ИгА нефропатији. Ј Ам Соц Непхрол. 2002;13: 142–148.
