Микрофизиолошки системи за рекапитулацију осовине црева и бубрега

Лаура Гиордано,^1,3Силвија Марија Михаила,^1,3Хосеин Еслами Амирабади,^1,2и Росалинде Масерееув

Хроничнибубрегаболест (ЦКД) се обично појављује заједно са другим коморбидитетима, наглашавајући комплексну патофизиологију за коју се сматра да је у великој мери модулисана двосмерним цревимабубрегапреслушавање. Комбиновањем напретка у ткивном инжењерингу, производњи, микрофлуидима и биосензорима, микрофизиолошки системи (МПС) су се појавили као обећавајући приступи за емулацију ин витро међусобне везе више органа, док се баве ограничењима животињских модела. Опонашање (пато)физиолошких стања осовине црева и бубрега ин витро захтева МПС који може да симулира не само ово директно двосмерно преслушавање већ и доприносе других физиолошких учесника као што су јетра и имуни систем. Разговарамо о недавним развојима у овој области који би потенцијално могли да доведу до ин витро моделирања осовине црева и бубрега код ЦКД.

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com

Цистанцхе тубулоса спречава болест бубрега, кликните овде да бисте добили узорак

Хронична болест бубрега: метаболички поремећај са поремећеном интер-органском и међуорганском сигнализацијом

Хроничнибубрегаболест (ЦКД) је најраспрострањенијабубрегаболест и карактерише је постепени губитак функције органа током времена, што нарушава способност филтрирања метаболичких отпадних производа из крви (Оквир 1). Бубрези имају многе високо специјализоване функције, као што су филтрација крви и активна секреција за уклањање метаболичког отпада, реапсорпција есенцијалних хранљивих материја, одржавање запремине крви и хомеостазе електролита, као и метаболичка и ендокрина активност [1].

Сматра се да је сложена и загонетна патофизиологија ЦКД модулисанабубрегаунакрсног преслушавања са више органа и система, посебно путем двосмерне међуорганске комуникације са гастроинтестиналним трактом, која се назива оса црева и бубрега[2]. Људска црева прихватају сложену заједницу микроба који живе у комензалном односу са својим домаћином [3] и дају значајан и јединствен допринос људском метаболому (видети Речник). У симбиози, цревна апсорпција обезбеђује узимање корисних микробних метаболита, док бубрези одржавају хомеостазу тако што излучују потенцијално токсичне метаболичке крајње производе. Супротно томе, отказивање бубрега доводи до акумулације метаболита из цревне микробиоте (тј. уремичних токсина) што доводи до развоја уремичног синдрома. Ова компликација доприноси дисбиози црева која негативно утиче на инфламаторне, ендокрине и неуролошке путеве укључене у настанак и прогресију ЦКД (Оквир 2 и Слика 1)[4]. Све у свему, ЦКД се може посматрати као метаболички поремећај који одражава поремећени проток метаболита и сигналних молекула међу органима и међу органима, праћен прекомерном активацијом имуног система (Слика 2). Сходно томе, централна улога даљинске сигнализације црева и бубрега путем уремичних токсина [5] подиже потребу за даљом карактеризацијом метаболома црева у ЦКД.

традиционално,бубрегаистраживања болести су се у великој мери ослањала на клиничке [6] и студије на животињама [7] које нуде ограничену контролу над експерименталним параметрима и имају велику варијабилност међу врстама. Због недостатка одговарајућих ин витро експерименталних модела, тренутно постоји императивна потреба за системима ћелијске културе који могу да обухвате различите аспекте ин виво функције органа коришћењем високо контролисаних и специјализованих микроокружења културе, укључујући 3Д скеле и микрофлуидику [8 ]. С обзиром на напредак у вишећелијском култивисању и биопроизводњи, интеграцију функција за праћење у реалном времену и независну контролу експерименталних параметара, хватање сложености људске физиологије ин витро је свакако на видику. Пружамо свеобухватан преглед најзначајнијих и најскоријих напретка у области 3Д ин витро модела и истичемо њихову релевантност за развој 3Д двосмерног система осовине црева и бубрега. Такође разговарамо о главним препрекама које оне носе, како их превазићи и нудимо нове увиде у тренутни правац ове области у контексту ЦКД.

Микрофизиолошки модели за разоткривање сложених интерконекција органа

Појава социолошких система за микрографију (МПС), који се такође називају орган на чипу (ООЦ), створио је нове могућности за проучавање физиолошких процеса укључених у појединачне органе и међуорганско преслушавање. Појављује се низ различитих мулти-МПС који подржавају приступ „физиом на чипу“ за симулацију функционалних јединица органа, као и преслушавање између њих, уместо да имају за циљ да репродукују комплетан орган(е). Са техничког становишта, МПС се често састоје од једног или више микрофлуидних канала са димензијама попречног пресека од стотина микрометара у којима се (ре)круже мале запремине (нанолитари до микролитра). Обезбеђивањем блиског контакта између ћелија, ове запремине омогућавају да се ухвати динамичка интеракција ћелија-ћелија уз обезбеђивање минималне потрошње реагенса и разблаживања једињења [9,10]. Додатни ламинарни ток може континуирано снабдевати ћелије свежим хранљивим материјама и кисеоником док истовремено уклања отпадне производе и може да генерише прецизне просторно-временске хемијске и механичке градијенте у њиховој близини [11]. Физичка изолација различитих аналога ткива постиже се раздвајањем у микроканале одвојене танким порозним мембранама или слојевима екстрацелуларног матрикса (ЕЦМ) [12].

Стварање платформе плућа на чипу, у којој су комбиновани механички напор и више типова ћелија да би опонашали дисање плућа, било је пионир у развоју биолошки инспирисаних МПС [13]. Од тада је напредак у микрофлуидном руковању омогућио повезивање различитих модела органа и контролу њиховог преслушавања унутар једног или више уређаја [14,15]. Најновија дешавања у овој области подстичу нас да разговарамо о овим напретцима у вези са моделирањем црева-бубрегаосе у ЦКД и истражити захтеве МПС-а за подршку међуорганској комуникацији, такође узимајући у обзир синергистички приступ њиховог комбиновања унутар силико модела.

На путу до реплицирања осовине црева и бубрега помоћу МПС-а

Интегрисањем микрофлуидике, ткивног инжењеринга и микроелектромеханичких система успостављено је неколико система „гут-он-а-цхип“. Међу најрепрезентативнијим конфигурацијама, гут-он-а-цхип са Института Висс (САД) успешно је емулирао динамично људско цревно микроокружење кроз примену физиолошки релевантних течности и механичких сила налик на перисталтику, а ове су подржале диференцијацију ћелија у ресице. - и структуре налик крипти, формирање дебелог епителног монослоја и побољшана ћелијска функција (Слика 3А) [16–19]. Недавно су се тополошке карактеристике појавиле као кључне за усмеравање функције ћелије, али само неколико студија је покушало да реплицира архитектуру крипто-вилуса у микрофлуидним системима који се сада могу лако добити путем 3Д стереолитографије високе резолуције [20], фотолитографије [21]. ], и микро-преливање умрежених хидрогелова [22]. Тренутно, опонашање структура налик цревним тубулима решава се култивисањем цревних ћелија на апикалној страни система мембране од шупљих влакана са пер фузибилним [23,24] или у лумену микроканала [25]. Додавање ЕЦМ премаза и једносмерног апикалног сабрата резултирало је фенотипом зрелог цревног тубула са структурама сличним ресицама. Изложеност токсину А који лучи Цлостридиум диффициле, природном фактору вируленције становника црева и дисруптору цревне баријере код дисбиозе, или метаболиту који потиче из цревне микробиоте, п-крезолу, резултирало је повећаном пермеабилности баријере [23,24]. Истовремено, п-крезол је конвертован у п-крезил сулфат и п-крезил глукуронид, крајње метаболите који се акумулирају у плазми током прогресије ЦКД, вероватно путем метаболизма посредованог цитохромом П450- праћеног коњугацијом, наглашавајући тако допринос црева до биотрансформације метаболита добијених из цревне микробиоте у уремичне токсине [23].

Комплексност и разноврсност цревног епитела може се поуздано рекапитулирати коришћењем 3Д органоида људског ткива [26,27]. Међутим, њихова употреба се показала изазовном јер њихова затворена, споља-унутра конфигурација отежава студије транспорта и излагање комензалним и патогеним бактеријама. Ипак, Тхорне и сарадници су показали да су, кроз ензимску дисоцијацију органоида, примарне цревне ћелије биле у стању да се самоорганизују и де ново сегрегирају у недиференциране или диференциране регионе, формирајући одељке налик ниши [28]. Интеграцијом засебног микроваскуларног ендотела култивисаног под независним сродним и цикличном деформацијом, процењена су својства апсорпције ових ћелија [29,30]. Недавно је показано да укључивање домена крипто-вилуса у епител у облику цеви са перфузибилним луменом одржава стереотипне карактеристике ћелијског узорка са саморегенеративним потенцијалом [31].

Ин витро студија интеракција домаћин-микробиота ометана је немогућношћу конвенционалних модела да одрже одрживу комплексну микробиоту неколико дана. Иако је допринос слоја слузи интеракцијама домаћин-микробиом често занемарен, недавно је показано да интеграција дебелог слоја слузи – делује као физиолошка баријера између бактерија и цревног епитела – може да одложи оштећење баријере и параћелијску пермеабилност [32,33]. Сходно томе, софистицирани микрофлуидни модел, ХуМиКс, омогућио је директну кокултуру анаеробних бактерија и цревних ћелија тако што је уградио функционални слој слузи, као и пулсирајућу супстанцу и механичку стимулацију (Слика 3Б) [34].

Већина цревне микробиоте су обавезни анаероби који захтевају<0.5% o2="" growth="" conditions="" that="" are="" difficult="" to="" represent="" in="" vitro="" [19,35].="" this="" limitation="" was="" overcome="" by="" engineering="" mpss="" that="" incorporate="" physiologic="" oxygen="" gradients="" and="" support="" the="" dynamic="" interaction="" between="" intestinal="" and="" vascular="" endothelial="" layers.="" the="" chip="" consisted="" of="" an="" upper="" anaerobic="" epithelial="" chamber="" and="" a="" lower="" aerobic="" endothelial="" chamber,="" separated="" by="" a="" polydimethylsiloxane="" (pdms)="" membrane.="" through="" a="" radial="" oxygen="" gradient="" generated="" by="" the="" system,="" intestinal="" cells="" were="" oxygenated="" whereas="" anaerobic="" conditions="" allowed="" microbiota="" growth,="" as="" assessed="" by="" real-time="" monitoring="" via="" integrated="" noninvasive="" oxygen="" sensors="" [19,36].="" similar="" physiological="" hypoxia="" conditions="" were="" achieved="" by="" zhang="" and="" coworkers="" who="" cocultured="" oxygen="" super-sensitive="" bacterial="" species="" using="" a="" differently="" designed="" mps,="" the="" gumi="" (figure="" 3c)="" [37].="" this="" platform="" induced="" a="" steep="" oxygen="" gradient="" through="" the="" addition="" of="" a="" long-term="" continuous="" fellow="" of="" anoxic="" apical="" medium="" and="" aerobic="" basal="" media.="" the="" use="" of="" polysulfone,="" which="" unlike="" pdms="" is="" an="" oxygen-impermeable="" material,="" prevented="" any="" oxygen="">

Развојбубрега-он-а-цхип системи су такође били изазовни због недостатка функционалних ћелија за рекапитулацију ин витро вишећелијске структуре и функционалне сложености унутар нефрона. Сходно томе, у односу на уређај гут-он-а-цхип, развој одбубрега-он-а-цхип системи донекле заостају. До данас су развијени модели физиологије гломеруларних, проксималних тубула и дисталних тубула, али остаје да се постигне интеграција свих компоненти у комплетан нефрон-на-чипу [38]. Да буде физиолошки релевантан, поред ћелијске сложености, биомиметикбубрега-он-а-цхип треба да интегрише (и) интеракције ћелија-ћелија као што су оне између подоцита или епителних ћелија проксималних тубула и (микро)васкуларног ендотела, (ии) трансћелијски електрохемијски и осмотски градијенти притиска који покрећу течности и метаболите преко интерстицијални простор, (иии) течност и (ив) структурни распоред бубрежних тубула, као и (в) ћелијске метаболичке и ендокрине функције [38].

Проксимални тубул игра кључну улогу у излучивању метаболичког отпада и реапсорпцији биомолекула и стога је био главни фокус интересовања у развоју ин витробубрега-на-чипу системи који рекапитулирају ин вивобубрегаткива. Развој функционалнихбубрегатубуле које користе ћелије проксималних тубула са биофункционализованим шупљим влакнима омогућиле су Јансену и сарадницима да проучавају секреторни клиренс метаболита добијених из цревне микробиоте. Овај систем је омогућио истраживачима да покажу како, путем даљинског сензора и сигнализације, ћелије проксималних тубула осећају повишене нивое индоксил сулфата и сходно томе прилагођавају експресију транспортера одговорних за њихово излучивање у покушају да одрже стабилне нивое метаболита и хомеостазу [39].

Интерстиције ендотел-интерстицијални простор-епитет регулишу континуирану размену растворених материја између циркулаторног и урина. Лин и сарадници су успешно развили перфузибилни 3Д васкуларизован проксимални тубул који је био у стању да симулира, путем размене растворених материја тубул–васкулатура, активну функцију реапсорпцијебубрега[40]. Овај модел дозвољава количину за сертификацију уноса албумина у бубрезима и реапсорпције глукозе током времена, нудећи обећавајући алат за истраживање (пато)физиолошких функција бубрега и фармакологије. Осим размене раствора,бубрегаинтерстицијски простор се такође сматра централним за развојбубрегафифиброза, обележје ЦКД. Сматра се да је ово узроковано ожиљцима интерстицијалног простора тубула као резултат активације интерстицијалног миофибробласта и накнадног депозиције ЕЦМ. Ипак, само неколико студија је известило о његовој интеграцији у 3Д ин витро системе. Молл и сарадници су известили о валидацији једноставног и високо поновљивог 3Д модела микроокружења тубула/интерстицијума за проучавање фифиброзе бубрега у физиолошки релевантном ин витро систему [41]. Ова студија је користила цисплатин за успешно опонашање акутне тубуларне повреде. Ин витро репликација микроокружења бубрежних тубула/интерстицијума је постигнута коришћењем хуманих дермалних фибробласта уместо реналних фибробласта јер први експримирају ниске нивое фиброзних маркера у базалним условима. Ипак, упркос овом ограничењу, систем је показао да епителне ћелије играју централну улогу у покретању активације и диференцијације миофибробласта. Молл и сарадници су покушали да понове ову студију користећи примарне бубрежне фибробласте, али су наишли на велику варијабилност у резултатима. С обзиром на важност интерстицијалног простора у ЦКД, биће неопходне даље 3Д ин витро студије да би се разјаснила његова улога у настанку и прогресији болести.

Тхебубрезитакође активирају 25(ОХ)витамин Д хидроксилацијом на позицији 1, што доводи до 1,25(ОХ)2витамина Д, есенцијалног хормона који често недостаје код пацијената са ЦКД и који може утицати на састав цревне микробиоте и интегритет баријере. Недавно је на чипу представљен метаболизам у јетри ибубрегаактивација витамина Д је развијена перфузијом медијума који садржи витамин Д у микрофлуидни чип, што сугерише да су сложене међуорганске метаболичке интеракције веома достижне коришћењем МПС технологија [42].

У ЦКД, претпоставља се да смањење производње кратколанчаних масних киселина (СЦФА), допуњено истовременим повећањем производње уремичног токсина и њихове системске акумулације [4], изазива хронично инфламаторно стање које је типично за ЦКД [4,43]. ]. Заиста, СЦФА, посебно бутират, имају и нефропротективне и интестиналне заштитне ефекте [4,44], а високи нивои бутирата су повезани са интегритетом баријере црева и побољшањем имунитета црева као резултат његових антиинфламаторних својстава [45]. Без обзира на то, Трапецар и сарадници су недавно оспорили ово, који су, у психомиметичком приступу, показали да СЦФА могу да погоршају инфламаторни одговор у моделу црева и јетре. Повезивањем две пнеуматске плоче које одвојено представљају црева и јетру, ЦД4 плус Т ћелије и инфламаторне ћелије 17 Т помоћнице (Тх17) могле би да циркулишу унутар и између два одељка. Супротстављени ефекти СЦФА могу бити у корелацији са степеном упале, при чему појачано инфламаторно стање производи штетнији ефекат [46].

Колико знамо, тренутно не постоји МПС који се бави ефектима метаболита добијених из црева на црева,бубрега, или других органа, уз истовремено праћење њихове биотрансформације, у контексту ЦКД. Подешавање чипа за верну рекапитулацију двосмерности производње и токова уклањања метаболита биће изазов. Интегрисање микробиоте добијене из узорака столице пацијената са ЦКД у цревни микрофлуидни систем омогућило би нам да проучавамо промене у микробном метаболизму и анализирамо њихове (ин)директне ефекте на удаљене органе, што је карактеристика која се не може постићи кроз ин виво експерименте.

Технолошки напредак који повећава ин виво транслациону вредност МПС-а Дизајнирање МПС-а је изазовно и захтева мултидисциплинарни приступ. Важно је напоменути да ниједан МПС не може све да уради и, у зависности од апликације, могу бити потребни различити системи. Предности и ограничења доступних система за борбу против црева –бубрегаосе су сумиране у табели 1. Један од најчешћих изазова у овој области је дизајнирање система који је биолошки сложен и довољно технички једноставан да се успостави у лабораторијама ћелијске културе.

Ингбер група (Висс Институте, САД) успоставила је добро оптимизоване протоколе за култивисање ћелија, повезивање микрофлуидних компоненти са чипом и узорковање [16–18,47]. Иако је технолошки напредан, њихов микрофлуидни систем захтева значајну обуку нетехничких оператера, чак и за аутоматске микрофлуидне тестове [47]. Мултиоргански чипови без пумпе, чији је пионир Схулер лабораторија (Универзитет Корнел, САД), као и компаније као што су Хесперос Инц. (Слика 3Е) и ИнСпхеро, повећавају проток на рачун ограничене контроле над колегама и сложеношћу уређаја [48] (хттпс://хесперосинц.цом/). Иако је ограничен у реплицирању биофизичких знакова, МПС који је развила Гриффитх лабораторија (Масацхусеттс Институте оф Тецхнологи, САД) користи конвенционалније протоколе, на пример, омогућавајући директан приступ аналогу ткива и коришћењем модификованих стандардних Трансвелл® уметака (Слика 3Ц, Д) [37,49].

Иновативне компаније имају слично развијене мултиорганске платформе, као што је ТиссУсе®. Њихове пумпе на чипу повезују органе и чине систем мање склоним хватању мехурића и цурењу. Међутим, ови уређаји нуде ограничено микрофлуидно рутирање, на пример, недостаје апикални колега у моделу црева, а прилагођавање модела ткива је тешко.

Други велики изазов је материјал чипа. ПДМС је међу најчешће коришћеним материјалима због своје одличне пропустљивости кисеоника, оптичке јасноће и својстава израде прототипа. Међутим, пропустљивост кисеоника је лоша страна када се култивишу обавезни анаеробни микробиом са цревним ћелијама [20,37]. Приликом тестирања хидрофобних једињења, на пример, у студијама токсичности или ефикасности лекова, ПДМС се не препоручује јер апсорбује мале хидрофобне молекуле. Стога су МПС састављени од инертнијих материјала, који спречавају неспецифично везивање једињења, најпоузданији. На пример, Едингтон и сарадници су развили микрофлуидну платформу на бази полистирена међусобно повезаних МПС-а у покушају да поново креирају физиом на чипу који може да генерише сложене профиле молекуларне дистрибуције за напредне апликације за откривање лекова [50].

Развој платформи са интегрисаним сензорима (кисеоник, уреа, лактат или глукоза) и/или оптичка транспарентност, олакшали су неинвазивну ћелијску аналитику у реалном времену (Оквир 3) [51,52]. Недавно је развијена платформа са потпуно интегрисаним модуларним сензором. Ово управља МПС јединицама на континуалан, динамичан и аутоматизован начин, и укључује физичке сензоре за праћење екстрацелуларног микроокружења, биохемијске сензоре за мерење растворљивих биомаркера, минијатурне микроскопе за хватање морфолошких промена и микрофлуидну плочу за усмеравање течности на време. начин [53].

Рачунарска анализа је такође неопходна да би се утврдило да ли се експериментални подаци добијени МПС-ом могу екстраполирати на ин виво перформансе [54]. Стога би интеграција алгоритама машинског учења (ин силико моделирање) требало да постане стратешка компонента МПС-а [55]. Рачунски модел се може прилагодити како би помогао у решавању ограничења експериментално повезаних МПС-а и довео податке у опсег студија на животињама и екстраполационих метода [54]. Предвиђања добијена из ин силико студија могу пружити повратне информације за даље побољшање МПС модела [55]. На пример, ин силицо студије би се могле користити за моделирање покретљивости имуних ћелија након оштећења цревне баријере и предвиђање понашања ћелија након излагања специфичним параметрима или биомолекулима [56–59].

Закључне напомене и будуће перспективе

Током следећег века, предвиђа се да ће се преваленција ЦКД драстично повећати широм света, што представља значајне економске и друштвене изазове. Без обзира на земљу порекла, утврђено је да се годишњи трошкови здравствене заштите и друштва повећавају паралелно са напредовањем ЦКД [60], наглашавајући хитну потребу за платформом модела болести у којој би се проучавала патофизиологија ХББ и идентификовали потенцијални терапијски циљеви.

Без обзира на то, остаје да се позабави многим изазовима, а неколико питања мора бити решено пре него што се могу развити МПС који тачно моделирају ЦКД (погледајте Нерешена питања). На пример, почетни догађаји који доводе до појаве ЦКД остају непознати, што чини моделирање почетка ЦКД-а у МПС-у изазовним.Бубрегповреде које доводе до развоја ЦКД су различите природе и често укључују кардиоваскуларну компоненту, што додатно отежава њихову заступљеност. Поред тога, састав цревног микробиома је сложен и изазован за репродукцију; без обзира на то, то је суштински услов за модел болести ЦКД. Најновији успешни развој МПС-а који интегрише анаеробне бактерије омогућен је интеграцијом биосензора за детекцију кисеоника, као и укључивањем контролисаних токова и слоја слузи који смањују претерани раст бактерија и ограничавају оштећење цревних ћелија (Табела 1). Међутим, остаје да се постигну широки анаеробни бактеријски конзорцијуми унутар система, иако ће то бити неопходно за физиолошку репрезентацију цревног микробиома. Проблеми са материјалима који апсорбују и ваздух пропуштају такође представљају велику препреку на терену, доводећи у питање прикладност система за раст анаеробних бактерија или за тестирање липофилних једињења. Релевантност међусобне повезаности органа је снажно наглашена у овом прегледу; стога је од кључне важности да се интегришу циркулаторни и имуни системи унутар МПС-а, али они су уграђени у само неколико модела.

Унапређивањем интердисциплинарности, интеграција биоштампања, биоматеријала и биосензора за праћење микроокружења у реалном времену могла би да се позабави анатомским и биохемијским карактеристикама, као и сложеношћу система који су неопходни да би се повећала њихова физиолошка релевантност. Како технологија МПС напредује, заједно са тренутним трендом ка побољшаним мултидисциплинарним приступима, ова питања без одговора ће на крају бити решена.

Признања

Овај пројекат је финансиран из програма ЕУ Хоризонт 2020 за истраживање и иновације у оквиру споразума о гранту Марие Скłодовске Цурие СТРАТЕГИ-ЦКД Х2020-2019-ЕТН (860329), као и позивом ВИДЕСПРЕАД-05-2018-ТВИННИНГ РЕМОДЕЛ (857491). Овај рад су додатно подржали ХоланђаниБубрегФондација (ДКФ, 17ОИ13). РМ је члан радне групе ЕУТок коју подржава ЕСАО/ЕРА-ЕДТА.

Референце

1. Химелфарб, Ј. ет ал. (2020) Садашњи и будући пејзаж дијализе. Нат. Рев. Непхрол. 16, 573–585

2. Евенепоел, П. ет ал. (2017) Гут-бубрегаосовина. Педиатр. Непхрол. 32, 2005–2014

3. Де Сорди, Л. ет ал. (2017) Микробиота црева олакшава промене у генетској разноврсности и инфективности бактеријских вируса. Целл Хост Мицробе 22, 801–808

4. Рукавина Микушић, НЛ и др. (2020) Микробиота црева и хроничнабубрегаболест: докази и механизми који посредују у новом

комуникација у гастроинтестинално-реналној оси. Пфлугерс Арцх. 472, 303–320

5. Нигам, СК и Бусх, КТ (2019) Уремијски синдром хроничнебубрегаболест: измењена даљинска детекција и сигнализација. Нат. Рев. Непхрол. 15, 301–316

6. Окада, Х. ет ал. (2020) Основне тачке из Смерница клиничке праксе засноване на доказима за хроничнеБубрегБолест 2018. Цлин. Екп. Непхрол. 23, 1–15

7. Бецкер, ГЈ и Хевитсон, ТД (2013) Животињски модели хроничнебубрегаболест: корисна, али не савршена. Непхрол. Диал. Трансплант. 28, 2432–2438

8. Фариа, Ј. ет ал. (2019)Бубрег-базирани ин витро модели за испитивање токсичности изазване лековима. Арцх. Токицол. 93, 3397–3418

9. Беебе, ДЈ ет ал. (2002) Физика и примена микрофлуидике у биологији. Анну. Рев. Биомед. инж. 4, 261–286

10. Зханг, Б. ет ал. (2018) Напредак у инжењерству органа на чипу. Нат. Рев. Матер. 3, 257–278

11. Лин, Б. и Левцхенко, А. (2015) Просторна манипулација микрофлуидиком. Фронт. Биоенг. Биотецхнол. 3, 39

12. Иум, К. ет ал. (2014) Физиолошки релевантни органи на чиповима. Биотецхнол. Ј. 9, 16–27

13. Хух, Д. ет ал. (2010) Реконституисање плућних функција на нивоу органа на чипу. наука 328, 1662–1668

14. Лее, СХ и Сунг, ЈХ (2018) Орган-он-а-цхип технологија за репродукцију мултиорганске физиологије. Адв. Хеалтхц. Матер. 7, 1700419

15. Сунг, ЈХ ет ал. (2019) Недавни напредак у системима тело на чипу. Анал. Цхем. 91, 330–351

16. Ким, ХЈ ет ал. (2012) Људско црево на чипу насељено микробном флором која доживљава покрете и проток налик цревној перисталтици. Лаб Цхип 12, 2165–2174

17. Ким, ХЈ и Ингбер, ДЕ (2013) Микроокружење гут-он-а-цхип индукује ћелије црева човека да се подвргну диференцијацији ресица. Интегер. Биол. (Цамб) 5, 1130–1140

18. Ким, ХЈ ет ал. (2016) Допринос микробиома и механичке деформације интестиналном бактеријском прекомерном расту и инфламацији у људском цреву на чипу. Проц. Натл. Акад. Сци. САД 113, Е7–Е15

19. Јалили-Фироозинезхад, С. ет ал. (2019) Сложени микробиом људског црева узгајан у анаеробном цреву на чипу. Нат. Биомед. инж. 3, 520–531

20. Црефф, Ј. ет ал. (2019) Израда 3Д скела које репродукују топографију цревног епитела помоћу 3Д стереолитографије високе резолуције. Биоматеријали 221, 119404