Део 1: Ефлукс магнезијума из ћелија Дросопхила Кенион је критичан за нормално и дуготрајно памћење побољшано исхраном

за више информација:Ali.ma@wecistanche.com

Молимо кликните овде до 2. дела

Ианиинг Ву1, Иосуке Фунато2, Елеонора Месцхи1, Кристијан Д Јованоски1, Хироаки Мики2, Сцотт Вадделл1*

1Центар за неуронска кола и понашање, Универзитет у Оксфорду, Тинслеи Буилдинг, Оксфорд, Уједињено Краљевство; 2Одељење за ћелијску регулацију, Истраживачки институт за микробне болести, Универзитет у Осаки, Суита, Јапан

Сажетак Додатак магнезијума у ​​исхрани (Мг2 плус) може побољшатимеморијакод младих и старих пацова.Меморија-појачавајући капацитет се у великој мери приписује повећању синаптичке густине хипокампуса и повишеној експресији НР2Б подјединице глутаматног рецептора НМДА типа. Овде показујемо да храњење Мг2 плус такође побољшава дугорочномеморијау Дросопхила. Нормал и Мг2 плус - побољшана мувамеморијаизгледа независно од НМДА рецептора у телу печурке и уместо тога захтева експресију конзервираног ЦННМ типа Мг2 плус -ефлукс транспортера кодираног непроширеним (уек) геном. УЕКС садржи претпостављени хомолошки домен који се везује за цикличне нуклеотиде и његова мутација одваја виталну улогу за уек од функције умеморија. Штавише, УЕКС локализација у Кенион ћелијама (КЦ) тела печурке је промењенамеморија-дефектне мушице које садрже мутације у генима везаним за цАМП. Функционално снимање сугерише да је ефлукс зависан од УЕКС-а потребан за споро ритмично одржавање КЦ Мг2 плус. Предлажемо да је регулисани неуронски Мг2 плус ефлукс критичан за нормалан и Мг2 плус -побољшанмеморија.

Кликните да бистеЦистанцхе витамин схоп и Цистанцхе за памћење

Увод

Магнезијум (Мг2 плус) игра кључну улогу у ћелијском метаболизму и сматра се есенцијалним кофактором за више од 350 ензима (Романи и Сцарпа, 2000; Винк и Нецхифор, 2011). Као резултат тога, промене Мг2 плус хомеостазе су повезане са широким спектром клиничких стања, укључујући она која утичу на нервни систем, као што су глауком (ДеТома ет ал., 2014), Паркинсонова болест (Хермосура ет ал., 2005; Хермосура и Гарруто, 2007; Лин ет ал., 2014; Схиндо ет ал., 2016), Алцхајмерова болест (Андра´си ет ал., 2000; Андра´си ет ал., 2005; Циллилер ет ал., 2007; Дурлацх ет ал. ., 1997; Глицк, 1990; Лемке, 1995; Цхуи ет ал., 2011; Вурал ет ал., 2010), анксиозност (Сартори ет ал., 2012), депресија (Вхиттле ет ал., 2011; Мурцк, 2002; Мурцк, 2013; Расмуссен ет ал., 1990; Гхафари ет ал., 2015) и интелектуални инвалидитет (Арјона ет ал., 2014).

Можда изненађујуће, повећање Мг2 плус у мозгу кроз исхрану може побољшати пластичност неурона имеморијаперформансе младих и старијих глодара, мерене у различитим задацима понашања (Слутски ет ал., 2010; Ландфиелд и Морган, 1984; Мицклеи ет ал., 2013; Абумариа ет ал., 2013). Поред тога, повишен Мг2 плус смањио је когнитивне дефиците у мишјем моделу Алцхајмерове болести (Ли ет ал., 2013) и побољшао изумирање сећања на страх (Абумариа ет ал., 2011). Ови очигледно корисни ефекти довели су до предлога да дијететски Мг2 плус може имати терапеутску вредност за пацијенте са различитиммеморија-проблеми у вези (Биллард, 2011).

Упркос великом броју потенцијалних места деловања Мг2 плус у мозгу,меморија-својство побољшања код глодара се углавном приписује повећању синаптичке густине хипокампуса и активности Н-метил-Д-аспартат глутаматних рецептора (НМДАР). Екстрацелуларни Мг2 плус блокира каналне поре НМДАР-а и на тај начин инхибира пролаз других јона (Маиер ет ал., 1984; дигест Пословична изрека 'ти си оно што једеш' савршено сумира концепт да наша исхрана може утицати и на наше менталне и физичко здравље. Знамо да је храна која је добра за срце, попут орашастих плодова, масне рибе и бобичастог воћа, такође добра за мозак. Знамо и да су витамини и минерали неопходни за опште добро здравље. Али да ли постоје докази да би повећање вашег уноса одређених витамина или минерала могло помоћи у јачању вашег мозга?

Иако би могло звучати скоро превише добро да би било истинито, постоје неки докази да је то случај са најмање једним минералом, магнезијумом. Студије на глодарима су показале да додавање додатака магнезијума храни побољшава колико добро животиње обављају задатке памћења. И младе и старе животиње имају користи од додатног магнезијума. Чак и старији глодари са стањем сличним Алцхајмеровој болести показују мањемеморијагубитак када се дају суплементи магнезијума. Али шта је са другим врстама?

Ву ет ал. сада показују да суплементи магнезијума такође повећавају перформансе памћења код воћних мушица. Једна група мува је неколико дана храњена стандардним кукурузним брашном, док је друга група добијала кукурузно брашно са додацима магнезијума. Обе групе су затим обучене да повезују мирис са наградом за храну. Муве које су примиле додатни магнезијум показале су се бољемеморијаза мирис када се тестира 24 сата након тренинга.

Ву ет ал. показују да магнезијум побољшавамеморијау мувама путем другачијег механизма од оног који је раније био пријављен за глодаре. Код глодара, магнезијум је повећао нивое рецепторског протеина за хемикалију у мозгу која се зове глутамат. Насупрот томе, код воћних мушицамеморијапојачање је зависило од протеина који преноси магнезијум из неурона. Муте мутанта којима је недостајао овај транспортер су показале оштећење памћења. За разлику од нормалних мува, оне без транспортера нису показале побољшање памћења након што су јеле храну обогаћену магнезијумом. Резултати сугеришу да транспортер може помоћи у прилагођавању нивоа магнезијума унутар можданих ћелија као одговор на неуронску активност.

Људи производе четири варијанте овог транспортера магнезијума, од којих је свака кодирана различитим геном. Један од ових транспортера је већ био умешан у развој мозга. Налази Ву ет ал. сугеришу да транспортери такође могу деловати у мозгу одраслих да утичу на когницију. Потребне су даље студије како би се тестирало да ли би циљање на транспортер магнезијума могло обећати за лечењемеморијаоштећења.

Бекерс и Стивенс, 1993; Јахр и Стевенс, 1990; Новак ет ал., 1984). Важно је да је претходна неуронска деполаризација, изазвана другим рецепторима трансмитера, неопходна да би се ослободио Мг2 плус блок на НМДАР-у и омогућио прилив Ца2 плус који је повезан са глутаматом. НМДАР, према томе, игра важну улогу у пластичности неурона као потенцијални детектор Хеббиан коинциденција. Акутно повишење екстрацелуларне концентрације Мг2 плус ([Мг2 плус ]е) у физиолошком опсегу (0,8–1,2 мМ) може да антагонизује индукцију дуготрајне потенциације зависне од НМДАР (Дунвиддие и Линцх, 1979; Маленка ет ал., 1992; Маленка и Ницолл, 1993; Слутски ет ал., 2004). Насупрот томе, повећање [Мг2 плус ]е током неколико сати у неуронским културама доводи до побољшања НМДАР посредованих струја и олакшавања експресије ЛТП (Слутски ет ал., 2004). Ефекти повећања [Мг2 плус ]е такође су примећени ин виво у мозгу пацова храњених са Мг2 плус -Л-треонатом (Слутски ет ал., 2010). Хипокампална неуронска кола се подвргавају хомеостатској пластичности (Турригиано, 2008) да би се прилагодили повећаном [Мг2 плус ]е повећањем експресије НМДАР-а који садрже НР2Б подјединице (Слутски ет ал., 2004; Слутски ет ал., 2010). Верује се да већа густина хипокампалних синапси са НР2Б који садрже НМДАР компензује хронично повећање [Мг2 плус ]е тако што повећава НМДАР струје током рафалног пуцања. У прилог овом моделу, мишеви који су генетски конструисани да прекомерно експримирају НР2Б показују побољшани ЛТП хипокампуса и понашањемеморија(Танг ет ал., 1999).

Олфацторимеморијакод Дросопхиле укључује хетеросинаптички механизам вођен јачањем допаминергичких неурона, што резултира пресинаптичком депресијом холинергичких веза између Кенион ћелија (КЦ) тела гљиве (МБ) и излазних неурона тела печурке (МБОН) (Сцхваерзел ет ал., 200 200). ; Асо ет ал., 2010; Асо ет ал., 2012; Цларидге-Цханг ет ал., 2009; Бурке ет ал., 2012; Лиу ет ал., 2012; Плац¸аис ет ал., 2013; Овалд ет ал. ., 2015; Хиге ет ал., 2015; Барнстедт ет ал., 2016; Париссе ет ал., 2016; Асо ет ал., 2014; Освалд и Вадделл, 2015). Поред тога, олфакторне информације се преносе до КЦ холинергичком трансмисијом из неурона мирисне пројекције (Иасуиама ет ал., 2002; Леисс ет ал., 2009). Иако је могуће да се глутамат испоручује у МБ мрежу путем који још није идентификован, тренутно не постоји очигледна локација за пластичност зависну од НМДАР у познатој архитектури холинергичких улазних или излазних слојева (Барнстедт ет ал., 2016. ). Мува, стога, пружа потенцијални модел за истраживање других механизама путем којих би се Мг2 плус у исхрани могао побољшатимеморија.

Појачавајући ефекти допамина зависе од допаминског рецептора типа Доп1Р Д1- (Ким ет ал., 2007; Кин ет ал., 2012; Хандлер ет ал., 2019), који је позитивно повезан са производњом цАМП (Томцхик и Давис, 2009; Бото ет ал., 2014). Штавише, ране студије на Дросопхили идентификовале су цАМП фосфодиестеразу кодирану дунце и рутабагу и аденилат циклазу стимулисану типом И Ца2 плус, респективно, као битне за мирис.меморија(Дудаи ет ал., 1976; Биерс ет ал., 1981; Дудаи и Зви, 1984; Цхен ет ал., 1986; Ливингстоне ет ал., 1984; Левин ет ал., 1992). Студије на ћелијама сисара су показале да хормони или агенси који повећавају ћелијски цАМП ниво често изазивају значајну екструзију Мг2 плус зависну од На плус у екстрацелуларни простор (Романи и Сцарпа, 1990б; Романи и Сцарпа, 1990а; Романи и Сцарпа, 2000; Винк и Нечифор, 2011; Ворман и Гинтер, 1987). Међутим, нејасно је да ли екструзија Мг2 плус игра било какву улогу у обради у меморији.

Овде показујемо да је Дросопхила дугорочнамеморија(ЛТМ) се може побољшати исхраном Мг2 плус суплементацијом. Открили смо да је непроширени (уек) (Маеда, 1984; Цоултхард ет ал., 2010) ген, који кодира функционални ортолог муве протеина Цицлин М2 Мг2 плус -ефлукса (ЦННМ) сисара, критичан замеморија-побољшавање својства Мг2 плус. УЕКС функција у МБ КЦ-овима је потребна за ЛТМ, а функционална рестаурација уек-а открива да је МБ кључно место за побољшање меморије зависно од Мг2 плус. Хронично мењање цАМП метаболизма увођењем мутација у днц или рут генима мења ћелијску локализацију УЕКС-а. Штавише, мутирање домена очуване цикличне нуклеотидне-везујуће хомологије (ЦНБХ) у УЕКС одваја суштинску улогу за уек од његове функције у меморији. УЕКС вођен Мг2 плус ефлукс је неопходан за споро ритмичко одржавање нивоа КЦ Мг2 плус што сугерише потенцијалну улогу обраде Мг2 плус тока у меморији.

Резултати

Мг2 плус храњење побољшава ЛТМ мува дивљег типа

Претходне студије су објавиле да је храњење пацова храном која садржи високу концентрацију Мг2 плус - побољшало њихову способност учења и памћења (Слутски ет ал., 2010; Ландфиелд и Морган, 1984; Абумариа ет ал., 2011; Мицклеи ет ал., 2013; Абумариа ет ал., 2013). Стога смо тестирали да ли слични ефекти постоје код мува тако што смо их хранили храном која садржи високу концентрацију Мг2 плус пре тренинга. Изненађујуће, муве дивљег типа које су храњене 4 дана пре тренинга храном са додатком магнезијум хлорида (МгЦл2) показале су значајно побољшане перформансе памћења 24 сата. Побољшање памћења зависи од концентрације и било је максимално када је храна додата 80 мМ МгЦл2 (слика 1А). Непосредне перформансе меморије нису очигледно побољшане (слика 1Б). Ефекат појачавања МгЦл2 такође је примећен код мува храњених магнезијум сулфатом (МгСО4), али не и калцијум хлоридом (ЦаЦл2) (слика 1Ц). Поред тога, храњење мува током 4 дана храном која садржи између 5 и 80 мМ стронцијум хлорида (СрЦл2) резултирало је високим нивоом смртности, а муве које су преживеле храњење са 5 мМ СрЦл2 нису показале побољшане тренутне или 24-часовне перформансе меморије (подаци нису приказани) . Ефекти побољшања памћења се стога могу посебно приписати суплементацији двовалентног Мг2 плус у исхрани.

Мг2 плус -појачана меморија је независна од НМДАР-а у телима печурака

Пошто је побољшано памћење магнезијум-Л-треоната код пацова било у корелацији са повећањем регулације хипокампалних НР2Б подјединица које садрже НМДАР (Слутски ет ал., 2010), тестирали смо промене у експресији глутаматног рецептора код мува храњених МгЦл2. РТ-кПЦР анализе нису откриле значајну разлику у обиљу мРНК за наводне НМДА (Нмдар1, Нмдар2), АМПА (ГлуРИА) или каинат тип (ГлуРИИА) рецепторе у главама узетим од мува храњених 4 дана са 80 мМ МгЦл2 у односу на оне који су храњени са 1 мМ МгЦл2 (слика 1Д).

Затим смо директно тестирали да ли је меморија побољшана Мг2 плус захтевала функцију НМДАР, тако што смо срушили експресију Нмдар1 или Нмдар2 гена користећи трансгену интерференцију РНК коју покреће УАС

Слика 1. Мг2 плус додатак исхрани побољшава дугорочну меморију Дросопхиле. (А) Муве дивљег типа су обучене и тестиране на 24-часовно памћење апетита након 1-5 дана ад либитум храњења храном допуњеном Мг2 плус. Памћење је значајно побољшано код мува које су храњене 4 дана са 80 мМ МгЦл2, у поређењу са онима које су храњене са 1 мМ. 80 мМ МгЦл2 производи незнатно веће перформансе од 50 мМ или 100 мМ и тако се сматра оптималним (звездице означавају п<0.05, t-test="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" groups="" for="" each="" time="" point,="" n="6–8)." (b)="" 4="" days="" of="" 80="" mm="" mgcl2="" food="" did="" not="" enhance="" immediate="" memory.="" (c)="" appetitive="" 24="" hr="" memory="" was="" enhanced="" by="" feeding="" wild-type="" flies="" for="" 4="" days="" with="" mgcl2="" and="" mgso4,="" but="" not="" cacl2.="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05, anova,="" n="6)" between="" mg2+="" fed="" and="" plain="" groups.="" (d)="" rt-qpcr="" showed="" no="" significant="" differences="" in="" glutamate="" receptor="" mrna="" expression="" between="" 1="" mm="" and="" 80="" mm="" fed="" flies="" (t-test,="" n="5)." (e)="" c739-gal4;="" uas-magfret-1="" flies="" were="" fed="" for="" 4="" days="" on="" food="" supplemented="" with="" mg2+.="" brains="" were="" dissected="" and="" fixed="" and="" a="" fluorescence="" emission="" ratio="" measurement="" (citrine/cerulean)="" was="" taken="" as="" an="" indicator="" of="" [mg2+]i.="" the="" magfret="" signal="" was="" significantly="" greater="" in="" the="" ab="" lobes="" of="" flies="" fed="" with="" 80="" mm="" mgcl2="" than="" those="" fed="" with="" 1="" mm="" mgcl2=""><0.05, t-test,="" n="52–60)." unless="" otherwise="" noted,="" all="" data="" are="" mean="" ±="" standard="" error="" of="" the="" mean="" (sem).="" asterisks="" denote="" significant="" differences=""><0.05), individual="" data="" points="" displayed="" as="" open="">

Интернет верзија овог чланка укључује следеће додатке за слику 1:

Додатак за слику 1. Обарање Н-метил-Д-аспартат глутаматног рецептора (НМДАР) у телима печурака не нарушава Мг2 плус побољшано памћење.

(РНАи) конструкти (Диетзл ет ал., 2007; Перкинс ет ал., 2015). Од две независне УАС-Нмдар1Р-НАи и четири УАС-Нмдар2РНАи линије које смо тестирали, само једна Нмдар1РНАи (БДСЦ 25941) линија, када је покретана у свим неуронима неуронским Синаптобревин (нСиб)-ГАЛ4, показала је значајно смањене перформансе 24 сата меморије, као у поређењу са хетерозиготним контролним мувама (слика 1—додатак слике 1А). Насупрот томе, селективнија експресија овог УАС-Нмдар1РНАи у аб КЦ-овима релевантним за ЛТМ коришћењем ц739-ГАЛ4 није значајно нарушила перформансе меморије од 24 сата (Слика 1—додатак слике 1Б). Штавише, муве које експримирају Нмдар1РНАи у аб неуронима задржале су робусну Мг2 плус побољшану меморију (Слика 1 - додатак на слици 1Ц). Ови резултати сугеришу да Мг2 плус памћење не мења експресију глутаматних рецептора, нити захтева функцију НМДАР у аб КЦ.

Концентрација Мг2 плус у аб неуронима је повишена код мува које су храњене високим Мг2 плус Користили смо МагФРЕТ, први генетски кодирани флуоресцентни Мг2 плус сензор (Линденбург ет ал., 2013), да бисмо тестирали да ли храњење Мг2 плус мења интрацелуларну концентрацију Мг2 плус ([Мг2 плус ]и). Конструисали смо муве које садрже УАС-МагФРЕТ-1 трансген и комбиновали га са ц739-ГАЛ4 да бисмо изразили МагФРЕТ- 1 у аб КЦ. Упоредили смо ФРЕТ сигнале у фиксним мозговима из ц739; УАС-МагФРЕТ-1 мушице храњене храном од 1 мМ или 80 мМ МгЦл2 током 4 дана. МагФРЕТ сигнал је био значајно већи и код а и б колатерала аб КЦ мува храњених са 80 мМ, него код оних храњених са 1 мМ (слика 1Е). Овај резултат указује да храњење Мг подиже неуронски [Мг2 плус ]и. Имајући у виду афинитет МагФРЕТ-1 (Кд=148 мМ) и ~50 процената повећања ФРЕТ сигнала након везивања Мг2 плус (Линденбург ет ал., 2013), процењујемо да је повећање од ~8 процената МагФРЕТ сигнал измерен код мува храњених 80 мМ МгЦл2 одговара приближно 50 мМ повећању аб КЦ [Мг2 плус ]и у просеку.

Непроширени кодирани транспортер Мг2 плус типа ЦННМ има улогу у меморији

Идентификовали смо непроширени (уек; Маеда, 1984; Цоултхард ет ал., 2010) као апетитивни ЛТМ који мења ген, ојачан наградом сахарозе. Муве са уекМИ01943 МиМИЦ уметањем (Венкен ет ал., 2011) показале су јак дефект у 24-часовној меморији, али њихов учинак одмах након тренинга није се могао разликовати од оних контрола дивљег типа. Детаљнија анализа мува уекМИ01943 открила је постојано распадање памћења које је прво постало значајно другачије од оног код мува дивљег типа 12 сати након тренинга (слика 2А). Код хетерозиготних уекМИ01943/ плус мува није евидентан дефект памћења, што показује да је овај наводни полни алел рецесиван.

уек је привукао нашу пажњу јер је то један ортолог мухе од четири људска ЦННМ гена који кодирају Мг2 плус транспортере (Исхии ет ал., 2016), а такође садржи наводни ЦНБХ домен који је структурно повезан са онима у цикличким нуклеотидима канала (Заготта ет ал., 2003; Флинн ет ал., 2007; Кестерс ет ал., 2015). Поравнање УЕКС секвенце од 834 аминокиселине са ЦННМ1-4 открива посебно високу конзервацију секвенце са ЦННМ2 и ЦННМ4 у ДУФ21, ЦБС пару и ЦНБХ доменима (Слика 2—додатак слике 1А–Ц). Стога смо претпоставили да УЕКС има потенцијал да повеже ефекте побољшања памћења дијеталног Мг2 плус са пластичношћу неурона зависном од цАМП.

Although uexMI01943 is assigned to the uex gene, the MiMIC element is annotated to lie 17 kb downstream of the uex coding region (Venken et al., 2011; Figure 2B). RYa (Yoon et al., 2016) is the next nearest gene to uexMI01943 but is >230 кб даље. Прво смо потврдили локацију МиМИЦ-а инверзним ПЦР-ом (Аттрилл ет ал., 2016). Важно је да код ових мува није откривено додатно уметање МиМИЦ-а. Затим смо тестирали да ли је уекМИ01943 одговоран за дефект меморије прецизним уклањањем МиМИЦ елемента ексцизијом посредованом Минос транспозазом (Арца` ет ал., 1997; Слика 2 - додатак слике 2А и Б). Уклањање МиМИЦ-а у уекМИ01943.ек1 и уекМИ01943.ек2 мушицама је вратило нормалне перформансе меморије од 24 сата, показујући да је уметање МиМИЦ-а потребно за уекМИ01943меморијадефект (слика 2Ц).

И кРТ-ПЦР мРНА и Вестерн блот анализа протеинских екстраката из глава мува нису успеле да открију значајну разлику у експресији уек/УЕКС код уекМИ01943 мува. Стога смо користили ЦРИСПР да уведемо стоп кодон у пети кодирајући егзон уек локуса (слика 2Б и слика 2—додатак слике 2Ц). Муве хомозиготне за насталу мутацију уекД нису биле одрживе као одрасле особе, угинуле су у фази ларве. Насупрот томе, хетерозиготне мухе уекМИ01943/уекД су биле одрживе, али су њихове 24-часовне мушице биле привлачнемеморијабио значајно оштећен (слика 2Д). Ови подаци показују да је уек есенцијални ген и да је уекМИ01943 одржив хипоморфни алел уек.

Тестирали смо и аверзивмеморијаперформансе уекМИ01943 мутантних мува. Хомозиготне уекМИ01943 мухе су одмах показанемеморијакоји се није разликовао од хетерозиготних и дивљих контрола (Слика 2Е). Међутим, њихово 24-часовно памћење, формирано након пет покушаја аверзивног тренинга са размаком (Тулли ет ал., 1994; Јацоб и Вадделл, 2020), или једног покушаја тренинга уз помоћ поста (Хирано ет ал., 2013), је значајно нарушено. (Слика 2Е). Ови експерименти сугеришу да су уекМИ01943 мушице генерално угрожене у својој способности да формирају ЛТМ. Уколико није другачије назначено, све накнадне анализе одмеморијау овој студији користите апетитно кондиционирање награђено шећером.

Слика 2. уекМИ01943 мутантне мушице имају дуготрајне кваровемеморија(ЛТМ). (А) Апетитивно задржавање памћења је тестирано у различитим временима након тренинга. Мухе хомозиготне за уекМИ01943 показале су значајан дефект у памћењу од 12 сати након тренинга, у поређењу са перформансама хетерозиготних уекМИ01943/ плус и контролних мува дивљег типа (стр.<0.05, anova,="" n="6–10)." (b)="" the="" uex="" locus="" lies="" on="" chromosome="" 2r="" between="" 3,900,285="" and="" 3,949,425="" (light="" blue="" bar).="" the="" four="" alternate="" uex="" transcripts,="" uex-re,="" uex-rg,="" uex-rh,="" and="" uex-rf,="" all="" encode="" the="" same="" protein.="" the="" uexmi01943="" mimic="" (blue="" triangle)="" resides="" ~17="" kb="" downstream="" of="" the="" uex="" coding="" region.="" the="" crispr/cas9="" edited="" uexd="" allele="" replaces="" a="" 3047="" bp="" fragment,="" including="" exon="" 7="" of="" uex="" with="" a="" stop="" signal="" (termination="" codon="" in="" all="" three="" reading="" frames)="" and="" a="" gfp="" cassette,="" truncating="" the="" uex="" reading="" frame="" (dark="" blue="" bar).="" (c)="" precise="" excision="" of="" the="" uexmi01943="" mimic="" restores="" normal="" 24="" hr="" memory="" to="" uexmi01943.ex1="" and="" uexmi01943.ex2="" flies=""><0.05, anova,="" n="8–11)." (d)="" uexd="" fails="" to="" complement="" the="" 24="" hr="">меморијадефект уекМИ01943 (стр<0.05, anova,="" n="6–8)." (e)="" flies="" homozygous="" for="" uexmi01943="" showed="" a="" significant="" defect="" in="" aversive="" ltm,="" as="" figure="" 2="" continued="" on="">

Слика 2 се наставља

у поређењу са перформансама хетерозиготних уекМИ01943/ плус и контролних мува дивљег типа (п<0.05, anova,="" n="8–12)." an="" ltm="" defect="" was="" also="" observed="" following="" five="" cycles="" of="" aversive="" spaced="" training="" and="" a="" 16="" hr="" fasting="" facilitated="" one-cycle="" training="" protocol.="" immediate="" aversive="">меморијаније био под утицајем уекМИ01943 хомозиготних мутантних мува.

Интернет верзија овог чланка укључује следеће изворне податке и додатке за слику 2:

Изворни подаци 1. Табела контроле оштрине шећера и олфакторног сензора за све експерименте понашања у овом рукопису.

Додатак слике 1. Очување УЕКС-а са његовим ортолозима.

Додатак слике 2. Конструкцијске шеме за уек Миноову ексцизију и стварање уекД алела.