Део 3: Ехинакозид изолован из Цистанцхе Тубулоса наводно стимулише лучење хормона раста преко активације рецептора грелина

Ехинакозид изолован из Цистанцхе тубулоса наводно стимулише лучење хормона раста преко активације рецептора грелина

Цхие-Ју Ву 1, Меи-Иин Цхиен 2, Нан-Хеи Лин 1, Ии-Цхиао Лин 1, Вен-Иинг Цхен 3, Цхао-Хсианг Цхен 2,4,* и Јасон ТЦ Тзен 1,*

1 дипломски институт за биотехнологију, Национални универзитет Цхунг-Хсинг, Тајчунг 402, Тајван; баби159357520@гмаил.цом (Ц.-ЈВ); CMNHEI@mohw.gov.tw (Н.-ХЛ); с9755702@гмаил.цом (И.-ЦЛ)

2 Ко Да Пхармацеутицал Цо. Лтд., Таоиуан 324, Тајван; рд1@кода.цом.тв

3 Одељење за ветеринарску медицину, Национални универзитет Цхунг-Хсинг, Таицхунг 402, Тајван; wychen@dragon.nchu.edu.tw

4 Дипломски институт за фармакогнозију, Медицински универзитет у Тајпеју, Тајпеј 110, Тајван

* Преписка: gm@koda.com.tw (Ц.-ХЦ); TCTZEN@dragon.nchu.edu.tw (ЈТЦТ); Тел.: плус 886-4-22840328 (лок. 776) (ЈТЦТ); Факс: плус 886-4-22853527 (ЈТЦТ)

Академски уредник: Пинароса Авато

Примљено: 22. јануара 2019.; Прихваћено: 14. фебруара 2019.; Објављено: 17. фебруара 2019

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ ВхатсАпп: 008618081934791

Апстрактан:Цистанцхеврста, пустињски гинсенг, забележено је да поседује многе биолошке активности у традиционалној кинеској фармакопеји и користи се као лек против старења. Три фенилетаноидна гликозида -ехинакозид, тубулозид А и актеозид — откривени су у воденом екстрактуЦистанцхе тубулоса(Сцхенк) Р. Вигхт и главни састојак,ехинакозид, додатно је пречишћен.Ецхинацосидеконцентрације веће од 10_6 М испољиле су значајну активност да стимулишу лучење хормона раста ћелија хипофизе пацова. Слично хормону раста који ослобађа хормон раста-6, синтетичком аналогу грелина, стимулацију лучења хормона раста ехинакозидом инхибирала је [Д-Арг1, Д-Пхе5, Д-Трп7,9, Леу11]-супстанца П , инверзни агонист рецептора грелина. Молекуларно моделирање је показало да су сва три фенилетаноидна гликозида адекватно интераговала са везним џепом рецептора грелина, а ехинакозид је показао нешто бољу интеракцију са рецептором од тубулозида А и актеозида. Резултати сугеришу да су фенилетаноидни гликозиди, посебно ехинакозид, активни састојци који су наводно одговорни за ефекте против старења Ц. тубулоса и може се сматрати да се развијају као непептидилни аналози грелина.

Кључне речи: цистанцхетубулоса;ехинакозид; грелин; лучење хормона раста;фенилетаноидгликозиди

ехинакозидинцистанцхеима много ефеката

Молимо кликните овде до 2. дела

4. Материјали и методе

4.1. Хемикалије и биљни материјали

Цистанцхедесертицола ИЦ Ма је набављена са локалног тржишта и оверена од стране др Нан-Хеи Лин.Цистанцхетубулоса (Сцхенк) Р. Вигхт је купљен од Синопхарм Тиан-Ли Пхармацеутицал Цо., Лтд., (Хангџоу, Кина). ХПЛЦ ацетонитрил, мравља киселина и метанол су купљени од ЕЦХО Цхемицал Цо., Лтд, (Миаоли, Тајван). Дулбеков модификовани Орлов медијум (ДМЕМ), дијализовани фетални говеђи серум (ДФБС) и Трипсин-ЕДТА купљени су од Инвитроген-а (Карлсбад, Калифорнија, САД). ДНаза И је купљена од Вортхингтон Биоцхемицал (Лакевоод, Њ, САД). Хормон који ослобађа хормон раста-6 (ГХРП-6) је набављен од Ген Ваи Биотецх, Инц. (Сан Дијего, Калифорнија, САД). Колагеназа тип И и [Д-Арг1, Д-Пхе5, Д-Трп7,9, Леу11]-супстанца П су купљене од Сигма-Алдрицх Цо. (Сент Луис, МО, САД). ЕЛИСА комплет за хормон раста пацова купљен је од Сунред Биологицал Тецхнологи Цорпоратион (Шангај, Кина).

4.2. ХПЛЦ/УВ и ЛЦ_МСн анализе екстракције воде Цистанцхе спп.

Осушена стабљика (25 г) одЦистанцхедесертицола ИЦ Ма орЦистанцхетубулоса (Сцхенк) Р је екстрахован три пута са 500 мЛ дестиловане воде током 60 минута на 50 степени у воденом купатилу. Раствор је филтриран кроз сиријски филтер од 13 мм са 0,45 ум ПП мембранским филтером (Палл Цорпоратион, Глен Цове, НИ, УСА) и подвргнут следећим анализама. Анализирани су хемијски састојци у екстрактима

коришћењем Синцронис Ц18 колоне (4,6 × 250 мм унутрашњег пречника, 5 ум, Тхермо Сциентифиц, Валтхам, МА, УСА) у ХПЛЦ систему заједно са детектором фотодиодног низа модела 600Е (Ватерс Цорпоратион,

Милфорд, МА, САД). Мобилна фаза се састојала од (А) воде која садржи {{0}}.1 проценат мравље киселине и (Б) ацетонитрила. Градијент елуирања био је следећи: 0–60 мин, линеарни градијент од 14 процената Б; 0–3 мин, 14 до 17 процената Б; 3–4 мин, 17 процената Б; 4–15 мин, 17 до 20 процената Б; 15–20 мин, 20 процената Б; 20–50 мин, 20 до 14 процената Б; 50–60

мин, 14 процената Б. Таласна дужина детекције апсорбанције ултраљубичастог (УВ) је подешена на 330 нм. Тандем масени спектрометар са линеарним трап квадруполним (ЛТК) (Тхермо Елецтрон, Сан Јосе, Калифорнија, САД) опремљен интерфејсом за електроспреј јонизацију (ЕСИ) повезан је са Сурвеиор ЛЦ системом (Тхермо Елецтрон)

са петљом узорка од 5 уЛ. Градијент елуирања био је следећи: 0–90 мин, линеарни градијент од 14 процената Б; 0–24 мин, 14 до 17 процената Б; 24–25 мин, 17 процената Б; 25–36 мин, 17 до 20 процената Б; 36–37 мин, 20 процената Б; 37–80 мин,

20% to 14% B; 80–90 min, 14% B. The heated capillary temperature was set at 300℃ with a spray voltage of 4.5 kV. Negative ESI mode was firstly scanned ranging from m/z 400–1000. Data-dependent MSN was obtained using the high purity helium (>99,99 процената) као колизиони гас.

4.3. Изолација ехинакозида

Водени екстракт из осушене стабљике (25 г) Ц. тубулоса је концентрован под сниженим притиском да би се добио тамносмеђи сируп. Сирова екстракција је суспендована са дестилованом водом и лиофилизована помоћу сушача смрзавањем. Прашак од 100 мг је растворен у дестилованој води од 5 мЛ и подвргнут пречишћавању коришћењем Сепхадек ЛХ-20 колоне (100 мЛ; ГЕ Хеалтхцаре Био-Сциенцес АБ, Шведска) елуиран са 10 процената воденог раствора метанола и праћен ХПЛЦ . Фракције које садрже ехинакозид су детектоване очитавањем апсорбанције на 245 нм и сакупљене коришћењем аутосамплера.

4.4. Животиње

Експерименте је одобрио Институционални комитет за негу и употребу животиња Националног Цхунг{0}}Хсинг универзитета са бројем одобрења ИАЦУЦ 106-079. Мужјаци Спрагуе_Давлеи пацова тежине 250_300 г су купљени од БиоЛАСЦО, Таиван Цо., Лтд. (Таипеи, Тајван). Две животиње по кавезу су држане у контролисаном окружењу од 23 о2, 60 о 10 процената влажности и циклуса светло/мрак од 12 сати. Пацови су храњени стандардном исхраном (обезбеђене калорије

са 28,7 процената протеина, 13,4 процената масти и 57,9 процената угљених хидрата, 5001 Родент ЛабДиет, Ст. Лоуис, МО, САД) и дестиловане воде ад либитум.

4.5. Култура примарних ћелија хипофизе

Ћелије хипофизе су изоловане према методи модификоване ензимске дисперзије коју су развили Иамазаки ет ал. [29]. Укратко, мужјаци Спрагуе Давлеи пацова су анестезирани са Золетилом 50 (40 мг/кг, ИП; Вирбац Лабораториес, Царрос, Француска), а предње хипофизне жлезде су уклоњене и дисперговане у културу хипофизних ћелија у суспензији, као што је претходно описано [30].

4.6. Тест лучења хормона раста

Примарне ћелије предње хипофизе од 4 × 104 ћелије/бунарићу су култивисане на 37 степени испод 5 процената ЦО2 током 2 дана пре теста лучења хормона раста у складу са протоколом који је претходно описан [30].

Након уклањања медијума културе, ћелије су изгладњеле у Дулбеко-овом модификованом орловом медијуму без серума (ДМЕМ) током 90 минута да би се стабилизовала базална секреција хормона. Медијум за гладовање је замењен свежим ДМЕМ-ом који садржи ехинакозид (од 10_8 до 10_5 М) или ГХРП-6 (агонист хуманог грелинског рецептора, ГХСР, 10_7 М) као позитивна контрола, а ћелије су инкубиране 15 и 30 минута на 37 степени испод 5 процената ЦО2. За детекцију антагонистичког ефекта, ћелије су инкубиране са ГХСР

инверзни агонист, [Д-Арг1, Д-Пхе5, Д-Трп7,9, Леу11]-супстанца П (0.5 уМ), а затим третиран ДМЕМ-ом који садржи ехинакозид (10_5 М) или ГХРП-6 (10_7 М) 30 мин. Подлога је прикупљена за

одређивање лучења хормона раста помоћу ЕЛИСА комплета за хормон раста пацова (Схангхаи Сунред Биологицал Тецхнологи Цорпоратион).

4.7. Статистичка анализа

Подаци су представљени као средње вредности о СД. Разлике су анализиране Т-тестом. Статистичке прорачуне је извршио ГрапхПад Присм 6 (ГрапхПад Софтваре Инц., Ла Јолла, ЦА, УСА). Ниво п < 0.05="" се="" сматра="" статистички="">

4.8. Хомолошко моделирање и спајање

Моделирање хомологије и спајање са људским рецептором грелина, рецептором секретагога хормона раста (ГХСР, приступни број ААИ13548), установљено је праћењем наше претходне конструкције [21,24]. Укратко, кристалне структуре 1 и 2 адренергичких рецептора (ПДБ 2ИЦИ и 3ПДС) са везаним лигандима, цијанопиндололом и ФАУЦ50 коришћене су као шаблони за конструисање ГХСР структуре [31,32]. ГХСР структура са најнижом укупном енергијом ПДФ изабрана је за даље спајање са ГХРП-6, ехинакозидом, тубулозидом А и актеозидом. Сви процеси моделирања изведени су помоћу платформе Дисцовери Студио 2.1 (хттп://аццелрис.цом/).

3Д структура ГХРП-6 је преузета из базе података Пуб-Цхем на веб локацији НЦБИ (хттп://ввв.нцби.нлм.них.гов/). 3Д структуре ехинакозида, тубулозида А и актеозида изграђене су помоћу програма Цхем3Д (хттп://ввв.цамбридгесофт.цом/). Место везивања лиганда ГХСР је дефинисано као сферни простор са радијусом од 14 А од центра џепа за везивање у симулацији пристајања. Спајање ГХРП-6, ехинакозида, тубулозида А или актеозида на место везивања ГХСР је изведено ин силицо коришћењем ЛибДоцк модула у пакету Дисцовер Студио 2.1 и даље минимизирано паметним алгоритмом за минимизирање са ЦХАРМм пољем силе у Откријте Студио 2.1 пакет [33]. Да би се упоредили релативни афинитети везивања ехинакозида, тубулозида А и актеозида у ГХСР, област активног центра конструисана са ГХРП-6 у ГХСР је коришћена за пристајање, а енергију везивања је израчунао ГЕМДОЦК (Институт за биоинформатику , Национални Универзитет Чиао Тунг, Тајван).

Доприноси аутора: Експерименти на животињама, Ц.-ЈВ, И.-ЦЛ и В.-ИЦ; Идентификација и пречишћавање: МИ.Ц., Н.-ХЛ и Ц.-ХЦ; Молекуларно моделирање: Ц.-ЈВ, И.-ЦЛ и ЈТЦТ; Дизајн и писање пројекта: Ц.-ХЦ и ЈТЦТ

Финансирање: Рад је делимично подржан грантом Џејсону ТЦ Цену са Националног универзитета Чунг-Хсинг (НЦХУ-102Д604).

Признања: Аутори захваљују Тиан-Схун Венг-у што је поделио своје професионално искуство у коришћењу врста Цистанцхе.

Сукоб интереса: Сви аутори изјављују да немају сукоб интереса.

Референце

1. Ванг, Т.; Зханг, Кс.; Ксие, В. Цистанцхе десертицола ИЦ Ма, "Десерт гинсенг": Преглед. Сам. Ј. Цхин. Мед. 2012, 40, 1123–1141. [ЦроссРеф] [ПубМед]

2. Ванг, Т.; Цхен, Ц.; Ианг, М.; Денг, Б.; Кирби, МГ; Зханг, Кс. Екстракт етанола Цистанцхе тубулоса посредује нивое полних хормона пацова индукцијом стероидогених ензима тестиса. Пхарм. Биол. 2016, 54, 481–487. [ЦроссРеф] [ПубМед]

3. Лин, ВИ; Цхун, И.; Јацк, Ц.; Као, СТ; Тсаи, ФЈ; Лиу, ХП Молекуларни путеви повезани са промоцијом дуговечности и когнитивним побољшањем Цистанцхе тубулоса у Дросопхила. Фитомедицина 2017, 26, 37–44. [ЦроссРеф]

4. Ву, ЦР; Лин, ХЦ; Су, МХ Реверсал воденим екстрактима Цистанцхе тубулоса из дефицита понашања у моделу пацова налик Алцхајмеровој болести: Релевантност за таложење амилоида и функцију централног неуротрансмитера. БМЦ Комплемент. Алтерн. Мед. 2014, 14, 202. [ЦроссРеф]

5. Ксуан, ГД; Лиу, ЦК Истраживање о ефекту фенилетаноидних гликозида (ПЕГ) Цистанцхе десертицола на анти-агинг код остарелих мишева изазваних Д-галактозом. Зхонг Иао Цаи 2008, 31, 1385–1388. [ПубМед]

6. Јианг, И.; Ту, ПФ Анализа хемијских састојака у врстама Цистанцхе. Ј. Цхроматогр. 2009, 1216, 1970–1979. [ЦроссРеф] [ПубМед]

7. Гао, Ц.; Ванг, Ц.; Ву, Г. Цистанцхе укупни гликозиди на утицај учења и памћења пацова са васкуларном деменцијом и истраживање механизама. Брада. Херб. Мед. 2005, 36, 1852–1855.

8. Ли, Ф.; Ианг, И.; Зху, П.; Цхен, В.; Ки, Д.; Схи, Кс.; Зханг, Ц.; Ианг, З.; Ли, П. Ецхинацосиде промовише регенерацију костију повећањем односа ОПГ/РАНКЛ у МЦ3Т3-Е1 ћелијама. Фитотерапиа 2012, 83, 1443–1450. [ЦроссРеф]

9. Схимода, Х.; Танака, Ј.; Такахара, И.; Такемото, К.; Схан, СЈ; Су, МХ Хипохолестеролемични ефекти екстракта Цистанцхе тубулоса, кинеске традиционалне сирове медицине, код мишева. Сам. Ј. Цхин. Мед. 2009, 37, 1125–1138. [ЦроссРеф]

10. Танг, Ф.; Хао, И.; Зханг, Кс.; Кин, Ј. Ефекат ехинакозида на фиброзу бубрега инхибицијом ТГФ- 1/Смадс сигналног пута у ДБ/ДБ мишем моделу дијабетичке нефропатије. Друг Дес. Девел. Тхер. 2017, 11, 2813–2826. [ЦроссРеф]

11. Ксионг, ВТ; Гу, Л.; Ванг, Ц.; Сун, ХКС; Лиу, Кс. Анти-хипергликемијски и хиполипидемијски ефекти Цистанцхе тубулоса код дијабетичких ДБ/ДБ мишева типа 2. Ј. Етхнопхармацол. 2013, 150, 935–945. [ЦроссРеф] [ПубМед]

12. Бао, КСКС; Ма, ХХ; Динг, Х.; Ли, ВВ; Зху, М. Прелиминарна оптимизација формуле кинеске биљне медицине засноване на неуропротективним ефектима у пацовском моделу Паркинсонове болести изазване ротеноном. Ј. Интегр. Мед. 2018, 16, 290–296. [ЦроссРеф] [ПубМед]

13. Којима, М.; Хосода, Х.; Датум, И.; Наказато, М.; Мацуо, Х.; Канагава, К. Грелин је ациловани пептид који ослобађа хормон раста из желуца. Природа 1999, 402, 656–660. [ЦроссРеф] [ПубМед]

14. Зигман, ЈМ; Јонес, ЈЕ; Лее, ЦЕ; Сапер, ЦБ; Елмкуист, ЈК Експресија мРНК рецептора грелина у мозгу пацова и миша. Ј. Цомп. Неурол. 2006, 494, 528–548. [ЦроссРеф] [ПубМед]

15. Цастанеда, ТР; Тонг, Ј.; Датта, Р.; Цуллер, М.; Тсцхоп, МХ Гхрелин у регулацији телесне тежине и метаболизма. Фронт. Неуроендоцринол. 2010, 31, 44–60. [ЦроссРеф] [ПубМед]

16. Рудман, Д.; Феллер, АГ; Награј, ХС; Германс, ГА; Лалитха, ПИ; Голдберг, АФ; Сцхленкер, РА; Цохн, Л.; Рудман, ИВ; Маттсон, ДЕ Ефекти људског хормона раста код мушкараца старијих од 60 година. Н. Енгл. Ј. Мед. 1990, 323, 1–6. [ЦроссРеф] [ПубМед]

17. Лиу, Х.; Бравата, ДМ; Олкин, И.; Наиак, С.; Робертс, Б.; Гарбер, АМ; Хоффман, АР Систематски преглед: Безбедност и ефикасност хормона раста код здравих старијих особа. Анн. Интерн. Мед. 2007, 146, 104–115. [ЦроссРеф] [ПубМед]

18. Гиордано, Р.; Бонелли, Л.; Маринацо, Е.; Гхиго, Е.; Арвиат, Е. Лечење хормоном раста у људском старењу: предности и ризици. Хормони 2008, 7, 133–139. [ЦроссРеф] [ПубМед]

19. Саттлер, ФР Хормон раста код мушкараца који старе. Најбоља пракса. Рес. Цлин. Ендоцринол. 2013, 27, 541–555. [ЦроссРеф]

20. Ло, ИХ; Цхен, ИЈ; Цханг, ЦИ; Лин, ИВ; Цхен, ЦИ; Лее, МР; Лее, ВС; Тзен, ЈТЦ Теагрелини, јединствени ациловани флавоноидни тетрагликозиди у Цхин-схин оолонг чају, претпостављени су орални агонисти рецептора грелина.

Ј. Агриц. Фоод Цхем. 2014, 62, 5085–5091. [ЦроссРеф]

21. Хсиех, СК; Ло, ИХ; Ву, ЦЦ; Цхунг, ТИ; Тзен, ЈТЦ Идентификација биосинтетичких интермедијара теагрелина и теагрелину сличних једињења у оолонг чајевима, и њихово молекуларно спајање са рецептором грелина.

Ј. Фоод Друг Анал. 2015, 23, 660–670. [ЦроссРеф]

22. Хсиех, СК; Цхунг, ТИ; Ли, ИЦ; Ло, ИХ; Лин, НХ; Куо, ПЦ; Цхен, ВИ; Тзен, ЈТЦ Гинкогхрелинс, јединствени ациловани флавоноидни гликозиди у Фолиум Гинкго, стимулишу лучење хормона раста преко активације рецептора грелина. Ј. Етхнопхармацол. 2016, 193, 237–247. [ЦроссРеф]

23. Хан, Л.; Мавис, БИ; Лиу, Е.; Зханг, И.; Ли, В.; Сонг, Кс.; Фу, Ф.; Гао, Кс. Структурна карактеризација и идентификација фенилетаноидних гликозида из Цистанцхес десертицола ИЦ Ма помоћу УХПЛЦ/ЕСИ-КТОФ-МС/МС. Пхитоцхем. Анал. 2012, 23, 668–676. [ЦроссРеф]

24. Лу, Д.; Зханг, Ј.; Ианг, З.; Лиу, Х.; Ли, С.; Ву, Б.; Ма, З. Квантитативна анализа Цистанцхес Херба коришћењем течне хроматографије високих перформанси у комбинацији са детекцијом низа диода и масеном спектрометријом високе резолуције у комбинацији са хемометријским методама. Ј. Сеп. Сци. 2013, 36, 1945–1952. [ЦроссРеф]

25. Моон, М.; Ким, ХГ; Хванг, Л.; Сео, ЈХ; Ким, С.; Хванг, С.; Ким, С.; Лее, Д.; Цхунг, Х.; Ох, МС; ет ал. Неуропротективни ефекат грелина на 1-метил-4-фенил-1, 2, 3, 6-тетрахидропиридин мишји модел Паркинсонове болести блокирањем микроглијалне активације. Неуротокс. Рес. 2009, 15, 332–347. [ЦроссРеф]

26. Лупиен, СЈ; Исабелле, ОМ; Хупбацх, А.; Ту, МТ; Бус, Ц.; Валкер, Д.; Пруесснер, Ј.; Мцевен, БС Изван концепта стреса: алостатско оптерећење – развојна биолошка и когнитивна перспектива. Ин Девелопментал Псицхопатологи: Волуме Тво: Девелопментал Неуросциенце; Јохн Вилеи & Сонс, Инц.: Њујорк, Њујорк, САД, 2015; стр. 578–628.

27. Рицо, М.; Ризви, АА; Судар, Е.; Шошкић, С.; Обрадовић, М.; Монталто, Г.; Бутјдир, М.; Микхаилидис, ДП; Исеновић, ЕР Преглед кардиоваскуларних и антиатерогених ефеката грелина. Цурр. Пхарм. Дес. 2013, 19, 4953–4963. [ЦроссРеф]

28. Холст, Б.; Ланг, М.; Брандт, Е.; Бацх, А.; Ховард, А.; Фримурер, ТМ; Бецк-Сицкингер, А.; Шварц, ТВ инверзни агонисти рецептора грелина: Идентификација активног пептидног језгра и епитопа његове интеракције на рецептору. Мол. Пхармацол. 2006, 70, 936–946. [ЦроссРеф]

29. Иамазаки, М.; Накамура, К.; Кобаиасхи, Х.; Мацубара, М.; Хаиасхи, И.; Канагава, К.; Сакаи, Т. Регулациони ефекат грелина на секрецију хормона раста из перфузираних ћелија предње хипофизе пацова. Ј. Неуроендоцринол. 2002, 14, 156–162. [ЦроссРеф]

30. Ло, ИХ; Цхен, ИЈ; Цхунг, ТИ; Лин, НХ; Цхен, ВИ; Цхен, ЦИ; Лее, МР; Цхоу, ЦЦ; Тзен, ЈТЦ Емогхрелин, јединствени дериват емодина у Хесхоувуу, стимулише лучење хормона раста преко активације рецептора грелина. Ј. Етхнопхармацол. 2015, 159, 1–8. [ЦроссРеф]

31. Моукхаметзианов, Р.; Варне, Т.; Едвардс, ПЦ; Серано-Вега, МЈ; Леслие, АГ; Тате, ЦГ; Сцхертлер, ГФ Две различите конформације хеликса 6 уочене у структурама везаним за антагонисте бета{4}}адренергичког рецептора. Проц. Натл. Акад. Сци. САД 2011, 108, 8228–8232. [ЦроссРеф]

32. Росенбаум, ДМ; Зханг, Ц.; Лионс, ЈА; Холл, Р.; Арагао, Д.; Арлов, ДХ; Расмуссен, СГ; Цхои, ХЈ; Деврее, БТ; Сунахара, РК; ет ал. Структура и функција иреверзибилног комплекса агонист-бета(2) адреноцептора. Природа 2011, 469, 236–240. [ЦроссРеф]

33. Броокс, БР; Бруццолери, РЕ; Олафсон, БД; државе, ДЈ; Сваминатхан, С.; Карплус, М. ЦХАРММ—Програм за прорачуне макромолекуларне енергије, минимизације и динамике. Ј. Цомпут. Цхем. 1983, 4, 187–217. [ЦроссРеф]