Обрасци експресије МРНА лука у мозгу пацова након двоструког опозива друштвено стечених информација заснованих на страху и награди (2)

Лук у опозиву директних и друштвено стечених страхова асоцијација.

Наша способност да протумачимо наше налазе у вези са нашим пацовима који су подвргнути опозиву страха стеченог директним учењем значајно је потпомогнута тиме колико је добро окарактерисан систем који лежи у основи учења и присећања страха. Бројне области које смо испитали су укључене у учење о страху или изумирању (од којих би последње претпоставили да је започето у Демонстраторима, пошто су били подвргнути не-појачаној ЦС презентацији током ФЦбП), посебно АЦЦ, ПЛЦ и ИЛЦ30–32 ,37. Иако је доступан нешто мањи број истраживања у вези са неуронским механизмима социјалног страха, предложени модели учења социјалног страха полажу да слични системи леже у основи социјалног и директног учења страха28. Наши налази не указују на општу улогу АЦЦ-а, ПЛЦ-а или ИЛЦ-а ни у опозиву друштвено стеченог страха или директно стеченог страха (мада види такође „Дискусију“ о полним разликама у активностима ПЛЦ-а у наставку). Међутим, као што је покривено у претходном одељку, ово вероватно само указује да Арц не служи као поуздан индикатор активности у овом случају. Испитивање ових области након стицања страха вероватно би испричало другачију причу. Тешка експлицитна истраживања активности Арц-а ​​након опозива страха су ограничена, постоје нека прошла истраживања из којих се може извући. Цхиа и Отто35 су открили да су пацови у кондиционирању страха у траговима имали значајно већу експресију Арц протеина у дорзалном и вентралном хипокампусу у поређењу са неусловљеним контролама. Значајно је да је Арц квантификован Вестерн Блот анализом хомогенизованог вентралног и дорзалног хипокампуса у овом експерименту, тако да прецизна локализација хипокампалне активности није била доступна. Ови налази вероватно указују на то да, као и код СТФП, транскрипција Арц може бити индукована у одређеним областима хипокампуса у временској тачки 48-х присећања за наглашено памћење страха. Наши нулти резултати могу такође бити потенцијално последица неуспешног присећања посматрача, јер за разлику од претходних студија у нашој лабораторији12–14,26 нисмо видели веће замрзавање ЦС код посматрача у поређењу са контролама. Није јасно да ли је то заправо због неуспешног опозива посматрача или због наше јединствене процедуре опозива ЦС и претходног излагања контрола ЦС није јасно.

Шта ради цистанцхе - Побољшање памћења

Потенцијална улога вентралног орбитофронталног кортекса у опозиву друштвено стечених информација.

У значајној студији, Лесбургуерес ет ал.24. успели су да покажу да док је активност дорзалног хипокампуса (дХПЦ) била неопходна за стицање и краткорочно опозив стеченог СТФП-а, СТФП меморија је на крају пребачена у ОФЦ за дуготрајно складиштење. Поред тога, Лесбургуерес ет ал. успели су да покажу да је обележавање неурона у орбитофронталном кортексу током СТФП аквизиције неопходно за дуготрајно складиштење друштвено преносивих преференција у храни и да ометање активности ОФЦ-а након аквизиције нарушава памћење 30 дана након аквизиције (мада видети такође 38). Ови налази би сугерисали комуникацију између дХПЦ-а и ОФЦ-а у првим данима или недељама након СТФП аквизиције и текућу реорганизацију ОФЦ-а у овом тренутку како би се прилагодило дугорочно складиштење СТФП меморије. Иако би недостатак укупних разлика у експресији вентралног или бочног ОФЦ лука између демонстраната, контрола и посматрача у овој студији довео у питање ту интерпретацију, открили смо значајну негативну корелацију између наше комбиноване мере укупног учинка друштвеног учења и ћелија које изражавају двоструки лук. у ВОЦ. Штавише, ова корелација није примећена између сличне метрике формиране за Демонстраторе на основу изабраног теста и замрзавања на ЦС. Како се ослањање на друштвено стечене информације може сматрати избором између потенцијално непоузданих друштвених информација и опасности учења кроз директно искуство, ова очигледна инхибиторна улога гласа у изражавању друштвено стечених информација може бити повезана са ширем улогом ОФЦ-а у вредности -засновано одлучивање39–42.

Експеримент са цистанцхе десертицола

Полне разлике у транскрипцији лука.

неколико статистичких и методолошких разлога. Прво, наша повремено мала величина узорка за женке, са величином групе за комбинације пола/стања у распону од н=2 до н=9 након уклањања пацова без довољно одрживих делова (мада посебно, н<5 was only present for female Controls in the vOFC and lOFC and female Demonstrators and Observers in the lOFC, see Table S5 for specific group sizes). Additionally, our lack of entirely undisturbed controls means that we have no way to determine whether these sex differences are the result of baseline or task-specific differences in Arc mRNA production. Finally, because the pre-in situ PFA wash was not introduced until all female sections had been processed, this difference in tissue processing might have affected the overall stain. That said, if this were the case, we might expect to see a broader and more consistent effect of sex across regions and types of Arc expression (nuclear, cytoplasmic, and dual). As it is, 18 regions/cellular areas of Arc expression combinations are examined, and only 10 display a significant overall effect of sex. Furthermore, this effect is not uniform in its direction, with males displaying greater overall Arc expression in 5 cases and females displaying greater expression in the other 5. Regardless, we feel that our findings here should serve only to inform possible future research into sex differences in Arc expression. As it is, the limitation of the current study would make drawing definitive conclusions regarding sex effects on Arc expression inappropriate. This should be kept in mind in reading the following discussion.

Иако је било мало истраживања о полним разликама у експресији Арц-а, постоје неки налази који указују на то да женке пацова изражавају више Арц у одређеним регионима дорзалног хипокампуса након поновљеног излагања релативно обогаћеном окружењу43, иако је такође био тренд у супротном смеру. примећено код пацова тестираних без претходне интервенције у понашању43. Наши налази могу указивати на то да су полне разлике у транскрипцији Арц-а ​​присутне након одређених општих задатака понашања или искустава. У ЦГ1 региону АЦЦ-а, открили смо да су мушкарци, свеукупно, имали више ћелија активних у обе временске тачке, вероватно због веће основне Арцтранкрипције у АЦЦ код мушкараца или повећане транскрипције након промене контекста/поновног излагања (кућни кавез → СТФП просторија за тестирање → комора за кондиционирање) пошто постоје неки докази—иако ограничени—за улогу АЦЦ-а у дугорочном опозиву контекстуалних сећања44. Мужјаци пацова су такође показали већи број нуклеарног и двоструког лука у ИЛЦ-у. Ово се може објаснити улогом ИЛЦ-а у изумирању и инхибицији страха31,45,46 и уоченим оштећењима у инхибицији и изумирању наученог страха код жена47-49. Ако је то случај, поставља се питање зашто нису примећене свеукупне разлике између наших контролних, посматрачких и демонстрационих пацова ако је експресија лука била покренута инфралимбичком активношћу изазваном ЦС.

Жене су показале више нивое експресије Арц за све бројеве у вЦА3. Разлика у нуклеарном броју потенцијално би могла бити резултат веће активације након излагања ЦС или поновног излагања комори за кондиционирање код женки, док виши нивои експресије цитоплазматског лука у вЦА3 након задатка са храном могу указивати на полне разлике у улога Арц-а ​​у вЦА3 или препознавање „познате“ хране (чак и за Посматраче мирис би био познат због њихове претходне интеракције са Демонстратором) или награђивања/општи процеси конзумирања. Та женка је такође показала значајно веће двоструко обележавање у вЦА3 - иако је овај ефекат био мали - такође би могао указивати на генерализовано повећање транскрипције вЦА3 Арц код жена. Женке пацова су такође показале већу транскрипцију нуклеарног лука у вОФЦ-у и више дуалне нивое Арц мРНК у лОФЦ-у, иако је ове резултате теже тумачити због малог броја женки контролних пацова чије је мождано ткиво било довољно нетакнуто да узме број ОФЦ-а. (н=2 и 3 за бочни и вентрални ОФЦ, респективно). Подаци доступних контролних пацова указују на могуће повећање производње ОФЦ Арц мРНК посредовано половином, али је исто толико могуће да овај ефекат не би постојао са вишим н. Значајно је да су нека ранија истраживања указала на структурне разлике у ОФЦ-у и функционалне разлике у понашању посредованом ОФЦ-ом између женских и мушких глодара50–52.

Цистанцхе екстракт у праху

Можда су наше најзанимљивије полне разлике у Арц мРНА откривене у ПЛЦ-у. Међутим, мужјаци су показали укупан већи број ћелија које експримирају Арц у цитоплазми иу цитоплазми и језгру (двострука експресија) од жена. Такође смо открили да док мушкарци демонстратори и посматрачи нису показали повећање транскрипције лука у односу на контроле у ​​временској тачки призивања страха, жене демонстранте показале су значајно већу транскрипцију нуклеарног лука од контрола, док су посматрачице биле у средини између њих. Овај сексуални ефекат може бити вођен горе поменутим дефицитима уоченим у инхибицији и изумирању наученог страха који се примећују код жена 47–49, пошто су прошла истраживања показала да је ПЛЦ критично укључен у стимулисање понашања страха45,53,54. Штавише, неколико студија је имплицирало разлике у ПЛЦ сигнализацији и структури као потенцијалним покретачким факторима за ова полно специфична оштећења у инхибицији и изумирању страха55–58. Иако нисмо пронашли значајну разлику у понашању замрзавања жена и мушкараца у односу на сигнал, повећање регулације Арц мРНА као одговор на ЦС повезан са неојачаним страхом код посебно женских демонстратора може бити индикација диференцијалног неуронског реструктурирања у ПЛЦ-у које би на крају могло довести до полне разлике у изражавању страха.

Закључци

Иако налази ове студије нису проширили наше разумевање можданих механизама укључених у враћање друштвено стечених сећања колико смо се надали, наши резултати пружају неке потенцијалне увиде у полне разлике у експресији Арц-а, као и о улози (или недостатак) Арц-а ​​у дуготрајном памћењу. Наши налази сугеришу да – барем у префронталном кортексу и вЦА3 – индукција мождане активности кроз призивање друштвено стечених информација није довољна да изазове повећање експресије Арц у односу на оне изазване само процедуром тестирања. Међутим, валидност овог закључка је свакако доведена у питање неубедљивим резултатима наших тестова понашања, јер би лоше задржавање друштвено стечених информација могло бити криво за овај недостатак ефекта. Теоретизирамо да би то могло бити зато што се минимално неуронско реструктурирање покреће када дође до опозива прије консолидације система. Даља истраживања улоге Арц протеина у процесима присећања социјалног учења су и даље оправдана с обзиром на то да наши резултати у понашању не показују социјално учење код пацова Обсервер. Будућа истраживања која испитују преклапање неуронских механизама који управљају различитим облицима друштвеног учења такође могу имати користи од укључивања животиња које су подвргнуте процедурама стицања и животиња које су подвргнуте процедурама даљинског опозива, јер је већа вероватноћа да ће ове временске тачке изазвати промене пластичности, а тиме и промене у експресији лука. .

Цистанцхе додатак близу мене-Побољшање памћења

Кликните овде да видите Цистанцхе Импрове Мемори производе

【Затражите више】 Е-пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Вхатс Апп: 0086 18599088692 / Вецхат: 18599088692

Методе

Субјекти. Субјекти су били мужјаци и женке Спрагуе-Давлеи пацова узгајани у кући у Центру за ресурсе животиња Универзитета Тексас у Аустину. Седам гнездећих парова дало је субјекте за Кохорту 1 (н=27 женки, н=36 мужјака), а осам гнездећих парова дало је субјекте за Кохорту 2 (н=27 мужјака, нема женки). Одгајивачи су били Спрагуе-Давлеи пацови (између 215 и 260 г по доласку) добијени од Цхарлес-Риверс-а (Вилмингтон, МА, САД), док су мужјаци били Спрагуе-Давлеи пацови (између 230 и 300 г по доласку) добијени од Харлана (сада Енвиго) (Хјустон, Тексас, САД). Сви пацови су били смештени са партнером у кавезу супротног пола све док женка није показала јасне знаке трудноће, у ком тренутку су женке биле смештене појединачно. Штенци су одбачени у тријаде истополне браће и сестара 21. дана након порођаја (П21) како би се осигурало учење социјалног страха26. Резервна штенад су одбачена у тријаде или дијаде са неповезаним пацовима и коришћена у другим експериментима на Универзитету Тексас у Остину. Женке из легла наше друге кохорте коришћене су у другим експериментима. Штенадима је било дозвољено да сазревају уз минималне сметње осим рутинских сточарских процедура (нпр. промене кавеза) све док нису започеле процедуре навикавања (тријаде женки) или процедуре процене доминације (мушке тријаде) (поступци доминације и резултати детаљно описани у Додатним материјалима). Пацови из кохорте 1 су започели процедуре између П106–П112 дана старости, а пацови из кохорте 2 су почели између П99–П118 дана старости. Сви субјекти су држани на 12-х обрнутом циклусу тамно-светло са искљученим светлима у 15 часова. Све експерименталне процедуре су завршене током тамног циклуса субјеката под црвеним светлом. Сви делови овог експеримента спроведени су у складу са водичем Националног института за здравље за негу и употребу експерименталних животиња и одобрени су за употребу од стране Универзитета Тексас у Комитету за негу и употребу животиња у Остину.

Апарат и стимуланси. Условљавање страха. Све процедуре условљавања страха и условљавања страха путем проксија завршене су у стандардним коморама за кондиционирање (30,48 цм × 25,4 цм × 30,48 цм) изграђеним од прозирних зидова од плексигласа с предње и задње стране, два челична зида са стране и плафона од плексигласа са рупа у центру. Под коморе је био низ шипки од нерђајућег челика повезаних са генератором шока (Цоулбоурн Инструментс, Аллентовн, ПА). Све коморе су биле затворене у кутије за акустичну изолацију (Цоулбоурн Инструментс) и осветљене унутрашњим црвеним светлом. Понашање је забележено камерама затвореног круга (Панасониц™ ВВ-БП334) постављеним изнад комора за кондиционирање са сочивом уметнутим кроз отвор на плафону од плексигласа. Коморе су у потпуности обрисане са 70-постотним раствором алкохола између сваког субјекта. Сва испорука стимулуса је контролисана коришћењем софтвера Фреезе Фраме (Цоулбоурн Инструментс). ЦС је био 20 стоне (5 кХз, 80 дБ) и, у процедурама са вишеструким ЦС презентацијама, варијабилни интервал између покушаја (ИТИ) у просеку 180 с. Безусловни стимулус (УС) је био шок од 1 мА који је трајао 500 мс и био је истовремено завршен са условљеним стимулусом.

Друштвени пренос преференције у храни. Све СТФП процедуре су се одвијале у просторији поред просторије у којој се налазе коморе за кондиционирање. Нове дијете су састављене мешањем 100 г 5ЛЛ2 Пурина хране за глодаре у праху са 1 г МцЦормицк млевеног цимета (дијета Цин) или 2 г Херсхеи какао праха (дијета Цо). Обична дијета, која је дата свим пацовима током периода рестрикције на храну и контролним пацовима на крајњи дан експерименталних процедура, била је непатворена 5ЛЛ2 Пурина храна за глодаре у праху. Све жваке у праху - како током рестрикције хране тако и током експерименталних процедура - биле су представљене у висећим шољама за храну које су направљене од 4 оз. стаклене тегле и 12-конструкцију челичне жице. Чаше за храну су испране, а затим обрисане 70-постотним раствором етанола пре него што су темељно опране сапуном и водом између сваке употребе. Све конзумативне фазе СТФП експерименталних процедура одвијале су се у стандардним кавезима за пацове (26,7 цм × 48,3 цм × 20,3 цм), при чему је сваки пацов добио свеж кавез. Фаза интеракције (фаза СТФП аквизиције) одвијала се у великој пластичној канти (50,5 цм × 39,4 цм × 37,5 цм) са подном подлогом од дрвене иверице која је замењена између сваке групе. Пластичне канте су темељно обрисане Виндек-ом између сваке сесије.

Преглед експерименталног дизајна и процедура друштвеног учења.

(Погледајте слику 2 за графички преглед).

Сви пацови су били ограничени на храну пет дана и навикли на руковање и просторију у којој би се СТФП процедуре одвијале четири дана непосредно пре дана 1 експерименталних процедура. Док су се поступци навикавања завршили пре првог дана експерименталних процедура, ограничење хране се наставило до краја експеримента. Један пацов из сваке тријаде је додељен једном од три услова: Демонстратор, Посматрач или Контрола. Мушке тријаде кохорте 2 су процењене на доминацију и све су показале јасну хијерархију и додељене су тако да је доминантни пацов био Демонстратор, а подређени посматрач како би се побољшао друштвени пренос страха13. Појединачне тријаде су даље насумично подељене у групе у којима би демонстратор и посматрач добили тест избора при опозиву СТФП-а (Избор) и групе у којима би добијали само демонстрирану храну (Цин).

Првог дана експерименталне процедуре, пацови који су били у стању Демонстратор су премештени у коморе за кондиционирање страха и остављени да се навикну 10 минута пре него што су били изложени 3 ЦС-а који су истовремено завршили болним шоком (погледајте „Апарати и стимуланси“ за специфичности). Након процедура условљавања страха, демонстранти су враћени у првобитни кућни кавез. Другог дана експерименталних процедура, 24 х након условљавања страхом, демонстратори су враћени у коморе за кондиционирање са својим колегом у кавезу који је био у стању посматрача и стављен је кроз ФЦбП процедуру (слика 2). Одмах након ФЦбП процедуре, пацови посматрачи су враћени у своје кућне кавезе, док су Демонстратори премештени у суседну просторију и дато им је 1 х да конзумирају гриз у праху ароматизовану циметом. Након што је прошао сат времена, Посматрачи су премештени у канту за интеракцију са својим демонстрантима и дозвољено им је да комуницирају са њима 30 минута како би се омогућило стицање друштвено преносивих преференција у храни. Претходна истраживања из наше лабораторије су потврдила да су ове временске тачке довољне за СТФП пренос33. Након тога, пацови посматрачи су враћени у свој кућни кавез, док су пацови демонстратори премештени у једно кућиште да би се спречило даље СТФП преношење на посматрача или контролу. Трећег дана експерименталних процедура, контролни пацови су премештени у коморе за кондиционирање и, након 10 минута навикавања на комору, представљена су три ЦС-а од 20 с без пратећег шока. Ово је урађено посебног дана како би се смањила могућност задржавања феромона аларма — за које је познато да их пацови ослобађају као одговор на претеће стимулусе и утичу на специфично учење59 — и даље присутни у комори.

Завршног дана експеримента, 4. дана, покренут је опозив и за друштвено преношену преференцију у храни и за условљавање страха/условљавање страха путем прокси меморија. Свим посматрачима и демонстрантима из тријада којима је додељен услов избора било је дозвољено 10 минута ад либитум приступа исхрани са циметом и какаоом, док је посматрачима и демонстраторима из тријада додељених услову Цин дато 10 минута ад либитум приступ дијети са циметом- само. У свим тријадама, контролним пацовима је дато 10 минута ад либитум приступ обичној прашкастој храни. Одмах након тога, пацови су враћени у свој кућни кавез и остављени неометани на период од 10-мин пре него што су враћени у лабораторијски простор и смештени у коморе за кондиционирање. Свим пацовима је затим дат 3-мин период навикавања у комору пре него што им је дат један ЦС од 20 с. 5 минута након завршетка ЦС, сви пацови су еутаназирани ињекцијом раствора пентобарбитала и фенитоина (Еутасол; Вирбац Анимал Хеалтх) и перфузирани. Њихови мозгови су касније обрађени за експресију Арц мРНА. С обзиром на временски ток наше терминалне процедуре и познати временски оквир миграције Арц мРНА28, повећана цитоплазматска експресија Арц мРНА би била последица СТФП процедура опозива, док би нуклеарна експресија била последица ФЦ/ФЦбП процедура опозива, са ћелијама које показују двоструку активацију које имају активирана у оба временска оквира (видети Слику 1; такође, видети "Анализу ткива" за детаље о третману и обради ткива).

Пустињски живи цистанцхе

Процедуре.

Навика и ограничење у исхрани. Сва навикавања су се десила непосредно пре првог дана експерименталних поступака. Хабитуација се састојала од тога да је сваки кавез пацова премештен у просторију у којој би се одвијале све СТФП експерименталне процедуре и оставио да се навикне на просторију 15 минута. Током овог периода, сваког пацова је покупио и њиме рукуо експериментатор који би се понашао у трчању током 2 минута да би их навикао на руковање и ту особу. Сви поступци навикавања су се одвијали у мрачној просторији под црвеним светлом, а сви пацови су примили 4 дана навикавања. Ограничење у исхрани почело је дан пре почетка навикавања и трајало је до краја експеримента. На почетку рестрикције хране, пелете хране које су сви субјекти јели уклоњене су из кавеза. Након тога, свим кавезима је дат дневни ад либитум приступ висећој тегли пуној обичне исхране Пурина 5ЛЛ2 у праху у свом кућном кавезу током 1 х. Пацови су свакодневно вагани почевши од почетка ограничења у исхрани до завршетка експеримента како би се осигурао необичан губитак тежине.

Бодовање понашања.

Сво бодовање понашања за овај експеримент је завршено коришћењем Интерактивног софтвера за истраживање понашања (БОРИС)60.

Страх условљава оцењивање друштвених контаката путем проксија. Претходна истраживања из наше лабораторије су показала да постоји јака веза између количине страха коју су посматрачи показали на тесту дугорочног памћења и времена проведеног у интеракцији са својим Демонстратором током ЦС код мушкараца13 и након ЦС код жена14,26. Као такви, видео снимци фазе друштвеног стицања условљавања страхом од стране проксија су оцењени за друштвену интеракцију између посматрача и демонстратора за сваки 20- период током ЦС презентације и 20- период непосредно након сваке ЦС презентација да обезбеди секундарни индекс стицања страха. Друштвени контакт је оцењен када су пацови посматрачи и демонстратори успоставили контакт осим у пролазу током периода сигнала (током ЦС контакта) или у 20 с након ЦС (после ЦС контакта). Израчунат је проценат сваког бодовног периода проведеног у контакту са Демонстратором. Подаци о проценту контакта током периода сигнала за мушкарце и подаци о проценту контакта непосредно након периода сигнала за жене су извучени и комбиновани у једну меру „релевантног контакта“ која ће се користити у свим коначним статистичким анализама.

Бодовање теста избора. Видео снимци теста избора за покретање присећања друштвено преносиве склоности према храни су оцењени за време које је дати пацов провео у интеракцији са шољицом за храну на основу тога да ли је садржала демонстрирану/већ конзумирану исхрану (дијету Цин) или роман дијета (дијета Цо). Ово је урађено као потенцијална секундарна мера преференције хране, јер смо очекивали да због тога што је тест избора ненормално кратак (10 минута) због потребе, можда нећемо моћи да откријемо преференције на основу саме количине поједене. Интеракција са чашом за храну је оцењена за сваки пут када је пацов био у физичком контакту са чашом и не удаљавао се од ње (тј. предње шапе су у контакту са теглом, глава унутар тегле, пење се на врх тегле или активно једе из тегле). За статистичку анализу, израчунали смо проценат времена проведеног у интеракцији са шољом која садржи дату дијету на основу укупне количине времена проведеног у интеракцији са било којом шољом (нпр. за дијету Цин, Процент времена= ТимеДиет Цин/ (ТимеДиет Цо плус ТимеДиет Цин)). Целокупна 10-мин. изборна сесија теста је оцењена за све пацове који су били подвргнути том тесту.

Анализа ткива.

Да би се минимизирала деградација мРНА рибонуклеазом (РНасе), сва опрема и површине коришћене током припреме и обраде мозга су редовно дезинфиковани или са РНасе АВАИ™ (Термо Сциентити; Валтхам, МА, САД) или РНАсеЗап™ (Амбион; Гранд Исланд, НИ , САД).

Припрема мозга. Непосредно након еутаназије, субјекти су перфузирани интракардијално коришћењем 4 процентног раствора параформалдехида (ПФА). Мозгови су затим уклоњени и потопљени у 4 процента ПФА да би се омогућила пост-фиксација током 24-48 сати. Када је пост-фиксација завршена, мозгови су пребачени у раствор од 30 процената сахарозе у физиолошком раствору пуферованом фосфатом за криопротекцију. Једном када су мозгови потонули на дно бочице, што указује на довољан унос сахарозе за криопротекцију, они су брзо замрзнути у сувом леду у праху и премештени у замрзивач на -80 степени за складиштење до секције. Мозгови су затим подељени коронално на клизном микротому дебљине 30 µм у шест серија (тако да су следећи делови у једној серији били удаљени 180 µм) и одмах монтирани и остављени да се осуше на ваздуху пре него што су стављени у вакуумску комору са сунђерима за влажност где су били оставити да се потпуно осуши 24 х. Исечени су и обрађени само делови хипокампуса (приближно −3,2 до −5,2 од брегме) или префронтални региони (приближно плус 3,7 до плус 1,4 од брегме) који садрже области од интереса. Монтирани делови су затим стављени у запечаћену кутију за слајд без РНасе и чувани на -80 степени до обраде.

Обрада ткива. Све процедуре су модификоване из протокола коришћених у Лее ет ал.61 и Петровицх ет ал.62. Пре обраде ткива, конструисана је цРНА сонда за Арц мРНА почевши од плазмида који садржи цДНК пуне дужине (~3.0 кбп) Арц транскрипта. Да би се створила сонда, ДНК је прво пресечена мешањем плазмида са пуфером за варење 10× (НЕБуфер; Биолабс; Ипсвицх, МА, САД), 10× ЕцоРИ рестрикцијским ензимом (Биолабс) и пречишћеном водом без нуклеазе пре него што је била инкубирано на 37 степени 2 х. Правилно сечење ДНК је верификовано помоћу електрофорезе, након чега је ДНК пречишћена преко ноћи у етанолу. Након пречишћавања, ДНК пелета је центрифугирана, испрана у ЕтОХ, потпуно осушена и ресуспендована у ТЕ пуферу. Да би се проверило да ли је ДНК била правилно линеаризована, израчунали концентрацију лука и проверили да нема загађивача, узорак ДНК је тестиран спектрофотометријом (Нанодроп Лите; Тхермо Сциентифиц, Валтхам, МА, САД). Сонда означена дигоксигенином (ДИГ) је транскрибована комбиновањем линеаризоване ДНК са водом без РНазе, пуфером 10× за транскрипцију (Амбион), блоком РНК (Амбион), мешавином за обележавање ДИГ РНК (Роцхе Апплиед Сциенце; Индианаполис, ИН, САД) и Т7 РНК полимеразу (Амбион) пре инкубације раствора на 37 степени током 2 х. Коначно, сонда је разблажена у води без нуклеазе и пречишћена у мини Куицк-Спин колони (Роцхе).

Када је цРНА сонда направљена, стакалца која садрже ткиво мужјака пацова су потопљена на 40 мин у 4% раствор ПФА да би се повећао интегритет ткива током ин ситу обраде. Ткиво женки пацова је обрађено без овог испирања ПФА. Плоче су затим испране и инкубиране у протеиназа К (ПК) пуферу на 37 степени пре него што су третиране са 0,5 процентним раствором анхидрида сирћетне киселине/1,5 процента триетаноламина који садржи глацијалну сирћетну киселину за пермеабилизацију. Плоче су затим испране у пуферу физиолошког раствора-натријум цитрата (ССЦ) пре него што су дехидриране потапањем у растућим концентрацијама етанола и осушене на ваздуху. На крају, свако стакалце је прекривено са 300 µЛ пуфера за хибридизацију који садржи тРНА квасца (Инвитроген; Царлсбад, Калифорнија, САД), ДНК сперме лососа (Амбион), дитиотреитол (Сигма; Ст. Лоуис, МО, САД) и цРНА сонду (1:100). Свако стакалце је затим прекривено и запечаћено око ивица ДПКС носачем (Елецтрон Мицросцопи Сциенцес; Хатфиелд, ПА, САД) пре него што је инкубирано у хибридизационом раствору 20 х на 60 степени. Посебно, покровни стакал је штитио ткиво од било каквог директног контакта са ДПКС носачем, тако да касније уклањање очврслог ДПКС-а није изазвало оштећење ткива.

Када је хибридизација завршена, покривна стакла су пажљиво уклоњена, а стакалца су инкубирана у 4кССЦ пуферу помешаном са натријум тиосулфатом (СТ) на 60 степени сат времена пре него што су третирана раствором на бази етилендиаминтетрасирћетне киселине да би се инхибирала активност РНК-азе на 37ºЦ. Након тога, стакалца су испрана у опадајућим концентрацијама раствора ССЦ помешаног са СТ поново на 60 степени. Ткиво је затим испрано у раствору детерџента (Твеен20) пре него што је обојено ПеркинЕлмер ТСА Флуоресцеин системом (НЕЛ701001КТ; ПеркинЕлмер, Валтхам, МА, САД). Стакалца су стављена у влажну комору и третирана пуфером за блокирање, а затим анти-ДИГ-ХРП коњугатом током 2 х. Слајдови су затим накратко испрани у раствору детерџента пре него што су враћени у тамну влажну комору и обложени раствором који садржи флуоресцеин тирамид реагенс (ФИТЦ) и остављени да одстоје 30 минута. Коначно, стакалца су опрана, остављена да се осуше на ваздуху и прекривена држачем који садржи нуклеарну мрљу 4′,6-диамидино-2-фенилинодол (ДАПИ) (Вецтасхиелд; Вецтор Лаб, Бурлингаме, Калифорнија, САД) . Слајдови су чувани у мраку на -20 степени до снимања.

Имагинг. Сва снимања су завршена коришћењем микроскопа Акио Сцопе А1 (Зеисс; Торнвоод, Њујорк, САД). Региони од интереса су идентификовани путем ДАПИ бојења коришћењем 10×објектива уз помоћ атласа мозга Пакинос и Ватсон63, а затим снимљени под објективом од 40× (стварно увећање ~900×). Слике су снимљене и за ДАПИ и ФИТЦ мрље, а касније су обојене и аутоматски спојене коришћењем прилагођеног макроа у софтверу ИмагеЈ са ФИЈИ (НИХ, Бетхесда, МД). Због деградације ткива која се дешавала ин ситу, нису сви делови или подручја од потенцијалног интереса били одрживи. Као такве, слике нису могле да се поуздано слажу у з-слагању и уместо тога су снимљене на једној равни. Снимљени су и избројани следећи региони: прелимбички кортекс (плус 3,72 до плус 2,52 од брегме), инфралимбички кортекс (плус 3,52 до плус 2,2 од брегме), латерални (плус 3,72 до плус 3,2 од брегме) и вентрални (плус 3,72). до плус 3,0 од брегме) орбитофронталног кортекса, ЦГ1 региона предњег цингуларног кортекса (плус 3,72 до плус 2,52 од брегме), и ЦА3 региона вентралног хипокампуса (-4,3 до -4,8 од брегме) (слика С6). Иако су амигдаларна језгра такође била од посебног интереса због своје добро утврђене улоге у учењу страха, горе поменута оштећења ткива су била посебно озбиљна у овој области. Као такви, нисмо били у могућности да добијемо довољно велику величину узорка да укључи тај регион (минимално 6 одрживих слика/регион је било потребно да би пацов био укључен у статистичку анализу дате области).

Бројања су завршена регион по регион и свим датотекама слика је додељен насумични нумерички код како би се експериментатор заслепио од свих детаља у вези са сликом у време бројања. Сви бројеви ћелија су узети у ИмагеЈ са ФИЈИ пакетом и направљени су помоћу алата за бројање ћелија. Ћелије су бројане за нуклеарну и цитоплазматску експресију мРНА лука одвојено, а ћелије које показују преклапајућу експресију су бројане као двоструко експресирање. Коначни бројеви за ћелије које експримирају нуклеарни Арц и ћелије које експримирају цитоплазматски лук укључивале су само оне ћелије које експримирају само у том региону (тј. нису укључивале ћелије са двоструком експресијом). Узети су пуни бројеви за ћелије обојене ДАПИ и израчунат је проценат ћелија које показују експресију у свакој датој области, а затим просечан проценат ћелија које показују сваки тип активације код појединачних пацова. Да би се спречило да резултати пацова са већим бројем слика имају несразмеран ефекат на нашу статистику и да бисмо спречили инфлацију величине узорка, само су ови просеци коришћени у нашој коначној анализи.

Преглед статистичке анализе. Све статистичке анализе су завршене коришћењем софтвера за кодирање Р. Комплетан код је бесплатно доступан за преглед у нашем спремишту података на хттпс://датаверсе.тдл.орг/датаверсе/МонфлсФеарМемориЛаб. Осим ако није другачије наведено, граница за тест који се сматра статистички значајним је постављена на п<0.05. All of our Arc results, unless otherwise mentioned, were tested for significance using a series of two-way ANOVAs (type 2) containing sex and condition as between-subject variables (Sex and Condition) with an individual ANOVAs run for each area of expression (nucleus, cytoplasm, and dual). Similarly, a series of one-way ANOVAs were run with a combined variable containing the food task (diet Cin only or Choice test for Demonstrators and Observers; plain chow only for all Controls) for each area of expression. Sex was not included as a secondary variable as the relatively low number of female rats made sample sizes too small for certain condition/food task combinations. When ANOVA assumptions were violated, data were transformed using either a log(y+1) function or by taking the inverse square root. As these transforms did not always succeed in bringing ANOVAs in line with assumptions, Kruskal-Wallace tests were performed on datasets where transforms were not effective. Pairwise t-tests were performed for posthoc analyses against a Bonferroni-corrected alpha value when ANOVAs indicated a significant effect of condition (α=0.017) or a significant sex and condition interaction (α=0.008; conditions tested against each other within each sex-only) with between-group effect sizes calculated using Cohen's d. To provide a better gauge of variability for our smaller group sizes, the MSError obtained from our ANOVA was used in the denominator of post hoc t-tests. Effect sizes for ANOVAs were calculated using the standard partial η2 formula and for Kruskal-Wallace tests using the formula η2 H =(H − k+1)/(n – k). For simplicity of data presentation, unless the addition of the food task grouping variable resulted in a significant effect or unless a significant contribution of sex was detected all data were presented graphically split up by area of expression and overall experimental condition only. Any rats that had fewer than 6 viable images counted in a given brain region were excluded from the analysis for that area.

Биваријантне корелације су израчунате за пацове Посматрач и Демонстратор да би се проценили потенцијални односи између мера понашања и броја ћелија лука за експресију која се јавља у одговарајућим временским тачкама (нпр. број цитоплазматског лука за проценат поједеног цимета). Пирсонови коефицијенти корелације су коришћени ако Грубсовом тестом нису откривени одступници ни у једном скупу података. Ако су откривени одступници, уместо тога је коришћен Спирманов коефицијент корелације. Да би се проценило да ли је веза између социјалног учења и Арц-а ​​у ћелијама са двоструким изражавањем у Обсерверсу, укупна метрика друштвеног учења – која се од сада назива метрика социјалног учења (СЛМ) – израчуната је узимањем средње вредности стандардизованих резултата ( з-сцоре) за проценат укупно поједеног који је био демонстрирана храна и проценат времена проведеног у контакту са Демонстратором током фазе друштвеног учења ФЦбП током ЦС презентације (мушкарци) или након ЦС презентације (жене). Значајно је да проценат замрзавања до ознаке последњег дана није коришћен за пацове посматрача јер су наши резултати и резултати нашег накнадног експеримента (погледајте Допунске материјале) показали да су услови наше процедуре тестирања понашања резултирали одређеним понашањем замрзавања чак и код Контролни пацови — барем код мужјака — и, као такви, можда нису најбољи показатељ снаге друштвено стеченог одговора на страх. Као таква, имајући у виду наша ранија открића да су интеракције са Демонстратором током или након ЦС (у зависности од пола) у великој мери предвиђале касније замрзавање до цуе12–14, интеракција са Демонстратором у временској тачки која одговара полу је тестирана на корелације против активности нуклеарног лука. уместо да се замрзне на знак последњег дана за пацове Обсервер. За Демонстраторе, слична метрика је израчуната на основу стандардизованог замрзавања до тачке последњег дана и процента укупно поједеног што је била позната дијета (Диет Цин) и проверена у односу на активност двоструког лука. Да би се исправили вишеструки тестови спроведени на сваком скупу података о понашању (6, за сваки регион мозга), критична п-вредност за корелације је Бонферони подешена на 0.0083.

Референце

1. Давсон, Г., Мелтзоф, АН, Остерлинг, Ј., Риналди, Ј. & Бровн, Е. Деца са аутизмом не успевају да се оријентишу на природне друштвене стимулусе. Ј. Аутисм Дев. Дисорд. 28, 479–485 (1998).

2. Зееланд, ААС-В., Дапретто, М., Гхахремани, ДГ, Полдрацк, РА & Боокхеимер, СИ Обрада награда код аутизма. Аутисм Рес.

3, 53–67 (2010). 3. Цхеваллиер, Ц., Кохлс, Г., Троиани, В., Бродкин, ЕС & Сцхултз, РТ Теорија социјалне мотивације аутизма. Трендс Цогн. Сци. 16, 231–239 (2012).

4. Ост, Л.-Г. Начини стицања фобија и исход бихејвиоралних третмана. Бехав. Рес. Тер. 23, 683–689 (1985).

5. Оллендицк, ТХ & Кинг, Њ Порекло страхова из детињства: Евалуација Рахманове теорије стицања страха. Бехав. Рес. Тер. 29, 117–123 (1991).

6. Мерцкелбацх, Х., Арнтз, А. & де Јонг, П. Искуства условљавања у фобији паука. Бехав. Рес. Тер. 29, 333–335 (1991).

7. Јеон, Д. ет ал. Опсервационо учење страха укључује дефектан систем бола и Цав1.2 Ца2 плус канале у АЦЦ. Нат. Неуросци. 13, 482–488 (2010).

8. Иусуфсхак, С. & Росенкранз, ЈА Социјална изолација након одвикавања нарушава условљеност опсервацијског страха. Бехав. Браин Рес. 242, 142–149 (2013).

9. Кавалиерс, М., Цхолерис, Е. & Цолвелл, ДД Учење од других како да се носе са мувама које гризу: социјално учење о условљеној аналгезији изазваној страхом и активном избегавању. Бехав. Неуросци. 115, 661–674 (2001).

10. Кавалиерс, М., Цолвелл, ДД & Цхолерис, Е. Учење страха и суочавања са природним стресором: Индивидуално и друштвено стечени кортикостерон и реакције избегавања уједања мува. Хорм. Бехав. 43, 99–107 (2003).

11. Кавалиерс, М., Цолвелл, ДД & Цхолерис, Е. Сродство, фамилијарност и друштвени статус модулирају друштвено учење о "микро предаторима" (муве које гризу) код мишева јелена. Бехав. Ецол. Социобиол. 58, 60–71 (2005).

12. Бруцхеи, АК, Јонес, ЦЕ & Монфлс, М.-Х. Условљавање страха путем проксија: Друштвени пренос страха током памћења. Бехав. Браин Рес. 214, 80–84 (2010).

13. Јонес, ЦЕ & Монфлс, М.-Х. Статус доминантности предвиђа пренос социјалног страха код лабораторијских пацова. Аним. Цогн. 19, 1051–1069 (2016).

14. Агее, ЛА, Јонес, ЦЕ & Монфлс, М.-Х. Различити ефекти фамилијарности/сродства у друштвеном преношењу асоцијација на страх и склоности према храни код пацова. Аним. Цогн. 22, 1013–1026 (2019).

15. Митцхелл, ЦЈ, Хеиес, ЦМ, Гарднер, МР & Давсон, ГР Ограничења двосмерне контролне процедуре за испитивање имитације код пацова: Знакови мириса на манипуладу. КЈ Екп. Психол. Б 52, 193–202 (1999).

16. Галеф, БГ & Вигморе, СВ Пренос информација у вези са удаљеном храном: лабораторијско истраживање хипотезе о 'информационом центру'. Аним. Бехав. 31, 748–758 (1983).

17. Галеф, БГ, Масон, ЈР, Прети, Г. & Беан, Њ Угљен дисулфид: Семиохемијски посредовани друштвено-индуковани избор исхране код пацова. Пхисиол. Бехав. 42, 119–124 (1988).

18. Галеф, БГ Студија случаја у анализи понашања, синтези и обраћању пажње на детаље: Социјално учење о преференцијама у храни. Бехав. Браин Рес. 231, 266–271 (2012).

19. Посадас-Андревс, А. & Ропер, ТЈ Социјални пренос преференција у храни код одраслих пацова. Аним. Бехав. 31, 265–271 (1983).

20. Цоунтриман, РА, Орловски, ЈД, Бригхтвелл, ЈЈ, Осковитз, АЗ & Цоломбо, ПЈ ЦРЕБ фосфорилација и експресија ц-Фос у хипокампусу пацова током стицања и опозива друштвено преносиве преференције хране. Хиппоцампус 15, 56–67 (2005).

21. Боик-Трелис, Н., Вале-Мартинез, А., Гуиллазо-Бланцх, Г., Цоста-Мисерацхс, Д. & Марти-Ницоловиус, М. Ефекти стимулације нуцлеус басалис магноцеллуларис на друштвено преносиве преференције хране и ц. -Фос израз. Научите. Мем. 13, 783–793 (2006).

22. Росс, РС & Еицхенбаум, Х. Динамика хипокампалне и кортикалне активације током консолидације непросторне меморије. Ј. Неуросци. 26, 4852–4859 (2006).

23. Смитх, ЦА, Цоунтриман, РА, Сахукуе, ЛЛ & Цоломбо, ПЈ. Неуробиол. Научите. Мем. 88, 65–74 (2007).

24. Лесбургуерес, Е. ет ал. Рано означавање кортикалних мрежа је потребно за формирање трајне асоцијативне меморије. Наука 331, 924–928 (2011).

25. Кнапска, Е. ет ал. Пренос емоционалних информација између субјеката изазива специфичне обрасце активације амигдале. Проц. Натл. Акад. Сци. 103, 3858–3862 (2006).

26. Јонес, ЦЕ, Риха, ПД, Горе, АЦ & Монфлс, М.-Х. Друштвена трансмисија павловског страха: условљавање страха прокси код сродних женки пацова. Аним. Цогн. 17, 827–834 (2014). 27. Твининг, РЦ, Вантреасе, ЈЕ, Лове, С., Падивал, М. & Росенкранз, ЈА. Интра-амигдала коло посебно регулише учење социјалног страха. Нат. Неуросци. 20, 459–469 (2017).

28. Олссон, А., Кнапска, Е. & Линдстром, Б. Неурални и рачунарски системи социјалног учења. Нат. Рев. Неуросци. 21, 197–212 (2020).

29. Гузовски, ЈФ, МцНаугхтон, БЛ, Барнес, ЦА & Ворлеи, ПФ Експресија непосредног раног генског лука у хипокампалним неуронским ансамблима специфична за окружење. Нат. Неуросци. 2, 1120–1124 (1999).

30. Ким, ЈЈ & Јунг, МВ Неурална кола и механизми укључени у павловско условљавање страха: критички преглед. Неуросци. Биобехав. Рев. 30, 188–202 (2006).

31. Лаурент, В. & Вестброок, РФ Инактивација инфралимбичког, али не и прелимбичког кортекса, нарушава консолидацију и враћање изумирања страха. Научите. Мем. 16, 520–529 (2009).

32. Товоте, П., Фадок, ЈП & Лутхи, А. Неуронска кола за страх и анксиозност. Нат. Рев. Неуросци. 16, 317–331 (2015).

33. Агее, ЛА & Монфлс, М.-Х. Утицај поузданости демонстратора и недавности последње демонстрације на стицање друштвено преносиве преференције у храни. Р. Соц. Опен Сци. 5, 172391 (2018).

34. Николаиенко, О., Патил, С., Ериксен, МС & Брамхам, ЦР Арц протеин: Флексибилно чвориште за синаптичку пластичност и спознају. Семин. Целл Дев. Биол. 77, 33–42 (2018).

35. Цхиа, Ц. & Отто, Т. Експресија хипокампалног лука (Арг3.1) је индукована присећањем сећања и потребна је за поновно консолидовање памћења у условљавању страха у траговима. Неуробиол. Научите. Мем. 106, 48–55 (2013).

36. Пиларзик, К. ет ал. Губитак функције фосфодиестеразе 11А4 показује да се недавна и удаљена дугорочна сећања могу одвојити. Цурр. Биол. 29, 2307-2321.е5 (2019).

37. Јонес, ЦЕ Друштвена трансмисија асоцијативног страха код глодара—Индивидуалне разлике у условљавању страха од стране Проки Вол. 17 (Спрингер, 2021).

38. Смитх, ЦА, Еаст, БС & Цоломбо, ПЈ Те орбитофронтални кортекс није неопходан за стицање или даљинско опозив друштвено преносивих преференција у храни. Бехав. Браин Рес. 208, 243–249 (2010).

39. Рудебецк, ПХ, Валтон, МЕ, Смитх, АН, Баннерман, ДМ & Русхвортх, МФС Одвојени неуронски путеви обрађују различите трошкове одлучивања. Нат. Неуросци. 9, 1161–1168 (2006).

40. Роллс, ЕТ & Грабенхорст, Ф. Те орбитофронтални кортекс и даље: од афекта до доношења одлука. Прог. Неуробиол. 86, 216–244 (2008).

41. Валлис, ЈД Међуврстне студије орбитофронталног кортекса и доношење одлука засновано на вредностима. Нат. Неуросци. 15, 13–19 (2012).

42. Изкуиердо, А. Функционална хетерогеност унутар орбитофронталног кортекса пацова у учењу награђивања и доношењу одлука. Ј. Неуросци. 37, 10529–10540 (2017).

43. Рандеси, М. ет ал. Полне разлике након хроничног стреса у експресији гена повезаних са опиоидима, стресом и неуропластиком у хипокампусу пацова. Неуробиол. Стрес 8, 33–41 (2018).

44. Марен, С., Пхан, КЛ & Либерзон, И. Контекстуални мозак: импликације за условљавање страха, изумирање и психопатологију. Нат. Рев. Неуросци. 14, 417–428 (2013).

45. Видал-Гонзалез, И., Видал-Гонзалез, Б., Рауцх, СЛ & Куирк, ГЈ Микростимулација открива супротне утицаје прелимбичког и инфралимбичког кортекса на изражавање условљеног страха. Научите. Мем. 13, 728–733 (2006).

46. ​​Сиерра-Мерцадо, Д., Падилла-Цореано, Н. & Куирк, ГЈ Дисоцијабилне улоге прелимбичког и инфралимбичког кортекса, вентралног хипокампуса и базолатералне амигдале у изражавању и гашењу условљеног страха. Неуропсицхопхармацологи 36, 529–538 (2011).

47. Баран, СЕ, Армстронг, ЦЕ, Нирен, ДЦ, Ханна, ЈЈ & Цонрад, ЦД Хронични стрес и полне разлике на опозив условљавања страха и изумирања. Неуробиол. Научите. Мем. 91, 323–332 (2009).

48. Греинер, ЕМ, Муллер, И., Норрис, МР, Нг, КХ и Сангха, С. Полне разлике у регулацији страха и понашању у потрази за наградом у задатку дискриминације страх-безбедност-награда. Бехав. Браин Рес. 368, 111903 (2019).

49. Даи, ХЛЛ & Стевенсон, ЦВ Неуробиолошка основа полних разлика у наученом страху и његовој инхибицији. ЕУР. Ј. Неуросци. 52, 2466–2486 (2020).

50. ван Хасселт, ФН ет ал. Индивидуалне варијације у бризи мајки у раној фази живота корелирају са доношењем одлука у каснијем животу и експресијом ц-фос у префронталним подрегионима пацова. ПЛоС ОНЕ 7, е37820 (2012).

51. Баилесс, ДВ & Даниел, ЈМ Полне разлике у нивоима протеина повезаних са мијелином унутар и густине пројекција између орбиталног фронталног кортекса и дорзалног стриатума одраслих пацова: Импликације за инхибициону контролу. Неуронаука 300, 286–296 (2015).

52. Орсини, ЦА & Сетлов, Б. Полне разлике у животињским моделима доношења одлука. Ј. Неуросци. Рес. 95, 260–269 (2017).

53. Цорцоран, КА & Куирк, ГЈ Активност у прелимбичком кортексу је неопходна за изражавање наученог, али не и урођеног. Страхови. Ј. Неуросци. 27, 840–844 (2007).

54. Бургос-Роблес, А., Видал-Гонзалез, И. & Куирк, ГЈ Трајни условљени одговори у прелимбичким префронталним неуронима су у корелацији са изражавањем страха и неуспехом изумирања. Ј. Неуросци. 29, 8474–8482 (2009).

55. Фентон, ГЕ ет ал. Упорна активност прелимбичке кортекса доприноси појачаном изражавању наученог страха код жена. Научите. Мем. 21, 55–60 (2014).

56. Фентон, ГЕ, Халлидаи, ДМ, Масон, Р., Бреди, ТВ & Стевенсон, ЦВ Полне разлике у наученом изражавању страха и изумирању укључују измењене гама осцилације у медијалном префронталном кортексу. Неуробиол. Научите. Мем. 135, 66–72 (2016).

57. Кирри, АЈ ет ал. Сигнализација полипептида који активира аденилат циклазу хипофизе (ПАЦАП) у префронталном кортексу модулира учење страха, али не и просторну радну меморију, код женки пацова. Неуропхармацологи 133, 145–154 (2018).

58. Даи, ХЛЛ, Сувансаванг, С., Халлидаи, ДМ & Стевенсон, ЦВ Полне разлике у дискриминацији слушног страха повезане су са измењеном функцијом медијалне префронталне кортекса. Сци. Реп. 10, 6300 (2020).

59. Кикусуи, Т., Такигами, С., Такеуцхи, И. & Мори, И. Алармни феромон појачава хипертермију изазвану стресом код пацова. Пхисиол. Бехав. 72, 45–50 (2001).

60. Фриард, О. & Гамба, М. БОРИС: Бесплатан, свестран софтвер отвореног кода за евидентирање догађаја за видео/аудио кодирање и посматрања уживо. Методе Ецол. Евол. 7, 1325–1330 (2016). 61. Лее, ХЈ, Хаберман, РП, Рокует, РФ & Монфлс, М.-Х. Изумирање и проналажење плус изумирање условљеног страха различито активирају медијални префронтални кортекс и амигдалу код пацова. Фронт. Бехав. Неуросци. 9, 1–10 (2016).

62. Петровицх, ГД, Холланд, ПЦ & Галлагхер, М. Амигдалар и префронтални путеви до латералног хипоталамуса се активирају наученим знаком који стимулише јело. Ј. Неуросци. 25, 8295–8302 (2005).

63. Пакинос, Г. & Ватсон, Ц. Те Рат Браин ин Стереотакиц Цоординатес: Хард Цоор. (Елсевиер, 2006).