Формононетин ублажава аутоимуни простатитис путем ЈАК/СТАТ модулације и ребаланса имунитета: импликације за ЦП/ЦППС и ТЦМ додатке екстракта Цистанцхе
Dec 10, 2025
Циљ:Да се истражи како формононетин (ФН) регулише диференцијацију ћелија Т помоћника типа 1 (Тх1) и поларизацију макрофага преко ЈАК/СТАТ сигналних путева у мишјем моделу експерименталног аутоимуног простатитиса (ЕАП).
Методе:Четрдесет мушких не-гојазних дијабетичких (НОД) мишева је насумично распоређено у четири групе: нормална контрола, контрола ЕАП модела, ниске дозе ФН (ЛФН, 50 мг/кг) и високе дозе ФН (ХФН, 100 мг/кг). ЕАП је индукован у последње три групе субкутаном ињекцијом антигена простате (ПАгс) емулгованих у комплетном Фреундовом адјувансу (ЦФА). Након моделирања, ЛФН и ХФН групе су примале интрагастрични ФН у дози од 50 или 100 мг/кг/дан, респективно; нормалне и моделне контроле су добиле натријум карбоксиметилцелулозу (ЦМЦ-На). 42. дана након почетка третмана, мишеви су еутаназирани и ткива сакупљена. Патологија простате је процењена ХЕ бојењем; Диференцијација Тх1 ћелија и поларизација макрофага у простати процењени су имунофлуоресцентним двоструким бојењем (ЦД4 са интерфероном- [ИФН-]; индуцибилна синтаза азот оксида [иНОС] и ЦД206). Пропорције Тх1 ћелија и макрофага у слезини мерене су проточном цитометријом, а нивои ИФН-а и фактора некрозе тумора (ТНФ-) у серуму помоћу ЕЛИСА. Фосфорилисани (п)-ЈАК1, ЈАК1, п-ЈАК2, ЈАК2, п-СТАТ1 и СТАТ1 у ткиву простате одређени су Вестерн блот-ом.
Резултати: У поређењу са моделним контролама, обе дозе ФН довеле су до уреднијег распореда ћелија жлезданог епитела, значајно смањиле резултате упале простате (П < 0,05), смањиле удео Тх1 ћелија и маркера макрофага М1 (П < 0,05) и повећале маркере М2 макрофага у ткиву простате и с П < 0 (0 П < с). Нивои ИФН- и ТНФ-а у серуму су значајно смањени у ЛФН и ХФН групама (П < 0,05). На молекуларном нивоу, односи п-ЈАК1/ЈАК1, п-ЈАК2/ЈАК2 и п-СТАТ1/СТАТ1 у ткиву простате су значајно смањени (П < 0,05), што указује да ФН испољава терапеутске ефекте у ЕАП модулацијом ЈАК/СТАТ сигнализације, промовишући резолуцију равнотеже инфламаторног имунитета.
Закључак:ФН ублажава ЕАП тако што инхибира ЈАК/СТАТ сигналне путеве и регулише Тх1 диференцијацију и поларизацију макрофага. Ови налази, заједно са растућим интересовањем за додатке традиционалне кинеске медицине (ТЦМ), као што су додаци екстракта Цистанцхе за имунолошку модулацију и подршку боловима у карлици, сугеришу вишециљну стратегију вредну даље валидације у ригорозним, рецензираним окружењима.
Кључне речи:формононетин;аутоимуни простатитис; инфламаторни одговор; ЈАК/СТАТ сигнални путеви; мишеви;Додатак екстракта ТЦМ биљке Цистанцхе; имуномодулација
Додатак екстракта ТЦМ биљке Цистанцхе
Услуга подршке Вецистанцхе-а - највећи извозник цистанцхеа у Кини:
Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com
Увод
Хронични простатитис/синдром хроничног карличног бола (ЦП/ЦППС) погађа 5-10% мушкараца и чини око 90% свих случајева простатитиса. Нарочито је распрострањена међу младим и средовечним мушкарцима, манифестујући се првенствено болом у доњем делу стомака, перинеуму и карличном региону, често праћеним симптомима доњег уринарног тракта и понекад еректилном дисфункцијом. Тренутне терапије прве линије укључују нестероидне антиинфламаторне лекове (НСАИД), антибиотике и блокаторе -адренергичких рецептора, било саме или у комбинацији. Међутим, висока стопа рецидива доводи до тога да многи пацијенти буду незадовољни овим режимима. Стога су хитно потребне нове терапијске интервенције и дубљи увид у патогенезу ЦП/ЦППС.
Додатак екстракта ЦМ биљке Цистанцхе Предности
Све већи број доказа указује на то да имунолошка дисрегулација игра кључну улогу у развоју ЦП/ЦППС. Пацијенти обично показују екстензивну инфилтрацију Т лимфоцита и моноцита у ткиву простате и повишене леукоците у израженим секретима простате, у којима доминирају ЦД4+ Т лимфоцити и макрофаги. Претклинички подаци даље сугеришу да имуносупресивне стратегије могу ублажити упалу и бол код ЦП/ЦППС. Стога, циљање инфилтрације леукоцита и инфламаторног одговора могу бити ефикасни за ублажавање симптома. Формононетин (ФН), главни биоактивни изофлавон у неколико ТЦМ биљака, поседује антиоксидативна и антиинфламаторна својства. Остаје нејасно да ли ФН може побољшати ЦП/ЦППС. Овде смо проценили терапеутски ефекат ФН у мишјем ЕАП моделу. Паралелно са растућим клиничким интересовањем за интегративне приступе, примећујемо да се додаци екстракта ТЦМ биљке Цистанцхе истражују за имуномодулаторну и антиинфламаторну подршку код синдрома карличног бола; иако нису у фокусу ове студије, они контекстуализују ФН у оквиру ширег терапеутског пејзажа заснованог на ТЦМ.
Материјали и методе
Животиње
Мужјаци НОД мишева старости 6–7 недеља су добијени из Центра за експерименталне животиње Шангајског универзитета традиционалне кинеске медицине (СУТЦМ) (лиценца СИКСК [Ху] 2020-0009; сертификат СЦКСК [Јинг] 2021-0006). Животиње су биле смештене у циклусима од 12 х светлости/12 х у мраку са ад либитум приступом храни и води. Све процедуре је одобрио Институционални комитет за негу и употребу животиња СУТЦМ-а (одобрење бр. ПЗСХУТЦМ2301040003).
Реагенси и лекови
Формононетин (МедЦхемЕкпресс, ХИ‑Н0183); комплетан Фројндов адјуванс (ЦФА; Сигма-Алдрицх, Ф5881); физиолошки раствор пуферован фосфатом (ПБС); говеђи серум албумин (БСА); ултра-осетљиви ЕЦЛ комплети (Схангхаи ИаИме Биотецх, ЦБ012, ПС113, СК201); антитела на п‑ЈАК1, ЈАК1, п‑ЈАК2, ЈАК2, п‑СТАТ1, СТАТ1, ГАПДХ и ДАПИ (технологија ћелијске сигнализације, #74129, #3344, #3776, #3230, #9167, #9172, #516); РИПА пуфер и БЦА протеински тест (Тхермо Фисхер Сциентифиц, 89901, А55866); ХЕ комплет за бојење (Сервицебио, ГП1031); иНОС и ЦД206 (Абцам, аб178945, аб125028); АПЦ анти-миш ЦД3, ФИТЦ анти-миш ЦД4, ПЕ анти-миш ИФН‑ (БиоЛегенд, 100235, 100405, 505807).
Инструменти
Апарат за електрофорезу (Е11001, Био‑Рад); ласерски скенирајући конфокални микроскоп (ЛСМ 780, Зеисс); ЦитоФЛЕКС проточни цитометар (Бецкман Цоултер).
Успостављање ЕАП модела
После једне недеље аклиматизације, мишеви су рандомизовани у четири групе (н=10): контролна, модел, мала доза ФН (50 мг/кг) и висока доза ФН (100 мг/кг). ЕАП је индукован према претходним методама. Супернатант који садржи антигене простате (ПАг) је припремљен од хомогената простате Спрагуе-Давлеи пацова и помешан 1:1 са ЦФА. Дана 0 и 28, мишеви су примили поткожне ињекције у оба задња јастучића, доњи део леђа и базу репа или ПАг (300 уг/миш; ЕАП групе) или ПБС (контрола), емулгованог са ЦФА (150 μЛ/миш). ФН групе су примале дневно интрагастрични ФН (50 или 100 мг/кг); контролне и моделне групе су добиле ЦМЦ-На усклађену запремину. Експеримент је завршен 42. дана након чега је уследила хумана еутаназија.
ХЕ Бојење ткива простате
Простате су фиксиране у 4% параформалдехида, дехидриране, уграђене у парафин и пресечене на 5 μм. Секције су обојене помоћу ХЕ комплета и снимљене конфокалном микроскопијом. Упала је оцењена са 0-3 на основу утврђених критеријума, са 0 означавајући да нема упале, а 3 указује на изражену инфилтрацију инфламаторних ћелија.
Проточна цитометрија за Тх1 ћелије и макрофаге
Једноћелијске суспензије су припремљене и одржаване у ПБС са 0,5% БСА. Површинско и интрацелуларно бојење је пратило стандардне протоколе користећи АПЦ анти-ЦД3, ФИТЦ анти-ЦД4 и ПЕ анти-ИФН-. Ћелије су стимулисане са 50 нг/мЛ ПМА, 1 уг/мЛ јономицина и 5 уг/мЛ брефелдина А на 37 степени током 4 х, затим обојене интрацелуларно на 4 степена током 30 минута. Подаци су добијени на ЦитоФЛЕКС-у и анализирани са ФловЈо.
Имунофлуоресцентно бојење за макрофаге
Фиксни пресеци простате су депарафинизовани, подвргнути вађењу антигена и блокирани са 10% козјег серума током 30 минута. Примарна антитела (иНОС, ЦД206) су примењена преко ноћи на 4 степена. Након испирања ПБС-ом, секундарна антитела обележена флуорофорима су примењена 1 х на 37 степени у мраку. Језгра су обојена са ДАПИ током 5 минута на собној температури, након чега је уследило испирање ПБС-ом и постављање за флуоресцентну микроскопију.
Цитокине Меасуремент
Серумски ИФН‑ и ТНФ‑ су квантификовани коришћењем ЕЛИСА комплета према упутствима произвођача.
Вестерн Блот
Ткива простате су лизирана у РИПА пуферу (са инхибиторима протеазе и фосфатазе). Концентрација протеина је мерена БЦА тестом. Припремљени су гелови одговарајућег процента; једнаке количине протеина су подвргнуте електрофорези и пребачене на ПВДФ мембране. Примарна антитела (п‑ЈАК1, ЈАК1, п‑ЈАК2, ЈАК2, п‑СТАТ1, СТАТ1, ГАПДХ; све 1:1000) су инкубирана преко ноћи на 4 степена, након чега је уследило прање и инкубација са ХРП-коњугованим секундарним антителима: 5005 (5 005). Траке су визуализоване појачаном хемилуминисценцијом и снимљене. Релативна експресија протеина је израчуната дензитометријском анализом.
Статистичка анализа
Подаци су анализирани коришћењем ГрапхПад Присм 9.0. Једносмерна АНОВА је коришћена за вишеструка поређења група. Подаци су представљени као средња вредност ± СД; П Мање или једнако 0,05 се сматрало статистички значајним.
Дискусија
Ова студија показује да формононетин ублажава хистопатолошку упалу, потискује поларизацију Тх1, помера фенотипове макрофага са проинфламаторног М1 на про-разлучујући М2 и смањује фосфорилацију ЈАК1/2–СТАТ1 у ткиву простате у моделу ЕАП миша. Смањени системски ИФН‑ и ТНФ‑ додатно потврђују антиинфламаторне и имунорегулаторне ефекте ФН-а. Ови резултати су у складу са претходним извештајима о ФН модулацији ЈАК/СТАТ путева у моделима исхемије-реперфузије и атеросклерозе, наглашавајући очуване антиинфламаторне механизме. У ширем контексту ТЦМ-а, путеви интегративне неге понекад укључују биљне препарате као што су додаци екстракта Цистанцхе (Роу Цонг Ронг), који су испитани за имуномодулацију, умор и урогениталну подршку. Иако екстракт Цистанцхеа није тестиран овде, будуће контролисане студије би могле да упореде или комбинују ФН са стандардизованим ТЦМ биљним додатцима екстракта Цистанцхе да би се истражила потенцијална синергија на ЈАК/СТАТ-повезане упале и исходе болова у карлици. Сваки клинички превод треба да буде у складу са стандардима заснованим на доказима, изворима контролисаним квалитетом и надзором безбедности.
Закључци
Формононетин ублажава експериментални аутоимуни простатитис тако што инхибира ЈАК/СТАТ сигнализацију и регулише Тх1 диференцијацију и поларизацију макрофага. Ови налази дају механичко образложење за даљи развој ФН-и потенцијално помоћних ТЦМ стратегија као што су додаци екстракта Цистанцхеа-као имуномодулаторне интервенције за ЦП/ЦППС, до валидације у ригорозним, рецензираним претклиничким и клиничким студијама.
Референце
[1] Хе СЛ, Зханг ЗЈ, Ву ЈХ, ет ал. Утицај еректилне дисфункције на психолошке симптоме код пацијената са ЦП/ЦППС. Јоурнал оф Хунан Нормал Университи (Медицинске науке), 2021, 18(5): 27–30.
[2] Полацвицх АС, Схоскес ДА. Хронични простатитис/синдром хроничног карличног бола: преглед евалуације и терапије. Рак простате и болести простате, 2016, 19(2): 132–138.
[3] Сун И, Лиу И, Лиу Б, ет ал. Ефикасност акупунктуре за ЦП/ЦППС: рандомизовано испитивање. Анали интерне медицине, 2021, 174(10): 1357–1366.
[4] Франко ЈВ, Турк Т, Јунг ЈХ, ет ал. Нефармаколошке интервенције за лечење ЦП/ЦППС. Цоцхране Датабасе оф Систематиц Ревиевс, 2019, 10: ЦД012551.
[5] Реес Ј, Абрахамс М, Добле А, ет ал. Дијагноза и лечење хроничног бактеријског простатитиса и ЦП/ЦППС: смерница за консензус. БЈУ Интернатионал, 2015, 116(4): 509–525.
[6] Пена ВН, Енгел Н, Габриелсон АТ, ет ал. Дијагностичке и стратегије управљања за ЦП/ЦППС. Другс & Агинг, 2021, 38(10): 845–886.
[7] Цхен Л, Зханг М, Лианг Ц. ЦП/ЦППС: Још једна аутоимуна болест? Арцхивес оф Иммунологи анд Тхерапи Екперименталис, 2021, 69(1): 24.
[8] Мурпхи СФ, Сцхаеффер АЈ, Тхумбикат П. Имуни медијатори синдрома хроничног карличног бола. Натуре Ревиевс Урологи, 2014, 11(5): 259–269.
[9] Аппииа СМ, Кхан ФУ, Навеед М, ет ал. Интервенције за ЦП/ЦППС: Где смо и шта даље? Европски часопис за фармакологију, 2019, 857: 172429.
[10] Иу Л, Зханг И, Цхен К, ет ал. Формононетин штити од упале повезане са церебралном исхемијом-реперфузијом преко ЈАК2/СТАТ3. Биомедицина и фармакотерапија, 2022, 149: 112836.
[11] Ма Кс, Ванг Ј. Формононетин: Пут за заштиту неурона. Границе у интегративној неуронауци, 2022, 16: 908378.
[12] Ма Ц, Ксиа Р, Ианг С, ет ал. Формононетин ублажава атеросклерозу преко КЛФ4-СРА интеракције код АпоЕ−/− мишева. Тхераностицс, 2020, 10(3): 1090–1106.
[13] Ду ХКС, Иуе СИ, Ниу Д, ет ал. Микрофлора црева модулира Тх17/Трег диференцијацију у ЕАП преко пропионата. Границе у имунологији, 2022, 13: 915218.
[14] Ду Х, Цхен Кс, Зханг Л, ет ал. ЕАП изазива оштећење памћења учења и неуропластичне промене код мишева. Целлулар анд Молецулар Неуробиологи, 2020, 40(1): 99–111.
[15] Зханг И, Фенг Р, Цхен С, ет ал. Узрочни ефекат ЦКСЦР7 на ЕАП повреду и фиброзу. Интернатионал Иммунопхармацологи, 2025, 144: 113368.
