Квантитативна протеомика открива значајне разлике између формирања мозга миша 2

Контактирајтеoscar.xiao@wecistanche.comза више информација

12. Холинергична трансмисија

Пренос ацетилхолина посредују две класе рецептора: никотински рецептори, који су јонски канали за натријумове катјоне који су усмерени на ацетилхолин, и мускарински рецептори, који су метаботропни рецептори повезани са активношћу тримерних Г протеина.

Неочекивано, у нашој студији нисмо били у могућности да откријемо пептиде који би се недвосмислено могли приписати никотинским рецепторима. Са друге стране, одредили смо титар неколико чланова мускаринских холинергичких рецептора. 12.1. Мускарински рецептори——Шарм

У хипокампусу и кортексу, али не и у малом мозгу, измерили смо титар Цхрмл, Цхрм3 и Цхрм4 (Слика 5А-Ц). У обе мождане формације, Цхрмл је била најзаступљенија подјединица мускаринског рецептора. Старење је смањило ниво Цхрмл и Цхрм3 у хипокампусу, док су у кортексу концентрације Цхрм3 и Цхрм4 смањене (Слика 5А, Б).

12.2. Метаболизам ацетилхолина

Холин ацетилтрансфераза (Цхат) је ензим укључен у синтезу ацетилхолина. Открили смо да је његова експресија 2- пута повећана у хипокампусу старијих животиња (слика 5А). За разлику од Чета, на титар ацетилхолин естеразе (Ацхе), ензима који деградира неуротрансмитер, није утицало старење у овој структури мозга (Слика 5А).

Кликните овде да бисте сазнали више

У кортексу, концентрације Цхат и Ацхе биле су значајно веће него у хипокампусу и малом мозгу; међутим, на њих није утицало старење (Слика 5А-Ц).

Такође нисмо приметили промене у концентрацији Цхат и Ацхе у вези са узрастом у малом мозгу, где је количина протеина била најнижа од свих анализираних региона мозга.

12.3.Везикуларни транспортер ацетилхолина—Слц18а3

Слц18а3 је протеин одговоран за пуњење ацетилхолина у синаптичке везикуле.цистанцхе продужење животаНаша студија открива да је концентрација Слц18а3 била највећа у кортексу младих мишева (додатна табела С1), и да је старење смањило ниво Слц18а3 за око 80 процената (слика 5Б). У хипокампусу, количина протеина није била под утицајем старењем (слика 5А), а у малом мозгу, протеин је откривен само код старијих животиња (додатна табела С1).

13. Моноамински рецептори, пренос сигнала и метаболизам

13.1.Рецептори

Иако смо могли да измеримо титар неколико мембранских протеина укључених у сигнализацију моноамина (нпр. у поновном преузимању моноамина), открили смо само неколико чланова моноаминских рецептора. Нисмо пронашли пептиде који се посебно приписују допаминским рецепторима, а међу бројним групама серотонинских рецептора, били смо у могућности да недвосмислено измеримо титар само једног серотонинског рецептора (Хтрла) у хипокампусу старих животиња (додатна табела С1).

У хипокампусу смо мерили титар два члана алфа-адренергичких рецептора: а2а(Адра2а) и а2ц(Адра2ц) (слика 6А). Њихова концентрација је била нижа код старих животиња; међутим, промене нису биле статистички значајне. У кортексу, Адра2ц је био присутан и код младих и код старих животиња, али је АдраЗа био изражен само код младих животиња (Слика 6Б). У малом мозгу, једини откривени алфа-адренергични рецептор био је АдраЗа код младих животиња (Слика 6Ц). у овој студији, нисмо били у могућности да недвосмислено доделимо било који пептид протеинима бета-адренергичких рецептора, Адрб.

За разлику од бета-адренергичких рецептора, открили смо значајно смањење експресије киназа укључених у десензибилизацију ових рецептора, Адрбкл, у хипокампусу и малом мозгу (Слика 6А-Ц).цистанцхе нзОво сугерише да бета-адренергички рецептори могу бити свеприсутно експримирани у мозгу, али због методологије коришћене у нашем експерименту, пептиди повезани са Адрб рецепторима нису могли бити додељени протеинима.

цистанцхе може против старења

13.2. Поновни унос моноамина

Концентрација транспортера серотонина (Слц6а4) одговорног за поновно преузимање неуротрансмитера била је присутна у свим проучаваним структурама мозга и на њу практично није утицало старење (Слика 6А-Ц). Приметили смо статистички значајно повећање Слц6а4 у хипокампусу старијих мишева; међутим, ово повећање је било веома мало (Слика 6А). За разлику од хипокампуса, пронашли смо око 3,5 пута већи титар Слц6а4 у малом мозгу старијег узраста, али повећање није било статистички значајно (Слика 6Ц).

Одредили смо титар транспортера допамина (Слц6а3) у кортексу (слика 6Б). Старење није утицало на његову концентрацију.

14. Деактивација моноамина

14.1.Моноамин оксидаза—Мао

Моноамин оксидаза катализује деаминацију амина и учествује у разградњи моноамина које ослобађају неурони и глиа ћелије. Постоје две изоформе Маоа, Маоа и Маоб, чија се експресија приписује, респективно, неуронима и глијалним ћелијама [36].

Резултати нашег истраживања откривају да су оба Мао изоензима била свеприсутно експримирана у свим можданим формацијама (Слика 6А-Ц). У хипокампусу, концентрација Маоа је смањена старењем, док је ниво Маоб значајно повишен код старијих животиња. (Слика 6А).величина пениса цистанцхеИсти тренд се може приметити за Мао изоформе у кортексу (Слика 6Б).

У малом мозгу, титар Маоа није био под утицајем старења, али је концентрација Маоб била више од четири пута већа код старих животиња него код младих (слика 6Ц). 14.2. Катехол О-метилтрансфераза——комп

Катехол О-метилтрансфераза катализује О-метилацију и, на тај начин, инактивацију моноамина као што су адреналин, допамин и серотонин. У нашој анализи, открили смо да је ензим у релативном обиљу у свим проучаваним можданим формацијама и да на његов ниво није утицало старење (Слика 6А-Ц).

15. Синтеза моноамина

15.1. Триптофан хидроксилаза 2—Тпх2

Триптофан хидроксилаза је ензим који катализује први корак синтезе серотонина. Наша студија показује да је ниво Тпх2 у свим можданим структурама старих животиња био сличан (Слика 6А-Ц). У хипокампусу младих животиња, титар Тпх2 је био много нижи него у другим можданим формацијама, али је старење резултирало значајно, више од 8-, повећање титра ензима у овој структури (слика 6А). У кортексу и малом мозгу, старење није имало утицаја на експресију ензима (слика 6Б,Ц).

15.2.Тирозин хидроксилаза—Тх

Он је укључен у први корак синтезе моноамина (као што су допамин, адреналин и нора-дреналин) из тирозина. Титар Тх је био највећи у кортексу (слика 6Ц), а присуство ензима није откривено у хипокампусу (слика 6А).цистанцхе прахСтарење није имало утицаја на експресију Тх у обе мождане формације (Слика 6Б, Ц).

15.3. Ароматична-Л-амино-киселина декарбоксилаза—Ддц

Ддц (такође познат као ДОПА декарбоксилаза и ААДЦ, и 5-хидрокситриптофан декарбоксилаза) учествује у синтези неуротрансмитера, катализујући декарбоксилацију различитих супстрата као што су ДОПА, фенилаланин, хистидин и 5-хидрокситриптамин. У нашим студијама открили смо да је Ддц био више од два пута већи у хипокампусу старијих животиња (слика 6А), док у кортексу и малом мозгу количина протеина није значајно модификована старењем (слика 6Б, Ц).

16. Трансдукција сигнала

Стимулација неколико метаботропних рецептора је повезана са модификацијом активности аденилат циклазе и/или фосфолипаза и променама у концентрацији секундарних гласника као што су цАМП и инозитол трифосфати. 16.1. Аденил циклаза——Адци

Адци је ензим који катализује формирање цАМП из АТП-а, а његова активност се регулише након стимулације метаботропних холинергичких и катехоламинергичких рецептора. Наша студија открива да су у хипокампусу Адци2 и Адци9 биле најзаступљеније изоформе циклазе (слика 6А). Открили смо да је концентрација главног облика ензима у хипокампусу, Адци9, значајно повећана код старих мишева, док је титар Адци1, Адци3, Адци6 и Адци8 смањен код старих животиња (слика 6А). Старење није имало утицаја на обиље главних облика Адци, Адци5 и Адци9, у кортексу, али је смањило титар Адци1, Адци2, Адци3 и Адци6 (слика 6Б). Такође смо приметили смањење главне Адци изоформе у малом мозгу, Адци (Слика 6Ц).

16.2. Фосфолипаза Ц—Плц

Фосфолипаза Ц (Пле), ензим који хидролизује фосфолипиде, укључен је у интрацелуларни пренос сигнала након стимулације мускаринског холинергичког рецептора (Цхрм) и алфа-адренергичког рецептора (Адра1)[37].

У нашој студији пронашли смо неколико припадника Пле класе у свим проучаваним структурама мозга (Слика 6А-Ц). Најзаступљеније Плц изоформе у хипокампусу биле су Плцгл и Плцх2, на чији титар није утицало старење (Слика 6А). За разлику од хипокампуса, скоро све Пле изоформе, осим Плцд3, биле су смањене у кортексу остарелих мишева (Слика 6Б). У малом мозгу, Плцб4 је био доминантна изоформа Плц, али на његов титар није утицало старење (Слика 3Ц ).Једини Пле чија је концентрација била различита у малом мозгу старих мишева био је Плцх2 (Слика 6Ц).

17.Цитоматрик Ацтиве Зоне——ЦАЗ

ЦАЗ је пресинаптички регион укључен у ослобађање неуротрансмитера [38]. Протеини унутар овог региона посредују, директно и индиректно, фузију синаптичких везикула са пресинаптичком мембраном. Међу овом групом протеина, може се разликовати неколико функционалних класа: СНАРЕ (рецептори протеина везаних за растворљив Н-етилмалеимид осетљив на фактор), који се могу поделити на в-СНАРЕ (СНАРЕ повезане са везикулама) и т-СНАРЕ (циљна мембрана -асоциатед СНАРЕс), и протеини укључени у спајање синаптичких везикула посредовано калцијумом [39].

У нашој анализи, нисмо приметили бројне значајне промене у концентрацији ЦАЗ протеина у хипокампусу и малом мозгу (слика 7А,Ц) у вези са узрастом (слика 7А,Ц). Једини протеини погођени узрастом у хипокампусу били су Снап25 и Вап, чији су титри били нижи у стари мишеви (слика 7А).екстракт цистанцхе салсаС друге стране, концентрација неколико ЦАЗ протеина је значајно модификована, обично повишена, старењем у кортексу (Слика 7Б). Најистакнутије промене су се односиле на в- и т-СНАРЕ протеине као што су синтаксини (Стк), синап-тотагмин (Сит), синаптобревини (Вамп), синаптогирини (Сингр) и синаптофизини (Сип) (Слика 7Б). Ово је пропраћено повећање концентрације протеина укључених у машинерију зависну од калцијума за спајање и сидрење синаптичких везикула, као што је

18.Постсинаптичка густина——ПСД

Постсинаптичка густина је регион богат протеинима везан за постсинаптичку мембрану где се налазе протеини укључени у пријем и пренос сигнала, као и модулацију синаптичке пластичности [40]. У нашој студији пронашли смо неколико чланова ПСД протеина у свим проучаваним структурама мозга (Допунска табела С1), а промене титра неких од њих (рецептора, протеина укључених у синтезу секундарних гласника, итд.) описане су у претходни одељци рада. Концентрација ПСД протеина у малом мозгу није значајно промењена старењем. Псд и Сханк3 су били једини изузеци: њихов титар је био смањен, односно повишен код старих животиња (слика 7Ц). За разлику од малог мозга, старење је значајно смањило концентрацију неколико чланова ПСД протеина у кортексу и хипокампусу (слика 7А, Б). Међу њима су били протеини важни за синаптичку пластичност као што су Длг4/Псд95, Сингап1, Сханкл и Сханк2 у кортексу (слика 7Б), и Псд,Длг, Длгап и Сханк у хипокампусу (слика 7А). Детаљна листа ових промена. је дато у Додатној табели С1.

19. Молекули адхезије транс-синаптичких ћелија—ЦАМ

Молекули адхезије транс-синаптичких ћелија регулишу синаптичку пластичност кроз организацију синаптичке везе, контролишу морфологију синапсе и регулишу функције рецептора[41]

Квантитативно смо измерили титре скоро 140 протеина означених молекулима адхезије транс-синаптичких ћелија (додатна табела С1). Све у свему, на ниво већине ЦАМ утицало је старење у хипокампусу и кортексу (Слика 8А, Б), али су релативно мале промене примећене у малом мозгу (Слика 8Ц). Приметили смо значајно смањење концентрације неколико молекула ћелијске адхезије као што су кадхерини (Цдх), катенини (Цтнн), ефрини (Епх), рецепторски тип тирозин-протеин фосфатазе (Птпр), неурексини (Нркн) и Лин7 протеин, како у хипокампусу тако иу кортексу старих животиња (слика 8А,Б). Пун скуп протеина представљен на слици 8 је описан у табели 1, а титар различитих изоформа Цдх, Цтнн, Епх и Нркн је представљен у Додатна табела С1.

Најзначајније промене у малом мозгу биле су повезане са експресијом Лги, чија је концентрација била више од два пута већа код старих мишева (Слика 8Ц). Лгис су секретирани протеини који регулишу дистрибуцију рецептора и ћелијске интеракције у нервном систему [73]. Иако у малом мозгу старење није утицало на титар већине ћелијских адхезионих протеина, титар неких од њих као што су ефрини (Епх), липрин-алфа (Ппфиа) и неурексини (Нркн) је смањен (Слика 8Ц). Такође смо пронашли значајно повишење Лги протеина у хипокампусу и кортексу (Слика 8А-Ц). Улоге појединачних ЦАМ-а су сажете у табели 1.

20. Екстрацелуларни матрикс (ЕЦМ) Перинеуронална мрежа (протеини

ПНН су структуре екстрацелуларног матрикса које покривају површину тела неуронске ћелије и избочине у централном нервном систему и стабилизују синапсе у мозгу одраслих. ПНН се састоје углавном од протеогликана хондроитин сулфата [74].

Пронашли смо више од 70 чланова ПНН-а у младим и старим мишјим можданим структурама (додатна табела С1). Генерално, приметили смо повишене нивое ПНН протеина у остарелим мозговима, а ова повећања се приписују углавном огромном повећању Хаплн-а (хијалуронана и протеогликанска веза протеина), главне компоненте ПНН-а (Слика 9А-Ц). Осим у Јапану, титар колагена (Цол) је повећан у хипокампусу и малом мозгу, а ламинини (Лам) су били повишени у свим проучаваним структурама мозга (Слика 9А-Ц). Неочекивано, открили смо да су неки од ПНН протеина смањени код старијих мишева, на пример, концентрације талина-2(ТИн2) и семафорина (Сема) у хипокампусу и кортексу (слика 9А,Б).

Анализирајући ЕЦМ протеин, открили смо занимљиву зависност: титри већине великих протеогликана (као што су Агрн, Нцан, Вцан и Бцан) су значајно повећани у хипокампусу и малом мозгу старих животиња, али не и у кортексу (Слика 9А- Ц). Чини се да је кортекс и најстабилнија мождана формација у контексту експресије ензима за ремоделирање ЕЦМ. Пронашли смо неколико чланова АДАМ протеаза у свим проучаваним структурама мозга. Само је концентрација АДАМ23 повећана старењем у кортексу (слика 9Б), АДАМ10, АДАМ11 АДАМ22 и АДАМ23 су повећани у хипокампусу старих мишева, док су титри АДАМ22 и АДАМ23 били повишени у кортексу (слика 9А,Ц) .

Међу металопротеиназама, могли смо да измеримо концентрацију само Ммп17, а она је благо смањена старењем у хипокампусу и малом мозгу (Слика 9А-Ц). Улоге ЦАМ протеинских група су сумиране у Табели 2.

21. Дискусија

Промене у протеинском саставу можданих формација које су повезане са старењем још увек су далеко од доброг разумевања. Неколико вредних података дато је студијама које су користиле имуноцитокемијске и имунохистохемијске технике. Они су показали разноврсну експресију неколико протеина у различитим структурама мозга, па чак и у различитим популацијама неурона [97-99]. Међутим, због методолошких ограничења, такве студије су ограничене на мали број протеина и могле су да дају само полуквантитативне податке о експресији протеина. Они такође нису могли да испоруче стварну концентрацију протеина, дату у апсолутним вредностима (нпр. у мол/г протеина), у проучаваним узорцима.

У овом раду користили смо технику засновану на спектрометрији масе, методу приступа тоталном протеину без ознака, да квантитативно опишемо протеине укључене у пренос сигнала у хипокампусу, можданој кори и малом мозгу младих и старих мишева. Све мождане формације су хетерогене структуре састављене од различитих ћелија, међу којима су неурони и астроцити најзаступљенији. Због тога се резултати представљени у овом раду не могу недвосмислено анотирати неуронима или глијалним ћелијама. Међутим, у неколико случајева познато је да је експресија анализираних протеина повезана скоро искључиво са једним типом ћелија, на пример, ензимима који синтетишу ГАБА у хипокампусу, а који су повезани углавном са интернеуронима (за преглед, видети [100]) .

Наша анализа је показала да је молекуларна машинерија укључена у ексцитаторни и инхибиторни пренос (респективно, глутаматергична и ГАБАергична) у хипокампусу и кортексу значајно измењена (смањена) старењем. Заузврат, експресија глутаматних и ГАБА рецептора у малом мозгу била је практично непромењена; међутим, титар ГАД-а (ензима укључених у синтезу ГАБА) био је јако повишен код старијих мишева.

Смањена концентрација протеина укључених у глутаматергијски и ГАБАергични пренос може указивати на смањену неуронску пластичност хипокампуса и кортекса код старијих животиња.

Смањен титар Цамк4 могао би бити следећи маркер ниже синаптичке пластичности старих животиња, јер је Цамк4 протеин који је неопходан за формирање дугорочне меморије [101]. Приметили смо не само значајно смањење Цам4 у свим проучаваним можданим формацијама, већ и веома висок ниво ове киназе у малом мозгу, што је у складу са студијама које показују значајну улогу активног Цамк4 за дуготрајну депресију малог мозга, која се сматра бити главни облик синаптичке пластичности у овој можданој структури[102-104]. Нисмо пронашли никакве старосне разлике у титру Цамк2, за који се зна да је директно укључен у синаптичко побољшање. Међутим, Цамк2 је протеин експримиран на веома високом нивоу и укључен у различите ћелијске догађаје, па стога недостатак статистички значајних промена у целим структурама није неочекиван.

Нисмо приметили бројне промене у концентрацији других киназа укључених у синаптички пренос и пластичност, као што су ПКА и Марк. Међутим, открили смо да је концентрација Пркача, каталитичке подјединице ПКА, значајно смањена старењем у хипокампусу. Ово може сугерисати нижу ексцитаторну трансмисију и пластичност остарелих хипокампуса јер фосфорилација АМПА подјединица зависна од ПКА директно контролише синаптичку инкорпорацију АМПА рецептора [105].

Неочекивано, нисмо били у могућности да измеримо титре никотинских ацетилхолинских рецептора (као и допаминских и серотонинских рецептора, осим Хтрла). Пошто смо идентификовали неколико других мембранских протеина, недостатак ових рецептора у нашој анализи није ефекат методе припреме узорка, већ је резултат стварног одсуства јединствених пептида који би се могли недвосмислено означити тим рецепторима.

За разлику од никотинских рецептора, идентификовали смо мускаринске ацетилхолинске рецепторе (Цхрм) у хипокампусу и кортексу и открили да је њихов титар значајно смањен код старих животиња. Занимљиво је да је концентрација ензима Цхат укљученог у синтезу ацетилхолина значајно повећана у хипокампусу и малом мозгу, а мали мозак је био једина структура мозга у којој нисмо били у могућности да измеримо концентрацију Цхрм.

Најизраженија разлика између младих и старих животиња у погледу адренергичке трансмисије био је веома висок пораст титра моноамин оксидазе б, ензима одговорног за деактивацију амина. Ово може сугерисати да су адренергички пренос и, свеукупно, катехоламинергичка сигнализација смањени код старих животиња. Међутим, такође смо открили значајно смањење концентрације Адрбкл-а, киназе која је укључена у десензибилизацију адренергичких рецептора, услед старења. Смањење регулације Адрбкл-а требало би да доведе до повећања осетљивости адренергичких рецептора — адаптације на смањене количине неуротрансмитера узроковане снажно повећаном активношћу Моаб-а.

Способност ослобађања неуротрансмитера такође зависи од присуства протеина укључених у промет синаптичких везикула. Наша студија показује да је концентрација протеина укључених у ослобађање неуротрансмитера, као што су в-СНАРЕ, т-СНАРЕ и протеини повезани са егзоцитозом, била релативно константна током старења у хипокампусу и малом мозгу. Насупрот томе, титар протеина укључених у ослобађање неуротрансмитера био је значајно повишен у старим кортексима, што може указивати на то да је количина активних синапси у старим кортексима већа од оне у младим кортексима. Међутим, повећање пресинаптичког дела ослобађања неуротрансмитера апарат у кортексу није био у корелацији са елевацијом постсинаптичких протеина који формирају машинерију за пријем и пренос сигнала. Приметили смо значајно смањење титра ових протеина и у кортексу иу хипокампусу.

Како синаптичка пластичност такође зависи од експресије протеина који организују морфологију синапсе, проверили смо концентрацију молекула адхезије транс-синаптичких ћелија и протеина екстрацелуларног матрикса који формирају перинеуронске мреже.

Открили смо да су титри већине ЦАМ смањени у остарелим хипокампима и кортексу, док су у малом мозгу концентрације ових протеина биле релативно стабилне. Иако је експресија неколико чланова ЦАМ-а проучавана у контексту Алцхајмерове болести [106-108], наша анализа пружа прву глобалну слику промена у експресији ЦАМ зависних од старости. За разлику од скоро свих других ЦАМ, открили смо значајно повећање нивоа Лги протеина. Познато је да Лги протеини учествују у формирању синапсе и сазревању, али иу процесу мијелинизације (за преглед, видети [42]). Кључни Лги везујући партнери у развоју синапсе су АДАМ протеини као што су АДАМ11, АДАМ22 и АДАМ23 [42]. У нашим студијама, открили смо значајно повећање концентрација свих ових АДАМ изоформи у хипокампусу. Овај налаз сугерише већи број зрелих, стабилних синапси у остарелим хипокампусима него у младим хипокампима.

Насупрот томе, открили смо да је већина перинеуронских мрежних протеина била заступљенија у старијим можданим формацијама. Разлике су биле најизраженије код Хаплн, Ацан и Бгн протеина, чији су титри били повишени у свим структурама мозга.

Штавише, приметили смо и значајно повећање протеогликана у хипокампусу и малом мозгу. Ово је у очигледној супротности са претходним имунохистохемијским студијама које су сугерисале да се у мозгу миша, хондроитин сулфат протеогликани који углавном садрже Хаплн протеин не мењају са старењем [109]. Ова контрадикторност може бити резултат различите старости младих животиња коришћених у овој (1-месечне) и претходној студији (старе 4 месеца)[109]. Такво тумачење је отприлике у складу са запажањима да се експресија неких протеогликана стално повећава у мозгу пацова до 5 месеци старости, али се онда титар неких протеина смањује (за преглед, видети [110]).

Иако смо открили да старење на сличан начин утиче на неке протеине или концентрације протеинских група у свим проучаваним можданим формацијама, чини се да истовремено старење није правило. Приметили смо да церебеларни протеом показује најмањи број промена током старења. , док су хипокампални и кортикални протеоми били нестабилни.

Закључно, наша анализа је прва дубинска и свеобухватна квантитативна протеомска студија која описује промене у концентрацији протеина критичних за пренос сигнала и синаптичку пластичност у хипокампусу, кортексу и малом мозгу младих и старих мишева. Подаци представљени овде дају општу слику утицаја физиолошког старења на синаптичку пластичност и могу да сугеришу потенцијалне мете лекова за терапије против старења.

22. Закључци

Познато је да старење мења функције мозга, а наше студије показују да су ове промене повезане са измењеном експресијом неколико рецептора, протеина за трансдукцију сигнала и структурних протеина укључених у формирање синапсе. Промене у протеому повезане са старењем уочене су у свим испитиваним структурама мозга, нпр. у хипокампусу, можданој кори и малом мозгу. Са старењем, најстабилнија структура мозга је мали мозак, док хипокампус и кортекс показују сличну количину различито експримираних протеина укључених у неуротрансмисију и неуропластичност. Наша студија открива да не постоји јединствени универзални образац промена у протеомима повезаних са старењем; уместо тога, свака од анализираних можданих формација представља сопствени начин промене.

Овај чланак је преузет из Целлс 2021, 10, 2021. хттпс://дои.орг/10.3390/целлс10082021 хттпс://ввв.мдпи.цом/јоурнал/целлс